JP2014510126A5

JP2014510126A5 - Ｉｆｎアルファ関連疾病の処置方法

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Publication number: JP2014510126A5
Application number: JP2014503144A
Authority: JP
Filing date: 2012-04-04
Publication date: 2016-09-08
Anticipated expiration: 2032-04-04

Description

本発明は、免疫原性ワクチン、およびＩＦＮα関連疾病、例えば全身性紅斑性狼瘡を処置するためのその使用に関する。

近年、ＩＦＮＩ型の誘導の徴候、いわゆるインターフェロン・シグネチャーが、異なる自己免疫疾患に罹患している患者で報告されている（Baccala et al., Immunol Rev 2005; 204: 9-26）ため、ＩＦＮＩ型と自己免疫障害との間の関係に対する関心が、今日、増大しつつある。実際、ＩＦＮＩ型は、その免疫調節作用のため、種々の自己免疫疾病のいくつかの病原性経路に関与すると思われる。

シェーグレン症候群（ＳＳ）（乾燥症候群としても知られている）は、外分泌腺、特に唾液腺および涙腺に影響を及ぼす慢性全身性自己免疫疾病である。ＩＦＮα活性上昇も、この疾患に罹患している患者の血清中で観察されている。最後に、他の疾病、例えば糖尿病、関節リウマチ、強皮症、血管炎および自己免疫性甲状腺炎も、高レベルのＩＦＮαに関連することが示されている。

したがって、本発明は、免疫学的Ｂ細胞耐容性を遮断し、ＩＦＮαに対する高力価のポリクローナル中和抗体を生成し得る能動的免疫化を可能にする治療有効量の免疫原性生成物を投与することにより、in vivoでＩＦＮａ活性を抑制するための方法、ならびにＩＦＮα関連疾病を処置するためのその使用を提供する。

本発明の一目的は、それを必要とする対象におけるＩＦＮα関連疾病を予防または処置するのに用いるための担体タンパク質分子と結合されるＩＦＮαを含む免疫原性生成物であって、対象に投与される治療有効量の免疫原性生成物が投与当たり３０ｍｃｇより多い、好ましくは少なくとも６０ｍｃｇの免疫原性生成物である。

本発明の別の実施形態では、治療有効量の免疫原性生成物の投与は、ＩＦＮαの過剰産生に関連する疾患の再燃（フレア）を予防する。

本発明の別の実施形態では、ＩＦＮα関連疾病は、全身性紅斑性狼瘡、関節リウマチ、強皮症、シェーグレン症候群、血管炎、ＨＩＶ、Ｉ型糖尿病、自己免疫性甲状腺炎および筋炎を含む。

本発明の別の実施形態では、免疫原性生成物は強力に不活性化され、これは、生成物が試験Ｂの疾病における抗ウイルス活性の５％未満を示す、ということを意味する。

本発明の別の実施形態では、免疫原性生成物は、試験Ｃの疾病におけるＩＦＮαの抗ウイルス活性を中和可能である。

本明細書中で用いる場合、「患者」という用語は、ＩＦＮα関連疾病に冒されている対象を指す。

本明細書中で用いる場合、「有効量」という用語は、有益なまたは所望の臨床的結果（例えば、臨床疾病の改善）を生じるのに十分な量を指す。

本発明の一目的は、それを必要とする対象におけるＩＦＮα関連疾病を処置するための方法であって、担体タンパク質分子と結合されるＩＦＮαを含む治療有効量の免疫原性生成物を対象に投与することを包含する方法であるが、この場合、上記治療有効量は、投与当たり３０ｍｃｇより多い。

本発明の一実施形態では、処置される対象は、ＩＦＮα関連疾病を患っている。

本発明は、ＩＦＮαの過剰産生と結び付けられる疾患を処置するための方法であって、治療有効量の免疫原性生成物を投与し、免疫原性生成物の投与が疾患の再燃を予防することを包含する方法にも関する。

このアッセイは、メイディン・ダービーウシ腎臓（ＭＤＢＫ）細胞に及ぼす水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）の細胞変性作用（ＣＰＥ）に及ぼすＩＦＮαの防御効果を基礎にしている。このアッセイは、Ｈｅｐ−２ＣまたはＡ５４９ヒト細胞およびＥＭＣＶウイルスを用いても実行され得る。試験Ｂは、以下の方法により実行される。
免疫原性生成物および免疫原性生成物を調製するために用いられる組換えＩＦＮα亜型（陽性対照）を、基本培地（２ｍＭグルタミン、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、１ｍＭＨｅｐｅｓを補足したＲＰＭＩ）中に、それぞれ少なくとも５００ｎｇ／ｍｌおよび少なくとも１０００Ｕ／ｍｌで希釈する。５０μｌの免疫原性生成物および陽性対照を９６ウェルプレート中でプレート化して、基本培地中で２倍希釈のシリーズに希釈する。５０μｌの細胞培地（４％ＦＢＳ、２ｍＭグルタミン、１ｍＭピルビン酸ナトリウムおよび１ｍＭＨｅｐｅｓを補足したＲＰＭＩ）中の各ウェル中に、２×１０^４ＭＤＢＫ細胞を付加し、３７℃、５％ＣＯ_２で一晩、プレートをインキュベートする。次に、ウイルスを基本培地中で少なくとも１０ＴＣＩＤ_５０（組織培養感染用量５０：感染細胞の５０％を殺害するために１０回希釈）に希釈する。プレートを空にして、１００μｌの希釈ウイルスを付加する。次いで、３７℃、５％ＣＯ_２で一晩、プレートをインキュベートする。

濾過ＫＬＨを、ＩＦＮα ２ｂ溶液（７０ｍＭリン酸水素二ナトリウム、ｐＨ７．８中のＩＦＮα ２ｂ）に、ＵＶ濃度を基礎にして、２０：１のＩＦＮα：ＫＬＨ比（ＫＬＨの１サブユニットに対して２０単量体のＩＦＮαのモル比に対応する）で付加する。グルタルアルデヒド（反応培地中の最終濃度２２．５ｍＭを達成するために付加）およびホウ酸塩、ｐＨ９（反応培地中２８．５ｍＭの最終濃度を達成するために付加）を用いて共役を実行して、ｐＨを８．５とする。次に、ｐＨ８．５でのこの溶液を、２３±２℃で４５分間混合する。
ｂ）グリシンを用いたクエンチング

このアッセイは、メイディン・ダービーウシ腎臓（ＭＤＢＫ）細胞に及ぼす水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）の細胞変性作用（ＣＰＥ）に及ぼすＩＦＮαの防御効果を基礎にしていた。免疫原性生成物および免疫原性生成物を調製するために用いられる組換えＩＦＮα ２ｂ（陽性対照）を、基本培地（２ｍＭグルタミン、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、１ｍＭＨｅｐｅｓを補足したＲＰＭＩ）中に、それぞれ少なくとも５００ｎｇ／ｍｌおよび少なくとも１０００Ｕ／ｍｌで希釈した。５０μｌの免疫原性生成物および陽性対照を９６ウェルプレート中でプレート化して、基本培地中で２倍希釈のシリーズに希釈した。５０μｌの細胞培地（４％ＦＢＳ、２ｍＭグルタミン、１ｍＭピルビン酸ナトリウムおよび１ｍＭＨｅｐｅｓを補足したＲＰＭＩ）中の各ウェル中に、２×１０^４ＭＤＢＫ細胞を付加し、３７℃、５％ＣＯ_２で一晩、プレートをインキュベートした。次に、ウイルスを基本培地中で少なくとも１０ＴＣＩＤ_５０（組織培養感染用量５０：感染細胞の５０％を殺害するために１０回希釈）に希釈した。プレートを空にして、１００μｌの希釈ウイルスを付加した。次いで、３７℃、５％ＣＯ_２で一晩、プレートをインキュベートした。培養の終了時に、ＭＴＳ／ＰＭＳ（１００μｌのＭＴＳ／５μｌのＰＭＳ；Promega Ｇ５４３０）の溶液２０μｌ／ウェルをウェルに付加し、プレートをさらに４時間、３７℃、５％ＣＯ_２でインキュベートした。次に、プレートを、分光光度計で４９０ｎｍで読み取った。

ウイルスを、ウイルス培地（２ｍＭのグルタミン、１ｍＭのピルビン酸ナトリウムおよび１ｍＭのｈｅｐｅｓを補足したＲＰＭＩ）中で少なくとも１０ＴＣＩＤ_５０（感染細胞の５０％を殺害する希釈の１０倍）に希釈する。プレートを空にして、１００μｌのウイルスを各ウェルに付加した後、３７℃、５％ＣＯ_２で２４時間、インキュベートした。

２つの狼瘡再燃は、関連ＳＡＥと報告されている。最初のものは、プラセボ群であった。他方は、注射の２日後に彼女のコルチコステロイド治療を自発的に中止していた患者において、ＩＦＮ−Ｋ２４０ｍｃｇの最初の注射後に起きた。この突然のコルチコステロイド処置の中止が、再燃の発生に関与した可能性がある。定期的暫定安全分析は、独立安全委員会により実施された。実験室パラメーターにおける臨床的に有意の変化は、検出されていない（血液学、生化学、尿）。
ワクチンの免疫原性

結果は、免疫原性生成物で処置した全群において、２８日目から抗ＩＦＮα抗体力価が検出された、ということを示している。
ワクチンの中和活性

これらの結果は、ＩＦＮαのin vivo中和を有するためには３０ｍｃｇ超の免疫原性生成物での処置が必要である、ということを示した。
実施例８：トランスクリプトーム解析