JPS63248320A - 体細胞胚の作成方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明はメロンの体細胞胚の作成方法に関するものでお
る。

従来技術 メロン（Ｃｕｃｕｍｉｓ　ｍｅｌｏ　Ｌ、）の体細胞胚
作成に関する技術は従来よりいくつかの方法が提案され
ているが、それらの多くは伯の植物における場合と同じ
く、寒天培地の如き固体培地上における体細胞胚の作成
方法であって、人工種子等の繁殖技術上重要な液体培地
にお【ノる体細胞胚の作成方法については殆ど知られて
いない。

その中の一つは例えば、折館他、「育種学雑誌」３６巻
、別冊２，２２６頁（１９８Ｂ）であるが、これらの方
法においても第一段階の培養において固体培地を用いて
おり、また体細胞胚の収ωは低く、かつ得られる体細胞
胚は奇型のものが多い。

発明の目的 本発明の目的は繁殖技術上有用な、正常な形態を有し、
その後の発育が順調でおるメロンの体細胞胚を効率よく
作成する方法を提供することにある。

発明の構成及び作用効果 本発明者らは前記の目的を達成するため鋭意研究の結果
、驚くべきことにメロンの特定の組織を、寒天培地の如
き固体培地で培養することなく、特定液体培地に植え込
み、撮盪培養することにより正常な形態の体細胞胚が高
収量で得られることを見出し、本発明に到達した。

すなわち本発明はメロンの種子または茎頂組織をオーキ
シンを少くとも５Ｘ１０’モル／ｌ含有する液体培地で
培養せしめることを特徴とするメロン体細胞胚の作成方
法である。

１肌り旦工 以下本発明を更に詳細に説明７る。

本発明で言うメロンとはＣｕＣＵｍｉＳ　ｍｅｌｏ　Ｌ
の範晒に分類されるものであればよく、例えばアールス
系、カンタループ系、ハネデユー系、マクワウリ等の栽
培種のみならず野生種であってもよい。

本発明においてはメロンの種子または茎頂組織を外植片
として用い、これを液体培地で振盪培養する。メロンの
種子は例えば原因らによる「植物細胞組織培養」　（理
工学社、　１９７９年）等に記載されているような方法
で滅菌することができる。また種子を培地に植え込む場
合は種皮のついた状態でもよいが、種皮を除き裁断した
方が好ましい。

一方茎頂絹織は有閑下で栽培している植物体から切りと
って、前記の様な方法で滅菌してもよいが、まず種子を
滅菌し、これを無菌下で発芽、生長させた植物から無菌
的に採取する方が好ましい。また茎頂を採取する植物体
は成木よりも発芽後１力月以内の幼植物であることが好
ましい。また茎Ｗｉ粗械はその近傍の葉、茎等を含有し
ていてもよい。

前記種子または茎頂組織は液体培地１００　ｒＩ１１当
り１０〜１０００１００Ｏのｖ１合で植え込むのが好ま
しい。

培地としては種々の液体培地を用いることができるが、
中でもＨＵｒａＳｈｉｇｅ−３ｋＯｏｇの培地及びＬｉ
ｎ５１１１ａｉｅｒ−５ｋ００（ＩＩの培地を好ましく
用いることができる。これらの培地はオーキシンを少く
とも５Ｘ１０’モル／ｌ、好ましくは２ｘｉｏ−ｔｉモ
ル／ｌ〜１０−（モル／ｉ含有することが必要である。

Ａ−キシン濃度が５　Ｘ　１０−７モル／ｉより低い液
体培地の場合には、体細胞胚が形成されないか、形成さ
れたとしても極めて僅かである。オーキシンとしてはイ
ンドール−３−耐耐、インドールー３−酪岐。

２．４−ジクロロフェノキシ酢酸、１−］゛ルルタリン
酢酸例示することができるが、中でも２，４−ジクロロ
フェノキシ酢酸が好ましい。これらのオーキシンは単独
または２種以上を混合して用いることができる。す゛イ
トカイニンは含有しなくてもよいが、１０−７モル／ミ
ル１０−４モル／ｉ存在した方が好ましい。サイ１〜カ
イニンとしては、６−ベンジルアデニン、カイネチン、
ゼアチン等の１種または２種以上を用いることができる
。

培養方式としては１ｒｉ盪Ｉ８養が好ましく、撮罎方法
は往復または回転どちらでもよく、撮勤数は毎分５０〜
２００回が好ましい。また培養は明所で行うことにより
、体細胞胚の収率をざらに向上さＵることがてぎる。

前記の様な条イ１て１０〜３０日間培養することにより
体細胞肝を（りることかできるが、この後、ｊｑられた
培養細胞及び体細胞胚をオーキシンを含まないか或いは
その濃度が５Ｘ１０−７モル／ｌより低い培地に移１こ
とによりさらに体細胞胚の数品を向上させ、また（７ら
れた体細胞旺の正常な生長を促すことができる。

以下実施例をあげて本発明をざら（詳述するが、本発明
は以下の実施例に制限されるものではない。

実施例１ メロン（品ｇ！ニリンデー秋型）の種子を通常の方法に
従って滅菌したあと種皮を除き、幅２ｍｌ１ｌに裁断し
、この１０ｍｇを、２．４−ジクロロワ１ノキシ酢Ｍ：
５×１−６モル／ｌ及び６−ヘンシルアデニン：５ｘ１
０−７モル／ｉ含イｊ７る）ｆｕｒａｓＪ＋ｉｇｅ−５
ｋｏｏｇの液体培地２５−に植え込み、明所で２０口間
、ＩｉＪ分１２０回転で振盪培養した。得られた美容細
胞と体細胞胚の混合物３０ｍｃ＋を生長ＦＡ整物質を含
まないＨｕｒａｓｈｉｇｅ−５ｈｏｏｇ培地２５ｄに移
し、１０日間１８谷した。この結果を第１表に示１゜ 実施例２　　　− メロン（品種；ふかみどりメロン）を用いる以外は実施
例１と同様にして体細胞肝を作成した。

結果を第１表に承り。

比較例１ メロン（品種：サンデー秋型）の種子を通常の方法に従
って滅菌したあと種皮を除き幅２ｍｍに裁断し、この１
０ｍｇを２，４−ジクロロフェノキシ酢酸：５×１−６
モル／ｌ，６−ベンジルアデニン：５×１０−７モル／
ｌ及び寒天１０ｑ／ｉを含有する）１ｕｒａｓｈｉｇｅ
−３ｋｏｏｇ　ｊｆ３地２０７！上に置床し、暗所で２
１日間培養した。得られたカルス３０ｍ（］を実施例１
と同様にして培養した。結果を第１表に示す。

実施例３ 実施例１において第１段階の培養の培地として、２．４
−ジクロロフェノキシ酢酸５Ｘ１０−６モル／′ｌ。

１−プフタリン耐酸５Ｘ１０−”モル／ｌ及び６−ベン
ジルアデニン２Ｘ１０−６モル／’　１　＠　含有づる
）１ｕｒａｓｈｉｇｅ−３ｋｏｏｇの液体培地を用いる
以外は実施例１と同様にして培養した。結果を第１表に
示す。

実施例４ メロン（品種ニリンデー伏型）の種子を滅菌後、無菌状
態の含水ガーＬ上で発芽させた。発芽後１４日口の幼植
物の茎頂を切りとり実施例１と同様にして培養した。結
果を第１表に示づ。

比較例２ 実施例４において幼植物の子葉を用いる以外は実施例４
と同様にして培養した。結果を第１表に示す。

＊培地１００　ｄ当りの大きさ１１１１１１１以上の該
ｆＩＩｌ胞の数

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）メロンの種子または茎頂組織を、オーキシンを少
   くとも５×１＾−＾７モル／ｌ含有する液体培地中で培
   養せしめることを特徴とする体細胞胚の作成方法。
2. （２）該培養を暗所条件で行う特許請求の範囲第１項記
   載の方法。