JPS63258901A

JPS63258901A - 低コレステリン血症活性を持つ天然多糖類の第四アンモニウム塩

Info

Publication number: JPS63258901A
Application number: JP61171929A
Authority: JP
Inventors: フランコ・コンティ
Original assignee: ETAB TEKUSUKONTOOLE; TEKUSUKONTOOLE ETS
Current assignee: ETAB TEKUSUKONTOOLE; TEKUSUKONTOOLE ETS
Priority date: 1985-08-14
Filing date: 1986-07-23
Publication date: 1988-10-26
Also published as: US4985410A; DE3676382D1; ATE59555T1; EP0212145B1; JPH0323081B2; IT1188184B; EP0212145A1; PT83053B; CA1282062C; IT8521937A0; ES2001226A6; PT83053A

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】本発明は低コレステリン血症活性を有する天然多Ｓ類の
第四アンモニウム塩に関する。

更に詳しくは、本発明は人間の治療において低□　コレ
ステリン血症剤として有利に使用される、植物起源の多
糖類の水溶性第四アンモニウム塩に。

その製法に、かつ関連薬剤組成物に関する。

本発明に依る多糖類アンモニウム塩は下記の一般式を持
つ：Ｈ式中、Ａは天然多糖類の単量体単位を表わし、ｍは１０
０ないし１，０００の全数であり、ｎは０ないし１０の
全数であ）、Ｂは０又はＳ又はＮＨ又はＮＲ’でありて
、ここにＷはアシル、好ましくはアセチルであり、Ｒは
ｌ−４個の炭素原子の線状アルキル基であ）、かつＸ（
→はＣＬ−、Ｂｒ−１Ｉ−。

Ｈ３Ｏ４−又はＣＨ，０−８Ｏ，−、ＮＯ３″″の如き
陰イオン又は製剤的に受容できる有機酸の陰イオンであ
る。

概して、低コレステリン血症活性を持つ公知生成物は、
例えばポリスチレンの、架橋合成重合体誘導体類である
。これらの重合体は水に不溶性であり、従ってそれらの
有用性は極めて低く、かつ更にそれらは好ましくない副
作用を示す。

上記天然重合体の中で、適当に処理したキトサンだけが
低コレステリン血症活性を持つ生成物として使用される
。

然しながら、上記公知の技術（Ｍ、スガノ、Ｔ、フジカ
ワ等、臨床栄養のアメリカン・ジャーナル（Ａｍ、　Ｊ
、　ｏｆ　Ｃｌ１ｎｉｃａｌ　ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ　）
、３３．１９８０年４月、７８７，７９３頁）において
、キトサンの多糖類高分子上の正電荷はアミン基をプロ
トン化することにより得られ、その結果、腸管の一条件
（ｐｉ−１７，２）下においては、キトサンのｐＫａが
６．３であるため、プロトンは殆ど完全に除去される。

このため、上記重合体の、胆汁塩と相互作用する能力は
非常に低い。

我々の先の特許の一つ（ＵＳＡ特許４，４３６，７３１
）において、キトサン第四級化反応はアミノ−配檀体項
内にあるアミノ基に対し直接行なわれ、正電荷は胃−腸
管のすべての−及びイオン力の条件の下に存在している
が、然しなから、上記アミノ−配糖体環への上記正電荷
の接近は、上記胆汁塩分子に対して近づきやすい問題を
生ずる。

第四アンモニウム基を含有し、低コレステリン血症剤と
して使用されるもう一つの公知の重合体は例えばヨーロ
ツ・母特許出願６６１３５中に記載されているように、
デキストランから得られる。

デキストランが細胞外細菌超厚のものであるため、この
生成物は＋Ｗｋｍ相の存在下に非常に安定であることは
なく、それ故、容易に分解され、同化され得る。

窒化基を含有するＢｕｌｌ　ａ　ｋ持つデキストラン分
子の分解は成る程度の毒性のある生成物を生じることが
でき、胃の強酸ｇ１境によシ助長される。

第四アンモニウム基を含有するデキストラン服合体の分
解生成物の同化性及び潜在′ａ注の両者のため、それら
を低コレステリン血症剤として使用することは問題であ
る。

我々は今回、新規の天然多糖類の水溶性第四アンモニウ
ム塩を発見した、この塩においては、胆汁塩分子との相
互作用に対して容易に利用できる分校上に、正電荷が多
糖類高分子から適当な距離にある。

上記塩は、非常に強力な低コレステリン血症活性を及ぼ
す他、経口投与における毒性が実質上無く、かつ又、人
間の胃中に存在する一４値に相当する一層において安定
である。

本発明に依る低カロチン血症活性を有する多糖類の第四
アンモニウム塩は、０．５ないし２の置換度を持つ式（
１）のものであることを特徴とする。この用語１置換度
１は多糖類の単量体単位数に対する、第四アンモニウム
基を含有する側鎖の分子数の比を表わす。上記塩の製法
は、前処理した天然多糖＠を、混合溶媒からなる反応媒
体中で、多糖類分子中に存在するＯＨ又はＳＨ又はＮＨ
２又はＮＨＲ型（Ｒは１−１０個の炭素原子をもつ線状
アルキル基である）の求核基と反応し得る工Ｉキシ基と
下記塩の一末端で作用させた第四アンモニウム塩と反応
させることを特徴としている。

本発明に依る第四級塩の製法及び上記塩の治療適用の両
者に関する、上記の及び更に他の特徴は非限定的実施例
に依る、本発明の好ましい実施態様の下記の記述から一
層、明らかになろう。

好ましく使用される上記多糖類はトラガント。

ガール及びイナデマメのゴム及びセルロールス、タマリ
ンド及びキトサンである。上記多糖類は使用可能なもの
の代表的なもののうちのものであり、セルロース又はキ
トサンの如き水不溶性であるか、又はガールコ０ム及び
イナがマメゴムの如き水溶性のいずれかであり得る。

典型的には、本発明に依れば、工４キシ基と作用させた
第四アンモニウム塩と反応させる天然多糖類は、その分
子量を必要な範囲内に調整し、かつその反応性を増加さ
せるために、酸、塩基又は溶媒で前処理される。

水不溶性多糖類は、酸加水分解により前処理して５０．
０００ないし３００．０００の適当な分子量を持つ重合
体を得るか、又は適当な溶媒Ｋｍ解しく例１−１’、セ
ルロースを鋼エチレンシアミンに溶解させ、かつキトサ
ンをギ酸に溶解させる）、ついでｐＨ１Ｏ−１２の水性
環境中で沈殿させて、不均質相中でも反応し得る殆′ど
無定形の重合体を得る。

水溶性多糖類は、濃度１０−３０重ｉチのＮａＯＨ溶液
で前処理し、ついで例えば、ジオキサン、アセトン、エ
チルアルコール又はイソ７″ｏピルアルコール型の有機
溶媒中に分数させてエポキシ化合物に対し非常に反応性
のあるＮａＯＨ−多糖類の錯体を得る。

上記多糖類とエポキシ化合物間の反応は、撹拌下に溶媒
中で、４０℃ないし１００’Ｃの温度及び４ないし１６
時間の時間で、ｌ：１ないしｌ：６′の多糖類対エポキ
シ化合物のモル比で、かっ１：５ないしｌ：３５の多糖
類対反応媒体の重量比で行なわれる。

置換度は０．５ないし２である。

一般式（１）の化合物類の製法及びそれらの治療適用の
それぞれについての下記の実施例及び表は非限定的、例
示目的のために以下に示される。

実施例１アセチル化度が２０チの商用キトサン（ｌＯＯｉを０．
１　Ｍのギ酸（５１）に溶屏し、溶液を還流下に２４時
間、加熱する。

ついで溶液を冷却し、５ＮのＮａＯＨ（１０１）で処理
して沈殿させ、沈殿物をそのＨ２０含有率が３０チとな
るまでイソノロビルアルコールで洗浄シ。

ついでインノロビルアルコール（６００ｄ）中に分散さ
せる。

系を撹拌下に４０分間、保ち、ついでグリシゾルトリメ
チル塩化アンモニウム（２６２ｇ）を〃口え。

混合物を６時間、８０℃に加熱する。

混合物を冷却し、石油エーテルを加え、沈殿物を戸別し
、アセトンで繰返し洗浄し、ついでｊＸＸ上下乾燥して
乾燥生成物（２５５ｇ）を得る。

’Ｈ−ＮＡＶｉＲにより定値した置換度は１．５であり
、生成物の水溶解度は２５℃で１２重量％である。

実施例２粉状ガールゴム（１００ｇ）を２０ｊｊｔＲ％のＮａＯ
Ｈ溶液（２１）中に分散させ、系を撹拌下に、周囲温度
で１時間保つ。

ついで系をジオキサン（３１）中に分散させ。

グリシツルトリメチル塩化アンモニウム（９５Ｆ）を加
え、混合物を撹拌下に４０℃で２４時間保つ。

ついで、生成物をアセトンで処理して沈殿させ、アセト
ン及び石油エーテルで繰返し６を浄し、最後に真空下に
乾燥して乾燥生成物（２５０ｐ）を得る。

’Ｎ−ＮＭＲにより定量した置換度は１．４であり、水
溶解度は２５℃で１５重量％である。

実施例３前もって０．１　Ｍ　ＨＣｌで加水分解し、周囲温度で
０．５Ｍの銅エチレンジアミン（２，０００ｄ）中で崖
？閏させたセルロース粉（１００，９）をアセトン中で
再生させる。

このセルロースを水とアセトンの晶合液中で縁返し洗浄
し、ついでＮａＯＨの８重量％溶液中に浸漬し、ついで
絞り乾燥し、９５％エタノール（２１）中に分散させる
。ノロピレンオキサイドトリエチル臭化アンモニウム（
１５０９）を加え、混合物を２４時間、８０℃に加熱す
る。

冷却後、生成物を石油エーテルで処理して沈殿させ、戸
別し、アセトンで洗浄し、ついで真空乾燥する。

”Ｈ−ＮＭＲにより定量したｆ良度は０．９であシ、水
溶解度は２５℃で７重ｔ％である。

先述の方法を用いて、第四アンモニウム塩を粉末イナゴ
マメゴム、タマリンド及びトラガントから作った。

本発明に依る生成物を一連の薬理学的試験において用い
た、その結果を下記の表中に要約しである。比較のため
、現在、利用可能な低コレステリン血症活性の最も有効
な樹脂であるコレスチラミンを用いて、同一条件下に行
なった試験の結果も記滅しである。

上記各種樹脂の“生体内″低コレステリン血症効果を実
証するため、下記の試験を用いた：ｌ）コレステロール
濃縮食餌によりラット及びウサギ内に誘発された低コレ
ステリン血症に対する作用。

２）犬における胆汁酸の糞排出に対する作用。

ｌ）ラット中に低コレステリン血症を誘発させるため、
その動物を。

一説ビタミンカゼイン　　　　　　２０チー　ＤＬ−メ
チオニン　　　　　　　　０．４チー　Ｈａｇｓｔｅｄ
塩混合物　　　　　　　４チー蔗糖　　　　　　　　　
　　　　４９．１％−コレステロール　　　　　　　　
１％−コール酸０．５％及びビタミン類を含有するＮａｔｈ食餌（Ｎａｔｈ及びｃｏｉｌ、　、
　Ｊ。

Ｎｕｔｒｉｔ、　６７．２８９．１９５９）の下に保持
した。

胃探針によｔ）１ｇ／動物／日のコレステロールを投与
することにより、ウサギ内に低コレステリン血症を誘発
させた。

平均体重２００９のＳｐｒａｇｕ＊−Ｄａｗｌｅｙのラ
ット及び３Ｋｇの体重のニューノーランドのウサギを用
い。

各々、１０匹の動物の群に分けた。

上記動物のすべてを食餌により低コレステリン血症にし
た。一つの詳を未処理のままとし、対照として役立たせ
、一方、他の群を３０日間の試験の下に各種生成物、０
．５９　／ｋ１９で処置した。

３０日間の処置の後、動物全部を殺し、頚動脈から採集
した血の中の全血漿コレステロールを定量した（　Ｐｅ
ａｒｓｏｎ及びｃａｌｌ、　、　Ｊ、　Ｃｈａｍ、　Ｅ
ｎｄｏａｒｉｎ。

Ｍ＠ｔａｂｏｌｉｍ　ｌ　２　、１２４５　、１９５２
　）。

２）胆汁酸の糞排出を評価するため、約８ゆ体重の４８
匹の雄のピーグル犬を用い、４匹づつの１２群に分けた
。動物全部を食餌の下に保ち、標準条件下に１舎に入れ
、対照の−＃を除き、他のすべての群に、上記食餌の他
に、２５日間の試験下に、上記生成物の一つを２９／Ｃ
Ｉ１日与えた。

試験開始後、２６日目に、代謝のおりの中に１２時間、
断食下に保持されていた犬の！ｔを胆汁酸定量に付した
（　Ｇｒｕｎｄｙ及びｃｏｉｌ、　、　Ｊ、　Ｌｉｐｉ
ｄ　Ｒｅｓ　。

６、３９７．１９６５；　Ｍａｋｌｔａ及びｃｏｉｌ、
　Ａｎｎ。

Ｂｉｏｃｈｅｍ、　５　＋５２３．１９６３；　Ｆｏｒ
ｒｎａｎ及びｃｏｌｌ、　。

Ｃｌ１ｎ、Ｃｈｅｍ、１４，３４８．１９６９）。

表１及び表２は食餌により低コレステリン血症にし、各
種の指示生成物で処置したラット及びウサギについて得
た結果を要約している。第３表は各種化合物、２９７ｋ
ｌ１日で処置した犬の胆汁酸排出の値を示している。

これらの試験において使用された本発明に依る生成物は
下記の如くである：ＥＴ１０１５　＝プールゴム基体をもつ生成物ＥＴ１０
１６　＝粉末イナゴマメゴム基体をもつ生成物１！ｖＩ
′１Ｏ１８＝セルロ一ス基体をもつ生成物ＥＴ１０１９
　＝タマリンド基体をもつ生成物ｇＴ１０２０　＝キト
サン基体をもつ生成物ＥＴ１０２１　＝　）ラガント基
体をもつ生成物表　　１３０日間、Ｎａｔｈ食餌（Ｎａｔｈ及びｃｏｉｌ、。

Ｊ、Ｎｕｔｒｉｔ、６７．２８９．１９５９）を受け、
上記の各種生成物で処置されたラット中の全漿液コレス
テロール値衆　　２３０日間、コレステロールｒ１１１ｍ食餌を受け。

上記各種生成物で処置されたウサギ中の全漿液コレステ
ロール値表　　３２５日間、上記各種生成物で処置した犬における糞胆汁
酸排出上記の表から、本発明に依る多糖類の第四アンモニウム
塩が低コレステリン血症食餌を受けたラット及びウサギ
の両者において、コレスチラミンよりも一層大きい低コ
レステリン血症活性をもっていることは明らかである。

犬における糞排出について得られた結果は本発明に依る
生成物の胆汁酸に対する結合活性を確認している。この
点において、これらの生成物の投与は、コレスチラミン
の当量投与量の場合よシも。

糞と共に排出される胆汁酸の量を相当大幅に増加させて
いる。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）下記の一般式（ I ）を持ち、かつ０．８ないし
２の置換度と５０，０００ないし３００，０００の分子
量を有する、低コレステリン血症活性を持つ天然多糖類
の水溶性第四アンモニウム塩、 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ）式中、Ａは天然多糖類の単量体単位を表わし、ｍは１０
０ないし１，０００の全数であり、ｎは０ないし１０の
全数であり、ＢはＯ又はＳ又はＮＨ又はＮＲ′であって
、ここにＲ′はアシル、好ましくはアセチルであり、Ｒ
は１〜４個の炭素原子の線状アルキル基であり、かつＸ
＾（＾−＾）＾はＣｌ＾−、Ｂｒ＾−、Ｉ＾−、ＨＳＯ
＿４＾−又はＣＨ＿３Ｏ−ＳＯ＿３＾−、ＮＯ＿３＾−
の如き陰イオン又は製剤的に受容できる有機酸の陰イオ
ンである。
（２）上記天然多糖類がトラガントである、特許請求の
範囲第（１）項に記載の天然多糖類の水溶性第四アンモ
ニウム塩。
（３）上記天然多糖類がガールゴムである、特許請求の
範囲第（１）項に記載の天然多糖類の水溶性第四アンモ
ニウム塩。
（４）上記天然多糖類がイナゴマメゴムである、特許請
求の範囲第（１）項に記載の天然多糖類の水溶性第四ア
ンモニウム塩。
（５）上記天然多糖類がセルロースである、特許請求の
範囲第（１）項に記載の天然多糖類の水溶性アンモニウ
ム塩。
（６）上記天然多糖類がタマリンドである、特許請求の
範囲第（１）項に記載の天然多糖類の水溶性アンモニウ
ム塩。
（７）上記天然多糖類がキトサンである、特許請求の範
囲第（１）項に記載の天然多糖類の水溶性第四アンモニ
ウム塩。
（８）前処理した天然多糖類を、混合溶媒からなる反応
媒体中で、あらかじめ存在しているか、又はその場で生
成され、かつ多糖類分子中に存在するＯＨ又はＳＨ又は
ＮＨ＿２又はＮＨＲ型（Ｒは下記の意味を持つ）の求核
基と反応し得るエポキシ基と下記塩の一末端で作用させ
た第四アンモニウム塩と反応させることを特徴とする、
下記の一般式（ I ）を持ち、かつ０．８ないし２の置
換度を有する低コレステリン血症活性を持つ天然多糖類
の第四アンモニウム塩を製造する方法、 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ）式中、Ａは天然多糖類の単量体単位を表わし、ｍは１０
０ないし１，０００の全数であり、ｎは０ないし１０の
全数であり、ＢはＯ又はＳ又はＮＨ又はＮＲ′であって
、ここにＲ′はアシル、好ましくはアセチルであり、Ｒ
は１−４個の炭素原子の線状アルキル基であり、かつＸ
＾（＾−＾）はＣｌ＾−、Ｂｒ＾−、Ｉ＾−、ＨＳＯ＿
４＾−又はＣＨ＿３Ｏ−ＳＯ＿３＾−、ＮＯ＿３＾−の
如き陰イオン又は製剤的に受容できる有機酸の陰イオン
である。
（９）上記天然多糖類がトラガント、ガールゴム、イナ
ゴマメゴム、セルロース、タマリンド及びキトサンであ
ることを特徴とする、特許請求の範囲第（８）項に記載
の方法。
（１０）上記天然多糖類が、水不溶性の場合には、あら
かじめ酸環境中で加水分解して５０，０００ないし３０
０，０００の分子量を持つ重合体を得ることを特徴とす
る、特許請求の範囲第（８）項に記載の方法。
（１１）上記天然多糖類が、水不溶性の場合には、あら
かじめ、適当な溶媒に溶解し、次いで１０ないし１２の
ｐＨの水性環境中で沈殿させることにより、活性化して
おくことを特徴とする、特許請求の範囲第（８）項に記
載の製法。
（１２）上記天然多糖類が、水溶性の場合には、あらか
じめ、１０ないし３０重量％の濃度のＮａＯＨ溶液で処
理して活性化し、ついで、ジオキサン、アセトン、エチ
ルアルコール又はイソプロピルアルコールの如き有機溶
媒中に分散させることを特徴とする、特許請求の範囲第
（８）項に記載の方法。
（１３）上記反応を撹拌下に、４０℃ないし１００℃の
温度で、４ないし１６時間の間、行なうことを特徴とす
る、特許請求の範囲第（８）項に記載の方法。
（１４）上記反応を、１：１ないし１：６の多糖類対エ
ポキシ化合物のモル比及び１：５ないし１：３５の多糖
類対反応媒体の重量比を用いて行なうことを特徴とする
、特許請求の範囲第（８）項に記載の方法。
（１５）上記反応媒体が混合溶媒であることを特徴とす
る、特許請求の範囲第（８）項に記載の方法。
（１６）式（ I ）の生成物を有効成分として含有する
ことを特徴とする、低コレステリン血症活性を持つ治療
組成物。