JPS63198635A - エイズ原因ウイルスに対する抗ウイルス剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〈産業上の利用分野〉 本発明は、現在までに治療法が知られていないエイズの
原因ウィルスに対して有効な抗ウィルス剤に関する。

〈従来の技術〉 抗ウィルス作用を有する抗ウィルス剤としては、アラ−
ニー（Ａｒａ−Ａ）、アシクロビール（Ａｃｙｃｌｏｖ
ｉｒ）などのようにウィルスのＤＮＡ合成阻害作用によ
るもの、レトロウィルスなどの逆転写酵素の阻害作用を
もラスラミン（Ｓｕｒａｍｉｎ）　、リバビリン（Ｒｉ
ｂａＶｉｒｉｎ）　、ニーゼットティー　（Ａ　Ｚ　Ｔ
　：　ａｚｉｄｏｔｈｙｍｉｄｉｎｅ）などが知られて
いる。抗ウイルス物質はその作用が細胞の代謝の特定の
部分で生じ、そのウィルスの増殖の限定された時点での
み効果がみとめられる。

レトロウィルスはＲＮＡからＤＮＡへの転写を逆転写酵
素（ｒｅｖｅｒｓｅ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ）で
行なうＲＮＡウィルスである。エイズ（ＡＩＤＳ）原因
ウィルスはレトロウィルスであって、）（ＴＬＶ−Ｉｌ
ｌ（ｔｌｕｍａｎ　Ｔ　ｃｅｌｌ　Ｌｙｍｐｈｏｔｒｏ
ｐｉｃ）　、ＬＡＶ（ＬＶｎｌＤｈａｄｅｎｏｐａｔｈ
ｙ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　Ｖｉ′ｒｕｓ）またはＨＩ
　Ｖ　（ｔｌｕｍａｎ　Ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎ
ｃｙ　Ｖｉｒｕｓ）と呼ばれる。

Ａ　Ｉ　Ｄ　５（Ａｃｑｕｉｒｅｄ　Ｉｍｍｕｎｅ　Ｄ
ｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　５ｙｎｄｒ。

ｌｅ：後天性免疫不全症候群）は生゛体のヘルパーＴ細
胞（Ｔ４）が原因ウィルスにより破壊され、カポシ肉腫
、カリニ肺炎、カンジダ感染、アスペルギルス感染症な
どの日和見感染より生じるもので、現在までに治療法は
知られていない。ＡＩＤＳ原因ウィルス感染後、ＡＣ（
＾ｓｙｍｐｔｏｍａｔｉｃ　Ｃａｒｒｉｅｒ）からＡ　
ＲＣ（ＡＩＤＳ　Ｒｅ１ａｔｅｄ　Ｃｏｍｐｌｅｘ）を
経てＡＩＤＳとなることが知られている。

〈発明が解決しようとする問題点〉 抗ウイルス物質としては、ウィルスの感染した細胞内で
のウィルスの増殖を阻害するものやウィルス感染力を低
下させるものなどがある。しかしながら、ウィルスを生
体から排除するためには、薬理作用の異なるものの併用
や、生体防御機構活性化物質（３ＲＭ　：　　Ｂｉｏｌ
ｏｇｉｃａｌ　　Ｒｅ５ｐｏｎｓｅ　　）ｉｏｄｉｆｉ
ｅｒ）、貴簡移植などを組みあわぜる必要がある。

ＡＩＤＳ原因ウィルス感染で生じたＡＩＤＳにおいては
、生体の免疫機能が著しく低下している場合、その治療
は一般に困難である。

本発明はＡＩＤＳ原因ウィルスの感染後、ＡＩＤＳに到
達するまでの間に治療を行ない、抗ウイルス効果および
免疫増強効果により、ＡＩＤＳへの到達を阻害するため
の治療剤を提供することを目的とする。

く問題点を解決するための手段〉 本発明は、ヒトインターフェロンを有効成分とするＡＩ
ＤＳ原因ウィルスに対する抗ウィルス剤である。

本発明に用いられるヒトインターフェロン（ｈ−ＩＦＮ
）は、天然型のもの、化学合成により製造されるもの、
遺伝子組換え技術により製造されるもののいずれであっ
てもよいが、特に天然型のものが好ましい。またｈ−Ｉ
　ＦＮには、α、βおよびγ型のものがあるが、本発明
にはαおよびβ型のｈ−Ｉ　ＦＮ　（ｈ−Ｉ　ＦＮ−α
、ｈ−Ｉ　ＦＮ−β）が好ましい。すなわち、天然型の
ｈ−Ｉ　ＦＮ−αおよびｉ−Ｉ　ＦＮ−βが望ましく、
ヒト白血球細胞によって産生されるｈ−Ｉ　ＦＮ−αヤ
、ヒト二倍体線維芽細胞によって産生されるｈ−ＩＦＮ
−βが好ましく用いられる。この中、後者のｈ−ＩＦＮ
−βが本発明の目的を達成するために特に好ましく、そ
の比活性が１０８０／η蛋白以上のものが最も望ましい
。

天然型ｈ−Ｉ　ＦＮ−βは、通常ガラスもしくはプラス
チック等の表面、またはＤＥＡＥ化デキ化上キストラン
クロキャリアー表面上等で培養されたｈ−Ｉ　ＦＮ−β
産生細胞（以後、単に細胞と略すことがおる）を、例え
ばＰｏ１ｙ　Ｉ　：　Ｃのような合成二本１１ＲＮＡに
よる誘発処理と、続いて行なう超誘発処理（例えばシク
ロへキシミドとアクチノマイシンＤの組合せによる代謝
阻害法または紫外線照射法等）に付した後、細胞を培養
液中に２０〜４８時間培養することにより、この培養液
中に産生され、ｈ−Ｉ　ＦＮ−βを含有する産生液とし
て取得される。

この場合、培養液としては例えばイーグルＭＥＭ培養液
が用いられ、必要に応じ血清および種々の添加物が加え
られる。もちろんこれ以外の培養液が用いられる場合も
ありうる。

このようにして得られるｈ−Ｉ　ＦＮ−βを含有してい
る産生液中のＩＦＮは、一般的に低濃度（数千〜致方単
位（生物学的検定法により、ＮＩＨ供与ｈ−Ｉ　ＦＮリ
フ７ランススタンダードで換算した力価すなわち国際単
位を示す）／ｍｌ）であり、この産生液にはｈ−ＩＦＮ
−βの他に細胞由来、培養由来または添加物由来の多く
の夾雑物を含んでいるので、医療に用いるにはｈ−Ｉ　
ＦＮ−βを濃縮精製することが要求される。

ｈ−Ｉ　ＦＮの濃縮精製法としては、すでに種々の方法
が提案されているが、本発明には特開昭５８−２０１７
９４＠に開示された次の方法が好ましい。すなわち、粗
ｈ−ＩＦＮ含有液を不溶性ブルー担体と接触させｈ−Ｉ
ＦＮを該ブルー担体に吸着させた後、溶出液を用いて該
ｈ−ＩＦＮを溶液として回収し、次いでこのｈ−Ｉ　Ｆ
Ｎ溶液を亜鉛をキレート化させたキレート基結合担体（
亜鉛キレート担体）に接触させた後、溶出液を用いて該
ｈ−ＩＦＮを溶液として回収し、濃縮精製されたｈ−Ｉ
　ＦＮを得るという方法である。

本発明の抗ウィルス剤には、必要により安定剤を添加す
ることができる。そのような安定剤としては、ヒト血清
アルブミン、特開昭５８−９２６１９号に開示されたポ
リオール、特開昭５８−９２６２１号に開示された有機
酸緩衝剤などを例示することができる。更に、投与方法
に応じて常用の担体等を適宜混合して製剤化できること
は言うまでもない。

剤型としては、注射剤、カプセル剤、経鼻剤、座薬、経
口薬、軟青剤など種々の形態のものが用いられる。

投与量は、投与対象、投与方法、症状などに応じ適宜決
定されるが、一般には３０〜６００万単位、特に５０〜
３００万単位、１〜７回／週の範囲で投与される。

く実験例〉 （Ａ＞ヒト細胞系のｈ−Ｉ　ＦＮ−βに対する感受性 ヒト細胞系（ｈｕｍａｎ　ｂｌａｓｔｏｉｄ　ｃｅｌｌ
　１ｉｎｅｓ）、ＣＣＲＦ−ＯＥＭおよびＴＡＬＬ−１
を培養し、生存曲線およびｈ−ＩＦＮ−βに対する感受
性を検討した。ＣＣＲＦ−ＣＥＭおよびＴＡＬＬ−１を
２Ｘ１０５細胞／ｍｌで１０％ＦＣ３添加ＲＰＭＩ−１
６４０を用い、３７℃−ＣＯ２ガスインキ１ベーターで
培養し、比活性が２Ｘ１０８υ／ＩＩ！９蛋白のｈ−Ｉ
　ＦＮ−β［“フエロン″（東し株式会社製）］を０１
１０．１００，１０００１０／ｎｌになるよう加え培養
した。生存率を第１表および第２表に示す。

第１表 ＣＣＲＦ−ＯＥＭ １〃３．１　　　９２．５ ３／／　　　１２．７　　　９７．４ ５〃２０．８　　　９５．４ ｈ−Ｉ　ＦＮ−β １０　ＩＩ／ｍｌ　　　Ｏ日月　　　　　２．０　　　
　　　　１００．０１／／　　　３．２　　　９５゜０ ３１／　　　１１，４　　　９４．０ ５／　　　１８．０　　　９５．２ １００ＩＵ／ｍｌ　　　Ｏ日月２．０　　　　　　１０
０．０１１！　　　３．２　　　９２．１ ３＃　　　１０．３　　　９６．４ ５１／　　　１６．０　　　９４．７ １０００ＩＵ／ｍｌ　　Ｏ日月　　　　　２．０　　　
　　　　１００．０１／／　　　２．９　　　９５．４ ３”　　　９．２　　　９４．３ ５〃１２．６　　　８７．５ ５０％抑制時の生存率：　５３．１％ 第２表 ３＃　　１２．９　　９Ｂ、３ ５　／ｌ　　２０．１　　９１．８ ｈ−Ｉ　ＦＮ−β １０１Ｕ／ｍｌ　　　　Ｏ日日　　　　５．０　　　　
　１００．０１／／　　　６．４　　９７．５ ５／　　１Ｂ、０　　９０．９ ３　ｕ　　　４．２　　６８．２ ５／／　　　　　　５．４　　　　　　　４９．１１０
００Ｉυ／ｍｌ　　Ｏ日日　　　　５．０　　　　　　
１００．０１／／　　　３．４　　６Ｂ、３ ３　／／　　　１．８　　３７．１ ５〃２．３　　２２．３ （ＢｌＡｒｓｓ原囚ウィルス感染細胞に対するｈ−ＩＦ
Ｎ−βの効果 ＡＩＤＳ原因ウィルスをヒト細胞系に感染させ、間接蛍
光法で感染細胞に対するｈ−Ｉ　ＦＮ−βの細胞増殖抑
制効果を調べた。結果を第３表および第４表に示す。こ
の結果からＴＡＬＬ−１１［Ｂ胞に対する５０％阻害濃
度は１２ＩＵ／ｍｌ　、ＣＣＲＦ　−ＣＥＭについては
４６ＩＵ／ｍｌであり、ｈ−ＩＦＮ−βの通常投与時の
血中濃度でも、ＡＩＤＳウィルス感染細胞の増殖を抑制
できることが示唆された。

また、ＡＩＤＳ原因ウィルスを、０．６ＴＣＩＤ５０／
ｃｅｌｌでＣＣＲＦ−ＣＥＭ、’１．１ＴＣＩＤ５０／
ｃｅｌｌでＴＡＬＬ−１に感染させ間接蛍光法を行ない
、ウィルス特異抗原陽性細胞数を調べ第５表に示す結果
を得た。

以下余白 第３表 ＣＣＲＦ−ＯＥＭ Ｘ１０５細胞／ｍｌ　　生存率（％） 未処理　　Ｏ日日　　　２．０　　　　１００．０２　
／ｌ　　７．１　　１００．０ ４１／　　１８．２　　９０．５ ５　〃２Ｂ、２　　７９．２ ６　＃　　２０．８　　７１．０ ｈ−ＩＦＮ−β １００１υ／ｍｌ　　　Ｏ日日　　　２．０　　　　１
００．０２１１　６．９　　９Ｂ、８ ４　〃１４．６　　９０．９ ５　ＩＩ　　２０．４　　８３．６ ６　〃１９．６　　７１２．３ ウィルス特異抗原陽性細胞 ５０％抑制濃度：　４６ＩＵ／ｍｌ 第４表 ＴＡＬＬ−１ ｘ１０５細胞／ｍｌ　　生存率（％） 未処理　Ｏ日日　　５．０　　　１００．０２　　ｒ／
　　　１１．２　　　９８．２４　　／／　　　１７．
８　　　９１．２５　　ＩＩ　　２１．２　　　８８．
０６　　〃１８．６　　　７６．９ ｈ−ＩＦＮ−β ５　ＩＵ／ｍｌ　　　Ｏ日日　　　５．０２　　ＩＩ　
　　８．３　　　９９．０４　　／ｌ　　　１５．２　
　　９３．５５　　〃１８，４　　　８９．８ ６　１１　　１８、Ｑ　　　　７７．９ウイルス特異抗
原陽性細胞 ５０％抑制濃度：　１２ＩＵ／ｍ＋ 第５表 ＣＣＲＦ−ＯＥＭ 陽性細胞％ ｈ−Ｉ　ＦＮ−β　　　　　未処理　　　　９．７１０
０ＩＵ／ｍｌ　　　　　　　２日月　　　　６．０４　
　ＩＩ　　　　　１０．２ ５１１　　　　１３．０ ６　　／／　　　　　１０．９ ＴＡＬＬ−１ 陽性細胞％ ｈ−ＩＦＮ−β　　　　　未処理　　　　１．１５ＩＵ
／ｍ１２日目　　　　０．６ ４　　＃　　　　　３．７ ５〃９．９ ６　　／ｌ　　　　　７．９ ＴＣＩＤ５０　　　　９０％阻害濃度二υ工財」−この
結果から、ＴＡＬＬ−１細胞を用いたＡＩＤＳ原因ウィ
ルスの感染価の９０％阻害濃度は１１　ＩＵ／ｍｌであ
ることがわかった。これよりＡＩＤＳ原因ウィルスの感
染に対しても１ｌ−ＩＦＮ−βが効果のあることが示唆
された。

更に、ヒト末梢単核球にＡＩＤＳ原因ウィルスを感染さ
せた場合のｈ−Ｉ　ＦＮ−βの抗ウイルス効果を検討し
た。すなわち、ヒト末梢血よりＦｉｃ。

１ｌ−ｉｓｏｐａｑｕｅ（ｄ＝１．０７７＞の比重遠心
法で単核球を採取し、Ｐ　ＨＡ　（Ｐｈｙｔｏｈｅｍａ
ｏｌｕｔｉｎｉｎ）で刺激し、幼若化細胞にＡＩＤＳ原
因ウィルスを感染させ、ｈ−ＩＦＮ−βを各濃度加えウ
ィルス特異抗原陽性細胞を調べた。ｈ−Ｉ　ＦＮ−βの
ウィルス特異抗原陽性細胞数５０％抑制濃度は１．８１
０／ｍｌ　、感染価（ＴＣＩＤ５ｏ）の９０％阻害濃度
は５１Ｕ以下／ｍｌであり、外部からＡＩＤＳ原因ウィ
ルスが生体内に侵入した場合、低濃度のｈ−ＩＦＮ−β
が存在するとＡＩＤＳウィルスの増殖を抑制することが
示唆された。

〈発明の効果〉 本発明の抗ウィルス剤は、ＡＩＤＳ原因ウィルス感染細
胞の増殖を抑制するので、ＡＩＤＳ原因ウィルスに感染
後、ＡＩＤＳへ至るまでの段階における治療剤として期
待できる。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）ヒトインターフェロンを有効成分とするエイズ原
   因ウィルスに対する抗ウィルス剤。