JPS63276496A - 哺乳類Ｔ細胞受容体β鎖定常領域ポリペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は哺乳類たとえば、マウスあるいはヒトなどのＴ
細胞受容体β鎖定常領域ポリペプチド（以下Ｔ細胞受容
体蛋白質ともいう）の大腸菌における生産とそのＴ細胞
受容体蛋白質を抗原として用いて該蛋白質と反応する抗
体（以下Ｔ細胞受容体抗体という）を製造する方法に関
する。Ｔ細胞受容体は哺乳類のリンパ球の一種であるＴ
細胞の表面にのみ特異的に発現している。Ｔ細胞受容体
はα鎖とβ鎖の２種のポリペプチドより成ると考えられ
ておりそれぞれの鎖は個々のＴ細胞により異なるアミノ
酸配列を有する可変部領域とすべてのＴ細胞で同じアミ
ノ酸配列を有する定常部領域の２つの部分からできてい
る。

従って本発明によって提供されるＴ細胞受容体蛋白質と
その蛋白質を抗原として用いて作製された抗Ｔ細胞受容
体抗体は哺乳類のリンパ球を分類するための重要な医療
用試薬となりうる。Ｔ細胞受容体に対する抗体は、Ｔ細
胞受容体と結合した際にＴ細胞の刺激活性化をおこなう
と考えられる。

そのため例えば抗腫瘍モノクローナル抗体とこの抗Ｔ細
胞受容体抗体を結合させたものを生体内に投与すれば、
生体中のＴ細胞とガン細胞を結合させることができる。

Ｔ細胞の一種であるキラーＴ細胞は結合した細胞を殺す
と考えられるので、このような方法により作製されたハ
イブリッド抗体は抗ガン作用をもつことが期待される。

このようにＴ細胞受容体蛋白質とそれに対する抗体は、
医療分野において広い用途が期待できる。

従来技術 哺乳類のＴ細胞受容体は、リンパ球の一種であるＴ細胞
の膜表面に形成されるが、それらの機能ならびに構造は
未だ部分的に明らかにされているのみである。

Ｔ細胞受容体のうちβ鎖については、Ｙ、　Ｙａｎａｇ
ｉらによってネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）　３０８　、
１４５　（１９８４）にヒトの遺伝子について、またＳ
、　Ｍ、　ｔｌｅｄｒｉｃｋ　らによってネイチ＋　−
（Ｎａｔｕｒｅ）　３０８．１４９（１９８４）にマウ
スの遺伝子について報告されている。Ｔ細胞受容体のα
鎖（Ｙ、Ｃｈｉｅｎら、ネイチａｙ　−（Ｎａｔｕｒｅ
）　３￥Ｌ。

３１　（１９８４）　）および機能は全く分かっていな
いか同じくＴ細胞受容体の一種と考えられるｒｌｌ：Ｈ
。

５ａｉｔｏ　ら、ネイチ＋　−（Ｎａｔｕｒｅ）　３０
９．７５７　（１９８４））についてもその遺伝子構造
が明らかにされている。

Ｔ細胞受容体遺伝子の発現に関しては、Ｚ、Ｄｅｍｂｉ
ｃらによってネイチ＋−（Ｎａｔｕｒｅ）　３２０．２
３２（１９８６）に、マウスキラーＴ細胞を宿主として
行われている例があるが、その蛋白質自体を利用するこ
とを目的として大腸菌その他の生物において大量に発現
されている例は未だない。

一方、Ｔ細胞受容体に対する抗体に関しては、その可変
部領域を認識する抗イデイオタイプ抗体について、Ｊ、
Ｐ、＾１ｌｉｓｏｎ　らによってジャーナル・オブ・イ
ムノロジー（Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　）ユ２９．２
２９３（１９８２）に報告されている。Ｔ細胞受容体の
定常領域を認識すると考えられる抗体の作製に関しては
、未だ報告がない。

発明が解決しようとする問題点 Ｔ細胞受容体の定常部領“域を認識する抗体は、Ｔ細胞
受容体がＴ細胞の直接的なマーカーであることを考える
と、例えばリンパ腫などにおけるリンパ球のクラス分け
など、臨床診断薬として応用できる。また、このような
抗体は生体に投与した際、生体中のキラーＴ細胞の定常
部領域に結合し、そのキラーＴ細胞を活性化する可能性
がある。このような抗体と腫瘍抗原に対する抗体とを化
学的に結合させ、生体に投与してやればキラーＴ細胞が
、腫瘍細胞を殺すことも期待できる。このように抗ガン
剤として応用される可能性がある。

Ｔ細胞受容体の定常部領域を認識する抗体を作製するた
めには抗原として用いるＴ細胞受容体定常部領域蛋白が
必要である。しかしＴ細胞で生産されているＴ細胞受容
体の量は少なく、免疫原として用いるほどの量を取得す
ることは困難である。

従って哺乳類のＴ細胞受容体を大量に供給する方法の開
発が望まれている。

問題点を解決するための手段 本発明者らは、組換えＤＮＡ技法によりマウスのＴ細胞
受容体β鎖定常領域を製造する方法について研究を行っ
た。その結果、抗体作製の為の抗原として用いるに足る
量のマウスＴ細胞受容体β鎖定常領域ポリペプチドの大
腸菌における製造に成功した。即ち、マウスＴ細胞受容
体βｔＪ　ｃ　Ｄ　Ｎ　Ａより、可変領域、膜結合領域
および細胞内領域を除く定常領域の細胞外ドメインに相
当する部分に対応するＤＮΔ部分を切り出し、大腸菌の
発現ベクターに組み込んだプラスミドを得た。このプラ
スミドを含む大腸菌を培養することにより、培養物中に
マウスＴ細胞受容体β鎖定常領域ポリペプチドが著量蓄
積することを見出した。さらにこのポリペプチドを精製
し、抗原として用いてウサギを免疫し、抗血清を取得し
た。得られた抗血清は、大腸菌によって作製されたマウ
スＴ細胞受容体β鎖定常領域ポリペプチドと反応するこ
とが確認された。

以下に本発明の詳細な説明する。

本発明は、マウスのＴ細胞受容体β鎖定常領域の細胞外
部分のポリペプチドを提供する。該ポリペプチドは、組
換えＤＮＡ技法を用いて下記のごとく製造することがで
きる。

即ち、マウスのＴ細胞受容体β鎮ｍＲＮＡを鋳型として
用いて調製された該ｍＲＮＡに相補性を示すＤＮＡ　（
ＣＤＮＡ）を組み込んだ組換え体プラスミドｌ：＋　８
６　Ｔ　５　（！Ｊ０Ｍ、　Ｄａｖｉｓより供与、ネイ
チ＋　−（Ｎａｔｕｒｅ）　３０８　、１４９（１９８
４）に報告されている〕をもとに、ζ、のうち定常領域
の細胞外領域のみを適当な制限酵素で切り出し、大腸菌
において大量発現の可能な適当な発現用プラスミドに挿
入する。このようにして作製した組換え体プラスミドを
大腸菌の中に導入する。

従って本発明は、マウスＴ細胞受容体β鎖定常領域を組
み込んだ組換え体ＤＮＡ、該組換え体ＤＮＡを含む大腸
菌および該大腸菌を用いるマウスＴ細胞受容体β鎖定常
領域ポリペプチドの製造法を提供する。同様の手法はヒ
トのＴ細胞受容体の任意の部分の作製にも応用できる。

次に本発明の組換え体プラスミドの製法について具体的
に説明する。

マウスＴ細胞受容体β鎖をコードするＤＮＡを含むプラ
スミドｐ８６Ｔ５から該定常領域ＤＮＡを切り出し、こ
れをベクターＤＮＡに組み込み、得られる組換え体ＤＮ
Ａを微生物に導入し、得られる形質転換体を培養するこ
とによってマウスＴ細胞受容体β鎖定常領域ポリペプチ
ドを培養物中に生成蓄積させ、これを採取することによ
ってマウスＴ細胞受容体β鎖定常領域ポリペプチドを製
造することができる。

ベクターＤＮＡとしては、挿入したＤＮＡを微生物で発
現させることができるものが良い。特に今回の例ではマ
ウスＴ細胞受容体β鎖の定常領域のみを発現させるため
、Ｔ細胞受容体β鎖遺伝子本来の翻訳開始コドン（ＡＴ
Ｇ）　、翻訳終結コドン（ＴＧＡ、ＴＡＧ、ＴＡＡ）が
除かれているのでｐＴｒｓ２０．　　ｐＫＹＰ２６で該
ＤＮＡをはさむことが必要である。ｐＴｒｓ２０は、ト
リプトファンプロモーターとシャインダルガーノ配列（
以下ＳＤ配列と略記する）を持ち、その下流を適当な制
限酵素で切断後、大腸菌ＤＮＡポリメラーゼにｌｅｎｏ
ｗ断片で処理するとＡＴＧＴドンが露出する。ｐＫＹＰ
２６は適当な制限酵素で切断後、大腸菌ＤＮＡポリメラ
ーゼにｌｅｎｏｗ断片で処理すると３つのフレームでＴ
ＡＡの終止コドンが現れる。ｐＴｒｓ２０とｐＫＹＰ２
６は第２図および第３図に示す構造を持つ。ポリペプチ
ドをコードするＤＮＡとベクターＤＮＡとの組換えは制
限酵素を用いて両ＤＮＡを消化後、Ｔ４ＤＮＡＩＪガー
ゼを用いて結合する一般的組換えＤＮＡ手法を用いて行
うことができる。

具体例として示したｐ８６Ｔ５．ｐＴｒｓ２０゜ｐＫＹ
Ｐ２６を用いて発現型プラスミドｐＭＣａ　Ｋ　８を作
製する場合は４段階の工程を経て行う。すなわちｐ８６
Ｔ５よりマウスＴ細胞受容体β鎖定常領域をコードする
５ａｕ３ＡＩ断片を、ｐ　Ｂ　Ｒ３２２のＥＣｏＲＶ部
位をＢｇｌＩ［に変えたベクターｐＢＲ３２２−Ｂｇ　
Ｉ　ＩＩのＢｇｌＩ［部位にＴ４ＤＮＡ　リガーゼを用
いて結合し第１図に示した組換え体ｐＭＣａＡ６を得る
。

次にｐＭＣ，Ａ６を５ｔｕＩで部分的に切断した後Ｐｓ
ｔＩで切断し、マウスＴ細胞受容体β鎖定常領域を含む
断片を得る。一方ｐＫＹＰ２６をＫｐｎ　Ｉで切断後大
腸菌ＤＮＡポリメラーゼにｌｅｎｏｗ断片で一本鎖ＤＮ
Ａ部分を消化し、次にＰＳｔｌで切断し、翻訳終結コド
ンと転写終結部を含む断片を得る。上記２つの断片をＴ
４ＤＮＡリガーゼで結合し、第２図に示した組換え体プ
ラスミドｐＭＣ：５Ｇ１１を得る。

次にｐＭｃ８Ｇ１１をＢｇｌＩ［で部分的に切断した後
、大腸菌ＤＮＡポリメラーゼＫｌｅｎｏｗ断片で一本鎖
Ｄ　Ｎ　Ａ部分をデオキシヌクレオチドで埋め、Ｐｓｔ
ｌで消化してマウス丁゛細胞受容体β鎮定常領域を含む
断片を得る。一方ｐＴｒｓ２０を５ａｃＩで消化した後
、大腸菌ＤＮＡポリメラーゼＫｌｅｎｏｗ断片で一本６
ｍ　Ｄ　Ｎ　Ａ部分を消化し、Ｐｓｔｌで切断してトリ
プトファンプロモーターを含む断片を得る。上記２つの
断片をＴ４ＤＮＡリガーゼで結合し第３図に示した組換
え体プラスミドｐＭｃ６Ｊｌｌを得る。

次にｐＭｃａＪｌｌよりマウスＴ細胞受容体β鎖定常領
域をコードするＣ１ａＩ−Ｐｓｔｌ断片を得、一方ダプ
ルトリプトファンプロモーターを持つ組換え体プラスミ
ドｐＫＹＰ２００からはダブルトリプトファンプロモー
ターを含むｐｓｔｔ−Ｃｌ　ａ　Ｉ断片を得る。上記２
つのＤＮＡ断片をＴ４ＤＮＡＩＪガーゼで結合し、第４
図に示した組換え体プラスミドｐＭｃａＫ８を得る。本
プラスミドは、ダブルトリプトファンプロモーター下流
にマウスＴ細胞受容体β鎖定常領域の細胞外部分が連結
した形を有する。

上記組換え技法における反応の条件は、一般的に下記の
とおりである。

ＤＮＡの制限酵素による消化反応は、通常０．１〜２０
■のＤＮＡを２〜２００ｍＭ（好ましくは１０〜４０ｍ
Ｍ）のトリス−ＨＣｌ　（ｐＨ６，０〜９．５好ましく
はｐＨ７，０〜８．０）、０〜２００ｍＭのＮａＣ１，
２〜３０ｍＭ　（好ましくは５〜１０ｍＭ）のＭ　ｇ　
Ｃｊｉ！　２を含む反応液中で、制限酵素０．１〜１０
０単位（好ましくは１爬のＤＮＡに対して１〜３単位）
を用い、２０〜７０℃（至適温度は用いる制限酵素によ
り異なる）において、１５分間〜２４時間行う。反応の
停止は、通常５５〜７５℃で、５〜３０分間加熱するこ
とによるが、フェノールまたはジエチルピロカーボネー
トなどの試薬により制限酵素を失活させる方法も用いる
ことができる。

一本鎖Ｄ　Ｎ　Ａ部分の大腸菌ＤＮＡポリメラーゼＫｌ
ｅｎｏｗ断片による消化反応は、通常１〜２■のＤＮＡ
を５ＱｍＭのトリス−ＨＣｉ’、　７ｍＭ　ＭｇＣｊ！
２．０．２ｍＭのデオキシヌクレオチド〔デオキシＡＴ
Ｐ（ｄΔＴＰ）　、デオキシＧＴＰ　（ｄＧＴＰ）　、
デオキシＣＴＰ　（ｄＣＴＰ）　、デオキシＴＴＰ（ｄ
ＴＴＰ）を各々０．２ｍＭずつ含む〕を含む反応液中で
、大腸菌ＤＮＡポリメラーゼＫｌｅｎｏｗ断片を４〜５
単位を用い、３７℃において３０分間行う。反応の停止
は、フェノールなどの試薬により制限酵素を失活させる
方法を用いることができる。一方一重鎖ＤＮＡ部分を大
腸菌ＤＮＡポリメラーゼＫｌｅｎｏｗ断片で埋める反応
は上記消化反応の際と同じ反応液中で１６℃、９０分間
行う。反応の停止はフェノールにより酵素を失活させて
行う。

制限酵素消化によって生じたＤＮＡ断片の精製は、低融
点アガロースゲル電気泳動法（ＬａｒｓＷｉｅｓｌａｎ
ｄｅｒ　：　Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉ
ｓｔｒｙ　９８　　。

３０５　（１９７９））　　（以下ＬＧＴ法という）や
ポリアクリルアミドゲル電気泳動法などによって行う。

ＤＮＡ断片の結合反応は、２〜２００ｍＭ（好ましくは
１０〜４０ｍＭ）のトリス−ＨＣｌ（ｐＨ６，１〜９．
５、好ましくはｐ　Ｈ７，０〜８．０）、２〜２０ｍＭ
（好ましくは５〜１０ｍＭ＞のＭｇ（１，，０，１〜ｌ
ＯｍＭ（好ましくは０．５〜２．０ｍＭ）のＡＴＰ、１
〜５０ｍＭ　（好ましくは５〜１０ｍＭ）のジチオスレ
イトールを含む反応液中で、Ｔ４ＤＮＡリガーゼ０．３
〜１０単位を用い、１〜３７℃（好ましくは３〜２０℃
）で１５分間〜７２時間（好ましくは２〜２０時間）行
う。

結合反応によって生じた組換え体プラスミドＤＮＡは、
必要によりＣｏｈｅｎらの形質転換法〔ニス・エヌ・コ
ーエン（Ｓ、　Ｎ、Ｃｏｈｅｎ）ら：プロシーディング
・オブ・ザ・ナショナル・アカデミイ・オブ・サイエン
ス（Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、）。

ＵＳＡ、剣、　２１１０　（１９７２）　）によって、
大腸菌に導入する。

組換え体プラスミドＤＮＡを持つ大腸菌から該ＤＮＡ０
単離は、後に述べる実施例１に示した方法あるいはバー
ンボイム（’　Ｂｉｒｎｂｏｉｍ　）　　らの方法〔エ
イチ・シー・バーンボイム（１，（：、　３ｉｒｎｂｏ
ｉｍ）ら：ヌクレイック・アンド・リサーチ（Ｎｕｃｌ
ｅｉｃＡｃｉｄｓ　Ｒｅｓ、）　７．１５１３（１９７
９）　）などを用いて行う。

プラスミドＤＮＡを１〜１０種類の制限酵素で消化後ア
ガロースゲル電気泳動あるいはポリアクリルアミドゲル
電気泳動により切断部位を調べる。

さらにＤＮＡの塩基配列を決定する必要があるときはマ
キサム・ギルバード法〔プロシーディング・オブ・ザ・
ナショナル・アカデミイ・オブ・サイエンス（Ｐｒｏｃ
、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、）、　７４　、
５６０（１９７７））　ｘたはＭ１３ファージを用いた
サンガー（Ｓａｎｇｅｒ）法〔サンガー（Ｓａｎｇｅｒ
）ら：プロシーディング・オブ・ザ・ナショナル・アカ
デミイ・オブ・サイエンス（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、＾
ｃａｄ、Ｓｃｉ、）　ＵＳＡ。

７４　、５４６３（１９７７）；　　アマ−ジャム（＾
ｍｅｒｓｈａｍ）社Ｍ１３クローニング・アンド・シー
フェンシング・ハンドブック（ｃｌｏｎｉｎｇ　ａｎｄ
　ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ　ｈａｎｄｂｏｏｋ）　）によ
って決定する。

本発明のマウスＴ細胞受容体β鎖定常領域ポリペプチド
は以下のとおりに製造できる。

すなわち、プラスミド（例えばｐＭｃ８に８）を用いて
大腸菌に−１２ＨＢＩＯＩを形質転換させ、アンピシリ
ン耐性のコロニーの中カラｐＭｃ８に８を有する大腸菌
を選び出す。ｐＭｃ８に８を有する大腸菌を培地に培養
することにより培養物中にマウスのＴ細胞受容体β鎖定
常領域ポリペプチドを生成させることができる。

用いる培地としては大腸菌の成育ならびにマウスＴ細胞
受容体β鎖定常領域ポリペプチドの生産に好適なものな
らば合成培地、天然培地のいずれも使用できる。

炭素源としては、グルコース、フラクトース、ラクトー
ス、グリセロール、マンニトール、ソルビトールなどが
、窒素源としては、ＮＨ４（１！。

（ＮＨ，）２３０．、カザミノ酸、酵母エキス、ポリペ
プトン、肉エキス、バタトトリブトン、コーン・ステイ
ープ・リカーなどが、その他の栄養源としては、Ｋ　２
　ＨＰ　Ｏ４、ＫＨｚＰＯｌ　ＮａＣｆ。

Ｍ　ｇ　Ｓ　Ｏａ　、ビタミンＢ１、Ｍ　ｇ　Ｃ１２な
どが使用できる。

培養はｐ　Ｈ５，５〜８．５、温度１８〜４０℃で通気
撹拌培養により行われる。

培養５〜９０時間で培養菌体中にマウスＴ細胞受容体β
鎖定常領域ポリペプチドが蓄積するので、培養物から菌
体を集菌し、菌体をリゾチーム処理後、凍結、融解を繰
り返して菌体を破砕し、遠心してえられる上清から通常
のポリペプチドの抽出方法に従ってポリペプチドを採取
する。

また該ポリペプチドの検出は培養菌体を直接レムリ（Ｌ
ａｅ咄１ｉ）　のサンプルバッファー〔レムリ（Ｌａｅ
ｍｍｌ　ｉ）、ネイチャー　□１ａｔｕｒｅ）、　２２
７，６８０　（１９７０））に加熱し溶解後、５ＤＳ−
ポリアクリル　アミドゲル〔レム！Ｊ　（Ｌａｅｍｍｌ
　ｉ）の方法：同上文献〕にかけ、クマシーブリリアン
トブルー染色によって行う。

マウスＴ細胞受容体β鎖定常領域細胞外部分の塩基配列
およびアミノ酸配列は式１に示した。

塩基配列はＭ１３ファージを用いたサンガー法で決定し
た。

式ｌ ＭｅｔＡｓｐＬｅｕＡｒｇＡｓｎＶａｌＴｈｒＰｒｏＰ
ｒｏＬｙｓＶａｌｓｅｒＬｅｕＰｈｅＧ］ｕＰｒｏＳｅ
ｒＬｙｓ八１ａＧｌｕ＾ＴＧＩＩ、ＡＴＣＴＧ八Ｇ八八
へＴへへへ＾ＣＴＣＣＡＣＣＣ八＾ＧＧへＣＴＣＣＴＴ
ＧＴＴＴＧＡＧへＣＡＴＣ八＾八ＡへＣへＧＡＧＶａｌ
ＧｌｕＬｅｕＳｅｒＴｒｐＴｒｐＶａｌ八５ｎＧへｙＬ
ｙｓＧｌｕＶａｌＨｉｓＳｅｒＧｌｙＶａｌＳｅｒＴｈ
ｒＡｓｐＰｒｏ　　　　５−ｓＧＩｕＧＩｕＡｓｐＬｙ
ｓＴｒｐＰｒｏＧ１ｕＧＩｙＳｅｒＰｒｏＬｙｓＰｒｏ
ＶａＩＴｈｒＧｌｎ八ｓｎＩ　ＩｅＳｅｒ＾１ａＧｌｕ
６＾ＧＧＡＧＧＡＣ＾＾ＧＴＧＧＣＣＡＧＡＧＧＧＣＴ
（：ＡＣＣＣＡ八ＡＣＣへＧＴＣ八ＣＡＣへＧ八＾へＡ
へＣＡＧＴＧＣ八６八〇へ２２ ＾１ａＬｙｓ ＧＣＴＡ八ＧＴＡ＾ マウスＴ細胞受容体β鎖定常領域の細胞外部分のアミノ
酸配列はネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）皿、１５５（１９
８４）に記載されており、この１３４番目から２７９番
目までのアミノ酸が細胞外部分ではないかというモデル
が提出されている（Ｎａｔｕｒｅ　３０９．７６２（１
９８４）　）。式１のアミノ酸配列はこのうち１３５番
目のＡｓｐから２５４番目のＡｌａまでのアミノ酸のＮ
末端側にＭｅｔ、Ｃ末端側にＬｙｓがついたものである
。

このアミノ酸配列はβ鎮定常領域の細胞外部分を完全に
覆ってはいないが免疫グロブリンフォルトといわれる立
体構造を取るのに必須の１６４番目と２２５番目のＣｙ
ｓが保存されている。

以下に本発明の実施例を示す。

実施例１　マウスＴ細胞受容体β鎖定常領域細胞外部分
をコードする組換え体プラスミドの造成：（１）ｐ８６
Ｔ５からｐＭＣ，Ａ５の造成（第１図）マウスＴ細胞受
容体β鎖をコードするＤＮＡを含むプラスミドｐ８６Ｔ
５　１５■を１００ｍＭ）すｘ−Ｈ（１（ｐＨ７，５）
　、７ｍＭＭｇＣ１ｚ、およびｌｏＯｍＭ　　Ｎａ（１
２を含む溶液（以下Ｙ−ＥｃｏＲＩ緩衝液と略す）６０
威に溶かし、制限酵素ＥｃｏＲＩ　　（全酒造社製）（
以下、特にことわらない限り制限酵素は全酒造社製を用
いた）８０単位を加え、３７℃２時間消化反応を行った
。該反応液からＬＧＴ法により、Ｔ細胞受容体β鎖をコ
ードする部分を含む約０．７　ｋ　ｂのＤＮＡ断片約０
．５■を得た。この０．７　ｋ　ｂのＤＮＡ断片をｌＱ
ｍＭ）リス−Ｈ１（ｐＨ７，５）　、７ｍＭ　　ＭｇＣ
ｆ２および１００ｍＭ　　ＮａＣ１を含む溶液（以下Ｙ
−１００緩衝液と略す）２０４に溶かし制限酵素５ａｕ
３＾Ｉ（ベーリンガーマンハイム社製）８単位を加え３
７℃　２時間消化反応を行った。この反応液からＬＧＴ
法によりマウスＴ細胞受容体β鎖の定常領域のみをコー
ドする約０．４３ｋｂのＤＮＡ：　断片的０．２■を得
た。

次にｐＢＲ３２２のＥｃｏＲＶ部位にＢｇｌ■リンカ−
〈全酒造社製）を挿入したベクター（ｐＢＲ３２２−Ｂ
ｇ　ｌ　ＩＩ）　　１■をＹ−１００緩衝液１００ｄに
溶かしＢｇｌＩＩを１０単位加え、３７℃で２時間消化
反応を行った後、フェノール処理して反応を停止させ、
約４．４ｋｂのベクターＤＮＡ約０．５■をＬＧＴ法に
より得た。

上記で得たｐ８６Ｔ５由来の５ａｕ３Ａ１断片（約０．
４３　ｋｂ）　０．０２１　ｐｍｏｌｅとｐＢＲ３２２
−Ｂｇ　ｌ　ｎ由来のＢｇｌＩＩ断片（約４．４　ｋｂ
）０、０１　ｐｍｏｌｅを５ＱｍＭ）リス−ＨＣ１（ｐ
Ｈ７，５）　、ｌｏｍＭ　　ＭｇＣＩｈ　　１０ｍＭジ
チオスレイトールおよび１ｍＭ　　ＡＴＰを含む溶液（
以下リガーゼ反応緩衝液と略す）２０Ｍに溶かし、この
混合液にＴ４ＤＮＡ’Ｊガーゼ（全酒造社製）６単位を
加え、４℃、１８時間結合反応を行った。該反応液を用
いて大腸菌８８１０１株〔ポリバー（Ｂｏｌ　１ｖａｒ
）ら：　ジーン（にｅｎｅ）　２　。

７５　（１９７７）　）を形質転換しＡｐｌのコロニー
を得、このコロニーよりプラスミドＤＮＡをバーンボイ
ムらの方法により回収し第１図に示したｐＭＣ，Ａ６を
得た。ｐＭＣａＡ６の構造は、Ｂｇ　ｌ　ｎ、Ｐｓｔ　
ｌ５ＳｔｕＩで切断してアガロースゲル電気泳動でＦＩ
ｉ認した。

（２）　ｐＭＣ，Ａ６０Ｔ細胞受容体β鎖定常領域をコ
ードする部分の下流への、ｐＫＹＰ２６由来翻訳終止コ
ドンを含むＤＮＡ断片の組み込み（第２図）： ｐＭｃ８Ａ６　５ｇをｌＱｍＭ）リス−Ｈ（１（ｐＨ７
，５）　、７　ｍ　Ｍ　　Ｍ　ｇ　Ｃｊ！　２および５
０ｍＭ　　ＫＣｊ＋を含む溶液（以下Ｙ−５０ＫＣｊ！
緩衝液と略す）３８誠に溶かし、制限酵素ＰＳｔＩ３０
単位を加え３７℃、２時間反応させた。次に制限酵素５
ｔｕｌ　　１０単位を加え３７℃、５分間、部分的消化
反応を行った。該反応液からＬＧＴ法によりｐＭＣ，Ａ
６でコードされるマウスＴ細胞受容体β鎖定常領域細胞
外部分とベクタ一部分を含む約１，３ｋｂのＤＮＡ断片
約１■を得た。

次に翻訳終止コドンを含むベクターｐＫＹＰ２６　　（
Ｂ、　ｃｏｌｉ　ＩＫＹＰ２６　ＦＥＲＭ　ＢＰ−８６
３より常法により採取）１．５ｇを１０ｍＭ）リス−Ｈ
Ｃｊ！（ｐＨ７，５）および７ｍＭ　　ＭｇＣＲｚを含
む溶液（以下Ｙ−０緩衝液と略す）３０層に溶かし、制
限酵素Ｋｐｎ［１０単位を加え３７℃２時間消化反応を
行った後、該反応液をフェノール処理して反応を停止さ
せ、ＬＧＴ法により約２．６ｋｂのベクターＤＮＡを１
■得た。このベク９−ＤＮＡ１ｇを、５０ｍＭのトリス
−Ｈ（１（ｐＨ７，５）　、７　ｍ　Ｍ　　Ｍ　ｇ　Ｃ
Ｒ２および各０．２ｍＭのデオキシヌクレオチド４種（
ｄＡＴＰ。

ｄＧＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＴＴＰ）を含む溶液（以下Ｋｌ
ｅｎｏｗ緩衝液と略す）２０ｍに溶かし、大腸菌ＤＮＡ
ポリメラーゼＫｌｅｎｏｗ断片（全酒造社製）４単位を
加え、３７℃、３０分間ＤＮＡ一本鎖部分の消化反応を
行った後、該反応液をフェノール処理して反応を停止さ
せ、ＬＧＴ法により約２，６ｋｂのベクターＤＮＡを０
．８■得た。

このベクターＤＮＡ０．８Ｊ１ｇをＹ−５０ＫＣｊ！緩
衝液３０誠に溶かし、制限酵素Ｐｓｔｌ　　１０単位を
加えて、３７℃、２時間消化反応を行った。この反応液
からＬＧＴ法により、翻訳終止コドン、転写終結部分お
よびベクタ一部分を含む、約１．８ｋｂのＤＮＡ断片０
．５ｇを得た。

上記で得たｐＭｃａＡ６由来のＰｓｔ（−３ｔｕｌ断片
（約１．３ｋｂ）　０．　Ｏｌｐｍｏｌｅと１）ＫＹＰ
２６由来のＰ　ｓ　ｔ　Ｉ−Ｋ　ｐ　ｎ　Ｉ　　（Ｋｌ
ｅｎｏｗで末端は平滑になっている）断片（約１．８ｋ
ｂ）０、０１　ｐｍｏｌｅを２０ＪＩ１１のりガーゼ反
応緩衝液２ＯＡ！ｌに溶かし、この反応液にＴ　４　Ｄ
ＮＡ　！Ｊガーゼ（全酒造社製）６単位を加え、４℃、
１８時間結合反応を行った。該反応液を用いて大腸菌Ｈ
ＢＩＯＩ株を形質転換しＡｐｌのコロニーを得、このコ
ロニーよりプラスミドＤＮＡをＬＧＴ法により回収し第
２図に示したｐＭＣａ　Ｇ　１１を得た。ｐＭｃａＧｌ
ｌの構造は、Ｐｓｔｌ。

５ｔｕｌ、ＢｇｌＩ［、Ｃ］　ａ　Ｉ、　ＢａｍＨＩで
切断してアガロースゲル電気泳動で確認した。

（３）　　ｐ　ＭＣａ　Ｇ　１１のＴ細胞受容体β鎖定
常領域、をコードする部分の上流へのｐＴｒｓ２Ｑ由来
翻訳開始コドンを含むＤＮＡ断片の組み込み（第３図）
： ｐＭｃａＧｌｌ　　３ＪｔｇをＹ−１００緩衝液３０誠
に溶かし、制限酵素Ｂｇ１１１　１０単位を加え、３７
℃、５分間、部分的消化反応を行った後、該反応液をフ
ェノール処理して、ＬＧＴ法によりｐＭｃａＧｌｌのＤ
ＮＡ断片２．５埒を得た。次に該ＤＮＡ断片２．５■を
２０ｄのＫｌｅｎｏｗ緩衝液２０４に溶かし、大腸菌Ｄ
ＮＡポリメラーゼにｌｅｎｏｗ断片４単位を加え、１６
℃９０分間ＤＮＡの一本鎗部分をヌクレオチドで埋める
反応を行った後、該反応液をフェノール処理して反応を
停止させ、ＬＧＴ法によりｐＭｃａＧｌｌのＤＮＡ断片
２■を得た。次に該ＤＮＡ断片２■を１５頭のＹ−５０
ＫＣｊ！緩衝液１５薦に溶かし、制限酵素ＰｓｔＩ　　
１０単位を加え３７℃、２時間消化反応を行った。

該反応液からＬＧＴ法により、ｐＭｃ、Ｇ１１がコード
するマウスＴ細胞受容体β鎖定常領域、翻訳終止コドン
、転写終結領域およびベクタ一部分を含む、約２．ｌｋ
ｂのＤＮＡ断片を０．５■得た。

次に翻訳開始コドンを含むベクターｐＴｒＳ２０２■を
Ｙ−０緩衝液３０ＪｄＩに溶かし、制限酵素５ａｃＩ（
東洋紡績社製）１０単位を加えて、３７℃、３時間消化
反応を行った後、該反応液をフェノール処理して反応を
停止させ、ＬＧＴ法により約４．６ｋｂのｐＴｒＳ２０
　　ＤＮＡ断片を２■得た。このＤＮＡ２ｇを、Ｋｌｅ
ｎｏｗ緩衡液２０ｍに溶かし、大腸菌ＤＮＡポリメラー
ゼＫｌｅｎｏｗ断片４単位を加え、３７℃、３０分間Ｄ
ＮＡ一本鎖部分の消化反応を行った後、該反応液をフェ
ノール処理して反応を停止させ、ＬＧＴ法により約４．
５ｋｂのＤＮＡ断片を１．５■得た。、：、（７）ＤＮ
Ａ断片１．５ｇをＹ−５０ＫＣ１’緩衝液３０ＩＪＪ１
に溶かし、制限酵素ＰｓｔｌｌＯ単位を加えて、３７℃
、２時間消化反応を行った。この反応液からＬＧＴ法に
よりｐＴｒｓ２０がコードするＤＮＡのうち翻訳開始コ
ドンとベクタ一部分を含む、約１．ｌｋｂのＤＮＡ断片
０．２−雌を得た。

上記で得たｐＭｃ８Ｇ１１由来のＰｓｔｌ−Ｂ　ｇ　ｌ
　Ｕ　（Ｋｉｅｎｏｗで末端は平滑になっている）断片
（約２．１ｋｂ）　　０．　Ｏｌ　ｐｍｏｌｅとｐＴｒ
ｓ２０Ｔ来のＰｓ　ｔ　ｌ−３ａｃ　Ｉ　　（にｌｅｎ
ｏｗで末端は平滑になっている）断片（約１．１ｋｂ）
　　０．　Ｏｌｐｍｏｌｅを２０４のりガーゼ反応緩衝
液２０層に溶かし、この反応液にＴ４ＤＮＡＩＪガーゼ
６単位を加え、４℃、１８時間結合反応を行った。該反
応液を用いて大腸菌Ｈ８１０１株を形質転換しＡｐｌの
コロニーヲ得、このコロニーよりバーンボイムらの方法
に従ってプラスミドＤＮＡを回収し、第３図に示したｐ
Ｍｃ８Ｊ１１を得た。

ｐＭｃ、Ｊｌｌの構造は、Ｐｓ　ｔ　Ｌ　ＰｖｕＩＩ、
Ｃ１ａｌおよびＢａｍＨＩで切断してアガロースゲル電
気泳動で確認した。

（４）　　ｐＭＣａ　Ｊ　１１のＴ細胞受容体β鎮定常
領域をコードする部分の上流へのｐＫＹＰ２０Ｑ〔西ら
、Ａｇｒｉｃ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、　　４８　（３）
　　、６６９−６７５゜（１９８４）　〕由来ダブルト
リプトファンプロモータ一部を含むＤＮＡ断片の組み込
み（第４図）：ｐＭＣＢＪｌｌ　　１■をＹ−１００緩
衝液２０誠に溶かし、制限酵素ＣＩａ１　１０単位とＰ
ｓｔｌ　　１０単位を加え、３７℃、２時間消化反応を
行った後、該反応液からＬＧＴ法により、ｐＭＣ，Ｊｌ
ｌがコードするＤＮＡのうち、マウスＴ細胞受容体β鎖
定常領域、転写終結部およびベクタ一部を含む約２．ｌ
ｋｂのＤＮＡ断片０．５Ｉｉｇを得た。

次にダブルトリプトファンプロモーターを含むｐＫＹＰ
２００約２ｇをＹ−１００緩衝液２０４に溶かし、制限
酵素Ｃ１ａＩ　　１０単位とＰｓｔｌ　　１０単位を加
え３７℃、２時間消化反応を行った後、該反応液からＬ
ＧＴ法により、ｐＫＹＰ２００がコードするＤ　Ｎ　Ａ
のうち、ダブルトリプトファンプロモータ一部分とベク
タ一部分を含む約１．ＨｂのＤＮＡ断片０．２■を得た
。

上記で得たｐＭＣ８Ｊｌｌ由来のＰｓｔＩ−Ｃ１ａｌ断
片（約２．１ｋｂ）　０．０１　ｐｍｏｌｅとｐＫＹＰ
２００由来のＰｓｔｌ−Ｃ１ａｌ断片（約１．１ｋｂ）
　０．０１ｐｍｏｌｅを２０頭のりガーゼ反応緩衝液２
０ｍに溶かし、この反応液にＴ４ＤＮＡＩＪガーゼ６単
位を加え４℃、１８時間結合反応を行った。該反応液を
用いて大腸菌Ｈ８１０１株を形質転換しＡｐｌのコロニ
ーを得、このコロニーよりプラスミドＤＮＡを回収し、
第４図に示したｐＭＣ，に８を得た。ｐＭＣ。

Ｋ８の構造は５ｔｕｌ、Ｐｓｔｌ、Ｃ１ａｌ。

ＢａｍＨＩで切断して、アガロースゲル電気泳動で確Ｓ
忍した。

実施例２　　ｐＭＣ７１に８を含む大腸菌によるマウス
Ｔ細胞受容体β鎖定常領域ポリペプチドの生産： 実施例１で得た組換え体プラスミドｐＭＣ。

Ｋ８を用い常法により大腸菌Ｈ３１１０株ｓ　ｔ　ｒＡ
　（ＦＥＲＭ　　ＢＰ−７３２）を形質転換した。得ら
れたＡｐｌコロニーを３ｍｌのＭＣＧ培地〔０，６％Ｎ
　ａ２ＨＰ　０４．０．３％ＫＨ，ＰＯ，。

０．５％ＮａＣＣ０，１％ＮＨ，Ｃｊ！、０．５％グル
コース、０．５％カザミノ酸、１ｍＭ　　Ｍｇ５Ｏ＊、
４ｇ／ｍｌビタミンＢ＋　、ｐＨ７，２）に接種し、３
０℃で１８時間培養した。得られた培養液を８．００　
Ｏｒｐｍ　、　１０分間遠心して菌体を回収した。この
菌体をＬａｅｍｍｌｉのサンプルバッファーに懸濁後、
５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動を行い、クマ
シーブリリアントブルーにて染色して、分子量約１７．
０００の部位にポリペプチドバンドを検出した。このバ
ンドは該プラスミドを含まない大腸菌を用いた場合には
存在しなかった。この結果、ｐＭｃ８に８を保有する大
腸菌は、マウスＴ細胞受容体β鎖定常領域ポリペプチド
を大量に生産していることがわかった。

ｐＭＣ，に８を含む大腸菌菌株は、Ｅｓｃｈｅｒ　ｉｃ
ｈ　ｉａ皿旦ＥＭＣａＫ８　　ＦＥＲＭ　　ＢＰ−／ｊ
／ダとして微工研に昭和６２年　３月　２３日付で寄託
しである。

実施例３　　　ｐＭ　Ｃａ　Ｋ　８を保有する大腸菌に
よるマウスＴ細胞受容体β鎖定常領域ポリペプチドの生
産： 実施例２で得た組換え体プラスミドｐＭｃａＫ８をもつ
大腸菌Ｗ３１　Ｌ　Ｏｓｔｒ八株へＬＣ培地〔トリプト
ン１０ｇ、酵母エキス５ｇ５ＮａＣｊ’　　５　　。

ｇ１グルコース２ｇを水１！にとかしＮａＯＨにてｐＨ
を７．０とする。〕で３３７℃１８時間培養し、この培
養液Ｑ、５ｍｌをｌ　ＱｍｌのＭＣＧ培地（ＮａａＨＰ
Ｏ−０，６％、ＫＨ２Ｐ０．０．３％、ＮａＣ１０，５
％、カザミ、′酸０，５％、Ｍｇ５０゜１ｍＭ、ビタミ
ンＢ　＋　　４　ｇ／ｍｌ−ｐ　Ｈ７，２）に接種し、
３０℃で４〜８時間培養後、トリプトファンの誘導物質
である３β−インドーノげ°クリル酸（３β−１ｎｄｏ
ｌｅａｃｒｙｌｉｃ　ａｃｉｄ、　以下ＩＡＡと略す）
をｌＯ■／ｍｌ加え、さらに２〜１２時間培養を続けた
。培養液を８．００　Ｏｒｐｍ　、　１０分間遠心して
集菌し、３０ｍＭ　　ＮａＣ１，３０ｍＭ　　）リス−
Ｈ（１（ｐＨ７，５）緩衝液で洗浄した。洗浄菌体を上
記緩衝液３ｍｌに懸濁し、０℃で超音波破砕（ＢＲＡＮ
ＳＯＮ　５ＯＮＩＣＰＯＷＢＲＣＯＭＰＡＮＹ社５ＯＳ
ＩＰＩＥＲＣＢＬＬ　ＤＩＳＲＵＰＴＯＲ２００，０Ｕ
ＴＰＬＩＴ　Ｃ０ＮＴＲ０Ｌ　２　、　　ｌ　０分間処
理）した。これを１５．００　Ｏｒｐｍ　、　３０分間
遠心して菌体残渣を得た。この菌体残渣からマーストン
らの方法（Ｆ、Ａ、　０１Ｍａｒｓｔｏｎ　ら：Ｂ１０
／Ｔｌｌ！ＩＪＩＮＯＬＯＧＹ２　　、８００　（１９
８４）　〕によりマウスＴ細胞受容体β鎖定常領域ポリ
ペプチドを抽出、精製、可溶化、再生した。

実施例４　マウスＴ細胞受容体β鎖定常領域に対するウ
サギ抗血清の取得： 実施例３で得られた精製マウスＴ細胞受容体β鎖定常領
域ポリペプチドを抗原として用いて、６力月齢の雌日本
白色ウサギ（中部化学）を後述のように一定の間隔で３
度に渡って免疫し、抗血清を取得した。まず１回目は、
５００■のＴ細胞受容体β鎖定常領域ポリペプチド（１
，５ｆｆｌｌのＰＢＳ（ＮａＣｊ！　　８ｇ／ｌ、ＫＣ
ｌ１０．２ｇ／Ａ、（無水）　Ｎ　ａｚＨＰ　０４１．
１５　ｇ／　ＲｌＫ　Ｈ４Ｆ　０゜０．２ｇ／ｊりに溶
解している〕を、１．５　ｍｌの完全アジュバント（流
動パラフィン、界面活性剤（＾ｒａｃｅｌ−Ａ）　、乾
燥加熱結核死菌体）（株式会社ヤトロン）と混ぜ、これ
を日本白色ウサギの四肢の裏、背中、臀部に分散して注
射した。４４日後に２回目の免疫として、５００■のＴ
細胞受容体β鎖定常領域ポリペプチド１．５ｍＩ　　Ｐ
ＢＳを、１．５ｍｌの不完全アジュバント（完全アジュ
バントから結核死菌体を除いたもの）と混ぜ、四肢の裏
に注射した。３回目の免疫は、２回目より４７日後に５
００Ｊｔｇ／　１．５ｍＩ　Ｐ　Ｂ　ＳのＴ細胞受容体
β鎖定常領域ポリペプチドを静脈注射した。その後１４
４回目免疫したウサギの動脈より全採血し、抗血清を取
得した。得られた抗血清は、ウェスタンブロッティング
法により、大腸菌で生産されているＴ細胞受容体β鎖定
常領域ポリペプチドのバンドとのみ特異的に反応し、こ
の結果、上記のようにして得られたウサギ血清中に、抗
Ｔ細胞受容体β鎖定常領域と対応する抗体が作られてい
ることが確認された。

参考例Ｉ ＡＴＧベクターｐＴｒｓ２０の造成： 第５図に示した手順に従い、ＳＤ配列とＡＴＣ開始コド
ンの間の距離が１４塩基で、かつＡＴＧコドンの直後に
Ｓａｃ　ｌサイトを有するＡＴＧベクターｐＴｒＳ２０
を造成した。

まず、特開昭５８−１１０６００号公報記載の方法で調
製したｐＫＹＰｌｏ　　３ＡｇをＹ−１００緩衝液３０
誠に溶かし、制限酵素Ｂａｎ［［と制限酵素Ｎｒｕ）に
ューイングランド・バイオラブズ社製）をそれぞれ６単
位ずつ加え、３７℃で３時間切断反応を行った。この反
応液からＬＧＴ法によりｐｔｒｐを含む約３．８ｋｂの
ＤＮＡ断片（ＢａｎＩ［［−Ｎｒｕｌ断片）約０．５■
を得た。

一方、ｐｔｒｐの下流にＡＴＧ開始コドンを付与するた
めに下記のＤＮＡ＋Ｊンヵーをトリエステル法により合
成した。

１９−ｍａｒと１７−＋ｎｅｔの合成りＮＡ　（各々１
０ピコモルずつ）を５０ｍＭ　　）リス−Ｈ（１（ｐＨ
７，５）、１０　ｍＭ　　Ｍ　ｇ　Ｃｊ２＊　、５　ｍ
Ｍジチオスレイトール、０．１ｍＭ　　ＥＤＴＡおよび
１ｒｎＭ　　ＡＴＰを含む全量２０ＪＬｌｌの溶液に溶
かし、Ｔ４ポリヌクレオチドキナーゼ３単位〈宝酒造社
製）を加えて、３７℃で６０分間リン酸化反応を行った
。

次に上記で得たｐＫＹＰ　１０由来の３ａｎ■−Ｎｒｕ
　Ｉ断片（約３．８ｋｂ）　　０．１Ｍと上記のＤＮＡ
リンカ−約０．５ピコモルをＴ４’Ｊガーゼ緩衝液２０
ρに溶かし、さらにＴ　４　ＤＮＡ　’Ｊガーゼ２単位
を加え、４℃で１８時間結合反応を行った。

得られた組換え体プラスミドの混合物を用いて大腸菌Ｈ
８１０１株〔ポリバー（３０１ｉｖａｒ）らニジーン（
Ｇｅｎｅ）　２　．７５　（１９７７）　）を形質転換
し、Ａｐｌのコロニーを得た。このコロニーのｔｇｔｍ
体からプラスミドＤＮＡを回収した。得られたプラスミ
ドの構造は制限酵素ＥｃｏＲＩ、ＢａｎＩ［Ｉ、Ｈｉｎ
ｄ［，５ａｃｌ、Ｎｒｕｌで切断後、アガロースゲル電
気泳動により確認した。このプラスミドをｐＴｒｓ２０
と名付けた（第５図）。

ｐＴｒｓ２ＱのＢａｎ１］ＩＩ、ＨｉｎｄＩ［サイト付
近の塩基配列は下記のとおりであることをＭ１３ファー
ジを用いたディデオキシ・シーフェンス法を用い確認し
た。

発明の効果 本発明によれば、マウスＴ細胞受容体β鎖定常領域ポリ
ペプチドをコードするＤＮＡを組み込んだ組換え体ＤＮ
Ａおよび該組換え体ＤＮＡを含む微生物が得られ、これ
らはマウスＴ細抱受容体β鎖定常領域ポリペプチドの大
量生産に利用することができる。

また同様の手法を用いて、β鎖のみでなくα鎖、γ鎖の
ポリペプチドの任意の部分をｊ作製することも可能であ
り、マウスのみでなくヒトのＴ細胞受容体ポリペプチド
の任意の部分の作製にも応用できる。

このようにして得られた、Ｔ細胞受容体ポリペプチドを
抗原として用いてＴ細胞受容体に対する抗血清（あるい
は抗体）を作製することが可能になった。

【図面の簡単な説明】

第１図は、組換え体プラスミドｐＭＣ，Ａ５の造成過程
を示す。 第２図は、組換え体プラスミドｐＭｃ８Ｇ１１の造成過
程を示す。 第３図は、組換え体プラスミドｐＭｃａＪ１１の造成過
程を示す。 第４図は、組換え体プラスミドｐＭＣａＫ８の造成過程
を示す。 第５図は、ＡＴＧベクターｐＴｒｓ２０の造成過程を示
す。 特許出願人　（１０２）協和醗酵工業株式会社学校法人
　藤　１）学　園 藤田学園保健衛生大学 代表者　　藤　１）啓　介 第２図 ＥｃｏＲＩ ｔｕＩ ＱＩＩＬＬ

Claims (11)

【特許請求の範囲】
1. （１）式１に示したペプチド配列を有する哺乳類Ｔ細胞
   受容体β鎖定常領域ポリペプチド。
2. （２）式１に示したポリペプチドをコードするＤＮＡ。
3. （３）式１に示したポリペプチドをコードするＤＮＡを
   組み込んだ組換え体ＤＮＡ。
4. （４）プラスミドｐＭＣ＿βＫ８。
5. （５）式１に示したポリペプチドをコードするＤＮＡを
   組み込んだ組換え体ＤＮＡを含む微生物。
6. （６）該微生物がエッシェリヒア・コリに属する特許請
   求の範囲第５項の微生物。
7. （７）￥Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ￥ＥＭＣ＿
   βＫ８。
8. （８）式１に示した哺乳類Ｔ細胞受容体β鎖定常領域ポ
   リペプチドをコードするＤＮＡを組み込んだ組換え体Ｄ
   ＮＡを含む微生物を培養し、培養物中に該ポリペプチド
   を蓄積させ、該培養物から該ポリペプチドを採取するこ
   とを特徴とする哺乳類Ｔ細胞受容体β鎖定常領域ポリペ
   プチドの製造法。
9. （９）トリプトファンプロモーターを有するプラスミド
   を用い、該ＤＮＡがプラスミドＤＮＡのトリプトファン
   プロモーターの下流に組み込まれたことを特徴とする特
   許請求の範囲第８項記載の製造法。
10. （１０）該微生物がエッシェリヒア・コリに属すること
    を特徴とする特許請求の範囲第８または９項記載の製造
    法。
11. （１１）特許請求の範囲第８または第９または第１０項
    記載の製造法によって製造されたポリペプチドを抗原と
    して用いることを特徴とする哺乳類Ｔ細胞受容体定常領
    域と反応する抗体の製造法。