JPS6321559A - ハプテンの酵素免疫測定法 - Google Patents
ハプテンの酵素免疫測定法Info
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- JPS6321559A JPS6321559A JP16690886A JP16690886A JPS6321559A JP S6321559 A JPS6321559 A JP S6321559A JP 16690886 A JP16690886 A JP 16690886A JP 16690886 A JP16690886 A JP 16690886A JP S6321559 A JPS6321559 A JP S6321559A
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- antigen
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Landscapes
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は改良されたハプテンの酵素免疫測定法に関する
ものである。
ものである。
酵素免疫測定法は、酵素活性を指標とし、抗原抗体反応
を利用して検体溶液中の抗原（または抗体）の量を測定
する方法であり、生理活性物質のように検体溶液中に微
量に存在する物質の分析法として極めて優れたものであ
り、医療分野など広い産業分野で利用できる。
を利用して検体溶液中の抗原（または抗体）の量を測定
する方法であり、生理活性物質のように検体溶液中に微
量に存在する物質の分析法として極めて優れたものであ
り、医療分野など広い産業分野で利用できる。
従来の技術
従来、ハプテンの酵素免疫測定法としているいろな種類
が知られているが、高感度のものとしては同相法やサン
ドイツチ法がある。いずれの方法も抗体を支持体に結合
させて同相の状態にしておき、これに被測定物質（抗原
）および酵素等で標識された抗原（または抗体）からな
る被測定物質溶液を加え、抗原抗体反応を行わせた後、
未反応（フリー）の抗原を水洗によシ除去し、結合した
（ボンド）抗原の酵素活性を測定し、緩度既知の検体溶
液を用いて予め作成した検量線から被測定物質の量を算
出する方法である。この方法でに、１０−１０ｇ／ｍＬ
８度の極微量からなり高い濃度の範囲まで抗原または抗
体を測定することが出来るが、反面、抗原抗体反応後、
フリーの抗原を固相から洗浄等によシ分離除去する操作
を必要とする。
が知られているが、高感度のものとしては同相法やサン
ドイツチ法がある。いずれの方法も抗体を支持体に結合
させて同相の状態にしておき、これに被測定物質（抗原
）および酵素等で標識された抗原（または抗体）からな
る被測定物質溶液を加え、抗原抗体反応を行わせた後、
未反応（フリー）の抗原を水洗によシ除去し、結合した
（ボンド）抗原の酵素活性を測定し、緩度既知の検体溶
液を用いて予め作成した検量線から被測定物質の量を算
出する方法である。この方法でに、１０−１０ｇ／ｍＬ
８度の極微量からなり高い濃度の範囲まで抗原または抗
体を測定することが出来るが、反面、抗原抗体反応後、
フリーの抗原を固相から洗浄等によシ分離除去する操作
を必要とする。
発明が解決しようとする問題点
本発明は、上記のような水洗による分離操作を要するこ
となく、自動的にフリーの抗原を分離し、被測定物質の
量を測定する方法を提供することを目的とする。
となく、自動的にフリーの抗原を分離し、被測定物質の
量を測定する方法を提供することを目的とする。
問題点を解決するための手段
酵素活性を指標とし、抗原抗体反応を利用して抗原の量
を測定する酵素免疫測定法において、基質（または酵素
活性制御物質）で標識された抗原分子の大きさと抗体分
子の大きさが、非常に異なることを用いて、遊離の標識
抗原と抗体に結合した標識抗原の分離を、限外ろ過膜を
用いて行う。
を測定する酵素免疫測定法において、基質（または酵素
活性制御物質）で標識された抗原分子の大きさと抗体分
子の大きさが、非常に異なることを用いて、遊離の標識
抗原と抗体に結合した標識抗原の分離を、限外ろ過膜を
用いて行う。
作 用
抗体と結合している抗原は、分子量が１６万以上になり
、結合していない抗原は分子量が約１万以下なので、限
外ろ過膜により、結合していない抗原のみを通過させ、
自動的に両者を分離することができる。
、結合していない抗原は分子量が約１万以下なので、限
外ろ過膜により、結合していない抗原のみを通過させ、
自動的に両者を分離することができる。
実施例゛
本発明の実施に用いる測定器具を図示の実施例を参照し
て説明する。
て説明する。
第１図は本発明の一実施例を示す断面図であって、透明
容器１は限外ろ過膜２およびホルダー３で上下に分けら
れている。測定に際しては、上部に試料溶液４を、下部
に酵素溶液５を適量式れた後、最上部よシ気体を通して
圧力を加え、酵素活性の変化を下部で測定する。
容器１は限外ろ過膜２およびホルダー３で上下に分けら
れている。測定に際しては、上部に試料溶液４を、下部
に酵素溶液５を適量式れた後、最上部よシ気体を通して
圧力を加え、酵素活性の変化を下部で測定する。
あるいは、第２図に示したように、透明容器１を限外ろ
過膜２およびホルダー３で左右に分け、一方に試料溶液
４を、他方に酵素溶液５を入れ、試料溶液側から圧力を
かけ、酵素溶液側で活性を測定することもできる。
過膜２およびホルダー３で左右に分け、一方に試料溶液
４を、他方に酵素溶液５を入れ、試料溶液側から圧力を
かけ、酵素溶液側で活性を測定することもできる。
次ぎに、具体例を挙げて本発明を更に詳細に説明する。
カフェインの態度測定
（１）測定器具の調製
透明容器の中央に、分子量１０万以上を通さない限外ろ
過膜をホルダーと共に取シ付ける。容器の上部には、抗
カフェイン・モノクロナル抗体（１Ｘ１０−２−り及び
、基質を標識した抗原であるウンベリルーβ−Ｄ−ガラ
クトシド標識カフェイン（２Ｘ １０−２ｍＭ）を含む
リン酸緩衝液（２０ｒｒＭ。
過膜をホルダーと共に取シ付ける。容器の上部には、抗
カフェイン・モノクロナル抗体（１Ｘ１０−２−り及び
、基質を標識した抗原であるウンベリルーβ−Ｄ−ガラ
クトシド標識カフェイン（２Ｘ １０−２ｍＭ）を含む
リン酸緩衝液（２０ｒｒＭ。
ｐＨ７，３）１ｍＬを入れる。下部には酵素としてβ−
Ｄ−ガラクトシダーゼ（ｓ ％ ｗ／ｖ ）を含むリン
酸緩衝液（２０ｍＭ、ｐＨ７，３）１ｍＬを入れる。
Ｄ−ガラクトシダーゼ（ｓ ％ ｗ／ｖ ）を含むリン
酸緩衝液（２０ｍＭ、ｐＨ７，３）１ｍＬを入れる。
この状態では、基質標識抗原（ウンベリルーβ−Ｄ−ガ
ラクシド標識カフェイン）と抗体（抗カフェイン・モノ
クロナル抗体）はほとんど結合しておシ、遊離の基質標
識抗原はほとんど存在しないので、基質が限外ろ過膜を
通過することはなく、容器下部の酵素は活性を示さない
。
ラクシド標識カフェイン）と抗体（抗カフェイン・モノ
クロナル抗体）はほとんど結合しておシ、遊離の基質標
識抗原はほとんど存在しないので、基質が限外ろ過膜を
通過することはなく、容器下部の酵素は活性を示さない
。
（掲 測定法
標準カフェイン溶液（Ｏｎｇ／ｍＬ 、 １０ｎ ｇ
／ｍＬ 。
／ｍＬ 。
２０ｎ９／ｍＬ、４０ｎ９／ｍＬ、８０ｎｇ／ｍＬ）０
．１ｍＬを、それぞれ（１）で調製した容器の上部に加
え、最上部より３ ｘｑｙｃＪ の圧力をかけ、３０℃
で３０分間放置する。
．１ｍＬを、それぞれ（１）で調製した容器の上部に加
え、最上部より３ ｘｑｙｃＪ の圧力をかけ、３０℃
で３０分間放置する。
過剰のカフェイン（抗原）が存在すると、（１）で抗体
と結合していた基質標識抗原が後で加えられた抗原によ
ジ置換され、後で加えられた抗原の量に対応する基質標
識抗原がフリーの状態になる。
と結合していた基質標識抗原が後で加えられた抗原によ
ジ置換され、後で加えられた抗原の量に対応する基質標
識抗原がフリーの状態になる。
フリーの基質標識抗原は限外ろ過膜を通過することが出
来るので、容器下部で酵素と反応して活性を示す。
来るので、容器下部で酵素と反応して活性を示す。
正確に３ｏ分後、各容器下部の溶液の螢光度を測定しく
励起波長： ３６０ ｎｍ、螢光波長４５０ ｎ ｍ
）得られた値から定量曲線を炸裂する。
励起波長： ３６０ ｎｍ、螢光波長４５０ ｎ ｍ
）得られた値から定量曲線を炸裂する。
次に未知試料溶液ｏ、 １ｍＬを、新たに調製した容器
の上部に加え、上と同様にして、螢光度を測定し、定量
曲線から濃度を測定する。
の上部に加え、上と同様にして、螢光度を測定し、定量
曲線から濃度を測定する。
なお分離操作を自動的に行って、フリーの抗原分分離す
ることをねらいとする従来技術として、抗体を通水性シ
ートに固定し、このシートを溶液が通るあいだに、抗原
抗体反応を行わせ、フリーの抗原のみがシートを通過す
るようにしたもの（特開昭５８−１５０８６１号公報）
があるが、抗体を固定化する必要がある点で本発明と構
成が異なっておシ、また溶液の流れ全制御するものがな
いため、定量精度の面でも劣っている。
ることをねらいとする従来技術として、抗体を通水性シ
ートに固定し、このシートを溶液が通るあいだに、抗原
抗体反応を行わせ、フリーの抗原のみがシートを通過す
るようにしたもの（特開昭５８−１５０８６１号公報）
があるが、抗体を固定化する必要がある点で本発明と構
成が異なっておシ、また溶液の流れ全制御するものがな
いため、定量精度の面でも劣っている。
発明の効果
以上のように、分離操作を人為的に行うことなく酵素免
疫測定が行えるために、省力化、保守の軽減および分析
時間の短縮が図れると共に、分離操作を行った時と同程
度の高感度が得られる。
疫測定が行えるために、省力化、保守の軽減および分析
時間の短縮が図れると共に、分離操作を行った時と同程
度の高感度が得られる。
第１図および第２図は本発明の実施例における測定器具
を示す断面図である。 １・・・・・・透明容器、２・・・・・・限外ろ過膜、
３・・・・・・ホルダー、４・・・・・・試料溶液、６
・・・・・・酵素溶液。
を示す断面図である。 １・・・・・・透明容器、２・・・・・・限外ろ過膜、
３・・・・・・ホルダー、４・・・・・・試料溶液、６
・・・・・・酵素溶液。
Claims (4)
- （１）酵素活性を指標とし、抗原抗体反応を利用して抗
原の量を測定する酵素免疫測定法であって、基質（また
は酵素活性制御物質）で標識された抗原分子の大きさと
抗体分子の大きさが、非常に異なることを用いて、遊離
の標識抗原と抗体に結合した標識抗原の分離を、限外ろ
過膜を用いて行うことを特徴とする酵素免疫測定法。 - （２）抗体を含む溶液と酵素（または酵素と基質）を含
む溶液とを限外ろ過膜で気密的に分離し、上記抗体を含
む溶液側に、被測定物質である抗原と基質（または酵素
活性制御物質）で標識した抗原の一定量を加えて競争的
に反応させ、抗体と結合しない遊離の抗原および標識抗
原を圧力差により限外ろ過膜を通して酵素溶液側に移動
させ、酵素反応を起こさせることにより、被測定物質を
定量することを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の
酵素免疫測定法。 - （３）基質（または酵素活性制御物質）で標識した抗原
と特価的に結合した抗体を含む溶液と、酵素（または酵
素と基質）を含む溶液とを、限外ろ過膜で気密的に分離
し、上記の抗原抗体結合物を含む溶液側に、被測定物質
である抗原を含む液を加えて、上記の標識抗原と置換反
応を起こさせ、抗体から遊離した標識抗原を圧力差によ
り限外ろ過膜を通して酵素溶液側に移動させ、酵素反応
を起こさせることにより、被測定物質を定量することを
特徴とする特許請求の範囲第１項記載の酵素免疫測定法
。 - （４）基質（または酵素活性制御物質）で標識した抗原
として、被測定物質と構造が類似し、抗体との結合力が
やや弱い疑似抗原を用いることにより、被測定物質であ
る抗原との置換反応をより速やかに行うことを特徴とす
る特許請求の範囲第３項記載の酵素免疫測定法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP16690886A JPS6321559A (ja) | 1986-07-16 | 1986-07-16 | ハプテンの酵素免疫測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP16690886A JPS6321559A (ja) | 1986-07-16 | 1986-07-16 | ハプテンの酵素免疫測定法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6321559A true JPS6321559A (ja) | 1988-01-29 |
Family
ID=15839869
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP16690886A Pending JPS6321559A (ja) | 1986-07-16 | 1986-07-16 | ハプテンの酵素免疫測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6321559A (ja) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5951353A (ja) * | 1975-04-28 | 1984-03-24 | マイルス・ラボラトリ−ズ・インコ−ポレ−テツド | 液体中のハプテン又は抗原を分析するための不均一系免疫分析方法及び試薬 |
| JPS60115865A (ja) * | 1983-10-21 | 1985-06-22 | バックスター インターナショナル インコーポレーテッド | 配位子を検知し且つ測定するための方法および構体 |
-
1986
- 1986-07-16 JP JP16690886A patent/JPS6321559A/ja active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5951353A (ja) * | 1975-04-28 | 1984-03-24 | マイルス・ラボラトリ−ズ・インコ−ポレ−テツド | 液体中のハプテン又は抗原を分析するための不均一系免疫分析方法及び試薬 |
| JPS60115865A (ja) * | 1983-10-21 | 1985-06-22 | バックスター インターナショナル インコーポレーテッド | 配位子を検知し且つ測定するための方法および構体 |
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