JPH07322876A - 常温において氷核形成活性を有する微生物変異株及びこれを利用した雪又は氷の製造方法 - Google Patents
常温において氷核形成活性を有する微生物変異株及びこれを利用した雪又は氷の製造方法Info
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- JPH07322876A JPH07322876A JP6175850A JP17585094A JPH07322876A JP H07322876 A JPH07322876 A JP H07322876A JP 6175850 A JP6175850 A JP 6175850A JP 17585094 A JP17585094 A JP 17585094A JP H07322876 A JPH07322876 A JP H07322876A
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- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/874—Pseudomonas
Abstract
(57)【要約】
【目的】 ２５℃以下の温度において、氷核形成活性を
有する新しい変異株を提供する。また、このような常温
でも活発な氷核形成活性を有する氷核形成微生物を用い
て雪又は氷を製造する方法を提供する。 【構成】 常温で安定した氷核形成活性を有する菌株シ
ュードモナスシリンゲＳＯ７５４である。また、（ａ）
氷核形成微生物シュードモナスシリンゲＳＯ７５４を水
に懸濁して懸濁液を作り、（ｂ）上記懸濁液を２５℃以
下に保ちながら水源に注水する手順で雪又は氷を形成す
る、氷核形成微生物を利用した雪又は氷の製造方法であ
る。 【効果】 本発明のシュードモナスシリンゲＳＯ７５４
（Pseudomonas syringaeSO754）は、常温においても優
れた氷核形成活性を安定した状態で保持する新しい微生
物変異株であり、このシュードモナスシリンゲＳＯ７５
４を用いることにより、培養、菌体回収、乾燥、貯蔵の
段階において低温処理を必要とせず、雪又は氷を容易に
製造することができる。
有する新しい変異株を提供する。また、このような常温
でも活発な氷核形成活性を有する氷核形成微生物を用い
て雪又は氷を製造する方法を提供する。 【構成】 常温で安定した氷核形成活性を有する菌株シ
ュードモナスシリンゲＳＯ７５４である。また、（ａ）
氷核形成微生物シュードモナスシリンゲＳＯ７５４を水
に懸濁して懸濁液を作り、（ｂ）上記懸濁液を２５℃以
下に保ちながら水源に注水する手順で雪又は氷を形成す
る、氷核形成微生物を利用した雪又は氷の製造方法であ
る。 【効果】 本発明のシュードモナスシリンゲＳＯ７５４
（Pseudomonas syringaeSO754）は、常温においても優
れた氷核形成活性を安定した状態で保持する新しい微生
物変異株であり、このシュードモナスシリンゲＳＯ７５
４を用いることにより、培養、菌体回収、乾燥、貯蔵の
段階において低温処理を必要とせず、雪又は氷を容易に
製造することができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、氷核を形成する活性を
持つ新規な微生物変異株及びこれを利用した雪又は氷の
改良された製造方法に関する。より詳しくは、本発明
は、常温においても氷核形成の活性を持つシュードモナ
スシリンゲ（Pseudomonas syringae）の微生物変異株に
関し、また、これを利用して雪又は氷を製造する方法に
関するものである。
持つ新規な微生物変異株及びこれを利用した雪又は氷の
改良された製造方法に関する。より詳しくは、本発明
は、常温においても氷核形成の活性を持つシュードモナ
スシリンゲ（Pseudomonas syringae）の微生物変異株に
関し、また、これを利用して雪又は氷を製造する方法に
関するものである。
【０００２】
【従来の技術】米国特許第４，２００，２２８号明細書
には、微生物を懸濁させて空気中に噴霧することにより
雪を製造する方法が記載されている。この米国特許で用
いられた微生物は氷核の形成を促進することが知られて
いる微生物であり、そのような微生物の使用は通常可能
であるとされている温度よりずっと高い温度で雪を作る
ことができる。更にこの特許は、このような氷核を形成
する微生物を適宜な方法で培養し、その培地から氷核形
成活性を有する微生物を乾燥した状態で回収する方法も
開示している。
には、微生物を懸濁させて空気中に噴霧することにより
雪を製造する方法が記載されている。この米国特許で用
いられた微生物は氷核の形成を促進することが知られて
いる微生物であり、そのような微生物の使用は通常可能
であるとされている温度よりずっと高い温度で雪を作る
ことができる。更にこの特許は、このような氷核を形成
する微生物を適宜な方法で培養し、その培地から氷核形
成活性を有する微生物を乾燥した状態で回収する方法も
開示している。
【０００３】また、米国特許４，７０６ ４６３号明細
書は、氷核形成活性を有する微生物を回収する方法を開
示している。この方法は、シュードモナスシリンゲを１
５℃以下で培養し、その培養液を１５℃以下で濃縮し
て、核濃縮物を冷却した後ペレットをつくり、２５℃以
下の温度で凍結乾燥する手順を記述している。
書は、氷核形成活性を有する微生物を回収する方法を開
示している。この方法は、シュードモナスシリンゲを１
５℃以下で培養し、その培養液を１５℃以下で濃縮し
て、核濃縮物を冷却した後ペレットをつくり、２５℃以
下の温度で凍結乾燥する手順を記述している。
【０００４】また、米国特許４，７９６，８０５号明細
書には、氷核形成の微生物を利用した氷の製造方法が開
示されている。この方法は、氷核を形成する微生物の水
溶性懸濁液を作り、得られた該懸濁液を水原に注入し、
約１３℃以下の温度で氷核が形成された水原を作り、こ
の氷核が形成された水原を冷却する工程からなってい
る。しかしながら、この氷核形成の微生物懸濁液は２１
℃でおよそ２４時間放置すると、その氷核形成活性が完
全に失われることが知られている。
書には、氷核形成の微生物を利用した氷の製造方法が開
示されている。この方法は、氷核を形成する微生物の水
溶性懸濁液を作り、得られた該懸濁液を水原に注入し、
約１３℃以下の温度で氷核が形成された水原を作り、こ
の氷核が形成された水原を冷却する工程からなってい
る。しかしながら、この氷核形成の微生物懸濁液は２１
℃でおよそ２４時間放置すると、その氷核形成活性が完
全に失われることが知られている。
【０００５】このような従来の発明は、用いられた氷核
形成の微生物が常温でその氷核形成活性をたやすく喪失
するのを防止するための方法に向けられている。これら
の発明において有用な代表的氷核形成の微生物は、シュ
ードモナド（Pseudomonad ）、特にシュードモナスシリ
ンゲ（Pseudomonas syringae）である。好ましくは、Am
erican Type Culture Collectionに１９８６年９月２３
日付で寄託されているシュードモナスシリンゲＡＴＣＣ
５３，５４３である。氷核形成活性をもつ他の例として
は韓国遺伝工学研究所附設遺伝子銀行（Korean Collect
ion for Type Cultures ）へ寄託されているシュードモ
ナスシリンゲＫＣＴＣ１，８３２及び日本のInstitute
for Fermentation, Osaka へ寄託されているシュードモ
ナスシリンゲＩＦＯ３３１０等がある。
形成の微生物が常温でその氷核形成活性をたやすく喪失
するのを防止するための方法に向けられている。これら
の発明において有用な代表的氷核形成の微生物は、シュ
ードモナド（Pseudomonad ）、特にシュードモナスシリ
ンゲ（Pseudomonas syringae）である。好ましくは、Am
erican Type Culture Collectionに１９８６年９月２３
日付で寄託されているシュードモナスシリンゲＡＴＣＣ
５３，５４３である。氷核形成活性をもつ他の例として
は韓国遺伝工学研究所附設遺伝子銀行（Korean Collect
ion for Type Cultures ）へ寄託されているシュードモ
ナスシリンゲＫＣＴＣ１，８３２及び日本のInstitute
for Fermentation, Osaka へ寄託されているシュードモ
ナスシリンゲＩＦＯ３３１０等がある。
【０００６】氷核形成の微生物は、Mr. L. R. Makiと彼
の同僚により１９７４年始めて発見され（L. R. Maki e
t al., Applied Microbiology Vol.28, p456 (1974)
）、以後多数の氷核形成微生物が各種の植物体の葉か
ら抽出された。このような氷核形成微生物の例として
は、Pseudomonas syringae、Pseudomonas fluoscens 、
Pseudomonas pisi、Pseudomonas coronafaciens 、Pseu
domonasviridiflava 、Erwinia uredovara 、Ernia ana
nas、Xanthomonas campestris等がある。
の同僚により１９７４年始めて発見され（L. R. Maki e
t al., Applied Microbiology Vol.28, p456 (1974)
）、以後多数の氷核形成微生物が各種の植物体の葉か
ら抽出された。このような氷核形成微生物の例として
は、Pseudomonas syringae、Pseudomonas fluoscens 、
Pseudomonas pisi、Pseudomonas coronafaciens 、Pseu
domonasviridiflava 、Erwinia uredovara 、Ernia ana
nas、Xanthomonas campestris等がある。
【０００７】特にシュードモナスシリンゲは、氷核形成
活性が高く、産業上広く利用されている。しかしなが
ら、これら従来の微生物は、常温では不安定で氷核形成
活性をたやすく失ってしまうという欠点がある。その結
果、氷核形成活性を保つためには、これらの微生物は低
温において培養され、回収され、乾燥されなけらばなら
ない。しかも、これら微生物の懸濁液もまた低温に保持
される必要がある。
活性が高く、産業上広く利用されている。しかしなが
ら、これら従来の微生物は、常温では不安定で氷核形成
活性をたやすく失ってしまうという欠点がある。その結
果、氷核形成活性を保つためには、これらの微生物は低
温において培養され、回収され、乾燥されなけらばなら
ない。しかも、これら微生物の懸濁液もまた低温に保持
される必要がある。
【０００８】また、氷核形成微生物が工業的規模の氷の
生産に用いられるような場合には、多量の菌体が必要で
あり、そして、これらの微生物はその培養、回収、乾
燥、輸送及び貯蔵の間低温に維持されなければならず、
これらの低温保持の制約は相当な経費を必要とし、ま
た、製造工程を複雑にする。従って、より高い温度、例
えば常温においても氷核形成活性を保つ新規の変異株が
要求されている。
生産に用いられるような場合には、多量の菌体が必要で
あり、そして、これらの微生物はその培養、回収、乾
燥、輸送及び貯蔵の間低温に維持されなければならず、
これらの低温保持の制約は相当な経費を必要とし、ま
た、製造工程を複雑にする。従って、より高い温度、例
えば常温においても氷核形成活性を保つ新規の変異株が
要求されている。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】そこで、本発明者ら
は、常温で氷核形成活性を有する新しい変異株について
鋭意研究を重ね、その結果、常温においても氷核形成活
性を安定した状態で保持するシュードモナスシリンゲＳ
Ｏ７５４（Pseudomonas syringae SO754）を得るに至
り、そして、このシュードモナスシリンゲＳＯ７５４が
その培養、回収、乾燥、輸送及び貯蔵の際に、常温でも
活発な氷核形成活性を保持するのを見出し、本発明を完
成した。
は、常温で氷核形成活性を有する新しい変異株について
鋭意研究を重ね、その結果、常温においても氷核形成活
性を安定した状態で保持するシュードモナスシリンゲＳ
Ｏ７５４（Pseudomonas syringae SO754）を得るに至
り、そして、このシュードモナスシリンゲＳＯ７５４が
その培養、回収、乾燥、輸送及び貯蔵の際に、常温でも
活発な氷核形成活性を保持するのを見出し、本発明を完
成した。
【００１０】従って、本発明の目的は、２５℃以下の温
度において、氷核形成活性を有する新しい変異株を提供
することにある。また、本発明の他の目的は、このよう
な常温でも活発な氷核形成活性を有する氷核形成微生物
を用いて雪又は氷を製造する方法を提供することにあ
る。
度において、氷核形成活性を有する新しい変異株を提供
することにある。また、本発明の他の目的は、このよう
な常温でも活発な氷核形成活性を有する氷核形成微生物
を用いて雪又は氷を製造する方法を提供することにあ
る。
【００１１】
【課題を解決するための手段】すなわち、本発明は、常
温で安定した氷核形成活性を有する菌株シュードモナス
シリンゲＳＯ７５４である。また、本発明は、（ａ）氷
核形成微生物シュードモナスシリンゲＳＯ７５４を水に
懸濁して懸濁液を作り、（ｂ）上記懸濁液を２５℃以下
に保ちながら水源に注水する手順で雪又は氷を形成す
る、氷核形成微生物を利用した雪又は氷の製造方法であ
る。
温で安定した氷核形成活性を有する菌株シュードモナス
シリンゲＳＯ７５４である。また、本発明は、（ａ）氷
核形成微生物シュードモナスシリンゲＳＯ７５４を水に
懸濁して懸濁液を作り、（ｂ）上記懸濁液を２５℃以下
に保ちながら水源に注水する手順で雪又は氷を形成す
る、氷核形成微生物を利用した雪又は氷の製造方法であ
る。
【００１２】本発明の氷核形成活性を有する微生物は、
霜に傷んだ植物体の葉から微生物を分離して採取し、こ
の分離された微生物の中ら、常温でも氷核を形成する活
性を有する微生物を選別する。引き続いて突然変異を誘
発させそして選別する工程が行われる。
霜に傷んだ植物体の葉から微生物を分離して採取し、こ
の分離された微生物の中ら、常温でも氷核を形成する活
性を有する微生物を選別する。引き続いて突然変異を誘
発させそして選別する工程が行われる。
【００１３】氷核を形成する微生物の選別 霜に傷んだ植物体の葉を生理食塩水で洗浄し、その洗浄
液を、０．３％の肉汁エキス、０．５％のペプトン、
２．５％のグリセロール、及び１．５％の寒天を含有す
る栄養寒天培地に塗布して３０℃で２日間培養した。第
１次の選別をするため、培養器を−４℃の冷却槽に１０
分間放置した後、結氷現象を示すコロニーを選別した。
液を、０．３％の肉汁エキス、０．５％のペプトン、
２．５％のグリセロール、及び１．５％の寒天を含有す
る栄養寒天培地に塗布して３０℃で２日間培養した。第
１次の選別をするため、培養器を−４℃の冷却槽に１０
分間放置した後、結氷現象を示すコロニーを選別した。
【００１４】第１次の選別で選別した７５種のコロニー
を各々３０℃で培養し、氷核形成活性が最も優れた微生
物を選別した。この第２次の選別は、全てのコロニーの
氷核形成活性を比較して実施した。
を各々３０℃で培養し、氷核形成活性が最も優れた微生
物を選別した。この第２次の選別は、全てのコロニーの
氷核形成活性を比較して実施した。
【００１５】氷核形成活性については次のような方法で
決定した。すなわち、分離した菌株を０．３％の肉汁エ
ッキス、０．５％のペプトン、２．５％のグリセロール
等を含有する栄養液体培地で３０℃の下で２４時間培養
し、この培養された菌株を収穫して５０ｍＭの燐酸緩衝
溶液（ｐＨ７．０）に分散させた。このような条件下、
氷核形成活性は氷核の形成が観察される温度を測定して
決定した。
決定した。すなわち、分離した菌株を０．３％の肉汁エ
ッキス、０．５％のペプトン、２．５％のグリセロール
等を含有する栄養液体培地で３０℃の下で２４時間培養
し、この培養された菌株を収穫して５０ｍＭの燐酸緩衝
溶液（ｐＨ７．０）に分散させた。このような条件下、
氷核形成活性は氷核の形成が観察される温度を測定して
決定した。
【００１６】氷核形成活性は、Mr. Valiの方法（Vali,
G.; J. Atmos. Sci., 28, pp402-409 (1971)）によって
氷核分光計（Freezing nucleus spectrometer, Mitsuwa
model K-1, Japan ）を用いて測定した。７５種のコロ
ニーの中、氷核形成性能が最も優れた菌株１種を、新規
の変異株を生成するための母菌株とした。
G.; J. Atmos. Sci., 28, pp402-409 (1971)）によって
氷核分光計（Freezing nucleus spectrometer, Mitsuwa
model K-1, Japan ）を用いて測定した。７５種のコロ
ニーの中、氷核形成性能が最も優れた菌株１種を、新規
の変異株を生成するための母菌株とした。
【００１７】微生物の同定 母菌株の同定はMr. Krieg の方法（Krieg, N. R.; Berg
ey's manual of systematic bacteriology, Vol. 1, 19
84）によって実施した。分類学的特性及び生理学的特性
は表１と表２に示した。表１及び２の結果により、母菌
株は、シュードモナスシリンゲ（Pseudomonassyringa
e）に特定され、シュードモナスシリンゲＳＯ７（Pseud
omonas syringaeSO7）と命名された。
ey's manual of systematic bacteriology, Vol. 1, 19
84）によって実施した。分類学的特性及び生理学的特性
は表１と表２に示した。表１及び２の結果により、母菌
株は、シュードモナスシリンゲ（Pseudomonassyringa
e）に特定され、シュードモナスシリンゲＳＯ７（Pseud
omonas syringaeSO7）と命名された。
【００１８】表１：母菌株ＳＯ７の分類学的特性 形態 短い棒状 大きさ ０．７〜１．０×１．２〜１．
６μｍ グラム染色 陰性 運動力 陽性 酸素要求度 好気性 群落の色相 浅黄−白色 最適温度 ２８℃ 蛍光色素 陽性 ４１℃生長 陰性 レバン生成（levan ） 陽性 アルギニン分解 陰性 オキシメージ反応 陰性 脱窒素反応 陰性 ゼラチン分解 陽性 澱粉分解 陰性
６μｍ グラム染色 陰性 運動力 陽性 酸素要求度 好気性 群落の色相 浅黄−白色 最適温度 ２８℃ 蛍光色素 陽性 ４１℃生長 陰性 レバン生成（levan ） 陽性 アルギニン分解 陰性 オキシメージ反応 陰性 脱窒素反応 陰性 ゼラチン分解 陽性 澱粉分解 陰性
【００１９】 表２：母菌株ＳＯ７の生理学的特性 炭素源 利用の可否 炭素源 利用の可否 Glucose ＋ L-Alanine ＋ D-Ribose ± D-Alanine − L-Arabinose ± L-leucine − D-Mannose ± L-histidine − D-Fructose ± L-Tyrosine − Raffinose ＋ L-Tryptophan − Fumarate ＋ Putrescine ＋ Sucrose ± Sarcosine ＋ Saccharate − Linolenate − Valerate ＋ Ascorbate ＋ Pyruvate ＋ Lecithin − Sorbitol ± Asparagine −
【００２０】変異株の製造 上記の如く選別された母菌株ＳＯ７は、３０℃の培養条
件下でもかなり盛んな氷核形成の活性を保持するが、そ
の活性は熱に対してやはり不安定であった。そこで、熱
に対して安定性のある氷核形成微生物をつくるために、
母菌株ＳＯ７に突然変異を誘発させて熱処理を行い、そ
の後に氷核形成の活性度を測定することで、熱に対して
安定性の高い氷核形成微生物の変異株を選別することが
できた。
件下でもかなり盛んな氷核形成の活性を保持するが、そ
の活性は熱に対してやはり不安定であった。そこで、熱
に対して安定性のある氷核形成微生物をつくるために、
母菌株ＳＯ７に突然変異を誘発させて熱処理を行い、そ
の後に氷核形成の活性度を測定することで、熱に対して
安定性の高い氷核形成微生物の変異株を選別することが
できた。
【００２１】突然変異は突然変異源として紫外線を用い
通常の方法によって実施した。シュードモナスシリンゲ
ＳＯ７を３０℃のグリセロール栄養培地で対数期まで培
養した後菌体を回収した。回収した菌体を生理食塩水へ
懸濁させ、グリセロール栄養寒天培地に塗布して菌の死
滅率が９５％に至るまで紫外線を照射した後、直ちに３
０℃の暗所に移して２４時間培養した。
通常の方法によって実施した。シュードモナスシリンゲ
ＳＯ７を３０℃のグリセロール栄養培地で対数期まで培
養した後菌体を回収した。回収した菌体を生理食塩水へ
懸濁させ、グリセロール栄養寒天培地に塗布して菌の死
滅率が９５％に至るまで紫外線を照射した後、直ちに３
０℃の暗所に移して２４時間培養した。
【００２２】形成された生存微生物の群落は滅菌したベ
ルベットを用いてレプリカ（Replica ）をつくり、３０
℃で２４時間培養した。レプリカを−４℃の冷却槽に放
置し、最も短い時間で結氷現象を起こしたコロニー数株
を選別した。選別したコロニーの氷核形成活性は氷核分
光計で測定した。これらの中で、活発な氷核形成活性を
示し、常温においても活性を保持する菌株を選別した。
ルベットを用いてレプリカ（Replica ）をつくり、３０
℃で２４時間培養した。レプリカを−４℃の冷却槽に放
置し、最も短い時間で結氷現象を起こしたコロニー数株
を選別した。選別したコロニーの氷核形成活性は氷核分
光計で測定した。これらの中で、活発な氷核形成活性を
示し、常温においても活性を保持する菌株を選別した。
【００２３】これらの菌株を３０℃のグリセロール栄養
培地で４８時間培養した後、遠心分離を施して菌体を回
収し、生理食塩水で洗浄した後に凍結乾燥した。凍結乾
燥した菌体は、５０ｍＭの燐酸緩衝溶液（ｐＨ７．０）
に分散させ、４０℃、３５℃、３０℃、２５℃、２０
℃、１０℃及び４℃の恒温槽中に２４時間放置した後、
氷核分光計を用いて活性を測定した。
培地で４８時間培養した後、遠心分離を施して菌体を回
収し、生理食塩水で洗浄した後に凍結乾燥した。凍結乾
燥した菌体は、５０ｍＭの燐酸緩衝溶液（ｐＨ７．０）
に分散させ、４０℃、３５℃、３０℃、２５℃、２０
℃、１０℃及び４℃の恒温槽中に２４時間放置した後、
氷核分光計を用いて活性を測定した。
【００２４】上記方法によって常温においても活性が高
くかつ安定した変異株１種を最終的に選別し、シュード
モナスシリンゲＳＯ７５４（Pseudomonas syringae SO7
54）と命名した。このシュードモナスシリンゲＳＯ７５
４はブタペスト条約により韓国種菌協会附設韓国微生物
保存センター（Korean Culture Collection Microorgan
ism ）に１９９３年７月１９日付受託番号ＫＣＣＭ−１
００３９として寄託された。
くかつ安定した変異株１種を最終的に選別し、シュード
モナスシリンゲＳＯ７５４（Pseudomonas syringae SO7
54）と命名した。このシュードモナスシリンゲＳＯ７５
４はブタペスト条約により韓国種菌協会附設韓国微生物
保存センター（Korean Culture Collection Microorgan
ism ）に１９９３年７月１９日付受託番号ＫＣＣＭ−１
００３９として寄託された。
【００２５】本発明の微生物変異株は、高い温度におい
ても活発な氷核形成活性を維持する点を除けば、その母
菌株ＳＯ７と同様な微生物学的特性を示し、シュードモ
ナスシリンゲの培地として通常用いられ、かつ、適切な
窒素源と、炭素源と、調整された水素イオン濃度の無機
塩類とを含む培地で培養することができる。このような
培地の調製と培養条件は、当業界に従事する者が容易に
最適化し活用し得ることである。
ても活発な氷核形成活性を維持する点を除けば、その母
菌株ＳＯ７と同様な微生物学的特性を示し、シュードモ
ナスシリンゲの培地として通常用いられ、かつ、適切な
窒素源と、炭素源と、調整された水素イオン濃度の無機
塩類とを含む培地で培養することができる。このような
培地の調製と培養条件は、当業界に従事する者が容易に
最適化し活用し得ることである。
【００２６】これまで用いられてきた氷核形成の微生物
は、２８〜３０℃で最大の菌体量を回収できるが、氷核
形成活性が著しく低下するので、約２１℃以下の低い温
度で培養されていた。しかしながら、本発明の微生物変
異株は、６０℃以下の温度において、特に４０℃以下の
温度において活発な氷核形成活性を示す。
は、２８〜３０℃で最大の菌体量を回収できるが、氷核
形成活性が著しく低下するので、約２１℃以下の低い温
度で培養されていた。しかしながら、本発明の微生物変
異株は、６０℃以下の温度において、特に４０℃以下の
温度において活発な氷核形成活性を示す。
【００２７】
【実施例】以下、実施例及び比較例に基づいて本発明を
より詳しく説明するが、後述するこれらの実施例は例示
的なことにすぎず、本発明がこれらの実施例に制限され
るものではない。
より詳しく説明するが、後述するこれらの実施例は例示
的なことにすぎず、本発明がこれらの実施例に制限され
るものではない。
【００２８】実施例１ シュードモナスシリンゲＳＯ７５４（ＫＣＣＭ−１００
３９）の５試料（試料Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＥ）を３リッ
トルのグリセロール栄養培地（０．３％の肉汁エツキ
ス、０．５％のペプトン、及び０．５％のグリセロー
ル）に接種し、空気流入量１．０ＶＶＭ、ｐＨ６．０の
条件下に、培養温度をそれぞれ１５℃（試料Ａ）、２０
℃（試料Ｂ）、２５℃（試料Ｃ）、２８℃（試料Ｄ）、
及び３０℃（試料Ｅ）として２４時間培養した。
３９）の５試料（試料Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＥ）を３リッ
トルのグリセロール栄養培地（０．３％の肉汁エツキ
ス、０．５％のペプトン、及び０．５％のグリセロー
ル）に接種し、空気流入量１．０ＶＶＭ、ｐＨ６．０の
条件下に、培養温度をそれぞれ１５℃（試料Ａ）、２０
℃（試料Ｂ）、２５℃（試料Ｃ）、２８℃（試料Ｄ）、
及び３０℃（試料Ｅ）として２４時間培養した。
【００２９】培養終了後、遠心分離して細胞を回収し、
５０ｍＭの燐酸緩衝溶液（ｐＨ７．０）に分散させ、M
r. Valiの方法（Vali, G. J.; J. Atmos. Sci., 28, pp
402-409 (1971) ）によって氷核形成活性を測定した。
この氷核形成活性は、総試料の５０％が凍結する温度
（Ｔ５０％）を測定して決定した。結果は、試料Ａの活
性（Ｔ５０％）が−２．６℃であり、試料Ｂの活性が−
２．５℃、試料Ｃの活性が−２．８℃であり、試料Ｄの
活性が−２．８℃であり、試料Ｅの活性が−３．０℃で
あった。
５０ｍＭの燐酸緩衝溶液（ｐＨ７．０）に分散させ、M
r. Valiの方法（Vali, G. J.; J. Atmos. Sci., 28, pp
402-409 (1971) ）によって氷核形成活性を測定した。
この氷核形成活性は、総試料の５０％が凍結する温度
（Ｔ５０％）を測定して決定した。結果は、試料Ａの活
性（Ｔ５０％）が−２．６℃であり、試料Ｂの活性が−
２．５℃、試料Ｃの活性が−２．８℃であり、試料Ｄの
活性が−２．８℃であり、試料Ｅの活性が−３．０℃で
あった。
【００３０】比較例１ シュードモナスシリンゲＡＴＣＣ５３，５４３を用いた
以外は実施例１と同じ方法で氷核形成活性を調べた。結
果は、試料Ａの活性（Ｔ５０％）が−２．７℃であり、
試料Ｂの活性が−２．７℃であり、試料Ｃの活性が−
３．５℃であり、試料Ｄの活性が−４．２℃であり、試
料Ｅの活性が−４．９℃であった。
以外は実施例１と同じ方法で氷核形成活性を調べた。結
果は、試料Ａの活性（Ｔ５０％）が−２．７℃であり、
試料Ｂの活性が−２．７℃であり、試料Ｃの活性が−
３．５℃であり、試料Ｄの活性が−４．２℃であり、試
料Ｅの活性が−４．９℃であった。
【００３１】これら実施例１と比較例１から得られた結
果を表３に示す。 表３：氷核形成活性（Ｔ５０％） 試料 培養温度 実施例１ 比較例１ Ａ １５℃ −２．６℃ −２．７℃ Ｂ ２１℃ −２．５℃ −２．８℃ Ｃ ２５℃ −２．８℃ −３．５℃ Ｄ ２８℃ −２．８℃ −４．２℃ Ｅ ３０℃ −３．０℃ −４．９℃
果を表３に示す。 表３：氷核形成活性（Ｔ５０％） 試料 培養温度 実施例１ 比較例１ Ａ １５℃ −２．６℃ −２．７℃ Ｂ ２１℃ −２．５℃ −２．８℃ Ｃ ２５℃ −２．８℃ −３．５℃ Ｄ ２８℃ −２．８℃ −４．２℃ Ｅ ３０℃ −３．０℃ −４．９℃
【００３２】実施例２ 実施例１において２８℃で培養されたシュードモナスシ
リンゲＳＯ７５４（ＫＣＣＭ−１００３９）の４つの試
料（Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ）を噴霧乾燥器で乾燥物の最終温度
が各々６０℃（試料Ｆ）、５０℃（試料Ｇ）、４０℃
（試料Ｈ）、及び３０℃（試料Ｉ）になるまで乾燥させ
た。乾燥した試料Ｆの活性（Ｔ５０％）は−５．２℃で
あり、試料Ｇの活性は−４．１℃であり、試料Ｈの活性
は−３．６℃であり、また、試料Ｉの活性は−３．１℃
であった。
リンゲＳＯ７５４（ＫＣＣＭ−１００３９）の４つの試
料（Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ）を噴霧乾燥器で乾燥物の最終温度
が各々６０℃（試料Ｆ）、５０℃（試料Ｇ）、４０℃
（試料Ｈ）、及び３０℃（試料Ｉ）になるまで乾燥させ
た。乾燥した試料Ｆの活性（Ｔ５０％）は−５．２℃で
あり、試料Ｇの活性は−４．１℃であり、試料Ｈの活性
は−３．６℃であり、また、試料Ｉの活性は−３．１℃
であった。
【００３３】比較例２ シュードモナスシリンゲＡＴＣＣ５３，５４３を用いた
以外は実施例２と同じ方法で氷核形成活性を調べた。乾
燥した試料Ｆの活性（Ｔ５０％）は−８．３℃であり、
試料Ｇの活性は−６．７℃であり、試料Ｈの活性は−
５．７℃であり、試料Ｉの活性は−３．８℃であった。
以外は実施例２と同じ方法で氷核形成活性を調べた。乾
燥した試料Ｆの活性（Ｔ５０％）は−８．３℃であり、
試料Ｇの活性は−６．７℃であり、試料Ｈの活性は−
５．７℃であり、試料Ｉの活性は−３．８℃であった。
【００３４】実施例２と比較例２から得られた結果を表
４に示す。 表４：氷核形成活性（Ｔ５０％） 試料 乾燥物最終温度 実施例２ 比較例２ Ｆ ６０℃ −５．２℃ −８．３℃ Ｇ ５０℃ −４．１℃ −６．７℃ Ｈ ４０℃ −３．６℃ −５．７℃ Ｉ ３０℃ −３．１℃ −３．８℃
４に示す。 表４：氷核形成活性（Ｔ５０％） 試料 乾燥物最終温度 実施例２ 比較例２ Ｆ ６０℃ −５．２℃ −８．３℃ Ｇ ５０℃ −４．１℃ −６．７℃ Ｈ ４０℃ −３．６℃ −５．７℃ Ｉ ３０℃ −３．１℃ −３．８℃
【００３５】実施例３ 実施例２で得られた試料Ｈ（乾燥物の最終温度４０℃）
の乾燥した菌体を蒸留水に分散させて懸濁液を調製し、
この懸濁液を７箇の試料（ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ、
ｇ）に分けて各々４℃、１０℃、２０℃、２５℃、３０
℃、３５℃、４０℃を保つ恒温装置で１２時間放置し
た。試料の氷核形成活性は、実施例２の活性に対する残
留活性（remaining activity) の百分率で表した。結果
を表５に示す。
の乾燥した菌体を蒸留水に分散させて懸濁液を調製し、
この懸濁液を７箇の試料（ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ、
ｇ）に分けて各々４℃、１０℃、２０℃、２５℃、３０
℃、３５℃、４０℃を保つ恒温装置で１２時間放置し
た。試料の氷核形成活性は、実施例２の活性に対する残
留活性（remaining activity) の百分率で表した。結果
を表５に示す。
【００３６】比較例３ 比較例２で得られた試料Ｃ（最終温度４０℃）の乾燥し
た菌体を用いた以外は、実施例３と同じ条件で氷核形成
活性を測定した。試料の氷核形成活性は、比較例２の活
性に対する残留活性（remaining activity) の百分率で
表した。結果を表５に示す。
た菌体を用いた以外は、実施例３と同じ条件で氷核形成
活性を測定した。試料の氷核形成活性は、比較例２の活
性に対する残留活性（remaining activity) の百分率で
表した。結果を表５に示す。
【００３７】 表５：残留試料の総氷核形成活性（％） 試料 試料温度 実施例３ 比較例３ ａ ４℃ ９９．８％±５．４ ９２．３％±２．５ ｂ １０℃ ９１．２％±３．１ ８９．６％±３．１ ｃ ２０℃ ９７．６％±２．３ ８１．５％±３．４ ｄ ２５℃ ９５．４％±２．９ ７５．３％±５．２ ｅ ３０℃ ８９．７％±３．４ ５４．３％±６．７ ｆ ３５℃ ８２．３％±３．３ ２５．９％±７．３ ｇ ４０℃ ７５．１％±５．１ １１．０％±６．４
【００３８】上記実施例１、２、３及び比較例１、２、
３から明らかなように、本発明の新規な微生物変異株Ｋ
ＣＣＭ−１００３９は、従来の微生物ＡＴＣＣ−５５，
５４３よりその氷核形成活性が優れ、特に２５〜４０℃
において本発明の微生物の活性がより優れており、常温
で氷核形成が可能であるという長点がある。以上、本発
明の好ましい具現例を挙げて詳細に説明したが、本発明
の趣旨と範囲内で多様な変形が可能であることも知る必
要がある。
３から明らかなように、本発明の新規な微生物変異株Ｋ
ＣＣＭ−１００３９は、従来の微生物ＡＴＣＣ−５５，
５４３よりその氷核形成活性が優れ、特に２５〜４０℃
において本発明の微生物の活性がより優れており、常温
で氷核形成が可能であるという長点がある。以上、本発
明の好ましい具現例を挙げて詳細に説明したが、本発明
の趣旨と範囲内で多様な変形が可能であることも知る必
要がある。
【００３９】
【発明の効果】本発明のシュードモナスシリンゲＳＯ７
５４（Pseudomonas syringae SO754）は、常温において
も優れた氷核形成活性を安定した状態で保持する新しい
微生物変異株であり、このシュードモナスシリンゲＳＯ
７５４を用いることにより、培養、菌体回収、乾燥、貯
蔵の段階において低温処理を必要とせず、雪又は氷を容
易に製造することができる。
５４（Pseudomonas syringae SO754）は、常温において
も優れた氷核形成活性を安定した状態で保持する新しい
微生物変異株であり、このシュードモナスシリンゲＳＯ
７５４を用いることにより、培養、菌体回収、乾燥、貯
蔵の段階において低温処理を必要とせず、雪又は氷を容
易に製造することができる。
Claims (2)
- 【請求項１】 常温で安定した氷核形成活性を有する菌
株シュードモナスシリンゲＳＯ７５４。 - 【請求項２】 （ａ）氷核形成微生物シュードモナスシ
リンゲＳＯ７５４を水に懸濁して懸濁液を作り、（ｂ）
上記懸濁液を２５℃以下に保ちながら水源に注水する手
順で雪又は氷を形成することを特徴とする氷核形成微生
物を利用した雪又は氷の製造方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1019930014322A KR960014623B1 (ko) | 1993-07-27 | 1993-07-27 | 신규의 빙핵형성 미생물 변이주 및 이를 이용한 눈 또는 얼음의 제조방법 |
| KR1993-14322 | 1993-07-27 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07322876A true JPH07322876A (ja) | 1995-12-12 |
Family
ID=19360148
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6175850A Pending JPH07322876A (ja) | 1993-07-27 | 1994-07-27 | 常温において氷核形成活性を有する微生物変異株及びこれを利用した雪又は氷の製造方法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5489521A (ja) |
| JP (1) | JPH07322876A (ja) |
| KR (1) | KR960014623B1 (ja) |
| FR (1) | FR2708282B1 (ja) |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5807697A (en) * | 1996-04-19 | 1998-09-15 | Lockheed Martin Energy Systems, Inc. | Biological tracer method |
| KR0180858B1 (ko) * | 1996-09-19 | 1999-04-01 | 김경환 | 신규한 빙핵활성 미생물 |
| US20060248793A1 (en) * | 2005-05-04 | 2006-11-09 | Takemoto Jon Y | Method for making fungi compatible artificial snow |
| US8128872B2 (en) * | 2008-07-30 | 2012-03-06 | Temptime Corporation | Freeze indicators, components therefor and preparative processes |
| JP5559886B2 (ja) | 2009-08-31 | 2014-07-23 | テンプタイム コーポレイション | 制御された温度応答を有する凍結インジケータ |
| US8430053B2 (en) | 2010-09-30 | 2013-04-30 | Temptime Corporation | Color-changing emulsions for freeze indicators |
| CN104583741B (zh) | 2012-08-16 | 2017-10-31 | 泰坦公司 | 应用光散射的冷冻指示器及其制造方法 |
| WO2017015529A1 (en) | 2015-07-22 | 2017-01-26 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Fluidic devices with freeze-thaw valves with ice-nucleating agents and related methods of operation and analysis |
| EP3478060A4 (en) | 2016-06-29 | 2020-02-12 | The General Hospital Corporation | ICE NUCLEATION FORMULATIONS FOR THE CRYCON PRESERVATION AND STABILIZATION OF BIOLOGICS |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63291577A (ja) * | 1987-03-05 | 1988-11-29 | ジェネンコア インターナショナル，インコーポレイティド | 氷核形成活性をもつ微生物の発酵方法 |
| JPH0276589A (ja) * | 1987-09-15 | 1990-03-15 | Eastman Kodak Co | 氷核形成性微生物を用いる氷の製造方法 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4200228A (en) * | 1978-09-18 | 1980-04-29 | Woerpel Marvin D | Snow making |
| US4706463A (en) * | 1986-09-23 | 1987-11-17 | Eastman Kodak Company | Recovery of microorganism having ice nucleating activity |
| US5137815A (en) * | 1986-09-23 | 1992-08-11 | Genencor International | Production of microorganisms having ice nucleating activity |
| US4978540A (en) * | 1988-01-20 | 1990-12-18 | Lee Tung Ching | Production of frozen foods and other products |
| CA1297824C (en) * | 1988-03-07 | 1992-03-24 | Carole B. Lindsey | Spray drying of microorganisms having ice nucleating activity |
-
1993
- 1993-07-27 KR KR1019930014322A patent/KR960014623B1/ko not_active IP Right Cessation
-
1994
- 1994-07-27 JP JP6175850A patent/JPH07322876A/ja active Pending
- 1994-07-27 FR FR9409315A patent/FR2708282B1/fr not_active Expired - Fee Related
- 1994-07-27 US US08/281,033 patent/US5489521A/en not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63291577A (ja) * | 1987-03-05 | 1988-11-29 | ジェネンコア インターナショナル，インコーポレイティド | 氷核形成活性をもつ微生物の発酵方法 |
| JPH0276589A (ja) * | 1987-09-15 | 1990-03-15 | Eastman Kodak Co | 氷核形成性微生物を用いる氷の製造方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR950003440A (ko) | 1995-02-16 |
| FR2708282A1 (fr) | 1995-02-03 |
| KR960014623B1 (ko) | 1996-10-19 |
| US5489521A (en) | 1996-02-06 |
| FR2708282B1 (fr) | 1997-07-18 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 19980707 |