JPS63291577A - 氷核形成活性をもつ微生物の発酵方法 - Google Patents
氷核形成活性をもつ微生物の発酵方法Info
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- JPS63291577A JPS63291577A JP63049913A JP4991388A JPS63291577A JP S63291577 A JPS63291577 A JP S63291577A JP 63049913 A JP63049913 A JP 63049913A JP 4991388 A JP4991388 A JP 4991388A JP S63291577 A JPS63291577 A JP S63291577A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は氷核形成活性(ice nucleating
activity:IN^)をもつ微生物の発酵方法
に関する。
activity:IN^)をもつ微生物の発酵方法
に関する。
米国特許第4,200,228号明細書には雪を製造す
る方法が開示されており、この方法によれば空気中に噴
霧される小滴中に微生物が含まれている。
る方法が開示されており、この方法によれば空気中に噴
霧される小滴中に微生物が含まれている。
使用されている微生物は氷核形成を促進することが知ら
れている種想のものである。その結果、通常の温度より
可成り高い温度で雪を製造することができる。このプロ
セスに有用な代表的な微生物である。
れている種想のものである。その結果、通常の温度より
可成り高い温度で雪を製造することができる。このプロ
セスに有用な代表的な微生物である。
このプロセスをいがなる規模でも使用しようとすると、
多量の微生物を必要とすることは明白である。更に、微
生物は、その貯蔵、取扱及び運搬輸送を容易にするため
に、乾燥形態で得るのが望ましい。
多量の微生物を必要とすることは明白である。更に、微
生物は、その貯蔵、取扱及び運搬輸送を容易にするため
に、乾燥形態で得るのが望ましい。
氷核形成活性をもつ微生物の生長条件は当業界で知られ
ている。例えばNak i及びWilloughbyの
Bacteria as 13iogenic 5ou
rces of FreezingNuclei、
J、八pplied Meteorogy 17.
104!3−1053頁には、シュードモナス・シリ
ンゲのような微生物を20’Cより低い温度、即ち5°
CでKoserクエン酸液体培地(ciLrate b
roth)で生長させることが記載されている。
ている。例えばNak i及びWilloughbyの
Bacteria as 13iogenic 5ou
rces of FreezingNuclei、
J、八pplied Meteorogy 17.
104!3−1053頁には、シュードモナス・シリ
ンゲのような微生物を20’Cより低い温度、即ち5°
CでKoserクエン酸液体培地(ciLrate b
roth)で生長させることが記載されている。
別の文献、即ちKoxloff、 5chofield
及びLuteのIce Nucleating Act
ivity of Pseudomonassyrin
Hae and Erwinia herbicola
、 J、Bacter。
及びLuteのIce Nucleating Act
ivity of Pseudomonassyrin
Hae and Erwinia herbicola
、 J、Bacter。
巧旦、222〜231頁(1983)には、pHが約7
.0のトリプトン−酵母エキス−グリセロール培地上で
微生物を生長させている。εの文献では、微生物は乾燥
状態では回収されておらず、懸濁液の状態で直接、活性
のテストをしている。この氷核形成活性は懸濁液中では
安定でなく、−夜で活性が低下することが認められてい
る。
.0のトリプトン−酵母エキス−グリセロール培地上で
微生物を生長させている。εの文献では、微生物は乾燥
状態では回収されておらず、懸濁液の状態で直接、活性
のテストをしている。この氷核形成活性は懸濁液中では
安定でなく、−夜で活性が低下することが認められてい
る。
前記微生物の大量生産に前記した公知の方法を用いた場
合には所望の氷核形成活性のものは得られない。最初の
懸濁液の氷核形成活性が所望の活性より低くなるばかり
でなく、大量の微生物を凍結乾燥する間に活性の大半が
失なわれてしまう。
合には所望の氷核形成活性のものは得られない。最初の
懸濁液の氷核形成活性が所望の活性より低くなるばかり
でなく、大量の微生物を凍結乾燥する間に活性の大半が
失なわれてしまう。
この結果は、前記方法が商業的な量の微生物を妥当なコ
ストで製造することのできないプロセスであることを示
している。
ストで製造することのできないプロセスであることを示
している。
特願昭62−236411号には、氷核形成微生物を製
造するものとして当業界で知られていた方法の改良が記
載されている。この方法ではpHを6.7〜5.5にコ
ントロールする。pHが約6.7に近づいた時には酸を
添加し、そしてpa+が5.5に近づいた時には塩基を
添加する。前記の特願昭62−236411号には、氷
核形成性微生物の発酵方法についての他の改良も記載さ
れている0例えば、炭素源としてのマンニトールと窒素
源としての酵母抽出物とを含む好ましい培地が記載され
ている。
造するものとして当業界で知られていた方法の改良が記
載されている。この方法ではpHを6.7〜5.5にコ
ントロールする。pHが約6.7に近づいた時には酸を
添加し、そしてpa+が5.5に近づいた時には塩基を
添加する。前記の特願昭62−236411号には、氷
核形成性微生物の発酵方法についての他の改良も記載さ
れている0例えば、炭素源としてのマンニトールと窒素
源としての酵母抽出物とを含む好ましい培地が記載され
ている。
前記特願昭62−236411号に記載の方法で得られ
るINAは許容できる。例えば、特願昭62−2364
11号の例1の記載に従って生成される発酵器INAは
5.Ox 10”である(ここで「発酵器INAJとは
、乾燥細胞1g当りの核の数の単位をもつ)、シかしな
がら、生産性は望ましい水準に達していない。
るINAは許容できる。例えば、特願昭62−2364
11号の例1の記載に従って生成される発酵器INAは
5.Ox 10”である(ここで「発酵器INAJとは
、乾燥細胞1g当りの核の数の単位をもつ)、シかしな
がら、生産性は望ましい水準に達していない。
発酵はかなりの細胞密度18g/4に達するが、完遂に
は36時間を必要とした。その結果、「発酵器生産性」
(定義は後述)はわずかに2.5X10”核数/hou
rでしかなかった。
は36時間を必要とした。その結果、「発酵器生産性」
(定義は後述)はわずかに2.5X10”核数/hou
rでしかなかった。
特願昭62−323063号には、前記の特願昭62−
236411号記載の方法よりも優れた結果をもたらす
方法が記載されている。その例1では、発酵器INAは
IOX 10”に増加したが、発酵器生産性は6.59
xtO”であった。これらの結果は、炭素源としての糖
と、α−ケトグルタレート又はα−ケトグルタレート生
成性アミノ酸とを含む培地を使用することによって達成
された。
236411号記載の方法よりも優れた結果をもたらす
方法が記載されている。その例1では、発酵器INAは
IOX 10”に増加したが、発酵器生産性は6.59
xtO”であった。これらの結果は、炭素源としての糖
と、α−ケトグルタレート又はα−ケトグルタレート生
成性アミノ酸とを含む培地を使用することによって達成
された。
前記の各特願昭の記載は、従来技術の発酵法を大きく改
良した発酵法をもたらしたが、更に改良が求められてい
る。より具体的には、発酵法の経済性を改良するために
は発酵器生成性を改良する必要があった。
良した発酵法をもたらしたが、更に改良が求められてい
る。より具体的には、発酵法の経済性を改良するために
は発酵器生成性を改良する必要があった。
本発明は、氷核形成活性をもつ微生物を培地において発
酵させる工程とその微生物を回収する工程とを含む、氷
核形成活性をもつ微生物の発酵方法の改良を提供する。
酵させる工程とその微生物を回収する工程とを含む、氷
核形成活性をもつ微生物の発酵方法の改良を提供する。
その改良は、
(1)前記の微生物を窒素源含有培地において少なくと
も約29℃の温度で増殖させる工程、及び(2)前記の
発酵を温度約24℃以下で定常期の間、続ける工程 を含んでなり、しかも前記の窒素源の濃度が(a)少な
くとも20g/lの細胞塊を提供するのに充分であり、
しかも (b)増殖期の終期においては、後の定常期における氷
核形成活性の形成を阻害するには不充分な窒素源しか残
留しないようにするのに充分な程度に低いものであるこ
とを特徴としている。
も約29℃の温度で増殖させる工程、及び(2)前記の
発酵を温度約24℃以下で定常期の間、続ける工程 を含んでなり、しかも前記の窒素源の濃度が(a)少な
くとも20g/lの細胞塊を提供するのに充分であり、
しかも (b)増殖期の終期においては、後の定常期における氷
核形成活性の形成を阻害するには不充分な窒素源しか残
留しないようにするのに充分な程度に低いものであるこ
とを特徴としている。
前記から明らかなとおり、本発明には2つの本質的な特
徴がある。第1は増殖期における窒素源の濃度であり、
そして第2は増殖期及び定常期の間の温度である。これ
らの特徴は、高INAを得ると同時に高い発酵層生産性
を提供するためには必要である。例えば、前記の特願昭
62−323063号の例1の細胞密度はわずか14.
5g/lであった。仮に、細胞増殖を改良するために栄
養素濃度を増加させ、そして温度を上げて維持すると、
INAが激しく低下した。同様に、栄養素濃度を調整せ
ずに、温度を調整したとすると くこのようにすること
は、前記の特願昭62−323063号には示唆されて
いないが)、得られる生産性は劣ったものであった。
徴がある。第1は増殖期における窒素源の濃度であり、
そして第2は増殖期及び定常期の間の温度である。これ
らの特徴は、高INAを得ると同時に高い発酵層生産性
を提供するためには必要である。例えば、前記の特願昭
62−323063号の例1の細胞密度はわずか14.
5g/lであった。仮に、細胞増殖を改良するために栄
養素濃度を増加させ、そして温度を上げて維持すると、
INAが激しく低下した。同様に、栄養素濃度を調整せ
ずに、温度を調整したとすると くこのようにすること
は、前記の特願昭62−323063号には示唆されて
いないが)、得られる生産性は劣ったものであった。
窒素源の初期濃度は、増殖期の間の発酵温度に関連する
。少なくとも20g/lの細胞塊を最終的に提供するの
に充分な窒素源が存在する。しかしながら、多くなり過
ぎて、阻害量の窒素源が増殖期の終了後に残留してはな
らない。これらの量は温度と関連がある。なぜなら、温
度が上昇すると、細胞塊の可能性も上昇(ある点まで)
し、そして窒素源も相当に増加させる必要がある。微゛
生物に対する最適増殖温度を超えると、増殖の可能性が
低下し、そして窒素源はそれに従って減少させる一ヒ・
要がある。
。少なくとも20g/lの細胞塊を最終的に提供するの
に充分な窒素源が存在する。しかしながら、多くなり過
ぎて、阻害量の窒素源が増殖期の終了後に残留してはな
らない。これらの量は温度と関連がある。なぜなら、温
度が上昇すると、細胞塊の可能性も上昇(ある点まで)
し、そして窒素源も相当に増加させる必要がある。微゛
生物に対する最適増殖温度を超えると、増殖の可能性が
低下し、そして窒素源はそれに従って減少させる一ヒ・
要がある。
30℃におけるシュードモナス・シリンゲの代表的な増
殖期では、窒素源の初期濃度は約45g/l〔グルタミ
ン酸モノナトリウム(MSG)を基準とする〕であり、
これによって増殖期の終点では細胞塊的24g/lが生
成される。MSGはほとんど残留しない。33℃では、
この微生物の最適増殖温度を越えており、濃度を例えば
約40g/lのようにわずかに低下させる。
殖期では、窒素源の初期濃度は約45g/l〔グルタミ
ン酸モノナトリウム(MSG)を基準とする〕であり、
これによって増殖期の終点では細胞塊的24g/lが生
成される。MSGはほとんど残留しない。33℃では、
この微生物の最適増殖温度を越えており、濃度を例えば
約40g/lのようにわずかに低下させる。
増殖期の最後に残留する窒素源の量は、通常の方法を用
いて測定することができる。使用する的確な方法は窒素
源の性質に依存する。MSGが窒素源である場合には、
当業界で知られている0PA−メルカプトエタノール蛍
光誘導体を用いるII P L C法によって、それを
培地中で測定することができる。
いて測定することができる。使用する的確な方法は窒素
源の性質に依存する。MSGが窒素源である場合には、
当業界で知られている0PA−メルカプトエタノール蛍
光誘導体を用いるII P L C法によって、それを
培地中で測定することができる。
前記の基準では、先に使用した濃度よりも若干高い初期
濃度をもたらす点に注意されない。例えば、30°Cに
おいて、MSG濃度は45g/lであり、これは細胞密
度24g/lを生成する。これに対して、前記特願昭6
2−323063号の例1におけるし一グルタミン酸の
初期濃度は、増殖温度24℃において20g/lであっ
た。
濃度をもたらす点に注意されない。例えば、30°Cに
おいて、MSG濃度は45g/lであり、これは細胞密
度24g/lを生成する。これに対して、前記特願昭6
2−323063号の例1におけるし一グルタミン酸の
初期濃度は、増殖温度24℃において20g/lであっ
た。
本発明によれば、窒素源は、増殖期の終期においては、
後の定常期における氷核形成活性の形成を阻害するには
不充分な窒素源しか残留しないようにするのに充分な程
度に低いものである。すなわち、これよりも多い量を使
用するとINAは約60%以上低下する。実験を数回実
施すれば、正確な量を決定することができる。これは、
この時点で発酵培地中に20g乙昧満が残留するのが好
ましく、5g/1lic、満残留するのが特に好ましい
ことを意味する。
後の定常期における氷核形成活性の形成を阻害するには
不充分な窒素源しか残留しないようにするのに充分な程
度に低いものである。すなわち、これよりも多い量を使
用するとINAは約60%以上低下する。実験を数回実
施すれば、正確な量を決定することができる。これは、
この時点で発酵培地中に20g乙昧満が残留するのが好
ましく、5g/1lic、満残留するのが特に好ましい
ことを意味する。
本発明の微生物及びその他の微生物の発酵においては、
微生物が急速に増加する増殖期と呼ばれる時期がある。
微生物が急速に増加する増殖期と呼ばれる時期がある。
この時期は、当業界において「対数期」又は「対数増殖
期」としても知られている。
期」としても知られている。
この時期に、生長培地の光学密度の対数を時間に対して
プロットすると直線が得られる。この時期の終点におい
て、前記の線の傾斜は劇的に低下する。これは微生物が
もはや増殖しないこと、すなわち定常期に入ったことを
示している。これらの2つの期間の間には短期の遷移状
態がある。例えば、22時間続く代表的な発酵では、遷
移状態はわずかに1時間だけ続くことがある。本明細書
において「増殖期の終期」とは、前記の直線部分の終り
のあたりから短期の遷移期間のいずれをも含むものとす
る。
プロットすると直線が得られる。この時期の終点におい
て、前記の線の傾斜は劇的に低下する。これは微生物が
もはや増殖しないこと、すなわち定常期に入ったことを
示している。これらの2つの期間の間には短期の遷移状
態がある。例えば、22時間続く代表的な発酵では、遷
移状態はわずかに1時間だけ続くことがある。本明細書
において「増殖期の終期」とは、前記の直線部分の終り
のあたりから短期の遷移期間のいずれをも含むものとす
る。
良好な増殖を促進するには、増殖期における温度を約2
9℃以上にする。本発明方法では、それよりも高い温度
を使用することができるが、約35℃よりも高い温度は
必要ない。本発明で使用する好ましい微生物すなわちシ
ュードモナス・シリンゲにおいては、33℃より高い温
度は増殖を低下させる。それよりも低い温度において非
常に高い細胞密度を得ることができる。増殖期における
現在のところ好ましい温度は約30°Cである。
9℃以上にする。本発明方法では、それよりも高い温度
を使用することができるが、約35℃よりも高い温度は
必要ない。本発明で使用する好ましい微生物すなわちシ
ュードモナス・シリンゲにおいては、33℃より高い温
度は増殖を低下させる。それよりも低い温度において非
常に高い細胞密度を得ることができる。増殖期における
現在のところ好ましい温度は約30°Cである。
我々が見出したところによれば、INAは発酵の定常期
において主に生成される。更に、この定常期においては
、生成されるINAの景を有意にするために、温度を2
4°C以下に下げることが必要である。温度を24℃よ
りも低くすることができるが、約21℃よりも低い温度
ではINAの改良はほとんど観察されない。従って、定
常期における現在のところ好ましい温度は21℃である
。
において主に生成される。更に、この定常期においては
、生成されるINAの景を有意にするために、温度を2
4°C以下に下げることが必要である。温度を24℃よ
りも低くすることができるが、約21℃よりも低い温度
ではINAの改良はほとんど観察されない。従って、定
常期における現在のところ好ましい温度は21℃である
。
本発明を実施する際には任意の通常の培地を用いること
ができるが、前記の特願昭62−323063号に記載
の培地が現在のところ好ましい培地である。
ができるが、前記の特願昭62−323063号に記載
の培地が現在のところ好ましい培地である。
この培地は2つの必須成分すなわち糖及びα−ケトグル
タレート又はα−ケトグルタレート生成性アミノ酸から
なる。有用な糖としてはグルコース(又は粗グルコース
例えばデキストロース)、シュークロース、フラクトー
ス、エリスロース、マンノース、キシロース及びリボー
スが含まれる。市販されているこれらの糖源を便利に使
用することができる。これらの糖源としては、液状シュ
ークロース、高フルクトースコーンシロップ及びデキス
トロースコーンシロップが含まれる。これらの糖の混合
物を使用することもできる。これらの糖と組み合せて他
の炭素源例えばマンニト−ル及び他の糖誘導体を使用す
ることができる。
タレート又はα−ケトグルタレート生成性アミノ酸から
なる。有用な糖としてはグルコース(又は粗グルコース
例えばデキストロース)、シュークロース、フラクトー
ス、エリスロース、マンノース、キシロース及びリボー
スが含まれる。市販されているこれらの糖源を便利に使
用することができる。これらの糖源としては、液状シュ
ークロース、高フルクトースコーンシロップ及びデキス
トロースコーンシロップが含まれる。これらの糖の混合
物を使用することもできる。これらの糖と組み合せて他
の炭素源例えばマンニト−ル及び他の糖誘導体を使用す
ることができる。
他の必須の成分はα−ケトグルタレート又はα−ケトグ
ルタレート生成性アミノ酸である。生物学的過程でα−
ケトグルタレートを生成するアミノ酸はアルギニン、ヒ
スチジン、グルタミン、グルタミン酸及びプロリンであ
る。これらの酸の塩例えばグルタミン酸モノナトリウム
(MSG)も有用である。これらのアミノ酸からα−ケ
トグルタレートを製造することに関する記載は、Bio
chem−istry、第2版、Lehninger、
v4orth(1975) 574頁以後にある。これ
らの化合物の混合物も使用することができる。
ルタレート生成性アミノ酸である。生物学的過程でα−
ケトグルタレートを生成するアミノ酸はアルギニン、ヒ
スチジン、グルタミン、グルタミン酸及びプロリンであ
る。これらの酸の塩例えばグルタミン酸モノナトリウム
(MSG)も有用である。これらのアミノ酸からα−ケ
トグルタレートを製造することに関する記載は、Bio
chem−istry、第2版、Lehninger、
v4orth(1975) 574頁以後にある。これ
らの化合物の混合物も使用することができる。
前記の培地が、リン酸塩例えばリン酸カリウムを含有す
ることも好ましい。リン酸塩の有用な初期濃度範囲は、
0,2〜6g/l、好ましくは0.6〜3g/lである
。好ましい態様においては、増殖期の終点においてほと
んど残留しない(例えば1g/1未満)ように初期ホス
フェート濃度を選択する。
ることも好ましい。リン酸塩の有用な初期濃度範囲は、
0,2〜6g/l、好ましくは0.6〜3g/lである
。好ましい態様においては、増殖期の終点においてほと
んど残留しない(例えば1g/1未満)ように初期ホス
フェート濃度を選択する。
前記の培地は、好ましくは他の成分を含有する。
前記の微生物の発酵用として当業界で知られているよう
に、硫酸マグネシウムが好ましい。更に、前記の培地が
痕跡量の金属を含有することが望ましい。痕跡量の鉄及
び亜鉛が特に有効である。
に、硫酸マグネシウムが好ましい。更に、前記の培地が
痕跡量の金属を含有することが望ましい。痕跡量の鉄及
び亜鉛が特に有効である。
増殖期温度が30℃である発酵に使用するには、以下の
培地が好ましい。
培地が好ましい。
シュークロース 90g/IMSG
45g/l硫酸マグネシウム
4g/lリン酸カリウム 2.75g
/l硫酸鉄 0.112g/l硫酸亜
鉛 0.0024g/12発酵の間では、
前記特願昭62−236411号に記載されているとお
り、pl+を制御するのが望ましい。
45g/l硫酸マグネシウム
4g/lリン酸カリウム 2.75g
/l硫酸鉄 0.112g/l硫酸亜
鉛 0.0024g/12発酵の間では、
前記特願昭62−236411号に記載されているとお
り、pl+を制御するのが望ましい。
温度は19℃〜25℃が好ましい。
本発明によれば、氷核形成活性をもつ任意の微生物を製
造することができる。適当な微生物としては、P、シリ
ンゲ5rinae)及び凡ニス上土ニル4! ’/ X
(f Iuorsμ猥σ、P、コロナファシェンズー
ドモナス(Pseudomonas)属の微生物を例示
することができる。本発明において使用するのに有用な
他の微生物としては、例えばエルウィナ・ヘルビコラE
ru+ina herbicolaを挙げることができ
る。
造することができる。適当な微生物としては、P、シリ
ンゲ5rinae)及び凡ニス上土ニル4! ’/ X
(f Iuorsμ猥σ、P、コロナファシェンズー
ドモナス(Pseudomonas)属の微生物を例示
することができる。本発明において使用するのに有用な
他の微生物としては、例えばエルウィナ・ヘルビコラE
ru+ina herbicolaを挙げることができ
る。
現在のところ好ましい微生物はP、シリンゲ植■植[吐
^TCC階53,543 (ブタベスト条約に従って米
国メリーランド州のロックビルの^TCC(^meri
can Type Cu1ture Co11ecti
on)に1986年9月23日に寄託〕である。
^TCC階53,543 (ブタベスト条約に従って米
国メリーランド州のロックビルの^TCC(^meri
can Type Cu1ture Co11ecti
on)に1986年9月23日に寄託〕である。
前記の発酵法で製造される微生物は種々の方法で乾燥さ
せることができる。典型的な例は、スプレー乾燥及び凍
結乾燥である。いずれの乾燥方法もINAを成る程度低
下させる0発酵話中で生成される大量のINAを保存す
る成る好ましい方法は、米国特許第4.706.483
号明細書(1987年11月17日発行)に記載の方法
である。この方法では、培地を冷却し、濃縮し、そして
超低温液体中に流してベレットを形成し、そしてこれら
のベレットを次に比較的低温で凍結乾燥する。
せることができる。典型的な例は、スプレー乾燥及び凍
結乾燥である。いずれの乾燥方法もINAを成る程度低
下させる0発酵話中で生成される大量のINAを保存す
る成る好ましい方法は、米国特許第4.706.483
号明細書(1987年11月17日発行)に記載の方法
である。この方法では、培地を冷却し、濃縮し、そして
超低温液体中に流してベレットを形成し、そしてこれら
のベレットを次に比較的低温で凍結乾燥する。
以下の実施例においては、INAは慣用技術を用いて計
算した。INAは複数個の微生物を含む水滴(10μm
)をパラフィン被覆アルミ箔上に置き、これを−5°C
の恒温浴中に入れることによって求めた。この方法の詳
細は、例えば文献Vali。
算した。INAは複数個の微生物を含む水滴(10μm
)をパラフィン被覆アルミ箔上に置き、これを−5°C
の恒温浴中に入れることによって求めた。この方法の詳
細は、例えば文献Vali。
(luantitative Evaluation
of ExperimentalResults on
the Hererogenous Freezin
g orSupercooled Liquids、
J、^toms Sci、、28.402〜409頁(
1971年)に記載されている。以下の実施例で報告し
たINAは、乾燥微生物1g当りの氷核形成部位の数で
ある。本発明の目的に対して、乾燥することなく発酵器
から直接サンプリングしたサンプルを用いてINAを測
定した。従って、これを「発酵器INAJと称する。そ
の単位は、乾燥微生物1g当りの核の数である。INA
の測定を間隔を置いてしばしば行うことにより、最適の
INA生産を決めることができる。
of ExperimentalResults on
the Hererogenous Freezin
g orSupercooled Liquids、
J、^toms Sci、、28.402〜409頁(
1971年)に記載されている。以下の実施例で報告し
たINAは、乾燥微生物1g当りの氷核形成部位の数で
ある。本発明の目的に対して、乾燥することなく発酵器
から直接サンプリングしたサンプルを用いてINAを測
定した。従って、これを「発酵器INAJと称する。そ
の単位は、乾燥微生物1g当りの核の数である。INA
の測定を間隔を置いてしばしば行うことにより、最適の
INA生産を決めることができる。
以下の表に示す発酵器生産性は、発酵器INAに細胞塊
を剰じ、10%種の接種から開始した発酵時間で除した
ものと定義される。単位は!・時間当りの核数である。
を剰じ、10%種の接種から開始した発酵時間で除した
ものと定義される。単位は!・時間当りの核数である。
以下、実施例によって本発明を具体的に説明する。
種の培養
前記の発酵培地51を含有する141発酵器中に、シュ
ードモナス・シリンゲ(P、syringae)八TC
C11h53543の試料4.5社を装入した。温度を
30℃に維持した。pl+が6.6に近づいた場合には
硫酸を加えた。この種(シード)発酵器中での発酵は2
1時間続けた。
ードモナス・シリンゲ(P、syringae)八TC
C11h53543の試料4.5社を装入した。温度を
30℃に維持した。pl+が6.6に近づいた場合には
硫酸を加えた。この種(シード)発酵器中での発酵は2
1時間続けた。
例1〜3
本発明を説明するために一連の発酵を実施しな。
各発酵において、種培養体の0.5f試料を、同じ成分
の培地4.51を含有する別の141発酵発酵器した。
の培地4.51を含有する別の141発酵発酵器した。
特に断らない限り、成分の濃度は同じである。温度は、
発酵の間、表に示すようにコントロールした。表中にお
いて、第1の温度は増殖期における温度であり、第2の
温度は定常期における温度である。温度が1つの場合に
は、発酵の間に温度変化がなかったことを示す。培地試
料を増殖期の終点で採取し、MSG含量を分析した。結
果を表中で「窒素含量」として示す、pHが6.6にな
ったら硫酸を添加し、pHが5.6になったら水酸化ナ
トリウムを添加した。溶解酸素は10%飽和より上に維
持した。すべての発酵は22時間行った。
発酵の間、表に示すようにコントロールした。表中にお
いて、第1の温度は増殖期における温度であり、第2の
温度は定常期における温度である。温度が1つの場合に
は、発酵の間に温度変化がなかったことを示す。培地試
料を増殖期の終点で採取し、MSG含量を分析した。結
果を表中で「窒素含量」として示す、pHが6.6にな
ったら硫酸を添加し、pHが5.6になったら水酸化ナ
トリウムを添加した。溶解酸素は10%飽和より上に維
持した。すべての発酵は22時間行った。
発泡抑制剤は発泡をコントロールするのに必要な場合に
添加した。結果を以下の表に示す。
添加した。結果を以下の表に示す。
り下余白
一表一
例、1 0.0 20 24 30−21
21.8例、2 181 7.26 22
33−21 8.00例、3 7.3
7.96 25 30−24 11.6比較例 CI 11 4.58 19 27−21 3.9
6C2142,191524−211,49C32NA
3.17 12 30−21 1.9C4コ
NA 5 1B 21
2.5C54NA 10
14.5 24
6.59C6NA O,54
24300,65N八−利用せず 1 この実験ではホスフェートが制御栄養であった。
21.8例、2 181 7.26 22
33−21 8.00例、3 7.3
7.96 25 30−24 11.6比較例 CI 11 4.58 19 27−21 3.9
6C2142,191524−211,49C32NA
3.17 12 30−21 1.9C4コ
NA 5 1B 21
2.5C54NA 10
14.5 24
6.59C6NA O,54
24300,65N八−利用せず 1 この実験ではホスフェートが制御栄養であった。
2 初期MSG濃度 25g/N
3 特JF62−236411の例1(36時間)の複
合窒素源4 特ij7#2−323063ノ例1のL−
グルタミン酸〔発明の効果〕 本発明は、氷核形成活性の高い生産性を提供するもので
ある。
合窒素源4 特ij7#2−323063ノ例1のL−
グルタミン酸〔発明の効果〕 本発明は、氷核形成活性の高い生産性を提供するもので
ある。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1、氷核形成活性をもつ微生物を培地において発酵させ
る工程とその微生物を回収する工程とを含む、氷核形成
活性をもつ微生物の発酵方法において、 (1)前記の微生物を窒素源含有培地において少なくと
も29℃の温度で増殖させる工程、及び(2)前記の発
酵を温度約24℃以下で定常期の間、続ける工程 を含んでなり、しかも前記の窒素源の濃度が(a)少な
くとも20g/lの細胞塊を提供するのに充分であり、
しかも (b)増殖期の終期においては、後の定常期における氷
核形成活性の形成を阻害するには不充分な窒素源しか残
留しないようにするのに充分な程度に低いものであるこ
とを特徴とする、氷核形成活性をもつ微生物の発酵方法
。
Applications Claiming Priority (2)
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Publication Number | Publication Date |
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- 1988-03-04 AT AT88103346T patent/ATE80655T1/de not_active IP Right Cessation
- 1988-03-04 JP JP63049913A patent/JPS63291577A/ja active Granted
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