JPS63167798A - ポリペプチド及びその製造方法 - Google Patents
ポリペプチド及びその製造方法Info
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Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/61—Growth hormone [GH], i.e. somatotropin
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
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- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野］
本発明はソマトメジン様活性のあるポリペプチド及びこ
のポリペプチドをコードする遺伝子を含むプラスミドで
形質転換された微生物を用いるその製造方法に関するも
のである。
のポリペプチドをコードする遺伝子を含むプラスミドで
形質転換された微生物を用いるその製造方法に関するも
のである。
［従来の技術］
ヒトを含む哺乳動物では、骨組織の成長促進に関与する
物質としてソマトメジンＡ、ＩＧＦ−Ｉ及びＩ ＧＦ−
ＩＩなどが知られている。これらの物質（以下ソマトメ
ジン様活性物質と云う）は肝組織から放出され、直接に
骨細胞に作用してその増殖を促進する。これらの物質の
産生１分泌は成長ホルモンにより制御されていると考え
られているが、成長ホルモン自体にはソマトメジン様活
性は非常に小さいと云われている。
物質としてソマトメジンＡ、ＩＧＦ−Ｉ及びＩ ＧＦ−
ＩＩなどが知られている。これらの物質（以下ソマトメ
ジン様活性物質と云う）は肝組織から放出され、直接に
骨細胞に作用してその増殖を促進する。これらの物質の
産生１分泌は成長ホルモンにより制御されていると考え
られているが、成長ホルモン自体にはソマトメジン様活
性は非常に小さいと云われている。
ソマトメジン様物質は骨組織の成長促進のための医薬と
して有用であるが、その産生１分泌量は極めて微量で、
抽出も簡単でないので、これらを生体から大量に得るこ
とは困難であり、特にヒトの場合には全く不可能である
。
して有用であるが、その産生１分泌量は極めて微量で、
抽出も簡単でないので、これらを生体から大量に得るこ
とは困難であり、特にヒトの場合には全く不可能である
。
ソマトメジン様物質はポリペプチドであるので、遺伝子
組換の手法により微生物に生産させることも考えられる
が、これらの物質は分子２約７．０００の比較的低分子
量の物質であり、微生物菌体内で発現されたとしてもそ
の量は僅かであり、また菌体内や抽出、精製の過程での
消化１分解等のためにこれらを効率よく生産させること
は非常に困難である。
組換の手法により微生物に生産させることも考えられる
が、これらの物質は分子２約７．０００の比較的低分子
量の物質であり、微生物菌体内で発現されたとしてもそ
の量は僅かであり、また菌体内や抽出、精製の過程での
消化１分解等のためにこれらを効率よく生産させること
は非常に困難である。
Ｃ発明が解決しようとする問題点］
従って遺伝子組換の手法で大量に生産可能なソマトメジ
ン様物質又はソマトメジン様活性を有する物質を得るこ
とは重要な課題である。
ン様物質又はソマトメジン様活性を有する物質を得るこ
とは重要な課題である。
［問題点を解決するための手段］
本発明者らは、ヒト成長ホルモン（以下ｈＧＨと云う）
のＮ−末端よりＣ−末端側へ１３８番目までのアミノ酸
連鎖を持つポリペプチドにこのソマトメジン様活性のあ
ること、このポリペプチドは、ｈＧＨをコードし、かつ
遺伝子組換の手法でｈＧＨを発現することのできる合成
遺伝子として知られているＤＮＡセグメントの相当する
部分を発現可能に挿入したプラスミドで形質転換した大
腸菌を用いて発現可能であること、及びこの様なプラス
ミドは、その３′末端に制限酵素５ａＡＩの部位を有す
る前記合成遺伝子を、ｈＧＨの発現可能に含むプラスミ
ドから制限酵素ＢｇＩＵ及び５ａｉｌによる消化とリン
カ−を用いる再接着によって調製可能であることを発見
して本発明を完成した。
のＮ−末端よりＣ−末端側へ１３８番目までのアミノ酸
連鎖を持つポリペプチドにこのソマトメジン様活性のあ
ること、このポリペプチドは、ｈＧＨをコードし、かつ
遺伝子組換の手法でｈＧＨを発現することのできる合成
遺伝子として知られているＤＮＡセグメントの相当する
部分を発現可能に挿入したプラスミドで形質転換した大
腸菌を用いて発現可能であること、及びこの様なプラス
ミドは、その３′末端に制限酵素５ａＡＩの部位を有す
る前記合成遺伝子を、ｈＧＨの発現可能に含むプラスミ
ドから制限酵素ＢｇＩＵ及び５ａｉｌによる消化とリン
カ−を用いる再接着によって調製可能であることを発見
して本発明を完成した。
即ち本発明はｈＧＨのＮ−末端よりそのＣ−末端側へ１
３８呑目までのアミノ酸連鎖を持つポリペプチド（但し
そのＮ−末端にメチオニンが付加されていてもよい）を
提供するものである。
３８呑目までのアミノ酸連鎖を持つポリペプチド（但し
そのＮ−末端にメチオニンが付加されていてもよい）を
提供するものである。
この様なポリペプチドは、式
％式％
Ｓｅｒ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｌｅｕ
Ｌｅｕ Ａｒｇ ｌｌｃ Ｓｃｒ ＬｅｕＬｅ
ｕ Ｌｃｕ Ｉｌｅ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ｔｒ
ｐ Ｌｃｕ Ｇｌｕ Ｐｒｏ Ｖａ１Ｇｉｎ
Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ｓｅｒ Ｖａｌ
Ｐｈｅ Ａｌａ Ａｓｎ ＳｅｒＬｅｕ Ｖ
ａｌ Ｔｙｒ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｓｃｒ Ａ
ｓｐ Ｓｅｒ Ａｓｎ ＶａｌＴｙｒ Ａｓｐ
Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｐ Ｌｅｕ
Ｇｌｕ Ｇｌｕ ＧｌｙＧｌｙ Ｓｅｒ
Ｐｒｏ Ａｒｇ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｇｉｎ
ｌｉｅ（以下式−■と云う）で表わされるアミノ酸連鎖
からなるものである（但し、Ｎ末端にメチオニン残基が
付加されてよく、かつ本質的にソマトメジン様活性を損
わない程度で多少の変更はあってよい）。
Ｌｅｕ Ａｒｇ ｌｌｃ Ｓｃｒ ＬｅｕＬｅ
ｕ Ｌｃｕ Ｉｌｅ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ｔｒ
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Ｐｈｅ Ａｌａ Ａｓｎ ＳｅｒＬｅｕ Ｖ
ａｌ Ｔｙｒ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｓｃｒ Ａ
ｓｐ Ｓｅｒ Ａｓｎ ＶａｌＴｙｒ Ａｓｐ
Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｐ Ｌｅｕ
Ｇｌｕ Ｇｌｕ ＧｌｙＧｌｙ Ｓｅｒ
Ｐｒｏ Ａｒｇ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｇｉｎ
ｌｉｅ（以下式−■と云う）で表わされるアミノ酸連鎖
からなるものである（但し、Ｎ末端にメチオニン残基が
付加されてよく、かつ本質的にソマトメジン様活性を損
わない程度で多少の変更はあってよい）。
この様なポリペプチド（以下ｈＧＨ−ＡＢポリベブチド
と云う）をコードするＤＮＡ連鎖を含む合成遺伝子はｈ
ＧＨのＡＢ部分をコードする遺伝子として知られている
（特開昭６０ − ２３４５８４ 号公報）。この遺
伝子はｈＣ；Ｈ−ＡＢボリペブチドをコードする次式の
ＤＮＡ連鎖（以下ｈＧＨ−ＡＢ遺伝子と云う）を含んで
いる。
と云う）をコードするＤＮＡ連鎖を含む合成遺伝子はｈ
ＧＨのＡＢ部分をコードする遺伝子として知られている
（特開昭６０ − ２３４５８４ 号公報）。この遺
伝子はｈＣ；Ｈ−ＡＢボリペブチドをコードする次式の
ＤＮＡ連鎖（以下ｈＧＨ−ＡＢ遺伝子と云う）を含んで
いる。
５゜ＴＴＣＣＣＡＡＣＴＡＴＴＣＣＡＣＴＧＡＧＴＣＧ
ＣＣＴＧＴＴＣＡＡＧＧＧＴＴＧＡＴＡＡＧＧＴＧＡＣ
ＴＣＡＧＣＧＧＡＣＡＡＧＣＴＡＴＴＧＣＧＣＴＡＣＧ
ＡＣＧＣＡＣＧＣＧＴＡＧＣＡＧＡＣＴＴＣＧＡＡＧＡ
ＡＧＣＡＴＡＣＡＴＣＣＣＧＡＡＡＧＡＡＣＡＧＡＡＧ
ＣＴＴＣＴＴＣＧＴＡＴＧＴＡＧＧＧＣＴＴＴＣＴＴＧ
ＴＣＡＡＡＴ’ＡＣＡＣＣＴＴＣＣＴＴＣＡＧＡＡＣＣ
ＣＡＣＡＧＡＣＣＴＴＴＡＴＧＴＣＧＡＡＧＧＡＡＧＴ
ＣＴＴＧＧＧＴＧＴＣＴＧＧＴＣＧＴＴＧＴＧＴＴＴＣ
ＴＣＴＧＡＡＡＧＴＡＴＣＣＣＧＡＣＣＡＧＣＡＡＣＡ
ＣＡＡＡＧＡＧＡＣＴＴＴＣＡＴＡＧＧＧＣＴＧＧＣＣ
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ＡＡＡＧＧＡＡＧＡＴＴＧＧＣＧＣＴＴＣＴＣＴＧＧＧ
ＴＣＧＴＣＴＴＴＴＣＧＡＡＣＣＴＴＧＡＡＣＴＧＣＴ
ＴＣＧＴＡＴＣＴＣＧＣＴＧＡＧＣＴＴＧＧＡＡＣＴＴ
ＧＡＣＧＡＡＧＣＡＴＡＧＡＧＣＧＡＣＣＴＴＣＴＣＡ
ＴＴＣＡＧＴＣＧＴＧＧＣＴＧＧＡＧＣＣＡＧＴＡＧＡ
ＡＧＡＧＴＡＡＧＴＣＡＧＣＡＣＣＧＡＣＣＴＣＧＧＴ
ＣＡＴＣＡＧＴＴＣＣＴＧＣＧＴＴＣＧＧＴＴＴＴＣＧ
ＣＡＡＡＣＴＣＡＧＴＣＡＡＧＧＡＣＧＣＡＡＧＣＣＡ
ＡＡＡＧＣＧＴＴＴＧＡＧＴＣＴＧＧＴＡＴＡＣＧＧＴ
ＧＣＧＴＣＴＧＡＣＡＧＴＡＡＣＧＴＴＧＡＣＣＡＴＡ
ＴＧＣＣＡＣＧＣＡＧＡＣＴＧＴＣＡＴＴＧＣＡＡＴＡ
ＣＧＡＣＣＴＧＣＴＧＡＡＡＧＡＣＣＴＴＧＡＡＧＡＡ
ＧＧＧＡＴＧＣＴＧＧＡＣＧＡＣＴＴＴＣＴＧＧＡＡＣ
ＴＴＣＴＴＣＣＣＴＡＧＧＴＣＴＧＧＧＡＣＴＡＣＣＣ
ＡＧＣＧＧＡＣＣＴＴＣＴＡＧＧＴＴＣＡＣＣＡＣＧＣ
ＡＣＴＧＧＴＣＡＧＡＴＣＣＣＡＡＧＴＧＧＴＧＣＧＴ
ＧＡＣＣＡＧＴＣＴＡＧこのｈＧＨ−ＡＢ遺伝子は大腸
菌中に安定に保持され、かつ複製可能なプラスミド中に
、大腸菌中で発現可能な様に挿入されることができる。
ＣＣＴＧＴＴＣＡＡＧＧＧＴＴＧＡＴＡＡＧＧＴＧＡＣ
ＴＣＡＧＣＧＧＡＣＡＡＧＣＴＡＴＴＧＣＧＣＴＡＣＧ
ＡＣＧＣＡＣＧＣＧＴＡＧＣＡＧＡＣＴＴＣＧＡＡＧＡ
ＡＧＣＡＴＡＣＡＴＣＣＣＧＡＡＡＧＡＡＣＡＧＡＡＧ
ＣＴＴＣＴＴＣＧＴＡＴＧＴＡＧＧＧＣＴＴＴＣＴＴＧ
ＴＣＡＡＡＴ’ＡＣＡＣＣＴＴＣＣＴＴＣＡＧＡＡＣＣ
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ＴＴＣＴＡＡＣＣＧＣＧＡＡＧＡＧＡＣＣＣＡＧＣＡＧ
ＡＡＡＧＧＡＡＧＡＴＴＧＧＣＧＣＴＴＣＴＣＴＧＧＧ
ＴＣＧＴＣＴＴＴＴＣＧＡＡＣＣＴＴＧＡＡＣＴＧＣＴ
ＴＣＧＴＡＴＣＴＣＧＣＴＧＡＧＣＴＴＧＧＡＡＣＴＴ
ＧＡＣＧＡＡＧＣＡＴＡＧＡＧＣＧＡＣＣＴＴＣＴＣＡ
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ＡＧＡＧＴＡＡＧＴＣＡＧＣＡＣＣＧＡＣＣＴＣＧＧＴ
ＣＡＴＣＡＧＴＴＣＣＴＧＣＧＴＴＣＧＧＴＴＴＴＣＧ
ＣＡＡＡＣＴＣＡＧＴＣＡＡＧＧＡＣＧＣＡＡＧＣＣＡ
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ＧＣＧＴＣＴＧＡＣＡＧＴＡＡＣＧＴＴＧＡＣＣＡＴＡ
ＴＧＣＣＡＣＧＣＡＧＡＣＴＧＴＣＡＴＴＧＣＡＡＴＡ
ＣＧＡＣＣＴＧＣＴＧＡＡＡＧＡＣＣＴＴＧＡＡＧＡＡ
ＧＧＧＡＴＧＣＴＧＧＡＣＧＡＣＴＴＴＣＴＧＧＡＡＣ
ＴＴＣＴＴＣＣＣＴＡＧＧＴＣＴＧＧＧＡＣＴＡＣＣＣ
ＡＧＣＧＧＡＣＣＴＴＣＴＡＧＧＴＴＣＡＣＣＡＣＧＣ
ＡＣＴＧＧＴＣＡＧＡＴＣＣＣＡＡＧＴＧＧＴＧＣＧＴ
ＧＡＣＣＡＧＴＣＴＡＧこのｈＧＨ−ＡＢ遺伝子は大腸
菌中に安定に保持され、かつ複製可能なプラスミド中に
、大腸菌中で発現可能な様に挿入されることができる。
この様にしてｈＧＨ−ＡＢ遺伝子の挿入されたプラスミ
ドｐＡＢ−１の物理地図を第１図に示す。
ドｐＡＢ−１の物理地図を第１図に示す。
このブラスミドの第１図上、制限酵素Ｃｆｌ ａ Ｉ部
位から下流のＳａｉ１部位までのＤＮＡ配列を第２図に
示す。
位から下流のＳａｉ１部位までのＤＮＡ配列を第２図に
示す。
このプラスミドは、例えば特開昭６０〜２３４５８４号
公報中で開示されているｐＧＨ−Ｌシリーズのプラスミ
ドから調整することができる。第３図にこのｐＧＨ−Ｌ
シリーズのプラスミドの物理地図、第４図にｈＧＨ遺伝
子部分の制限酵素部位をより詳細に示す。
公報中で開示されているｐＧＨ−Ｌシリーズのプラスミ
ドから調整することができる。第３図にこのｐＧＨ−Ｌ
シリーズのプラスミドの物理地図、第４図にｈＧＨ遺伝
子部分の制限酵素部位をより詳細に示す。
ｈＧＨ遺伝子のＣｌａｌ部位から下流のＢｇＡＩＩ部位
までのＤＮＡ配列はｐＡＢ−１のそれと全く同一である
。ＢｇＡＩＩ部位から下流の５ａｉＩ部位まではｈＧＨ
のＣ部分と呼ばれている部分をコードし、そのＣ末端の
コードに停止コドンが続いている。そのＤＮＡ配列は下
式の通りである。
までのＤＮＡ配列はｐＡＢ−１のそれと全く同一である
。ＢｇＡＩＩ部位から下流の５ａｉＩ部位まではｈＧＨ
のＣ部分と呼ばれている部分をコードし、そのＣ末端の
コードに停止コドンが続いている。そのＤＮＡ配列は下
式の通りである。
ＡＡＣＴＡＣＧＧＣＣＴＧＣＴＧＴΔＣＧＣＡＴＴＣＣ
ＧＴＡＡＡＴＴＧＡＴＧＣＣＧＧＡＣＧＡＣＡＴＧＣＧ
ＴＡＡＧＧＣＡＴＴＴＧＡＴＡＴＧＧＡＴＡＡＧＧＴＣ
ＧＡＡＡＣＴＴＴＣＣＴＧＣＧＴＣＴＡＴＡＣＣＴＡＴ
ＴＣＣＡＧＣＴＴＴＧＡＡＡＧＧＡＣＧＣＡＡＴＣＧＴ
ＴＣＡＧＴＣ；ＴＣＧＴＴＣＴＧＴＴＧＡＡＧＧＧＴＣ
ＧＴＡＧＣＡＡＧＴＣＡＣＡＧＣＡＡＧＡＣＡＡＣＴＴ
ＣＣＣＡＧＣＴＧＴＧＧＣＴＴＣＴＡＡＴＡＧ ”’へ
ＣＡＣＣＧＡＡＧＡＴＴＡＴＣＡＧＣＴ第５図にｐＧＨ
−Ｌシリーズのプラスミド、ｐＧＨ−Ｌ９からのｐＡＢ
−１の調製を示す。この図に示す様にｐＡＢ−１はｐＧ
Ｈ−Ｌ９を制限酵素Ｂｇｉｎ及び５ａｊ２１で二重消化
し、必要に応じてアガロース（アクリルアミド）ゲル電
気泳動等で精製してｈＧＨ−ＡＢ遺伝子を含む大きなり
ＮＡ断片とし、これを式 ％式％ で表わされるＤＮＡ連鎖からなるリンカ−と連結環化し
て調製することができる。
ＧＴＡＡＡＴＴＧＡＴＧＣＣＧＧＡＣＧＡＣＡＴＧＣＧ
ＴＡＡＧＧＣＡＴＴＴＧＡＴＡＴＧＧＡＴＡＡＧＧＴＣ
ＧＡＡＡＣＴＴＴＣＣＴＧＣＧＴＣＴＡＴＡＣＣＴＡＴ
ＴＣＣＡＧＣＴＴＴＧＡＡＡＧＧＡＣＧＣＡＡＴＣＧＴ
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ＧＴＡＧＣＡＡＧＴＣＡＣＡＧＣＡＡＧＡＣＡＡＣＴＴ
ＣＣＣＡＧＣＴＧＴＧＧＣＴＴＣＴＡＡＴＡＧ ”’へ
ＣＡＣＣＧＡＡＧＡＴＴＡＴＣＡＧＣＴ第５図にｐＧＨ
−Ｌシリーズのプラスミド、ｐＧＨ−Ｌ９からのｐＡＢ
−１の調製を示す。この図に示す様にｐＡＢ−１はｐＧ
Ｈ−Ｌ９を制限酵素Ｂｇｉｎ及び５ａｊ２１で二重消化
し、必要に応じてアガロース（アクリルアミド）ゲル電
気泳動等で精製してｈＧＨ−ＡＢ遺伝子を含む大きなり
ＮＡ断片とし、これを式 ％式％ で表わされるＤＮＡ連鎖からなるリンカ−と連結環化し
て調製することができる。
なおｐＧＨ−Ｌ９を細胞内に保存する大腸菌。
Ｅ、 コリ（Ｅ、ｃｏ １１）ｐＧＨ−Ｌ９は微工研
菌寄第７６０６号として通商産業省工業技術院微生物工
業技術研究所に寄託されている。ｐＧＨ−Ｌ９は特開昭
６０−２３４５８４号公報に開示されている様に、この
寄託菌株を培養し、その菌体から慣用の方法によって容
易に抽出調製することができる。
菌寄第７６０６号として通商産業省工業技術院微生物工
業技術研究所に寄託されている。ｐＧＨ−Ｌ９は特開昭
６０−２３４５８４号公報に開示されている様に、この
寄託菌株を培養し、その菌体から慣用の方法によって容
易に抽出調製することができる。
ｐＡＢ−１プラスミドはｐＧＨ−Ｌ９と同様に慣用の方
法によって大腸菌に容易に形質転換することができる。
法によって大腸菌に容易に形質転換することができる。
ｐＡＢ−１はｐＧＨ−Ｌ９由来のトリプトファン プロ
モーターやオペレーター系を持ち、これが強力にｈＧＨ
−ＡＢ遺伝子の発現を制御するので、得られた形質転換
体は培地中で培養増殖させ、インドールアクリル酸で誘
導することによってｈＧＨ−ＡＢポリペプチドを著量蓄
積する。その培養条件、誘導条件等はＥ、コリｐＧＨ−
Ｌ９と同様である。
モーターやオペレーター系を持ち、これが強力にｈＧＨ
−ＡＢ遺伝子の発現を制御するので、得られた形質転換
体は培地中で培養増殖させ、インドールアクリル酸で誘
導することによってｈＧＨ−ＡＢポリペプチドを著量蓄
積する。その培養条件、誘導条件等はＥ、コリｐＧＨ−
Ｌ９と同様である。
菌体内に蓄積されたｈＧＨ−ＡＢポリペプチドは菌体を
溶菌させたのち、通常の生理活性ポリペプチドの回収及
び活性化法によって分離回収することができる。
溶菌させたのち、通常の生理活性ポリペプチドの回収及
び活性化法によって分離回収することができる。
翻訳開始コドンとｔｒｐ Ｌ Ｓ、Ｄ、配列との間
の塩基数がｐＧＨ−Ｌ９と多少異なるが同様なプラスミ
ドを持つＥ、コリ ｐＧＨ−Ｌ８ （微工研菌寄第７６
０５号）、同−Ｌ１１（同第７６０７号）または同−Ｌ
１３（同第７６０８号）からも同様な発現系を構築する
ことができる。
の塩基数がｐＧＨ−Ｌ９と多少異なるが同様なプラスミ
ドを持つＥ、コリ ｐＧＨ−Ｌ８ （微工研菌寄第７６
０５号）、同−Ｌ１１（同第７６０７号）または同−Ｌ
１３（同第７６０８号）からも同様な発現系を構築する
ことができる。
［作用］
ｈＧＨ−ＡＢポリペプチドはヒトを含む哺乳動物の骨組
織に直接動いてその成長を促進する。
織に直接動いてその成長を促進する。
［実施例］
以下本発明を実施例で更に詳しく説明する。
なお実施例中で略号で示した試薬は以下の通りである。
（票僧緩衡液： ５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−塩酸 ｐｉｆ
７．５３５ ｍ Ｍ Ｍ ｇ ＣＩ ２ ３５ ｍＭ ２−ｍｅｒｃａｐｔｏｅｔｈａｎｏ
ｌＴｒｉｓ−ＮａＣ１：１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−塩酸緩衛
液、０．１４Ｍ ＮａＣ１、ｐＨ８゜ ＴＥ−蔗糖：２５％蔗糖（Ｗ／Ｖ）、 ５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−塩酸緩衛液、 １［＋１Ｍ ＥＤ
ＴＡｐＨｇ。
７．５３５ ｍ Ｍ Ｍ ｇ ＣＩ ２ ３５ ｍＭ ２−ｍｅｒｃａｐｔｏｅｔｈａｎｏ
ｌＴｒｉｓ−ＮａＣ１：１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−塩酸緩衛
液、０．１４Ｍ ＮａＣ１、ｐＨ８゜ ＴＥ−蔗糖：２５％蔗糖（Ｗ／Ｖ）、 ５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−塩酸緩衛液、 １［＋１Ｍ ＥＤ
ＴＡｐＨｇ。
リゾチーム ：１１０ｌｌ１／ｍｌリゾチーム、０．２
５Ｍ Ｔｒｉｓ−塩酸緩衛液、ｐＨ８゜０．５）Ｉ Ｅ
ＤＴＡ： ｐＨ８゜ ＰＮａｓｅ： ０．０４Ｍ酢酸緩衡液（Ｐｈ ５）に１
０ｍｇ／ｍｌの濃度に溶かし、１００℃で５分間加熱処
理する。
５Ｍ Ｔｒｉｓ−塩酸緩衛液、ｐＨ８゜０．５）Ｉ Ｅ
ＤＴＡ： ｐＨ８゜ ＰＮａｓｅ： ０．０４Ｍ酢酸緩衡液（Ｐｈ ５）に１
０ｍｇ／ｍｌの濃度に溶かし、１００℃で５分間加熱処
理する。
Ｌｙｔｉｃ旧ｘｔｕｒｅ：０．１％非イオン系界面活性
剤（Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００）、 ５０ａ＋Ｍ Ｔｒｉｓ−塩酸緩衛液、 ６２．５ｍＭ ＥＤＴＡ ＳｐＨ８゜ ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）６０００ ： １級
の粉末５Ｍ ＮａＣｌ ＣｓＣ１：固体。
剤（Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００）、 ５０ａ＋Ｍ Ｔｒｉｓ−塩酸緩衛液、 ６２．５ｍＭ ＥＤＴＡ ＳｐＨ８゜ ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）６０００ ： １級
の粉末５Ｍ ＮａＣｌ ＣｓＣ１：固体。
ＥＢ溶液：エチジウムブロマイドを水に対して４．６７
ｍｇ／ｍｌになるよう溶解して調製。
ｍｇ／ｍｌになるよう溶解して調製。
ＴＥ： ＬＯｍＭ Ｔｒｉｓ−塩酸緩衛液、１ｍＭ Ｅ
ＤＴＡ、 ｐｌ！ ７．４゜ＴＥ−ｓａｒｋｏｓｙｌ：
ｌｏｍＭ Ｔｉｒｓ−塩酸緩衛液、１＋ｎＭ ＥＤＴ
Ａ、 ０．３８％ＳｏｄｉｕｍＮ−Ｌａｕｒｏｙｌ
５ａｒｋｏｓｉｎａｔｅ ＳｐＨ７，４゜ＴＥＮ： ｌ
Ｏｄ Ｔｉｒｓ−塩酸緩衛液、１ｍＭ ＥＤＴＡ。
ＤＴＡ、 ｐｌ！ ７．４゜ＴＥ−ｓａｒｋｏｓｙｌ：
ｌｏｍＭ Ｔｉｒｓ−塩酸緩衛液、１＋ｎＭ ＥＤＴ
Ａ、 ０．３８％ＳｏｄｉｕｍＮ−Ｌａｕｒｏｙｌ
５ａｒｋｏｓｉｎａｔｅ ＳｐＨ７，４゜ＴＥＮ： ｌ
Ｏｄ Ｔｉｒｓ−塩酸緩衛液、１ｍＭ ＥＤＴＡ。
０、ＬＭ ＮａＣｌ、ｐｎ ７．４゜
実施例Ｉ
Ｅ、コリ ｐＧＨ−Ｌ９ （（微工研菌寄第７６０６号
）をＰＢＢ倍地（ペプトン１０ｇ、肉エキス１０ｇ、Ｎ
ａＣ１２，５ｇ、酵母エキス２ｇ、水１１．ｐＨ７，０
）に３７℃で通気培養してプラスミドを増幅した。菌が
２〜５×１０８／ｍｌまで増殖したところでクロラムフ
ェニコールを最終濃度的１５０μｇ ／ ｍｌになるよ
うに加え、そのまま３７℃で８時間培養した。
）をＰＢＢ倍地（ペプトン１０ｇ、肉エキス１０ｇ、Ｎ
ａＣ１２，５ｇ、酵母エキス２ｇ、水１１．ｐＨ７，０
）に３７℃で通気培養してプラスミドを増幅した。菌が
２〜５×１０８／ｍｌまで増殖したところでクロラムフ
ェニコールを最終濃度的１５０μｇ ／ ｍｌになるよ
うに加え、そのまま３７℃で８時間培養した。
培養液４００ ｍｌから集めた菌体（約１ｇ）を約３０
ｍ１のＴｒｉｓ−ＮａＣ１に懸濁し、容量４０ｍ１の冷
却遠心機用遠心管に移し、７．００Ｏｒｐｍ、°７分間
遠心して沈澱させた。１０ｍ１のＴＥ−蔗糖を加えて懸
濁し、θ℃５分間放置後２ｍｌの０．５ｍＭ ＥＤＴ
Ａを加え、さらに０℃、１０分間装いた。これに１６ｍ
１のＬｙｔｉｃ Ｍｉｘｔｕｒｅを一気に加え、遠心
管を数回反転して全体を均一にした。そのまま０℃で１
５分間放置後、０°Ｃで１５．０００〜１８．００Ｏｒ
ｐｍ。
ｍ１のＴｒｉｓ−ＮａＣ１に懸濁し、容量４０ｍ１の冷
却遠心機用遠心管に移し、７．００Ｏｒｐｍ、°７分間
遠心して沈澱させた。１０ｍ１のＴＥ−蔗糖を加えて懸
濁し、θ℃５分間放置後２ｍｌの０．５ｍＭ ＥＤＴ
Ａを加え、さらに０℃、１０分間装いた。これに１６ｍ
１のＬｙｔｉｃ Ｍｉｘｔｕｒｅを一気に加え、遠心
管を数回反転して全体を均一にした。そのまま０℃で１
５分間放置後、０°Ｃで１５．０００〜１８．００Ｏｒ
ｐｍ。
３０分間遠心した。上清を静かに別の遠心管に移した。
約３０ｍ１のｃｌｅａｒｅｄ １ｙｓａｔｅが得られ
た。
た。
ｃｌｅａｒｅｄ １ｙｓａｔｅにその１／１０重量の
ＰＥＧ粉末および１／１０容量の５ＭＮａＣＡを加え、
マグネチンクスターラーで完全に溶解させた。０℃で１
晩放置した後、１０．０００ｒｐｍ、１０分間遠心した
。沈澱を上清から分離した後、これを３ ｍｌのＴＥに
よく溶かしさらに少量のＴＥを加えて全体を正確に４．
７６ｍ１にした。これに５．ＯＯｇ Ｃｓ（、ｉ、Ｑ
、５ｍ１ＥＢ溶液を加えよく混合した。
ＰＥＧ粉末および１／１０容量の５ＭＮａＣＡを加え、
マグネチンクスターラーで完全に溶解させた。０℃で１
晩放置した後、１０．０００ｒｐｍ、１０分間遠心した
。沈澱を上清から分離した後、これを３ ｍｌのＴＥに
よく溶かしさらに少量のＴＥを加えて全体を正確に４．
７６ｍ１にした。これに５．ＯＯｇ Ｃｓ（、ｉ、Ｑ
、５ｍ１ＥＢ溶液を加えよく混合した。
２容のエタノールを加え、０℃、２０分放置後１０．０
００ｒｐｍで１０分間遠心し、上清をよく除き、沈澱を
９ ｍｌのＴＥ−Ｓａｒｋｏｓｙｌによく溶かし、さら
に少量のＴ Ｅ −５ａｒｋｏｓｙｌで９．５２ｇに調
整した。これに１０ｇ ＣｓＣ１，１ｍｌ Ｅ Ｂ溶
液を混ぜて約２０℃、３６，０００ｒｐｍで３６時間遠
心した。ブラックランプ（３６０ｎｍ）照射下プラスミ
ドｃｃＤＮＡバンドを幅狭く回収した。
００ｒｐｍで１０分間遠心し、上清をよく除き、沈澱を
９ ｍｌのＴＥ−Ｓａｒｋｏｓｙｌによく溶かし、さら
に少量のＴ Ｅ −５ａｒｋｏｓｙｌで９．５２ｇに調
整した。これに１０ｇ ＣｓＣ１，１ｍｌ Ｅ Ｂ溶
液を混ぜて約２０℃、３６，０００ｒｐｍで３６時間遠
心した。ブラックランプ（３６０ｎｍ）照射下プラスミ
ドｃｃＤＮＡバンドを幅狭く回収した。
ＴＥＮで平衡化した５ｅｐｈａｒｏｓｅＣＩ−４８カラ
ム（０，８Ｘ２０ｃｍ）に、得られたｃｃＤＮＡ画分（
０，１３ｍ１）をそのまま加え、ＴＥＮで自然流出法に
よりゲル濾過を行った。
ム（０，８Ｘ２０ｃｍ）に、得られたｃｃＤＮＡ画分（
０，１３ｍ１）をそのまま加え、ＴＥＮで自然流出法に
よりゲル濾過を行った。
波長２５４ｎｍにおける吸光度でモニターして約５ ｍ
ｌのｖｏｉｄ ｖｏｌｕｍｅ、ＤＮＡ画分、ＲＮＡ画
分、さらに続いてＥＢおよびＣ５Ｃｊ２か流出した。Ｄ
ＮＡ画分に相当する最初のピークを集めてＴＥに透析し
てほぼ純ｔやなｐＧＨ−Ｌ９プラスミドＤＮＡを得た。
ｌのｖｏｉｄ ｖｏｌｕｍｅ、ＤＮＡ画分、ＲＮＡ画
分、さらに続いてＥＢおよびＣ５Ｃｊ２か流出した。Ｄ
ＮＡ画分に相当する最初のピークを集めてＴＥに透析し
てほぼ純ｔやなｐＧＨ−Ｌ９プラスミドＤＮＡを得た。
ｐＧＨ−Ｌ９ ５０ｔ１ｇを２０ｍＭＴｒｉｓＨＣｆｌ
（ｐＨ７，５）−１０ｍＭ β−ＥｔＳＨ−１
７５ｍＭ ＮａＣ１−１０ｍＭ ＭｇＣｊ２２中Ｂ
ｇｆｌ ｌｌ３７．５Ｕ、５ａｊ２１７５Ｕを加え、３
７℃１７時間インキュベートし反応停止、フェノール処
理後、ＤＮＡをエタノール沈でんさせ、５％ポリアクリ
ルアミド電気泳動に付した。ゲルから、抽出を行いｈＧ
Ｈ−ＡＢ部分遺伝子を含む約４．６ＫｂｐのＤＮＡ断片
約２０μｇを得た。
（ｐＨ７，５）−１０ｍＭ β−ＥｔＳＨ−１
７５ｍＭ ＮａＣ１−１０ｍＭ ＭｇＣｊ２２中Ｂ
ｇｆｌ ｌｌ３７．５Ｕ、５ａｊ２１７５Ｕを加え、３
７℃１７時間インキュベートし反応停止、フェノール処
理後、ＤＮＡをエタノール沈でんさせ、５％ポリアクリ
ルアミド電気泳動に付した。ゲルから、抽出を行いｈＧ
Ｈ−ＡＢ部分遺伝子を含む約４．６ＫｂｐのＤＮＡ断片
約２０μｇを得た。
一方 ” ＧＡＴＣＴＡＡＴＡＧ３° ５゜ＡＴ
ＴＡＴＣＡＧＣＴ の連鎖からなるＢｇＩＩＩ−３ａｉＩリンカ−ＤＮＡ断
片を化学合成した。
ＴＡＴＣＡＧＣＴ の連鎖からなるＢｇＩＩＩ−３ａｉＩリンカ−ＤＮＡ断
片を化学合成した。
ｈＧＨ−ＡＢ遺伝子１ ｐｍｏｊ２ 、リンカ−ＤＮＡ
断片１０ｐｍｏｊ２にＤＮＡリガーゼ３５０Ｕ（ベーリ
ンガー・マンハイム）を加えて、２０°Ｃ２０時間結合
反応を行わせた。
断片１０ｐｍｏｊ２にＤＮＡリガーゼ３５０Ｕ（ベーリ
ンガー・マンハイム）を加えて、２０°Ｃ２０時間結合
反応を行わせた。
反応停止後、フェノール処理を行い、ＤＮＡをエタノー
ルで沈でんさせた。このうちの１／４を用いてＥ、コリ
ＨＢＩＯＩをコーエンらの方法で形質転換し、アンピ
シリン耐性でテトラサイクリン感受性を指標にクローニ
ングを行った。得られた形質転換株、Ｅ、コリ ＨＢＩ
ＯＩ ｐＡＢ−１をＥ、コリ ｐＧＨ−Ｌ９の場合と
同様にして培養、溶菌、プラスミド分離及び精製を行い
、ｐＡＢ−１プラスミド２０Ｕｇを得た。得られたｐＡ
Ｂ−１プラスミドについてジデオキシ法によってシーケ
ンシングを行い、これが第１図の物理地図及び前述した
各ＤＮＡ連鎖部分と一致することを確認した。
ルで沈でんさせた。このうちの１／４を用いてＥ、コリ
ＨＢＩＯＩをコーエンらの方法で形質転換し、アンピ
シリン耐性でテトラサイクリン感受性を指標にクローニ
ングを行った。得られた形質転換株、Ｅ、コリ ＨＢＩ
ＯＩ ｐＡＢ−１をＥ、コリ ｐＧＨ−Ｌ９の場合と
同様にして培養、溶菌、プラスミド分離及び精製を行い
、ｐＡＢ−１プラスミド２０Ｕｇを得た。得られたｐＡ
Ｂ−１プラスミドについてジデオキシ法によってシーケ
ンシングを行い、これが第１図の物理地図及び前述した
各ＤＮＡ連鎖部分と一致することを確認した。
Ｍ９−０．２％ Ｃａｓａｍｉｎｏ Ａｃ１ｄ−０，
４％ Ｇｌｕｃｏｓｅ−Ａｐ （２０Ｕｇ／ｍ１）−チ
アミン（１０Ｕｇ ／ ｍｌ ）培地を培地として用い
、対数増殖期の初期にインドールアクリル酸を（４０Ｕ
ｇ ／ ｍｌ ）になるように加えて、形質転換株Ｅ、
コリ ＨＢＩＯＩ ｐＡＢ−１を２３時間通気培養し
た。
４％ Ｇｌｕｃｏｓｅ−Ａｐ （２０Ｕｇ／ｍ１）−チ
アミン（１０Ｕｇ ／ ｍｌ ）培地を培地として用い
、対数増殖期の初期にインドールアクリル酸を（４０Ｕ
ｇ ／ ｍｌ ）になるように加えて、形質転換株Ｅ、
コリ ＨＢＩＯＩ ｐＡＢ−１を２３時間通気培養し
た。
得られた菌体は超音波破砕、遠心分離後、７Ｍ尿素を含
む２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣＡ （ｐＨ７，５）、
１０ｍＭ β−メルカプトエタノールロマトグラフィ
による精製を行った。
む２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣＡ （ｐＨ７，５）、
１０ｍＭ β−メルカプトエタノールロマトグラフィ
による精製を行った。
溶出は同一のバッファーを用いた。次にＤＥＡＥ−ｃｅ
ｌｌｕｌｏｓｅカラムにチャージし、１０ｍＭ β−
メルカプトエタノール、７Ｍ尿素を含む２０ｍＭ Ｔ
ｒｉｓ−ＨＣｌ （ｐＨ７，５）中、０〜０．３Ｍの
ＮａＣｌでグラジェント溶出を行った。高分子量の不純
物については同一バッファー中５ｅｐｈａｄｅｘ Ｇ
−７５カラムを用いて除去した。
ｌｌｕｌｏｓｅカラムにチャージし、１０ｍＭ β−
メルカプトエタノール、７Ｍ尿素を含む２０ｍＭ Ｔ
ｒｉｓ−ＨＣｌ （ｐＨ７，５）中、０〜０．３Ｍの
ＮａＣｌでグラジェント溶出を行った。高分子量の不純
物については同一バッファー中５ｅｐｈａｄｅｘ Ｇ
−７５カラムを用いて除去した。
得られたｈＧＨ−ＡＢフラクションは１０ｍＭ炭酸アン
モニウム溶液に対して透析を行った。各精製ステップで
のＳ Ｄ Ｓ −、Ｐ Ａ Ｇ Ｅによる分析結果を第
６図に示す。同図中レーンＭｒは分子量マーカー、同１
は超音波破砕液、同２は遠心分離で得られる沈澱物の溶
解液、同３は ５ｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−５０カラムクロマトグラフイ
後のフラクション、同４はＤＥＡＥ−ｃｅｌｌｕｌｏｓ
ｅクロマトグラフィ後のフラクション、同５は５ｅｐｈ
ａｄｅｘ Ｇ−７５力に溶解し、５ｅｐｈａｄｅｘ
Ｇ−５０カラムクラム後のフラクションを各々示す。
モニウム溶液に対して透析を行った。各精製ステップで
のＳ Ｄ Ｓ −、Ｐ Ａ Ｇ Ｅによる分析結果を第
６図に示す。同図中レーンＭｒは分子量マーカー、同１
は超音波破砕液、同２は遠心分離で得られる沈澱物の溶
解液、同３は ５ｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−５０カラムクロマトグラフイ
後のフラクション、同４はＤＥＡＥ−ｃｅｌｌｕｌｏｓ
ｅクロマトグラフィ後のフラクション、同５は５ｅｐｈ
ａｄｅｘ Ｇ−７５力に溶解し、５ｅｐｈａｄｅｘ
Ｇ−５０カラムクラム後のフラクションを各々示す。
またｒｅｄ＋。
−はメルカプトエタノールを含む場合及び含まない場合
をそれぞれ示す。
をそれぞれ示す。
表１
− ０．０５６ ２．ＩＸ １０３ａ）旦、ｃ
ｏｌｉ ＨＢＩＯＩ中 ｂ）＋：ＩＡＡで誘導 −：ＩＡＡ無添加Ｃ）培地１ｍ
ｌあたり ｄ） Ｓ Ｄ Ｓ −Ｐ Ａ Ｇ Ｅで測定実施例２ このようにして得られたｈＧＨ−ＡＢポリペプチドは若
干ラビットから得られる軟骨細胞を用いた３５Ｓ硫酸塩
の取り込み実験においてソマトメジン類似活性を存する
ことがわかった。
ｏｌｉ ＨＢＩＯＩ中 ｂ）＋：ＩＡＡで誘導 −：ＩＡＡ無添加Ｃ）培地１ｍ
ｌあたり ｄ） Ｓ Ｄ Ｓ −Ｐ Ａ Ｇ Ｅで測定実施例２ このようにして得られたｈＧＨ−ＡＢポリペプチドは若
干ラビットから得られる軟骨細胞を用いた３５Ｓ硫酸塩
の取り込み実験においてソマトメジン類似活性を存する
ことがわかった。
このバイオアッセイに用いた細胞は若干ラビットから得
られる軟骨細胞で、０．３％ＦＣＳを含むＤｕｌｂｅｃ
ｏ″ｓ ｍｏｄｉｆｉｅｄＥａｇｌｅ″ｓ ｍｅ
ｄ ｉ ｕｍ （ＤＭＥＭ）中で２４ｈブレインキユベ
ーシヨンした後、試験サンプルおよび０．５μｃｉのＨ
ＳＯ４を加えてさらに２４ｈインキユベーシヨンを行っ
た。プロテオグリカン合成はプロナーゼＥ処理後、塩化
セチルピリジニウムで沈澱する物質への３５Ｓ０２″″
の取り込みを測定することて行った（表２）。
られる軟骨細胞で、０．３％ＦＣＳを含むＤｕｌｂｅｃ
ｏ″ｓ ｍｏｄｉｆｉｅｄＥａｇｌｅ″ｓ ｍｅ
ｄ ｉ ｕｍ （ＤＭＥＭ）中で２４ｈブレインキユベ
ーシヨンした後、試験サンプルおよび０．５μｃｉのＨ
ＳＯ４を加えてさらに２４ｈインキユベーシヨンを行っ
た。プロテオグリカン合成はプロナーゼＥ処理後、塩化
セチルピリジニウムで沈澱する物質への３５Ｓ０２″″
の取り込みを測定することて行った（表２）。
ｒ ！太 叩 ４） 六本 ｍｌ
表２ ｈＧＨ−ＡＢポリペプチドのソマトメジン類似
活性０ ５２１１±８０６
０．００１ ５３３９±２２９ ７１３９
±３８０．００３ ５００７±１２３ ７
５０７±３７０．０１ ５４３０±２４９
７６５７±４５６０．０３ ６３１９±１
３２ ７６４５±５１４Ｌ ノ七 ５リ Ｖノ
ＩＪＪ 木 」ｈＧＨ−ＡＢポリペプチドはこれまで
のソマトメジン類似活性を有する物質などの場合と異な
り発現率も高く抽出・精製も容易にかつ効率よく行え、
骨の成長促進剤としての幅広い応用が可能となる。
活性０ ５２１１±８０６
０．００１ ５３３９±２２９ ７１３９
±３８０．００３ ５００７±１２３ ７
５０７±３７０．０１ ５４３０±２４９
７６５７±４５６０．０３ ６３１９±１
３２ ７６４５±５１４Ｌ ノ七 ５リ Ｖノ
ＩＪＪ 木 」ｈＧＨ−ＡＢポリペプチドはこれまで
のソマトメジン類似活性を有する物質などの場合と異な
り発現率も高く抽出・精製も容易にかつ効率よく行え、
骨の成長促進剤としての幅広い応用が可能となる。
第１図は本発明の骨組織の成長促進剤の有効成分である
ｈＧＨ−ＡＢポリペプチドを調製するために使用できる
プラスミドの物理地図を、第２図はこのプラスミドのｈ
ＧＨ−ＡＢ遺伝子の両末端部分の塩基配列を、第３図は
第１図のプラスミドを調整するための原料となるプラス
ミドの物理地図を、第４図はこの原料プラスミドのｈＧ
Ｈ遺伝子をそれぞれ示す図であり、第５図は本発明の方
法による第１図のプラスミドの調整を説明する図であり
、第６図はｈＧＨ−ＡＢポリペプチドのＳＤＳポリアク
リルアミド電気泳動パターンを示す図である。 第２図 第３図 第４図 Ｓ、Ｄ Ｍｒ １ ２ ４３に −一＝ ・・ ； ２５．７に一一＝ ＝ミテ １８．４に悌ミ ー淘醇 ｒｅｄ。 ３４ｓ ＋− 一１−一 −一
ｈＧＨ−ＡＢポリペプチドを調製するために使用できる
プラスミドの物理地図を、第２図はこのプラスミドのｈ
ＧＨ−ＡＢ遺伝子の両末端部分の塩基配列を、第３図は
第１図のプラスミドを調整するための原料となるプラス
ミドの物理地図を、第４図はこの原料プラスミドのｈＧ
Ｈ遺伝子をそれぞれ示す図であり、第５図は本発明の方
法による第１図のプラスミドの調整を説明する図であり
、第６図はｈＧＨ−ＡＢポリペプチドのＳＤＳポリアク
リルアミド電気泳動パターンを示す図である。 第２図 第３図 第４図 Ｓ、Ｄ Ｍｒ １ ２ ４３に −一＝ ・・ ； ２５．７に一一＝ ＝ミテ １８．４に悌ミ ー淘醇 ｒｅｄ。 ３４ｓ ＋− 一１−一 −一
Claims (2)
- （１）式 【アミノ酸配列があります】 で表わされるアミノ酸連鎖（但しＮ末端にメチオニン残
基が付加されてよく、かつ本質的にソマトメジン様活性
を損わない程度で多少の変更があってもよい）を持ちソ
マトメジン様活性を有するポリペプチド。 - （２）式 【遺伝子配列があります】 で表わされるＤＮＡ配列（但しその遺伝子産物のソマト
メジン様活性を本質的に損わない程度で多少の変更があ
ってよい。）を有する遺伝子セグメントを発現可能に保
有するプラスミドで形質転換された細菌を栄養培地に培
養してこの遺伝子を発現させ、その遺伝子産物である、
式 【アミノ酸配列があります】 で表わされるアミノ酸連鎖（但しＮ末端にメチオニン残
基が付加されてよく、かつソマトメジン様活性を損わな
い程度で多少の変更があってよい）を持ちソマトメジン
様活性を有するポリペプチドを採取することを特徴とす
るポリペプチドの製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61310177A JPH0771508B2 (ja) | 1986-12-29 | 1986-12-29 | ポリペプチド及びその製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61310177A JPH0771508B2 (ja) | 1986-12-29 | 1986-12-29 | ポリペプチド及びその製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63167798A true JPS63167798A (ja) | 1988-07-11 |
| JPH0771508B2 JPH0771508B2 (ja) | 1995-08-02 |
Family
ID=18002099
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61310177A Expired - Lifetime JPH0771508B2 (ja) | 1986-12-29 | 1986-12-29 | ポリペプチド及びその製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0771508B2 (ja) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59173083A (ja) * | 1982-09-27 | 1984-09-29 | バイオジェン インコーポレイテッド | 豚成長ホルモンを生産するためのｄｎａ配列，組換ｄｎａ分子および生産方法 |
| JPS60234584A (ja) * | 1984-05-09 | 1985-11-21 | Morio Ikehara | 組換プラスミド |
-
1986
- 1986-12-29 JP JP61310177A patent/JPH0771508B2/ja not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59173083A (ja) * | 1982-09-27 | 1984-09-29 | バイオジェン インコーポレイテッド | 豚成長ホルモンを生産するためのｄｎａ配列，組換ｄｎａ分子および生産方法 |
| JPS60234584A (ja) * | 1984-05-09 | 1985-11-21 | Morio Ikehara | 組換プラスミド |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0771508B2 (ja) | 1995-08-02 |
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