JPS63146833A - 後生的なグリコシル化最終産物を除去する為の方法及び薬剤 - Google Patents

後生的なグリコシル化最終産物を除去する為の方法及び薬剤

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JPS63146833A JP62228202A JP22820287A JPS63146833A JP S63146833 A JPS63146833 A JP S63146833A JP 62228202 A JP62228202 A JP 62228202A JP 22820287 A JP22820287 A JP 22820287A JP S63146833 A JPS63146833 A JP S63146833A
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】
出ｆｆｉ者は本発明の主題に指示されている次の論文の
共茗茜である：゛非酵素的にグリ〕シル化される大食細
胞リレブタの機能はインシ臼リンレベルにＪ、って調節
される、”　Ｖ　１ａｓｓａｒａ　。 ｒＪ　ｒｏｗｎｌｅｃ　、　Ｃｅｒａｌｌｌ　、［）　
ｊａｒ）ＯＬＯ３（１９８（ｉ）、Ｖｏｌ、３５．３ｕ
ｐｐ　＋−１，１３ａベージ；゛大食９１１１胞による
糖尿病性のラット末梢神杼ミ１リンの蓄積は後生的グリ
コシル化最終産物の存在にＪ、り増加りる“Ｖｌａｓｓ
ａｒａ　、　Ｈ，、Ｂｒｏｗｎｌｅｃ　％Ｍ、、Ｃｃｒ
ａｍｉ　、　Ａ、　Ｊ、　ＥＸＤ、　１ｙｌｅｄ、　（
１９８４）、ｖｏｌ。 １６０、ＰＰ、　　１９７−２０７；“大食細胞による
人の糖尿病性末梢神経ミニリンの識別と取込み”　　Ｖ
　　Ｉａｓｓａｌａ　　、　　　ト１．　　　、　　Ｏ
ｒｏｗｎｌｅｅ　　、　　Ｍ、　　　、ＣＱＩｏａ−ｍ
ｉ、　　Ａ、　　Ｄｉａｂｅｔｅｓ　　（１９８５）　
　、　Ｖｏｌ、３４、　Ｎ００６、ＤＩ）、　　！１５
３−５５７　；　”グルコース修正蛋白質の＾親和リレ
ブタ調節取込みと分解二尼化ｎ分子除去のための潜在的
機序”　、Ｖ　Ｉａｓｓａｒａ　、　ｌ−１、、［３ｒ
ｏ＊ｎ１ｃｅ　、　Ｍ、　　、Ｃｅｒａｍｉ　、Ａ、　
　、　Ｐｒｏｃ　。 Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　、　Ｓｃｉ、　ｌＪ、ｓ、＾、　
（Ｓｅｐｔ　、　１９８５）、Ｖｏｌ、８２、ｌ）Ｄ、
　５５８８−５５９２　：“グルコース修１１蛋白質の
ための新しい大口綱胞すセプタは既述の腐食性動物リレ
ブタとは異なる’　、Ｖｌａｓｓａｒａ　、Ｉｆ、、３
ｒａｗｎｌｅｅ　　１　Ｍ、　、　Ｃ０ｒａ−１ｉ１　
Ａ、　　Ｊｏｕｒ　　、　　［ＸＤ。 Ｍ　ｃｄ、　　（１９８６）　　（印刷中）“アゾ１」
−ム発生におりる非酵素的グリコシル化の役割”　、Ｃ
ｅｒａｏ＋ｉ　、△、　　、Ｖｌａｓｓａｒａ　、　Ｉ
ｌ、　、［３ｒｏ、ｗｎｌｅａ　、　Ｍ、　　、　Ｊｏ
ｕｒｖａｌ　ｏｒ　Ｃａ１ｌ−ｕｌａｒ　　１３ｉｏｃ
ｈｅｍｉｓｔｒｙ　　（１９８Ｂ）、Ｖｏ　Ｉ　、　３
Ｇ、ＰＰ、１１１−１２０．前記出版物の全−ｃｈ＜参
照の中に３まれ
【いる。 木光明は一般に動物蛋白質とグルコースの１１１ｖｉｖ
ｏ反応に関りる。さらに特に蛋白質の非酵素的グリコシ
ル化どイのｉｎ　ｖｉｖｏ　Ｎｌ害にス・１するＴ；’
ｔ１％に関覆る。 グル：１−スど＜Ｉｉ白質の間の反応はしばらく知られ
ており、（の最初の表明にＪ３いＣ１よ、食物の調理の
間に茶色の色素の光用で認められた。この現象も１１９
１２ｉ１に、グル丁１−スと他の還元糖はアミノ酸と反
応して、一連の脱水と転イひを受ＧＪ−Ｃ安定した茶色
の色素を生成するｔＪ加物を生成することを認めたＭａ
ｉｌｌａｒｃｌにより確ｉＪ　０れた。Ｍａｉｌｌａｒ
ｄＬ、　Ｃ，（１９１２）　Ｃ，Ｒ１△ｃ−ａｄ、３ｃ
ｒ、　、　ｖｏｌ。 １５４、ＰＰ、　６Ｇ−６８゜ この現象は近４１．　ｉｎ　ｖｉｖｏでぞの士別を保つ
ことが認められた。従って、Δｍａｄｏｒｉ牛成物とし
て生成れている安定したアミノ１−　’Ｆ　Ａ−１シケ
１−シルｆ＝Ｊ加物を生成１Ｊるグル：１−スどＭ頗ア
ミノ３．ｔの間の非醇糸的反応番、五へしグ［＋ピンと
としに存ｆＬりろことが認められでＪｔす、ここてＣま
グルニＪ−スどの反応にＪ、りへＥグ１１ビンのベータ
鎖の７ミノ末端で生成されるΔｍａｄｏｒ　ｉ生成物の
転位はへ［グロビン△１Ｃどしで知られる付加物を生成
する。ＪＭａｉｌＩＬ′Ｉｒｄ系列のこの初期反応は水
晶体クリスタリン、］コラーゲン神経蛋白質のような各
種の他の体蛋白質とともに存在することｂ：謬められた
。１３　ｕｎｎ、Ｉｌ、Ｆ、　、１ｌａｎｃｙ、ｌ）、
　Ｎ、　、Ｇａ１ｂａｙ　、　Ｋ、　Ｈ。 Ｇａ１ｌｏＤ　ＸＰ　、　ｌ−ｌ　、　、（１９７５）
　Ｂ　１Ｏｃｈｅｌ。 Ｂ　１ｏｐｌ＋ｙｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏｍｎ＋　、　、
ｖｏｌ、６７、ＰＰ、１０３−１０９：　ｋｏｃｎｉｇ
　、Ｒ、Ｊ　、　、［３１ｏｂｓＬｅｉｎ、Ｓ、Ｈ。 Ｃａｒａｍｉ　　、　　Δ　、　　、　　（１９７７）
　　Ｊ、　　［３ｉｏｌ　　、　Ｃｈｅｗ　　、　、ｖ
ｏｌ。 ２５２、ＰＰ、　２９９２−２９９７：　Ｍｏｎｎ１ｅ
ｒ、　Ｖ、　Ｍ、　、Ｃｃｒａａｉｉ　、Ａ、　、（Ｉ
Ｑ８３）　！物と　ＵにｒａｔノるＭａｉ旦虹り尺公、
Ｏ（１，Ｗａｌｌｅｒ　、　Ｇ、　Ａ、、　Ａｌｌ１ｅ
ｒｉｃａｎ　　Ｃｈｃ＋ｎ１ｃａｌ　　５ｏｃｉｅｔｙ
、　　ｖｏｉ、　　２１５、ρｐ、　４３１−４４８：
Ｍｏｎｎ１ｃｒ、　Ｖ、　Ｍ、、ＣｅｒａｍｉΔ、、　
　（１９８２）　Ｃｌ１ｎｉｃｓ　ｉｎ　Ｅｎｄｏｃｒ
ｉｎ。 １ｏｕａｎｃ１Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　　、　　ｖｏｌ
、１１、　ｐｐ、　４３１　−　４５２を見よ。 さらに、後１１１１のＭａｉｌｌａｒｄ　４１成物に似
たスペクトルおよび蛍光特性をもつ茶色の色素がへ令省
からの水晶体蛋白質やコラーゲンのようムいくつかの長
命蛋白質と結合してｉｎ　ｖｉｖｏにも認められた。 色素のイ［令１！１連の直線的ｌ曽加は２０才と９０才
の１−令の間の人の硬股二］ラーゲン中で認められた。 Ｍｏｎｎ１ｃｒ、ｙ、　Ｍ、　Ｃｃｒａｍｉ　、△。、
（１９８１）Ｓｃｉｅｎｃｅ、　　ｖｏｌ、　　２１１
、　ｐｐ、　　　４９１−　　４９３　；　　Ｍ　ｏｎ
ｎｉｅｒ。 ＶｏＭ、、Ｃｅｒａｍｉ　、Ａ９、（１９８３）　［３
ｉｏｃｈｃｍ。 １１１ｏｐｈｙｓ、Δｃｔａ　０、ｖｏｌ、　７６Ｇ、
ｐｐ、９７−１０３：Ｍ　ｏｎｎｉｃｒ、Ｖ、Ｍ、　、
Ｋｏｈｎ　、Ｒ，Ｒ，、ＣｃｒａｍｉΔ０、゛真性糖尿
病におＧＪる人＝１ラーグンの年令関連褐変の強化”、
（１９８４）　Ｐｒｏｃ　。 Ｎａｐ、　Ａｃａｄ　、Ｓｃｉ　、　、ｖｏｌ、８１、
Ｐ　Ｐ　、　　、’＋　８３−　５８７、を見よ。おり
しろいことには、］ララーンの老化はグルコースによっ
て誘導される架橋にＪ、す１ｎｖｉｔｒｏで似せること
ができる；　Ｉｉ’ｉｌじく、：ｌ、められているイ・
１加物の生成におｔ」る他の蛋白質のコラーゲンによる
捕そくｔま架橋反応により起ることが理論づけられてお
り、賢阜礎説と動脈壁中のコレステ［１−ル保）ｈの低
密瓜リボ蛋白質におりるアルブミンと抗体の観察される
凸積を説明すると信じられている。［３ｒｏｗｎｌ−ｅ
ｅ、　Ｍ’、　、Ｐｏｎｇｏｒ　、Ｓ、、Ｃｅｒａｍｉ
、Ａ、　　　（１り８３）Ｊ、ＥｘｐｏＭａｄ、ｖｏｌ
。 １ｈ８．　Ｉ）＋３．１７３９−１７４４　：　Ｋｏｈ
ｎ　１Ｒ、Ｒ、、Ｃｅｒａｍｉ　、△、　　　Ｍｏｎｎ
１ｅｒ、　　Ｖ、　Ｍ、　、（１９８４）Ｄ　１ａｂｃ
ｔｃｓ　、　ｖｏｌ、３３、Ｎｏ　、　　１　、　ＰＰ
、５７−５９を見Ｊ、、　Ｃｅ−ｒａｍｉ、Δ、　、Ｖ
ｌａｓｓａｒａ　、　ｔｌ、、ｒ３ｒｏｗｎｌｅｅ　、
　Ｍ、　、　　（１９８５）　Ｍｃｔａｂｃ＋ｌ１５ｍ
　、　ｖｏｌ　。 ３４、ｐｐ、　３７−４４゜ ［）ｏｎｇｏｒ　、　Ｓ、　Ｍ、他、ｌｉ、］上の場合
に番よ、牛血ｒ＾？ルブミンやポリ−し一リジンのよう
なある褐色になったポリペブヂド中に存在することが認
められている蛍光発色団が単離され、確認され、構造は
２−（２−）目標巨大分子イル）−４（５）−（２−フ
ラニル）−１１１−１ミダ／−４（以ＩＤ　”ＦＦ　Ｉ
”　）と定められた。この化合物は’ｊｉＷＵ異れ状態
で存在することが分っており、その構造中に２個のベブ
ブド誘尋のアミン窒素を取り込んだ。これらのアミン窒
素の取り込みと化合物中の２つのグルコース残１１ｔは
、・でのペブブド結合前駆物質はＭａｉｌｌａｒｄ　’
、／　ｒｌ　ｔｚス（Ｈａ明Ｌ　認メラｔＬ　６　’／
　／Ｌｌ　−ｑ　−スに」、る蛋白質のｉｎ　ｖｉｖｏ
架橋に関係があるのではないかということを示唆した。 Ｃｌ１ＬＩｎす、　Ｊ　、　　Ｃ、（：、　　、　　１
ＪＩｒｉｃｈ　　、　、　Ｐ、　　Ｌ）。 ｆ、１Ｈｃａｌａ　、　ｌ’＜、　、　Ｃ０ｒａｌｌｉ
　、　Ａ、　、（１９８５）　Ｊ。 Ｂ　ｉｏｌ　、　　Ｃｈｅａｉ　、　　、ｖｏｌ、２［
ｓｏ　、ｐｐ、　　７’１７０−７９７４を兄よ。 この発色団は後生的グリコシル化最終産物の固定を可能
にし、蛋白質老化ブし１セスを明らかにし、Ｃさればそ
の阻害の方法と薬剤を開発Ｊる試みの助けとなっている
特殊化学を確認しようどケる補助的研究の一助となった
。 この発明前の１人にＪ、る開発１ｔｌｌ究にまり、進／
ｕだグリコシル化を阻止Ｊ”る力をシ１明りろある化合
物が確認された。 前述のμｌ害物質の開発以来のさ、らに進んだＩｔｌ）
究４４後生的グリコシル化１ｄ終産物のｉｎ　ｖｉｖｏ
　ｌＪｌ除または除去の内因的手段と占えられるｂのの
確認を可能にした。このとλは展開され、ここで十分に
説明され、従って、本出願が目射しているのはこの意味
である。 本発明に従って、動物の自体を刺激して後生的グリコモ
ル化Ａ３終産物の識別とこれに対する親和力を増Ｊこと
によって動物に−３ける蛋白質前止の阻止と処１１に対
りる方法と関連薬剤が明らかになる。特に、ｔｌ核頻１
１泡ど大食ＩＩＪｌ胞のような食細胞はターゲット蛋白
質のＪ：うな高分子を識別し、除去りる食細胞の活性を
増加させることのできる薬剤で処理される。 本発明の薬剤は１つまたは２つ以上の刺激剤からイ【す
、これＬＬ甲独Ｊ、たは１体に結合した天然または合成
の後生的グリコシル化最終産物からなり、１）！Ｊ　ｊ
ｊ２１０休１１炭水化物、蛋白質１合成ポリペプチド、
脂質、生物適合性の天然および合成樹脂、抗原およびそ
の混合物を含む。刺激化合物ｔよ糖と他の高分子の間の
反応から生成される他メ後生的グリコシル化１ｄ終産物
や後生的グリコシル化最終産物に対するその活性を僧り
ょうに食細胞を刺激するモノー鬼゛ンを含む。 従って、刺激化合物はアルブミンのような蛋白質に結合
した化合物１τｌ−Ｉからなる。代って、刺激化合物は
、例えばアルブミンとグルニ】−スまたはグルコ１−ス
ー６−リ／ｖ　Ｆｌｉ　Ｉスｊルの反応に五つ（調装さ
れる合成的にｉＡ６される１１２４的グリコシル化１１
１終産物からなる。この反応生成物はＦＦｌ−アルフミ
ン複合体とＦ、Ｉじやりｈで単独または担体とともに用
いることができる。 刺激化合物どして８ｉ１ＫＬ：ノキンは腫瘍壊死囚−ｒ
（ＴＮＦ）としＣ知られる蛋白質およびこの発明名の１
人によりｙｉ！見され、分離され、“カルク１ンパと命
名されたその変種からなる。この物質は単独または他の
刺激化合物と共に没５される。。 さらに、本発明の刺激化合物は後に゛共刺激剤パどして
確認された物質と共に没５される。刺激化合物の共刺激
剤との共投与は前名の１ｌＩｌ性を促進ｒＪ。 ることが認められた５、適１．ＩＪな共刺ゐハ１０．１
１　ｎｊｌ’！ｒ−Ｉｃｕｋｉｎ　−１（Ｌ　−１＞お
よびガンマ−インターフ１Ｈンのような七）」ンを含む
。 本発明の方法および単独または１１１１に１述された方
法と結合して実施される方法のさらに進んだ代りの貝体
例はそれを刺激化合物にさらす食細胞の５１、体外処理
である。例えば、患者は、血液が動脈システムおよび静
脈システムから体外に向けられ、血液内の食細胞と接触
させるように適切に配置された刺激化合物や共刺激剤を
含む装置を通して管理される体外血液処理が？ｊわれる
。、刺激化合物や共刺激剤は固定されるかあるいは体液
の流れに入るＪ：うにされる。 方法が刺激化合物や刺激剤のｉｒ＋　ｖｉｖｏ投与がら
イする場合には、この時の投与は、経口法および皮肉、
皮下、静脈内、あるいは腹膣内注射、カテーテル挿入ま
たは伯の通常の方法を含む既知の技術により行われる。 刺激化合物またはその化合物はこれらの投与法に対して
適した薬剤組成物で調製される。 本発明のさらに進ｌυだ局面においては、食細胞ＬＬ　
（４Ｍ中のインシュリンレベルの調節にＪ：リターゲッ
トｎ分子８識別し、除去するその能力を増Ｊように刺激
されろ。特に、インシュリンレベルの人目標巨大分子的
減少は食事操作と単独あるいは前記薬剤の（Ｑ　’Ｊと
組み合わＵて１ｊわれる膵臓ベータ細胞抑制の利用にＪ
、り行われる。このように、この補助的り法は食用；抱
の活ｔ’ｌに対してｉの効果を及ぼし、本発明に従っ″
Ｃ１Ｍ生的グ９」シル化最りａ産物の１５１取と除去の
増加を促進する。 ざらに、本発明【よ体内の後生的グリコシル化１１終産
物の増強の逆の結果の処ｄに対Ｊる各種の治療法にＩＩ
−Ｊる。特に、イ１令［ｙ、１連３１：たは糖尿病関連
の動脈硬化、皮膚のしわ、動脈遮所および糖尿病付網膜
、腎＆１障害のＪ、うな病変Ｇ１全てが１ｐ牛的グリコ
シル化最終産物の存在が増すにつれて起る過剰の増強ま
たは１−ラッピングの結果である。従って、このような
病変を防ぐことを広く求めている本発明による治療方法
は、にす１゛１１い速度と効率で身体から俊生的グリコ
シル化Ｊ！終舌物を除去するために食細胞を祠激し、こ
れによっ−（ここで１述されている病変の始まりをｉｔ
！ｉｔ）るべく直接かあるいは適当な薬剤組成物で本発
明の薬剤を投トノすることを意図している。特定の投←
Ｊブ１１１−　：ｍＴルはさまざまで、ｒ￥格を６つ医
パンあるいは獣１ζ７開業医の特別指導ｅ決定されるで
あろう。 Ｍａｉｌｌａｒｄブ１コヒスは体内の１要な蛋白質の塊
、その中ではコラーゲン、Ｔ５スブン、水晶体蛋白！１
および腎臓糸球体Ｌｔ礎膜、のいくつかに急激な影響を
及ぽりので、本方法は特別の治療的応用をもつでいる。 これらの蛋白質は年令に応じて（そこで・“°蛋白質老
化”の用；ｊ：の適用がある）また血糖に艮峙聞ざらさ
れたり、ＡＧＥ生成の結果として劣化する。ぞの結果と
して、動物の体系からグリコ１シル化最終産物を除人す
る力の増強は糖尿病を含む数多くの病変の小人な不利４
１作用をよく処理し、当然ながら動物の生活の負や期間
を数円する保証となる。 本発明のさらに進んだ治療的応用は免疫学の領域である
。特に、一般には後生的グリコシル化最終産物、および
特別な場合にはＦ　Ｉ”　Ｉが抗原にされ、次いで、食
細胞がこの結合された複合体にさらされて、このａｌｌ
　＋１１によるこの結合された複合体の取込みと消化を
促進する。次いで、食細胞は特定の抗原に対する抗体の
展開を引き出すために系統の動物の免疫システムに対７
る消化された複合体を承り。このように、免疫学的に重
要な反応を引き出さない抗原は抗原に対してイ１効！、
１：防御を展開りるためにＣよ免疫学的ににり反応的に
される。 例えば、後！！−的グリ丁１シル化最ｎａ物またはＦ　
Ｆｌを含む結合された複合体は動物の体内に導入される
か、あるいは食細胞が動物から対外的に？１１鯉１され
、結合された複合体と接触さｔ！ζ、その後そのすしブ
タを増加させた食細胞は抗体をＩｉ５聞りるＪ、うに免
疫システムを適当に刺激りるために動物の体内に再導入
されるように、前述の方法はｉｎ　ｖｉｖｏまたはＣｘ
ｖｉｖＯ′ｃ実施される。 前述のブｌ］ト」ルに対Ｊ゛る＊）Ｉ’は抗原に対して
直接り用さＵるようにａｓｍ胞の刺激を予想りる。。 この１順にＪ３いては、ターゲット抗原に対し−（４：
１責的１．ｇ抗体は［［：ｌのような後生的グリコシル
化１ｄ終産物て゛標識されるか、これに結合され、標識
／結合された物質は次にこの物質に対する食細胞の活性
を刺激Ｊることを促進するように　ｉｎ　ｖｉｖ。 に導入される。標Ａ／結合物質【よターゲラ［−ｉＡ　
ＩＩａｔに結合し、イの結果生ずる複合体はＡＧＥまた
は［−Ｆｌを識別りる食細胞によって攻撃される。攻撃
は直接かある６月ま抗原の壊死を引起フカケクヂンのＪ
、うなｔ）−１ンの分泌によって起る。食細胞は前に述
べたにうなｉｎ　ｖｉｖｏまたはｅｘ　ｖ−ｉｖｏの／
Ｊ法により前以て活性化される。前述したのと同じよ・
うに、このブ【−１トニ１ルは１り天的免疫不全症候酊
（ＡＩＤＳ＞や他の粁瘍よたはウィルス性感染県に対り
る可能性ある治療法として１）別の用途をもっている。 ざらに、本発明は、後生的グリコシル化最終産物に対し
Ｃ１）定の食細胞の活性を刺激する薬剤として働く可能
性あるイ１効＜１薬物のスクリーニングのための検定シ
ステムのＩＩ発を含む診断的応用を意図している。１つ
の例においてＧＥＬ　、見込みのある試験薬物をそのｌ
ｄｌ　徴効果を測定りるために大口細胞リンプルに投与
し、対照サンプルは前に挙げたＪ、うな既知の刺＆化合
物を与えたが、何の刺激も見られなかった。さらに、特
定の食細胞１ノンプル４．Ｌ　＋’＋ｒｒにｊ述された
各種の既知の薬剤と一連の＋ｉ、＋−のリンプルコロニ
ーの接種により、でさればこの細胞活性を刺激する場合
に最ム有効であることが知られているｂのの中から薬剤
を決定りるために（Ｊｌ究された。この薬剤は放（ト）
竹インデーＣクータ＜Ａど【゛適当にｖＡ識され、特定
の細胞コロニーにＪ。 るこの薬剤の取込みにより放（ト）能または刺激の進１
１が図表で示される。こうしく、標識された後生的グリ
コシル化最終産物の最大の取込みと処理を示目標巨大分
子［に−はこの刺激能力で最も有効へＨ１当・Ｊる桑作
１を確認する。 前記診断法により、刺激を受けやすい細胞コロニーが決
定でさ・、その可、能性がはっきりしている場合には、
この４１１１激を達成することのでさ・る特定の薬剤の
識別がはっさりしているかどうかを決定Ｊるために、コ
Ｌ二に一をさらに研究した。 その他の診断的応用は食細胞にＪ、６１１２り、的グリ
コシル化Ｊ！ＩＩ産物の識別と除去および動物のシスー
ｉＡの機能性に関するこの現象の忠義に関’Ｊ　’ｉＪ
−る各種のパラメーウのω１究に関する。第１の具体例
において、人良細胞のような食細胞は動物の身体から取
り出され、後生的グリコシル化最終産物に露出さＵるこ
とににすａｘ　ｖｉｖｏで活性化される。 これらの活性化された食細胞は次に丁ｅｃｈｎｉｃｉｕ
ｍで／１５！銅線標識し、後に動物に再導入し、動物の
システムを通じて循環さｕｌその間に細胞の最終的１Ｑ
置を示り″ためにｈ３１Ｏ４線映像化する。このように
しで、動物の身体にＪ月ノる後生的グリコシル化最、　
終産物のＱＪｆｆの位置がｗ１認される。この方法はじ
ゆく肝性斑ｔ、ａのような後生的グリコシル化ＩＱ１！
産物の望ましくないδカ瓜を確認覆るのに特に有用Ｃあ
る。こうするど、仝！〉のｉ能不全の位置を確認するこ
とができる。 また、身体から後生的グリコシル化最終産物を除去する
ための仝Ｑのコンγイシ］ンは、放射線標識の後生的グ
リコシル化最終産物の調製とその識別、取込みおよび除
去に必要な時開を測定−するために身体にｔｌｌ射Ｆｉ
ｌ標識物質を投与することによって測定できる。この測
定値は次に同じパラメータのもとで■常な体系を試験す
ることによって決定される標準測定値と比較される。例
えば、前記の試験は９体のΔＧ［を除去シスデｔ１の動
きに悪い影響を及ばり他の疾患の試験として（ｊわれる
。 代って、この方法は身体から食細胞を除去し、ぞの有効
竹と敢ｕｌＦ！標識の侵１的グリコシル化最終産物を用
いたａｘ　ｖｉｖｏ操作速亀について試験することにＪ
、って体外的に実Ｍ−Ｊることができるさらに進んだ診
ｆ！ｌ’ｉ法は１１１１究中の動物の体内の食細胞の活
ｔ’ｌ化の状態の関数として病変の存在を測定Ｊること
ができる。このように、大食細胞１よある病変と関連し
て見い出されることが知られている１：＋ＩＡな放（ト
１線標識の後生的グリコシル化１ｄ終Ｒ物に露出され、
次に、食細胞が刺激の状態にあるかどうか、またくうで
あればその刺激のにλられる源に関して決定するために
、食細胞の刺激の状態が適切に展間された基へｔに対す
る比較にＪ：り観察された。こうして、体内の１４定の
Ａ　ａ　を三の６在は相当す６特定の病変を反映し、食
細胞の観察とその感受性および特定の後生的グリコシル
化最終産物に関りる４１１１激増加の測定は１！Ｉ定の
病変の存在を示唆１′る。 従って、成骨分離改良および動物体系からの後生的グリ
コシル化最終産物の除去の目標巨大分子法を提供するの
が本発明の１な［］的である。 優生的グリコシル化最終産物の結合、″取込みお、Ｌび
分解に対りるイの親和力Ｊｊよび可能性を増□すように
食細胞を刺激りることを特徴とする前記のような方法を
提供するのが本発明のその土の目的である。 前記のよう＜ｘ　Ｚｊ法で１（／ｌ的グリニ１シル化最
終産物を結合し、取込み、分解するように食細胞を刺激
することのできる薬剤を提供するのが本発明のなａ３ｃ
の上の［目的ぐある。 蛋白［化の不利な結果を処ｔするための治療法を提供す
るのが本発明のなおぞの上の目的である。 他の目的や利点は次の説明図に関して進行するｖｃり説
明の化察から（の技術に熟練した石には明らかになるで
あろう。 本発明に従って、ζＵ白白花老化処冒し、それによって
ぞの不利な影穴を阻止するために、動物にに　ＧＪろ後
！［的グリ薯シル化最終産物の除去を促進りるための組
成物および関連の方法を開発した。 特に、中核細胞立入食細胞のようｈ食細胞は、後生的グ
リコシル化ｉＪ終産物を識別し、結合し、分解りるこの
ｃ１細胞の能力を促進・する１つ以−Ｅ−の薬剤まＩこ
；ま刺激化合物に露出さける。 本発明は、中核細胞ｗ大食細胞がグルコース媒介の障害
を受け、後生的グリニ１シル化生成を受１ノだよ１分子
を識別し、除去し、分子Ｒする能力をｂつという観察結
果に基づいている。１５に、（ｉ核Ｉ１１胞と大食細胞
はその識別、除去および分解機能を細胞に行わせるグル
コ１−ス変史高分子に対゛する特定の表面リレブタをｂ
つことが測定された。 グルコース媒介のＣ１１ｎ質の変化に関する以前の研究
は、グルコースはこのようｆ、ｊ高分子ど反応しＣ１そ
の正常な機能を妨げるイの性質の変化をムたらＪことを
ｌｉ［した。グルコースは酵素の助ＧＪなしに１）に蛋
白質のアミノニスと反応し、その結果、架橋結合される
かあるいは他の蛋白？′ｉに共心結合されで、それにに
っＣぞの蛋白質に１市イくされることが知られている。 特に、グルコースは先づ蛋白質のアミン基と反応し、可
逆的な５ｃｈｉ［ｆ塩基付加物としで知られているもの
を生成り−る。次に、その付加物は転位してにり安定で
あるが、なお可逆的なＡｍａｄｏｒｉ物買を生成する。 ７ｆｕ初にグリコシル化される蛋白質であるＡ　ｌｌ１
ａｄｏｒｉ物質は次に、ある場合には蛋白質の第２のグ
リコシル化アミノ基との反応を含むさらにその先の反応
を受け、それによって架橋が生成される。この反応の結
果は２つのグルコース部分とその７ミノ基の本発明化の
１人により以前に＆Ｖ認され、ＦＦＩとされた化合物へ
の転換である。 この化合物は黄色および蛍光の外観を示す後生的グリニ
１シル化最終ｄ物の複合体族である。この化合物の存在
はグルコースと蛋白質のｉｎ　ＶｉｔｒＯの反応によっ
て確証され、できてさた塊は色が黄色から茶色になるこ
とが認められる。これらの後生的グリ′：１シル化最終
産物は、ＤＮＡを含む蛋白質や他の高分子と糖の反′応
から１７！ｉ￥ｉに生成する。 Δｍａｄｏｒｉ物質はまた第２のグルコースとム反応し
て、イれに上つく生成する２手にグリコシル化された誘
ｎ体は次に３１グリコシル化蛋白質のアミノ（と〆１１
＆に反応して、後生的グリコシル化ＩＡ　４４産物（Ａ
ＧＥ）を生成し、（れによって蛋白質を結合りる。この
現象１よ“トラッピングパと名づ（」られ、：トンーグ
ン、通常不溶性の構Ｊ２ｊ的蛋白買。 およびアルブミンとＩＱＧをもつ］ラーゲンと同様に循
環しＬいる可溶性の蛋白質である低密瓜のリポ蛋白質の
反応により　ｉｎ　ＶｉｔｒＯで一１明された［（ｒｏ
ｗｎｌｃｅ　１Ｍ９、他、ｌ］ｉａｂ員Ｏ３、Ｖｏｌ、
３４．１）Ｐ。 ９３８−９４１　（１９８５）　；　［３ｒｏｗｎｌｅ
ｃ　、　Ｍ、　、ｐｏｎｇｏｎ、Ｓ、　、Ｃｅｒａａｉ
　、Ａ、　、ＬＪ、　［ｘ＋＋、　Ｍｅ（１，、Ｖｏｌ
。 １ｈ８　ＰＰ、　１７３９−１７４４　　（１９８３）
を見よ。 グルコース媒介による４１ｉ白質の架橋と［−ラッピン
グは期間の間多くの組織や器官の病変に導く身体の通常
のプロセスである。蛋白質の内部架橋４Ｉこは２つのｇ
Ｉ４Ｉ４接置白質橋は構造蛋白質の機械的性質を変える
。架橋とトラッピングの結果としての免疫学的＊　１ｌ
ｉｉ素的、物理的および他のｆ［！１の変化し知られて
いる。０例えば、糖尿病の血液にＪ３ＬＪる異常に高レ
ベルのグルコースは架橋と捕そくされた蛋白質の生成の
異′ｔ：１な増加をもたらし、これは病気の罹病埠″と
死亡率の増大の原因となることがあることが前提とされ
ている。 捕−ξくは病変に脣さうる異常な９謬の蛋白質の異常な
増強をもたらり。グルコース媒介の架橋および捕イくに
Ｊ、って引さ・起されるとにえられる病変の例はリポ蛋
白質と他の血漿蛋白質の冠状動脈壁への何名ど、イの結
末としての６ｈ脈遮断や心臓ｆｌｆＩを引き起１蛋白質
亡ニルステロールの増強を含む。Ｊｉ’、１様に、動脈
壁にお【１６］ラーグンの架橋はその４Ｍ造を強化して
、循環的問題を引き起１ことに五っＣ動脈壁の機械的ｆ
／ｉ買を疫化させる。捕ぞくや架橋から起る身体や腎臓
の比較的小さイｚ血管の基礎膜の肥厚は抹消血管疾患や
腎臓基礎膜の肥θを来たし、ぞの結果、腎臓機能の喪失
をムだら１（腎臓病）。さらに、脳の血管壁の肥厚は血
流減退を来し、老衰の始まりとイｉる。 皮膚における］ラーゲンや他の高分子の架橋は糖尿病Ｍ
眼、Ｉ：；　Ｊ：び１Ｊ１に水晶体や網膜の血管に対す
る障害、１股者の場合番ユ祝力喪失と最終的には自目標
巨大分子とへる、にＪハＪる変化と１１１１様に、しわ
や他の変化をｂたら”Ｊ　１１結論として、グルコース
はＤＮＡと反応することが知られてＪ３す、実験にＪ、
す、八〇Ｅ−ＤＮＡが細菌１こおいて突然変光を誘発覆
ることが証明された。 萌に触れたように、食細胞は、特定の化学構造を識別し
、それに結合するその表面上のリレブタによって異常な
８分子を識別して、除去することがぐさる。このＪ、う
にして、異常な高分子が識別されたら、食細胞Ｉ、ｔ　
、ｉ”５分子あるいは異常な（’に分子を含む粒子を内
部移行し、次にそれを分解りる。 ある場合には、内部移行でき’、ｘ　ＧＪれば、食細胞
はさらに酵素ｆ）他の因子を分泌しＣ１分子または粒子
を細胞外で分解するのを助Ｃノる。（ｂつＧＪられた蛋
白質が除去されたら、正常な組織の新しい成長が続いて
起り、冒された部分の正常なｎ能が山開′する。 体内の食細！泡１′、１いろんなりイブの白血球から仕
る。白血球の１つのタイプ、中核細胞【、１骨１＆ぐつ
くられ、一時的に血中を循環し、その後、−ｅれが大食
細胞となる組織に入る。中核細胞としであるいは大食細
胞としての食細胞のある分子への露出はこれらの分子に
（・１するリレプタの細胞の表面の外観を調節りること
がある。 このように、本発明は、ｊｐ核細胞や大食細胞を含む食
細胞は後生的グリコシル化最終産物に対するその識別と
親和力に関１Ｊるこれらの細胞の可能性、Ｊ３Ｊ、びこ
れを分解する可能性を４進するある薬剤または刺激化合
物への露出によって修正されるという発見に基づいてい
る。特に、これらの細胞のある刺激化合物への露出はこ
れらの細胞上に展ｖ；１されるリレブタの数を増し、そ
の結果、後生的グリ−」シル化１！終産物の識別と分解
に関してこれらの細胞の能力と親和力を増すことが認め
られた。 従って、本発明のｈ法は一般に、身体や特にその食細胞
を九り性化ざｕ１後生的グリコシル化を受ＧＪたターゲ
ット高分子のその識別と除去を増加さけるある薬剤ある
いは刺激化合物に動物を露出ざＵることからなる。 本発明で有用な適当な刺激化合物は単独でまたは担体に
結合さＵて用いられる天然よｌこ【、Ｌ合成的に生成さ
れる後生的グリコシル化最終産物を含む物質からなる。 適当＜Ｋ　Ｍ１激化合物ｔ３１蛋白質アルＩミンのよう
な担体蛋白質に結合された化合物ＦＦ１を含む。刺激化
合物はまた、例えば、グルコース、グル：１−スー６−
りん酸］−ステル等のＪ、うな糖と蛋白質または他の高
分子の反応によって生成される合成的に誘導されろ後牛
的グリニ１シル化ＩＬＡ終産物からなることもある。こ
の反応生成物は単独で使用されるか、あるいはＦＦｌ−
アルジミン複合体と同じ様にして担体と結合される。、
　１４体は炭水化物、蛋白質、合成ポリペプチド、脂ｒ
’ｊ、ｉＩ物−適合性の天然および合成、ＦＡ脂、抗原
およびイの混合物からなるグループから選択される。 ここで用いられているにうに、゛抗原パという用語は、
蛋白質やＩＩ？質両分、細菌、ウィルスおよび他の同じ
起源と作用をｂつ他の微ケー物の、」、うな病変または
他の器質的廃疾の開始をもたら一！Ｊ　ｆｉ　Ｉ＝ｆ’
の侵入性刺激物を含む。 刺激化合物ｔよまた食細胞を刺激して、後生的グリコシ
ル化最終産物に対してその活着を増Ｊ他のＬノ１ンｂ含
む。 刺激化合物として働く特定のモノキンは腫ｇ！壊死囚了
（Ｔ　Ｎ　Ｆ）どして知られている蛋白質とこの発明省
の１人により発見され、中部され、“力ククｆン″と命
名されたその変種から成る。この物質番ま東独あるいは
他の刺激化合物と組み合わせ（投与される。 さらに、本発明の刺激化合物は下で“Ｊｔ　ＩＩＩ　ｍ
剤°゛として確認された物質と組み合わせて投与される
。 刺激化合−物の共刺激剤とのＪｔ投与各よ前者の活性を
ＯＮ　ｉ！！：　することが認められた。適当な共刺激
剤はｌ　ｎ１ｅｒｌａｕｋｉｎ　−１（夏Ｌ−１）およ
びガンマーインターフェ〔１ンのような七）キンを含む
。 アルブミンのような［４体分子に結合された１−Ｉ　■
から成る刺激化合物の調製に関しては、合成化合物「［
Ｉ−へキリノン酸がその調製に用いられる。このように
、水溶性のカルボジイミドが「［Ｉ−ヘキリノン酸の酸
部分を蛋白質の７ミノＪ、ｔに附加するのに用いられる
。この配合体（よ、粕製復に、大食細胞を刺激りろため
に　１１ｖ目ｒｏ　（’用いられる。／＋　１１．’１
間から２４１１．’１間のイン−１−Ｌべ一シニ１ン後
に、この大ｔｔｍ胞はにり活発にＡＧＥ−アルブミンを
結合し、内部移（ｊし、分解りる。 従つ（、本発明は動物にＪ３ける後生的グリニ１シル化
最終ＩＪｒ−物の増強の不利な作用を処］１９７す゛る
ことを追求した各種の治療法を含んでいる。動脈の３１
令あるい＄ユ糖尿病関連硬化、皮膚のしわ、動脈連所お
、Ｊ、び糖尿病性網１１２および腎Ｐｉｉ障害のよう＜
；　ｊｉｉ状は全てが後で１゛的グリコシル化最終Ｒ物
が量的に増大するにつれて起る過剰の増強またＬＬ　Ｉ
＋Ｉｉぞくから起る。従って、少なくとし一部は、体内
の後１的グリコシル化最終産物の訃枯によっ（引き起さ
れる病変を防ぐことを求めた治療法は、身体を刺激して
イの後生的グリコシル化ム１終産物の識別ど除去に対す
るそのｒ　ＰＩを増大さけるために直１ａにあるいは適
当な製剤組成物の形Ｃ・の木工と明の薬剤の投ちから成
る。特に、その薬剤（ま、体内のＱ　Ｇｆｌｌ胞を刺激
して、での除去がより大きい速瓜と有効性で起るように
後生的グリコシル化最終産物の識別と除去に対Ｊるその
枯れを増大さＵるために投与される。？５別の投与ブ１
コｌ−」／Ｌ／　ＧまざＪ：ざＪ：であり、資格のある
医名立獣医の１ハ１業医の指示によつ−（決定される。 従って、本発明Ｇｅｔまた発明の治療方法で用いられる
適当＜＜製剤組成物ら含み、適当な製剤的に受容できる
担体においで調製される本発明の薬剤から成る。このよ
うな担体は知られており、組成や投与方法、例えば経口
的、非杼〔ｌ的など、にＪ、す１５瓜がさまざまである
。 木光明Ｇ、Ｌ、＊細胞の活ｔ’ｌ　Ｉ”＝これによって
発見された刺ゐ化合物との関連を確証する次の例：Ｊ的
実施例やデータのと察からよりよく理解されるであろう
。 ”ＩＩ 次に続く研究において、後生的グリコシル化最終産物の
クリアランスシステムのｉｎ　ｖｉｖｏ存在が確証され
、研究されて木（Ｊｌ究のλ目Ｖが確立された。 拝ｍ 臣肛Ｍ’正常で健康な成人のボランティアからの人血（
２，０ｍｌりをヘパリン加ブユーブに集めた。血漿と軟
層の除去に続いて、ＲＢＣをＣａ２４と１２＋のむい１
！ｉｇ緩衝塩類（Ｐ［３Ｓ　）　、ｐｌｌ　７．４．１
０容らｔ　＜”　４回洗浄し、ＤｕｌｂＱＣＣＯの修正
１’：ａｇｌｃｊｐ。 地に再懸濁さＵだ。 オーンニン°　　　Ｃ“ゞ〜：Ｉ）＋供給体からの１５
％ＲＢ　Ｃ懸濁液０．１ｄを高力価抗−Ｄ血清０．５７
に加え、３７℃で３０分間インキ１べ−１−シた。イン
↑Ｌベージ」ンの後で、細胞をＰ　Ｂ　Ｓ　（ＧＩＢＣ
Ｏ）で３に弓洗い、［）ｕｌｂｅｃｃｏの修正Ｅａｇｌ
ｃ培地３３−申に再懸濁ざＬ！　１．：。 Ｆ　Ｆ　ｌ　−Ｒ１３Ｃ−’　：　＃！ｒ殊’、ＪＫｆ
ｌｌ生的グリコシル化最終産物（ＡＧＥ）（２−（２−
フロイル）　−４（５）−（２−フラニル）−１Ｈ−イ
ミダゾール〕−へ−１゛リノンＭ（１＝Ｆｌ−１−１Ａ
）は前記のようにして装〕Δされ／；ｌ：　　（Ｐ　　
ｏｎｇｏｎ　　他　、　　ＰＮ　　Δ　Ｓ　　（１９８
４）　　Ｖｏｌ、８１、　　ｐｐ。 ２６８４−２６８８）。簡単に言うと、ジ、４−１リン
／水３：１のフリルグリＡキリル水化物（１０ｍｍｏｌ
）を６−アミンへ−１−、ｌナノン酸（１５１１１１１
０１）とトリエチルアミン（１５ｍｍｏｌ）で処理し、
２５℃で１時間撹拌した。 儂アンモニア水の添加後に、この混合物を５％Ｎａ１ｌ
、ＰＯ４で稀釈し、Ｃｌｌ２Ｃｊｚで抽出し、ブライン
で洗い、活性炭と一３Ｏ４を通して濾過した。粗生成物
をシリカゲル士の中Ｌ１−クロマトグラフィーｔこより
精製し、ス１へ［１−色のフレークとしてＦＦ１−１１
Δがｙ）られた（１１１．　Ｐ、　１０５−１０６℃）
。新たに洗浄したノーマルＲ［３Ｇを１０　ｍＨの水溶
性１−シフ■へ一１シル−３−（２−（４−［ルホリニ
ル）−１デル）−カルボジイミド（ＣＭＣ）のある場合
とない場合とでＰ　［３Ｓ中にＦｊ懸濁さｔ！　（Ｖ　
１ａｓｓａｒａ、仙、（１９８５）　、　Ｖｏｌ、８２
、ＰＰ、　５５８８−５５９２）　、コｔＬにＦＦｌ−
Ｈ△をいろいろな濃度（１０−１０（ｌμＭ）で添加し
た。混合物番４１室温で１時間連続的に混合しながらイ
ン１」べ−１〜した。ＰＢＳ中にＲＢ　Ｃ甲独あるいは
Ｒ１３０とカルボジイミド（１０１１Ｈ）を含む甲す混
合物を対照として同様に処理した。３回洗浄後、細胞は
ｌ）　Ｂ　Ｓ中の１１１１）Ｉグリシンに再懸濁ｃ５ｔ
！、３０分間インキュベートさけた。ＰＢ’Ｓで３同洗
浄後に、細胞は中核細胞に対して　１００の過剰比ｃａ
作川用定前にＲＰＭＩ中にｔ％濁さＵｋ。 ノリ」シル　−１＜ＢＣ２゛″門：非＾７素的にグリニ
］シル化された赤面法を製ｆｉするためには、グルコー
ス、グル：」−スー６−りん酸１ステル、４−シＵ−ス
およびアラビノースをＤｕｌｌ＋ｅｃｃｏの修正［、ａ
ｇｌｃ培地中に　１００　ｍＭ漠度ぐ懸濁させた新しく
月１岨した正常な人界血球に加え、室温で４８１１５間
インニ１ユベートした。糖の添加され＜２いＲ［３Ｃ懸
濁液を対照細胞として用いた。インキュページ三１ン後
に、細胞をＰ　［３Ｓで３瓜洗浄し、ＲＰＭＩ中に懸濁
させた。ΔＧＥ−［１３８△は、ブ［１テア−Ｕ阻害剤
（１）ＭｓＦ　１．５　ＩＮ　、　［Ｄ−ｒ△０．５　
ｍｌ　）と抗生物質（ペニシリン１００μ／−、グンウ
ミシン４０ｆｆ１９／ｄ）の存在で３７℃で６週問５０
１１１８グル］−ス中で生血循アルブミン（【３ＳΔ）
をイン＝１１べ一１−りることによってＶＪ道された。 、　Ｖ　Ｉａｓｓａｒａ　（ｌ！ｉ、阻止を見よ。 人コ且１配置り胞コグＪ１１Ｌ：　　１００７！の新鮮
な人血液からの軟層を塩類１ｍＨ１二［）１Δ、ｐＨ７
，４、テ２　瓜ｍ　ｎＪし、中核細胞を前記のようにＦ
　１ｃｏｌｌ　−Ｐａｑｕｅ勾配（・の遠心分離により
血液の池の成分から分離しｋ　　　（Ｇｉａ＋ｃｌｉａ
、　　　−Ｍｃｙｌｉｎｏ他　　（１９５０）　　　、
　　Ｊ、　　　　１１１１１Ｈｎ、　Ｍｅｔｈｏｄｓ、
　Ｖｏｌ、３３、Ｐ、１）。中核細胞は冷１で１）Ｍ　
ｌ　１Ｇ４０　（ＧＩＢＣＯ）中で３１復洗ｔｐシて、
血小板を除去し、細胞を正常へ人血清中で１０％にした
ＲＰＭＩ中に懸濁さけた。これらの実験に用いられる中
核細胞の懸濁液を得るために、前述のｐｏｒｃＯＩＩ粘
ｙＪ法を用いた（　Ｇ　ｉｍｅｌ　ｉＱ−Ｍ　ｃｙｌ　
ｉｎｇ同上）。 ｐ１３ｒｃＯ１＋は１Ｏ−ＸｉｌｉｌＰＢＳの０．ＩＶ
ｏｌ、の添加により秀張にした。ｉ常な人血清１ｍｌ、
ＰＬ３Ｓ１４．７ｄ、および著張ｐｅｒｃｏｌｌ　２２
　ｎｄｌを無菌の５０　ｍ遠心分離管中で混合し、５ｏ
ｒｖａｌｌ　３３−３４０−ター中て・５℃ぐ２５分間
１８，０００　ｒｐｍ　′ｃｎ心分離した。 中核細胞懸濁液５ＩＲＩｌをイ１−じてくる勾配で層に
分け、管を振ＯＪツるバフラ１−型り−クー中で５℃で
２５分間１．５０００で遠心分離した。得られたバンド
は光散乱により検出し、単核＠胞に相当りるバンド１は
移動さけ、ねじぶた式デフ［１ン・ジャーの中で［）Ｍ
　Ｉ　　１０６／ｍｅて・１２５％人血消と一緒に５％
Ｃ０２中で３７℃で５−７０間１８養した。細胞１台性
はトリパンＪルーｉｌｌ除（Ｇｉｂｃｏ　Ｌａｂ、）に
よツＣ評価され、組織−培養液塑１７１表面上の食細胞
の甲板培養効率を血球ｌｉｔにＪ、リイ」看前とｆＮＪ
着後に測定した。使用ＱＬｌｉｉ＾に際して１０６の１
１１核細胞の部分標本を前以てきれいにした丸いカバー
グラスを含ムｉｔｔ菌（１）　ヘｌ−ＩＪ　ｔｉｌｌ中
に薄くかぶＩＣ５％Ｃｏ２１１Ｊｒ３７℃で２１１．１
間インキ」ベートした。 ｍ１ユ且尤：　Ｒ１３Ｃ添加前に、ＩＬ！核細胞培た液
をＲＰ　Ｍ　Ｉ　１６４０で２度洗った。いろんな赤血
球懸濁液を単核■１胞に対して１００（Ｒ多く各々のく
ぼみに添加し、３７℃で５％ＣＯＺ中で２１１５間まで
インキコベートした。その段階で、カバーグラスがくぼ
みから取り除かれ、非粘着物質を除入りるためにＲＰＭ
Ｉで３回洗浄され、きれいなくぼみに置さ、Ｐ　Ｂ　Ｓ
中で３０分間１２５％ゲルタールアルデヒドでｌ’Ｊ定
した。摂取された赤血球から表面イ・１看み血球を区別
するためには、低張液（＋１２０で１：４に稀釈された
Ｐ　Ｂ　Ｓ　）を選んだくぼみに１０炒１：ｔ１加え、
次に固定剤を加えた。検定Ｖ、宋を読み取るだめに、２
小のカバーグラスを４０倍の位相差顕微鏡を用いてル１
数した。３つＬス上のに（ｆ意に選ｌυだ視野から少な
くとム３００の単核細胞がくぼみへに語数された。デー
タは１００１ＩＪの甲核細胞当りのｊ［の単核■１１１
４（（・するまたは摂取された赤血球をもったＩｌｌ核
細胞）の数（結合自分率）として表現された。摂取−イ
ンデックスはまた■の単核細ｉ抱当りの摂取されたある
い４よ（＝Ｊ　Ｗされた赤血球の数としてし決定された
（　１１１ａｎｃｏ他（１９７Ｇ）、Ｊ。 Ｅ　Ｘｐ、　Ｍｅｔｌ、、Ｖｏｌ、　１４４、Ｐ、　１
り３１　）。 Ｆ　ｌ−１−Ｉｔ　ｎ　Ｃ１／　２　／ｌ　　°７ｉ　
：　Ｆ３　ａｌｂ　／ｃ向系交配マークスを心臓穿（１
１１によって出血させ、約２．０−の血液をとった。１
涛、血球【、１大吊の２１ｉ１［ｉの陽イオンのむいＰ
［３Ｓで洗い、ＩＯＩＩＨＣＭＣの存在で前記のＪ、う
に［Ｆｌ−１１Ａと結合さＵだ。ざらに、（〕Ｍ　Ｃ単
独あるいはｒ”　Ｂ　Ｓ甲独申でインキＳＬベートした
ＲＢＣを３・１照どして用いた３、その結末全ての細胞
懸濁液は０．２　ｍＣｉ　ｔｈ２（”Ｃｒ　）　０４を
Ｒｆ）　Ｍ　１−ＩＧ４０１’ｉ地中に５０％詰めたＲ
　Ｂ　Ｃ２ｍに３７℃で１１１１間加えることによって
５１　Ｃｒ　ｖ−標識した。標識した細胞は結合しくな
い同位元素を除ノ、するために少なくとも４回洗っ／、
＝０１２匹の１３ａｌｂ　／ｃ　−Ｎ／ウスに次にＲ［
３Ｃ懸ｍ　浩２００１１．１を静脈内注訃１した。各々
のサンプルを３１！のＢａＨ＋／Ｃマウスに投与した。 適当なｎ、ｌ、間間隔でマウスに出血さけ（０，２ｄ）
　、敢躬能レベルを９１数によって測定しＩこ。 結　　　　　末 赤血球の思人質、脂質合１．Ｌ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏの中
核細胞イン−１１ベージ」ンの７１１目に認められた。 Ｆ　ｌ−’　Ｉ　−、ｌ−＜１３　Ｇの思人質、脂質合
と■ンドシ１〜−シスは３０−４！□１分内に完了し、
その間にＡブソニン作用を受（）た細胞は１５分以内に
最大の結合をした。Ｆ　Ｆ　ｌ−結合１’＜　ｔ３　Ｃ
の培養した人中核狽胞どの１１１′ｉ間のインキ１ベー
シヨンの終りに、食作用自分率ど食伯用、インデックス
を計１＋ｌｉ　Ｌだ。１図に示されるＪ、）に、ＦＦＩ
　−１ｉＥ請、ＩｆｉｌＬＪＩ　（！ｌ！１　％　）　
とｌ　Ｑ　Ｇ−’ｆｊｊｌ覆Ａ血球（１０％）の赤血球
食作用％はス・１照のｌ）　Ｂ　Ｓ処理細胞〈４％）の
場合よりずっと高い。間挿に、［１−１−処理ｌで［３
Ｃの食作用インデックスｔよ皇１゛１・１；１′な対照
（１，２）に比較して非常に上背した（３゜４）。 Ｆ　Ｆ　Ｉ　−Ｒｌ’３　Ｃの人中核細胞との相互作用
の特巽性を確認りるために、赤血球の結合と摂取がＭ　
ｃｔｈｏｄｓ　（方法）　　（Ｖ　１ａｓｓａｒａ他、
虹）で述べられているようにして装）告したＡ　Ｇ　Ｅ
　−Ｂ　Ｓ八がない場合とある場合に認められた競合実
験が行われた。２図に示されるように、５００μにＪ／
ｄのｊ度でＡＧＥ〜ｌ（Ｓ　Ａを添加Ｊると対照の７０
％以１：　ｂ　ｒ　Ｆ　Ｉ　、−Ｒ１３Ｃ結合を抑制し
た。対照的に、ＡＧ［三−＋３　Ｓ　Ａは最大ＣＩＯ（
Ｉ　Ｍｌ／ｄ　）　ＦもＡプソニン作用を受けたあるい
ｔまＰＦ３５処理赤血球を抑制しなかった。これらのデ
ータは、ＦＦＩＩ■赤血球は特にＥＬＳ核綱胞ＡＧＩヨ
ー結合部位によって識別され、結合されることを示して
いる。 後生的グリコシル化最終Ｐｔ物（ＡＧＥ）生成は、グル
コース、グルコース−６−りんＭ１ステル、ｔシロース
およびアラビノースのような異なった糖を１００　ｍＨ
のＧＪ度で含むＤｕｔｂｅｃｃｏの修正［ａ−リＩｅ　
Ｉｆ’、地中で室温で４８時間インキュベートすること
により赤血球表面に１４導された。この期間の終りに、
培地は細胞溶解のシ［随は見られず、赤血球自体は顕微
鏡的に４．Ｌ対照とは区別でさ−ないように見えた。Ｒ
１へにより説明されているＪ、うに（Ｃｈａｎｇ他の方
法、（ＩＱ８５）　Ｊ　、　Ｂ　ｉｏｌ、　ＣｈｏＩＩ
ｌ、　。 ＶＯｔ、２６０％ＰＰ、　７９７０−７９７．１）　、
糖の中でインキュベートされた全ての細胞−よ、対照と
比較して、イーの細胞膜−［にかなりのがの後生的グリ
コシル化最終産物の生成を受【ノだ。この点て・は、仝
ηのグループからのＲＢ　ｃが正常な人の中核細胞食作
用検定を行うことができた。３図に示されるＪ、゛）に
、グルコース−インキュベートＲ１３Ｃは１５％の１．
′。 合および摂取を示し、Ｇ６Ｐ−処理ＲＢ　Ｃμ、対照の
Ｐ　Ｆ３　Ｓ　−ＲＢ　Ｇの６％の結合および摂取に比
較して、２６％で・あった。ずっと低い結合レベルはキ
シ１コースとアラビノースと前以てインニｊ　二ｔベー
トした赤血球で認められた（各々　１５％）。 Ｆ　Ｆ　Ｉ　−Ｈ△のような八〇Ｅによって修正される
地元の赤血球はｉｎ　ｖｉｖｏで大食ＭＩ胞ににり識別
され、「１臓および牌臓人食細胞に存在Ｊる同じへＧＦ
−リレブタによってノ（修正細胞より速く循環から除外
されるかどうかを決定するために、１３　ａｌｂ　／　
Ｃｇｉｌ系交配マウスの赤血球をＭｅｔｈｏｄｓ（方法
）の中で述べているようにＦＦｌ−１（Ａとと乙にか、
ＰＢＳ甲独で室温で１１１５間処理した。 追加の対照のように、マウスの細胞をカルボジイミド（
１０ｍＨ）で処理した。５１Ｃｒ−標識に続いＣ１細胞
の３つのグループ全てを右性生殖？ウスに静脈内にＮｉ
ｌ入し、赤血球放射能を２０口間しニターした、ｔ、Ｉ
−用の１藺間以内に全てのグループからトリ収される最
ＶＪの放Ｑ−１能の約９％が、最初の２４１に１間以内
に０．／Ｉ％に減少するために、恐らくＣｘ　ｖｉｖｏ
処１１４＋にＪ、−）で起る外ｆｆ１ｌ溶血にＪ、す、
血清画分中に回収された。４図に示されろように、１Ｆ
Ｉ−処理赤血球の半減期は、対照の未処理細胞の約２０
１１の゛ｒ減＋１１３に比軸して、７０に減少した。　
１ｆｆｉ＋様に、ノＪルポジイミド甲独で処１！ｌ！　
した細胞は始んど正常な目１ｖｉｖｏ　＝＞−スをｂつ
ていた。 ！、　　　察 −Ｖ記の試躾ｔ、１１）殊な中核細胞／人食細胞すレブ
クににるＩＪ２１的グリコシル化ｈ１終産物（Δ〇　Ｉ
Ｅ　）の識別に関する以前の観察結果、および化学的に
付加するか烈１１２０人細胞の表面にｉｎ　ＶｉｊｒＯ
でり成されるこのイ１加物が正常り人のＩｌｉ核Ｓｉｔ
胞により細胞結合と摂取を誘々１：きるという現Ｏのム
１随を拡張している。非修止細胞に人ｎ；に細胞人面十
にＡＧＥが存在りるど、牌１ｔｉｉ　によびｎ１臓の食
細胞によるこれらのへＧＥ−細胞のより速い除去により
、ｉｎ　ｖｉｖｏでのその牛Ｕ期間を知（りる。このに
うなｎ　ｉＩ　ｉｌｌ胞の識別と除去の機序は、八〇Ｆ
−ＢＳへの超過剰の存在で結合する八Ｇ　ＩＥ−赤血球
のみの競合的抑制によって示されるように、１！１定の
大食細胞Ａ　Ｇ　Ｅ−リレプクを通じで媒介されるとと
えられる（　Ｖ　１ａｓｓａｒａ他、虹）。 年令とともに、非酵素的にグリコシル化された蛋白質ｔ
よ通常さらにｒｉｉｌＥと転位を受【ノ、正常の人硬膜
」ラーグン中に見られるように、ΔＧｌ：ので１成の増
加をもたらｔ　（Ｍ　ｏｎｎｉｃｒ他、（１９８４）　
１１　ＮＡ　３　、　Ｖｏｌ、８１、ＰＰ、　５８３−
５８７）。１つの特殊な最終産物、Ｆ　ｌ−Ｉ　ＧＪ　
ＩＦ常／ｉ人血ｒ１１アルブミンおよびグＵビンについ
て　ｉｎ　ｖｉｖｏで確認された（Ｐｏｎｏｏｎ他、（
１９８４）ＰＮ八へ、　Ｖｏｌ、８１、ｌ’、　２６８
４　）。八Ｇに−リレブタ識別は八ＧＥ（１）ＦＩＩと
ともに増大し、従って、衰えていく高分子の除去に対す
る峙間依（ｆ在の信号を優先的に識別することができる
（　Ｖ　１ａｓｓａｒａ他、回」二）。 赤面Ｒ膜／ｌｉ白質の非／ｌ？素的グリコシル化は先づ
仝ての土な蛋白質バンドのリジン残７．４ｔ′無に別に
起ることが以前に証明されており、（Ｍｉｌｌｅｒ仙、
（１９８０）　Ｊ　、　Ｃｔｉｎ　Ｉ　ｎＶｅｓ（、Ｖ
ｏｌ、Ｇ５、ＰＰ、８９Ｂ−９０１）糖尿病の場合に（
Ｉ　ＣＮ進されるが、溶血性６血の場合には減少する。 これらの所見は、白液グルコースによる場合以外の膜蛋
白質の修止ｔ、Ｌグル］−ス淵度だ＃ｊｅなく、赤血球
（「令に依存することを示唆している。ｎｒｆ記のｊ：
験は、ＡＧ＋二が正常な烈傷の赤血球に存在し、これは
中核細胞７／人食細胞ＡＧ［−リレプタによる循ｌ）か
らの赤血球の毎［１の除去の一部原因になっていること
を証明している。 さらに、Ａ　Ｇ　Ｅ蓄積は＋！７＆グルコースレベルへ
の露出によって促進り゛ることがでさ、これは引き続い
（Ｉｊ核ｌＩＩ胞ΔＧＦ−リレブタ結合増加とグルコー
ス婬正赤血球のＩＰ、取増加をもたらし、これ【、１糖
尿病にＪ３いて適疫に短くなった赤面法生存にある役割
を鵠じることがある。（Ｐ　ｃｔｃｒｓｏｎ、　Ｃ、〜
ｌｉｔ！！、（１’）７７）ΔＮＮ、　　Ｉｎｔ、　Ｍ
ｅｄ、、Ｖｏｌ、８Ｇ、ＰＰ、　４５２−４２９　）グ
ルコースとグルコース−６−りんＭＪＴスプル処理細胞
の間のみ血抹結合の違いは生成される八〇Ｅの紺が多い
ことによるものと思われ、これμグルコース−６−リ１
． ギ１ベージ」ン混合物中にＪ、り反応性のある聞１ｚ構
造の率がｎいことによるものである。驚いたことには、
生成されるＡＧＥの吊によっで示されるように、キシロ
ースとレーアラビノースは何れｂグルコースよりし蛋白
質７ミノ駐とにり速く反応することができる１）れども
、正常な対照細胞以上の結合と取込みを誘轡しなかった
。この減少番よさらに先の（１１１究を正当化ＭるＧＪ
れどｂｌそれは恐ら＜ＡＧｌ＝あるいは他の単核細胞リ
レブタによって識別されないグリコシル化生成物の生成
によるものぐあろう。 ｔ″　　　　　　　　■ 以下のーλルの実験は、最終産物（ＡＧＥｓ　）の取込
みおよび分解を刺激するように食細胞を刺激Ｊる薬剤の
能力を測定するために行った。 そこで、上記の実施例■にＦＬ！載したのと同様の方法
を使・）で多数のＡＧＥＳを調製した。まず、１”　Ｉ
Ｔ　１−１１八を上記の通り調製し、ヒトおよび牛のア
ルブミンの両方に多１１１に結合させた。水溶性カルボ
ジイミドを使って、「Ｆ夏−１１△のＭ部分をタンパク
質１の７ミノＭに結合させた。調製後、共役物を精製し
、その後、４・〜２４　［１．Ｉ間培養することによっ
てマクロフ？−ジを刺激１゛るために試験ｎ内で使用し
た。取込みと分解について観察する予定のＡＧＥＳを追
跡ＣきるＪ、うに適切に放射線標識した。次に刺激され
たマク【」）７ージを放射線椋識へ〇　「ｓにざらし、
次いで様々な薬剤にさらして試験を行い、これらの薬剤
が標識ＡＧ．ＥＳを取込みおよび分解するマク「」ノ？
−ジの能力に与える影−を測定した。上記の方法右よび
イれに続く考察（よ、前；ホのブラツク５らが使用した
ブ【１トー１ルに一致り゛る、１従 つＣ１第６図、１部は、ガンマ−インターフェロンが／
ｆＯしムい場合に、ある薬剤で刺激された後のヒト中球
にＪ：るＡＧＥ〜Ｉ　Ｓ　Ａの吸収を示し【いる。０．
１および０．２部ｇ／＃ｌｉ！の［ト１ーヒトアルブミ
ンは、対照（棒線Ａ）に比較して、取込みシス７ムに対
Ｊる刺激効果を右しくいた（各々、棒線１−およびＦ）
。「［：ｌ−生アルブミンｂ　４ｔｌ＋激を与える（棒
線Ｌｘ’、Ｆ’，Ｊ〕よびＧ’）、、万ンマーインター
フｌ［１ンのみ（棒線Ｃ）、またはリボ多糖のみ（棒Ｉ
’ｄ　Ｆ３　）あるいはインターフェロンー１のみ（棒
線Ｗ）では刺激効宋はない。 第６図、■部４．Ｌ、こうした薬剤が存イ１し、ガンマ
−インターフ１１コンが存イｉしくＣい場合のヒト中球
にＪ、るΔＧ　Ｅ−１３　３　Ａの分解を示しくいる。 Ｆｆ：ｌ−８８Ａ製剤はやや刺激をうえる（棒線Ｙ）。 第７図、１部には、ヒトガンマ−インクーラ１０ン１０
’Ｊ／ｄの存７ｆ下、同じ薬剤にＪ，る△ＧＥ−１３　
８への取込みにりλる刺激ｌＡ！Ｊ！を示しである。 これから明らかａＪ、うに、ガンマー−インターフ［ロ
ンは、０．０１．０．０２　、Ｊｊよび０．０５１ｔ’
Ｊ／１ｔｄｌのＦＦｌ−［３３△（棒ＦＩＩＮ、Ｏ，お
よびＰ）によって刺激が増強される。分解もこれらの薬
剤プラスガンマ−インターフェロンの存在下ひ強化され
る（第７図、棒線Ｖ）。 また、単球またはマク［１７Ｉ−ジ細胞ら、ぞの他のへ
ＧＥ−分子を結合、内在化および分解する能力が増強さ
れた細胞が結果的に得られる八Ｇ　Ｅ−１ｆ！体分子に
よって、刺激できることが証明された。八〇　Ｆ−１（
ｉ体分子もよ、例えばグルコースまたはグルコース−６
−ホスフｆ−トとアルブミンとの反応からｎ−られる。 反応生成物の精製後、ＡＣ［−巨大分子のΔＧＦ−アル
ブミン取込みは、上記（△）のように示される。ＡＧＥ
−［３ＳＡ　（グルー１−スー６−ホスフエートをアル
ブミンと６〜８週間培口して調ｌｌＩ！Ｊ）は、０．１
■／−でヒト単球によるへＧＥＥ−Ｏ８△取込みに対す
る刺激効果を右しており（第６図、棒線Δへ）、高濃度
ではやや刺激を与える（棒線Ｂ［’３およびＣＧ）。第
７図、棒線Ｓは、ガンマ−インターフ１０ンの存在下、
グルコース−６−ホスフェートから％Ｊ　ｉＱした八Ｇ
に−１３９八〇、５ｍ９／１ａｌｌがマク（−１フアー
ジ１こにる八〇　Ｆ　−１３Ｓへ吸収を大いにｉ＋ｌｌ
　’ａりろことを示している。低ｌＩＱ度では刺激効果
はわずかである（捧オ；ＩＱ　Ｊｊ　Ｊ、びＲ）　。 ヒト甲球にＪ、るΔＧ　Ｆ　−１３８Δの分解ら、ガン
マ−インターフ１［」ンの存る下、ΔＧＩＥ［３ＳΔに
よって刺激される（第７図、棒ｔｆＡＸ）。インターン
［［］ンがない場合、刺激はわずかぐある（第６図、棒
線７）。 マウス腹膜マク［１）ｉｊ−ジは、グルニＩ−スー６−
ホスフエートから調製した八〇　Ｆ−１３８Ａでやり激
された場合、八〇Ｅ’−１３８への増加取込みを示す（
第５１２４、捧ｆｌ　Ｇ　Ｇ　）。分解も増大する（第
５図、棒線ＮＮ）。先に述べた通り、マクロ７ノ・−ジ
むどの食ｉｌｌ胞ｔよ、マクａフ？−ジをノノケクｆン
（同’ａ　％７’＋−鮭瘍壊死要因）などのｔノキンで
処理したｔｔＨ古竹化して八Ｇ［−巨大分子を除去する
、ｊ、う刺激してｂよい。カククチンの４Ｍ　Ｘａ　Ｊ
ｊ　Ｊ、び’ｆ５　Ｍは、本発明との一人が前に説明し
゛（いる。カククｆ−ンは、３７３古流体１ｄ当り２０
ηの濃度でマク［ｊ）ｉ・−ジを刺激して八Ｇ［−受容
体を発現させ、へ〇Ｅ−巨大分子の結合、内在１ヒおよ
び分解を増大さ口る。マウスマク目標巨大分子フアージ
を２０　ｊＩ！Ｆ／ｄのカケクチン／’ｒ−ＮＦ（ガン
マ−インターフェロンなしに）とバに２４１１．１間前
培養し、次いで△ＧＥ−１３ｓＡどバに培みするとＡ（
：ｌｉ［−ＢＳＡ（アルブミンと反応したグルコースか
ら製造）取込みが４イアＥ　１９加りる（第５図、棒線
１：に）。また、分解す対照の５０％だ番り増加する（
棒線Ｍ　Ｍ　）。 同様に、−１令のヒト単球をカケクプンと共にガンマ−
インターフｘ　［１ンむしに２４〜４８時間前！８ｒＳ
リルと、Ａ　Ｇ　Ｅ　−１３８Ａ　（７）　Ｉｌｌ＜　
込ミＪ３　に　Ｕ　’ｔ＞解ははぼ２１８になる（第６
図、棒線Ｄ）。分解も増大する（棒ｊｆＡｌ）。 マク【１フアージを刺激しＣΔＧＥｓの取込みと分解の
能力を増大ざＵる薬剤の上記の例【ま、限定的なしので
はない。その他の薬剤には、さらに担体分子に連結した
合成特〜°シ的へ〇［Ｅｓ　、糖と巨大分子どの反応か
ら製造されるその他の八ＧＥＳ、およびマク１フアージ
を刺激してΔＧ［Ｓにえｊする能力を増大さけるイの他
のＵ）１ンがある。 また、ｈ法とし−（は、これらの薬剤と、体の八〇［除
去機＃１４により大きな刺激を香しく与えろことのぐぎ
るインク−シイ４−ンー゛１およびガンマ−インターフ
］［１ン雪の１つＪ、た（、１（れ以」−の共１・１１
激剤とのバ段Ｌ５がある。 δうに本発明の１つの実施態様では、マクロファージを
これらの薬剤で・生体外処理し、体内にしとりことがて
゛きる。１例えば忠との動脈Ｊｊ　、Ｊ二び静脈系に導
管を入れ（血液を体外へ取り出し、Ｋ＆”ｆｆに通し、
再び患者にしどりという体外＋ｆｉ＋液処１１１１を１
１つでもにい。この′３ＡｉＩ″ｌは、中球／マク■ノ
１−ジとの接触またはそれにきらすことにＪ、リイれら
を刺激しくΔＧ［−除去ｂ１横の活ｆ［を、ｉめる薬剤
を含ん（・いろムのとりる。１ざらに、薬剤を固定して
しＪ、いし、または血液流に入れてしよい。かかる体外
ＩＪ法は、ｌｉ独」、ｋは、上記のガンマ−インター７
＋　Ｉ」ンなど、方法を増強するその他の薬剤の！と１
とｌ＼の投′ｊど御粘に行うことかで−きる本発明の付
加的態様は、マクロフ？−ジへＧＥ浄化機構に与えるイ
ンシーｌリンの効果の観察に関Ｊる。血液中のインシュ
リンがｉ［常噛以上の動物は、増強したマク目ファージ
Δ（２１日浄化機構を有していることがわか−）だ、１
これは、動物にアロキリンをｔｌ　Ｃｌすることによっ
でぞのインシュリン製造膵臓１１胞を破壊・する実験質
、脂質物、または低インシ」リンレベルの遺伝的糖尿病
動物の両方で頴明された。両市とム血液グルコースレベ
ルは正常より＾い。第８図に承り通り、実験的誘発糖尿
病（ア０１リーン使用）および結果の低血精インシュリ
ンレベル（２５±６μＵ／ｍｌりは、正常動物（血清イ
ンク１リンフ４　ｊ：　２８１１Ｕ／ｌｎｅ＞と比較し
て、２　ｆ８のマク１１フアージとの八〇　Ｆ　−［３
Ｓ　Ａ結合活性を右していた。第９図では、遺伝的に低
いインシュリンレベル（８，２１−２μ（］／ａｉりの
Ｃ５７１３Ｌ／Ｋｓ　Ｊ　、　ｄ　ｂ／ｄ　ｂマウスは
、対照マウスにリマク■コフン・−ジへのΔＧ　Ｅ　−
１３８へ結合瓜が大きいことが明らかである。対照的に
、遺伝的インシコリン過剰症動物（Ｃ５７ＢＬ６．ｄｂ
／（１ｂ、而γ１）インシュリン〉３００μ”Ｕ／ｌｌ
１１！、第９図）など、血液中のインシュリンレベルが
高い動物は、対照動物に比較しで、マク１１フアージへ
のＡ　Ｇ　ＩＦ−［３８八結合活竹ｔよ約５０′兄低い
。この除去機構の抑制は、八Ｇ［−巨大分子の浄化が１
１℃十するために、否定的効果を有している。八〇　ｌ
″の分解（ｆｆ１１０図）は、インシー１リンレベルと
のＩＩ′□１１様の関係を示Ｊ。低インシ１リン症およ
びインシＪリン過剰症動物では両方とｂ等しく血液中の
グルー１−スがＳ１シ常に」＝　！ｊｌ　シ１こことに
？ｔ［しＪるのｆ、ＬΦ昔ぐある。 その他のマク［１フア一ジ受容体へのインシー１リンの
効果は周知であるが、これはへＧＬ受容体を調節するイ
ンシュリンの役２．１１の７ｂｔ初の＋Ｍ　？−ｅある
。 インシー１リンが血液中のグルコースレベル全調節し、
グルコースがマク【１フッＩ−ジによって除去されるＡ
ＧＥＳの／ｒ・成の一因であるため、この新知見は、こ
れら３つの現象間の実際的な相η関係を示唆するちので
ある。 本発明から誘導される（＝１加的観察Ｊ３」：び木Ｉｊ
法の効果の実行可能な機構を提供）る観察は、「「１−
Ｉｌｊ体タンパク質またはＡＧＥ〜タンパク質での刺激
で、マク【、１フアージが周辺流体ヘカケクチンを分泌
するということぐある。マクロフｉ／−ジがある１１１
１１激に反応してカケクブンを１成することｉ、Ｌ　）
Ｊｌらｔｔ　ｒ　イ６が、コｒＬハ、［ＦＩとＡＧＥ−
タンパク質に反応して￥Ｊ造される［）１ンのＩ＋Ａ　
Ｉ！ｌＪの帽テ１１である。これらの部分（１丈体内に
存在するので、カククヂンの１成はＡＧＥＳの認識、内
イ１化、または分解の闇に牛しる。カケク１−ンが除去
ｌ１ｆＳを増強りることは知られているので、この観察
はカケクチンが、除去機構の活性向」−ためにその他の
マクし１フン・−ジに信号を送る拡大現象に関係してい
ることを示唆するらのぐある。△Ｇ　Ｅ　Ｓにさらした
ｌＪＩ　Ｉｎによるカケクブンの分泌も、ＩＩ胞にその
他の影フキをｂだら 従って木光明の治療法の１つは、除去機構を刺３２　・
Ｊるのに十分なｆ、Ｉのカケクチンまたはカタクアンの
誘導体を供給することから成る。投与Ｊる力ケクブンの
ｉ［：　＆Ｉｆ　’ｌ吊は揉々（・、本明細、１：に記
載の〕Ｊククブーンを用いた実験て゛の使用１４１ま代
表的イｉｂので・ある。１！ｉ定的ムｈｔは、当然、治
療を（−■う］治国または獣医が決定する。 さらに、本発明の治療適用は免疫学の領域にある。１゛
１に、口■１胞にＪ、る１：Ｆｌのような１ジノ１的グ
リニ１シル化ｆｌｕ柊産物の認識および分解は、それに
λ１する免疫性を生じさせたい抗Ｂ；ミのそうした。１
１胞への導入を促逗り゛る。従って後（１的グリニ）シ
ル化尼ｎ戸「。物Ｊ：たはＦ　Ｆ　Ｉ　ｌま、その池の
ｌｊ休体＼のれ１２合について本明細−：に開広したの
と全く同様の方法（・抗り；ミに結合さけることが（・
きる、、イの１９、刺激したい特定の食細胞を結合複合
体にさら１ことがＣさ゛、ぞの結果、■１胞（、Ｌ復古
を；、２識よｊにび分解し、付随的にその特異的受容体
を光イ１−さける１９次に、これらの活性１ヒ食町胞１
．ｉ　、　！ＦｌｌＩ物の免疫社隻構に］シムすること
ができ、Ｉｎ初の抗ム７１にス・１する抗体の免疫ｔｅ
ｌ　４４１．ＸＪ、−、）　−Ｃ％　（Ｄ　光牛ヲｃ（
進りる、。 −り記の′ｆ′ｊ法は、／）体外または、生体内で実施
りることが（゛きる。生体外の揚台、１）法（よ、Ｊ、
　＝ｆｉ’体内から食す１胞を除）、し、それらを結合
複合体にさらして特定抗原に対する感受性を開光するも
のである。（の後に、ｂｔ体発生の一因であることが知
られている動物の細胞で動物から同様に単離、除去した
ｂの、Ｊ：たはｌ１ｉｌじ機能を果たすその他の諒から
の細胞の試￥１を、対象抗ぬに対する抗体を−［じさぼ
るのに十分り期間、活性化食細胞にさらり、。 その抗体を動物に役！−３して、抗原の侵入によって生
じる病状のＡ！ミ影警を回避また（１軽減する。 あるいは、牛体外活着化細胞は、抗Ｕｌｊに対して動物
に接種し、それに」、ってその抗体の生体内光１１を促
進りるワクブンとして利用することができる。 牛体内プ［］ト］−ルは、ＡＧＩＥ／［ｌ”　ｌと抗原
どの結合複合体を調’１１Ｊすること、およびそれに続
く食細胞の！１一体内活性化と動物の免疫機構による抗
体の発生を促進りるために、この結合複合体をＵＪ物に
直接投与することを意図している。さらに１つの化８法
は、ＡＧＥ／Ｆ：ＦＩと抗原との結合複合体Ｊ、りむし
ろそれらの混合物の形成を意図している。このｎ合物番
、Ｌ１上記のプロ１〜コールの結合複合体の代りに利用
りることがでさ−る。免疫学的プロｌ−二ｔ−ルの生体
外実施態様の特別な実施は、その１！を別な１）法を実
施する朋聞中、Ｊ：たはイの一部の期間に結合枚合体ま
たは食細胞を固定するものである。従って、例えば、＄
１１１胞または結合複合体のいずれかを固定した後、未
結合物質をそこへ循環さｕ　’Ｃ’　Ｉｉ性化を行うこ
とができる。結合物質を＋ｊＪ物に投与したい場合には
、周知のｈ法で活性化した後、基質から解放することが
できる。 さらに１つの治療的プロ１−コ゛−ルは、本明細店で定
義したように、この場合には特別な抗原への八〇　Ｅ　
／　Ｆ　［Ｉの結合、標識、あるいはその他の組合せに
基づく先に述べた免疫学的プロトコールにＪ：って示唆
される。従って、ＡＧＩ三／ＦＦｊを、イの１６＋別な
抗原に特異的な抗体と結合させ、１１１られた会合混合
物または結合物質を動物／ヒト宿主の食ＩＩＩ胞に接触
させて、かかる細胞を刺激し、抗原を認識および攻撃り
”ることができる。こうした場合、結合物°ｄど食細胞
とを接触さけるｂ法は、変えてもよい。 イの後、多ｈ１の結合物質を１４標抗原と結合さ「るた
めに体内に導入してもよい。刺激された食細胞を次に今
人するか、または、結合物質の生体内）９人と同時に食
細胞を刺１１５ｔすると、食細胞は、結合物質と１１標
抗原によって形成される複合体を直１ａ、または−しノ
ーｔ−ンカケク１ン／ＴＮＦの分泌にＪ、って攻撃し、
崩壊／分解する。最終的ｎ用の正確な機構に関係なく、
食細胞は、抗体によってそれと１３１１連した特定のＡ
ＧＥ／ｒＦＩを認識するために、目標巨大分子標抗原に
対して特異的に作用する。 先に述べた治療法は、その特別な宿主や主治医の治療条
ｆ［によって、投与量、投与法および周ＩＩ！ｊ性を変
えることができ、熟練した医師や獣医によって調節され
る。この療法は、従末治療法が症状を軽減できないこと
を考えると、後天性免疫不全ｔｒｉ″候市（ＡＩＤＳ）
にかかった患者の治療の潜在的に有効ｔｆｈ法を提供覆
るしのである。 上記の免疫学的および治療的ブロトニＬ−ルは寸べＣ１
かかるプロ１−」−ルの効能が考えられるしのを増強Ｊ
るために、本明細占で先に述べたＩＪ法ぐ１つまたはそ
れ以上の共刺激剤をハＪ！与りるムの−Ｃある。本発明
は、従ってその実施におけるかかる変形に及ぶしのであ
る。 前述の通り、本発明は多数の診Ｉｇｉ適用を厄図してい
る。第１の適用では、後生的グリ、ｊシル化１！終産物
に対する特１／Ｊ的食細胞の６竹を刺激り″る薬剤とし
Ｃ作用するのに有効な潜イｌ的薬剤のスクリーニングの
ために、検定システムを開発できろ従って、イｊ望なテ
スト薬剤の刺激効果を決定するために、（の薬剤をマク
【コツ戸−ジ試料に投〜し、テスト薬剤と」（に培養し
たマク１１フアージ試料を、適切に標識した１０住的グ
リコシル化最終産物が多量に存在する流体または組織試
料と培養１−ることがでさ°るのて・、取込みおよび分
解の比較（Ｉ１１究を１１うことか′Ｃきる。この検定
では、複数のマク［］フｉＪ−ジコロニーをＪ：ヂ様ノ
／な既知薬剤と椙着することができるため、右５Ｉｌ桑
剤の比較テストをより特異的に行える。 また別の治療ブ１コトニ１−ルは、既知薬剤のどれが１
ｐ生的グリニ１シル化１＋ｈ　ｒＩ’ｊ　Ａｔ物に対す
る細胞活↑１のＩＩ激に最も有効Ｃあるかを決定するた
めの特定食細胞の調査を意図する。従って上記のプロト
コールと同様の方法で、特定食細胞コロニーの枚数の比
較しうる吊を子離し、いくつかの異なる既知薬剤と培養
し、（の後、適切に標識した後生的グリコシル化最１１
＋産物を含むＩＭＪじ相当試ｒ１と培養Ｊることができ
るので、食細胞の活性化の範囲を比較し、それによって
細胞＝ｌ　Ｃに一の刺激に最も有効な薬剤を見ルめるこ
とができる。かかる方法では、標識した後生的グリコシ
ル化ｊｄ　ＨＩ？物の最大の吸収および処冒を示すコＩ
：に一が最も有効な薬剤を同様に確認する。 さらに１つの治療利用は、（り１的グリコシル化最終産
物の認識と除去、および動物体内系の動きに関連したそ
れらの重数性が伴う様々なパラメーターのＮ１究に基づ
く。第１の実ＩＡｒＪ！、様では、中球や７りＬ］ファ
〜ジなどの食細胞を動物体内から除去し、本発明の薬剤
にさらＪことによって生体外活着化を行うしのである。 これｔ、Ｌ、木明細占で先に述べたような肉体外分路に
よって達成される。 かかる活性化の後、食細胞を直ちに体内へ戻ず代わりに
チクｙニウムなどによって適切に敢用￥Ａ標識し、イの
後体内へ戻し、それから食細胞の移動杼路を追跡し、体
内の後生的グリコシル化最終産物の集中位ｌを決定Ｊる
ために動物に敢口・１瞭投影を１ｊう。この方法ぐ、ア
ラ０−ムｔｌなどの望ましくない後住的グリコシル化１
ｄ　１１産物の集中を北見し、それによってこうした集
中の臨床的ｉ［２！！　（／ｌを評＆ｌ１１１Ｊること
ができる。この方法は、動物よ／、、：　ＩＪ患古の病
的症状の評１１１１を試みる上でざらにＫＦ要へ情報を
提供するものである。 さらに同様に病的症状に関するΦ要な情報を提供しＪ：
うという治療的応用は、族０１線標識薬剤の調製および
イれらの特定動物からの食細胞とのり４谷またはそれと
の接触、ざらにそれに続く標識薬剤の１４識および分解
までの杼道時間の測定を１１図するムのである。かかる
時間測定は、同じブ［１１−］−ルで試験した正常動物
よた昏、１患省から採取した細胞を試験して決定した標
準測定値と比較Ｊることがでさ゛る。このデータは、糖
尿病などの病状、また１、１本明細書で先に述べたその
伯の病状、または体内のΔＧ［Ｅ除去機侶の廟さに逆の
影響を与えるＪ、うなその他の疾燵ミの存在を見極める
ことがて・ぎる。この診断方法は、Ｆ識桑剤を動物また
は忠古に投与りることにより生体内で行うことがでさ・
るし、あるいは、体外で動物または患者の食細胞をＤｉ
　９ｆｌｌし、これらの細胞を標識薬剤で１８養りるこ
とによつ”Ｃ生体外で１７つこともできる。 さらに１つの治療方法【よ、ＶＪ物の体をさらに定性分
析することを息図りるものである。このｌｊ法では、動
物の食細胞のしＩＪ＋ｆ１を測定して１−常細胞ぐみら
れる活性と比較することのでさる方法で特定の食細胞を
確認してしＪ：い。この場合、例えば、敢０・１線標識
薬剤を体内に導入するか、またも、１体内からの９綱１
泡コロニーを中刻１してＭ会１線標識薬剤と培養Ｊるか
して、特定の後生的グリコシル化最終産物について、Ｊ
：り特安的にＧＫ細胞の活性レベルを測定することが℃
°きる。特定の後イ１的グリニ１シル化最終産物につい
−（食細胞で発生する細胞受容体が１ｈ異的ｔ’ｌ質を
右しくいるためにこうした測定がｉｉＪ能となる。従つ
−Ｃイうし／、１）ればア；ｉ−１−１−ｌ＼斑が発生
りる後生的グリコシル化最終産物の除去に最ｂｌＩＩ係
が深いンク目フン・−ジ３したは１１１球を子離して、
イの話ｔ’ｌについて試験することが用能（・、ｂしそ
の＞ｒｌ　ｔ’ｔが賃常に上ｒ？　Ｌ　’Ｕいるような
らば、かかる瑳の発生を示−りしのぐある。同様の試験
ブ１１−１１−　’、１−ルｔ、Ｌ糖尿病名化りどの存
在を決定するために使用りることができる。従って、特
定の条ｆ１に関連した特異的ｔ１２イ１的グリー１シル
化最終ｐＴ物はこれらｉｐ生的グリコ１シル化最終産物
の体内系（・の責常番槓を示唆する食細胞からの反応を
引出り、。 体内（′の１２１定ＡＧＥＳの存Ｃ１覧、Ｌ、同様に１
′ｉ定のν（状を反映してＪ３す、特定の後４［的グリ
コシル化最終産物に関して、ぞれらの感受ｆ／ＩＪｊよ
び向−１シｌこ刺激性の決定は、特定病状の存７［を示
唆するｂのである。
【図面の簡単な説明】
第１図は、本発明の薬剤の１つを含む各種の薬剤でｒｌ
ｉｆされｌζ赤血球の相対的結合ど取込みを猫くグラノ
である。 第２図は、本発明に従って薬剤のリンプルへの導入にに
って引さ起される赤血球結合の競合的阻害を説明するグ
ラフである。 第３図は、各種の糖との反応によって修正された赤血球
の単核細胞による結合と取込みを説明する。 第４図は、対照ど比較されるように、本発明による薬剤
との結合にＪ、って標識され、ｈ正された赤血球の半減
期を説明りる線グラフである。 第５図は、各１＝１ｉの刺徴化合物に露出されたマウス
大食細胞による後イ１的グリコシル化最終産物の相対的
ム取込みと分解を説明Ｊる棒グラフである。 第６四ｔよ、ある［１の４１取った人の単核細胞につい
て５図で説明されたしのと同じデータを説明づ−る棒グ
ラフである。 第７四ｔよ、ｊｌ、刺激剤ガンマーインターフエ［１ン
も添加され、試験された、入車核細胞を用いて行われる
１ｔ１１様の比較実験を説明する棒グラフて゛ある。 第８図は、正常なリンプルやアＬ］キＩＪン誘導の糖尿
病１／１人食細胞リンプルが比較され１．：、マウス大
食細胞の結合１に力にス＝Ｉ　Ｊるインシュリンの作用
を説明Ｍるグラフである。 第９図μ、−リンプルの各々の結合能力に関して大入食
細胞の正常またはス・１照リンプルの間の低およびｔ′
島インシュリン血症竹糖尿病竹入食細胞との比較を説明
する、第８図と同じグラフである。 第１０図１．１．１鈴生的グリコシル化最終産物を分解
りる能力に関して同じ大食細胞リンプルの聞の比較をＪ
る、第９図と同じグラフＣある。 １４檜出願人　　　１ｆ　Ｏグラフ１ラーコ−ニバーシ
ｉイ ＦＩＧ、　１ ＦＩＧ、２ ＦＩＧ、３ ５１ｃｒ　−ＲＢＣ（対照の’／、） ρ　　　　　　１２５−配イ１ｆＬ）ｋＬＨ（ｕｇ／ｆ
ｆ１Ｑ　ＡＩＢ　ａ蚤白側−ｎ、ｓ、＞、　　　　　　
　　１２５−ＡＧＥ−ＢＳＡｆｐｑ／ｍ９４．１　ａｔ
白實）更　　　　　　　　　　　　　≧毛ａｌ　Ｊ１２
５ニーＡＧε−ＢＳＡ峰合 （ｎｇ／ｍｇ　）３！＋白實） １２５Ｉ−ＡＧＥ−ＢＳＡ稙合 （ｎｇ／ｍｑ掲絶釦口實） １２５ニーＡＧＥ−ＢＳＡ分解 （ν９／ｍ９繍把蚤白實）

Claims (75)

    【特許請求の範囲】
  1. （１）後生的グリコシル化を受けた巨大分子を認識およ
    び除去する活性を体内に増加させることのできる薬剤か
    ら成る、後生的グリコシル化を受けた目標巨大分子の動
    物体内からの隔離および除去を促進するための組成物。
  2. （２）薬剤が、後生的グリコシル化最終産物、担体に結
    合した後生的グリコシル化最終産物、担体に結合したけ
    い光発色団２−（２−フロイル）−４（５）−（２−フ
    ラニル）−１￥Ｈ￥−イミダゾール、体を刺激して目標
    巨大分子に対する認識および除去活性を向上させるモノ
    キン、共刺激剤と組合せた上記のいずれか、およびそれ
    らの混合物から成る群から選択されることを特徴とする
    特許請求の範囲第１項に記載の組成物。
  3. （３）後生的グリコシル化最終産物が、タンパク質性巨
    大分子と糖との非酵素反応生成物から成ることを特徴と
    する特許請求の範囲第２項に記載の組成物。
  4. （４）後生的グリコシル化最終産物が、アルブミンとグ
    ルコースの反応生成物、アルブミンとグルコース−６−
    ホスフエートの反応生成物、およびそれらの混合物から
    成る群から選択されることを特徴とする特許請求の範囲
    第３項に記載の組成物。
  5. （５）担体が、炭水化物、タンパク質、資質、合成ポリ
    ペプチド、生物適合性天然および合成樹脂、およびそれ
    らの混合物から成る群から選択されることを特徴とする
    特許請求の範囲第２項に記載の組成物。
  6. （６）共刺激剤が、インタールイキン−１およびガンマ
    −インターフエロンから成る群から選択されることを特
    徴とする特許請求の範囲第２項に記載の組成物。
  7. （７）製薬的有効量の目標タンパク質を認識および除去
    する活性を体内の食細胞に増加させることのできる薬剤
    および製薬的に許容される担体から成る、後生的グリコ
    シル化を受けた目標タンパク質の動物体内からの隔離お
    よび除去を促進するための動物投与用製薬組成物。
  8. （８）薬剤が、後生的グリコシル化最終産物、担体に結
    合した後生的グリコシル化最終産物、担体に結合したけ
    い光発色団２−（２−フロイル）−４（５）−（２−フ
    ラニル）−１￥Ｈ￥−イミダゾール、食細胞を刺激して
    目標タンパク質に対するかかる認識および除去活性を向
    上させるモノキン、共刺激剤と組合せた上記のいずれか
    、およびそれらの混合物から成る群から選択されること
    を特徴とする特許請求の範囲第７項に記載の製薬組成物
    。
  9. （９）後生的グリコシル化最終産物が、タンパク質性巨
    大分子と糖との反応生成物から成ることを特徴とする特
    許請求の範囲第８項に記載の製薬組成物。
  10. （１０）後生的グリコシル化最終産物が、アルブミンと
    グルコースの反応生成物、アルブミンとグルコース−６
    −ホスフエート、およびそれらの混合物から成る群から
    選択されることを特徴とする特許請求の範囲第９項に記
    載の製薬組成物。
  11. （１１）担体が、炭水化物、タンパク質、脂質、合成ポ
    リペプチド、生物適合性天然および合成樹脂、抗原およ
    びそれらの混合物から成る群から選択されることを特徴
    とする特許請求の範囲第８項に記載の製薬組成物。
  12. （１２）共刺激剤が、インタールイキン−１およびガン
    マ−インターフエロンから成る群から選択されることを
    特徴とする特許請求の範囲第８項に記載の製薬組成物。
  13. （１３）食細胞を含有する動物の体内から誘導した複数
    の生物試料を調製すること； 該試料を決定下で有望な薬剤と培養すること； 該試料の１つを残してそれ以外すべてを後生的グリコシ
    ル化最終産物に対して食細胞を刺激することが知られて
    いる薬剤の様々なものと培養すること、ただし該薬剤は
    、後生的グリコシル化最終産物、担体に結合した後生的
    グリコシル化最終青物、担体に結合したけい光発色団２
    −（２−フロイル）−４（５）−（２−フラニル）−￥
    Ｈ￥−イミダゾール、該食細胞を刺激して目標タンパク
    質に対する認識および除去活性を向上させるモノキン、
    共刺激剤と組合せた上記のいずれか、およびそれらの混
    合物から成る群から選択されるものとする； 一番最後の該生物試料を対照として保っておくこと； 該試料をそれぞれ異なったアリコート量のそれに関連し
    た適当な標識を有する既知の後生的グリコシル化最終産
    物に導入すること； 該試料をそれぞれ約２４時間まで培養すること；および
    、 その後、後生的グリコシル化最終産物の取込みおよび劣
    化を測定するために試料を観察し、決定下で有望薬剤と
    培養した細胞と、既知薬剤で培養した試料の活性を比較
    し、有望薬剤の刺激活性の存在と程度を決定することか
    ら成る、動物の体を刺激して後生的グリコシル化をうけ
    た体内からの巨大分子を認識および除去させるための薬
    剤として機能すると思われる物質の活性の決定方法。
  14. （１４）後生的グリコシル化を受けた巨大細胞の認識お
    よび除去活性を動物体内に増加させることのできる薬剤
    の有効量を体内に導入することから成る、後生的グリコ
    シル化最終産物の動物体内蓄積の有害な余病を回避する
    方法。
  15. （１５）後生的グリコシル化最終産物、担体に結合した
    後生的グリコシル化最終産物、担体に結合したけい光発
    色団２−（２−フロイル）−４（５）−（２−フラニル
    ）−１￥Ｈ￥−イミダゾール、体内を刺激して目標巨大
    分子に対するかかる認識および除去活性を向上させるモ
    ノキン、共刺激剤と組合せた上記のいずれか、およびそ
    れらの混合物から成る群から選択した薬剤を導入するこ
    とから成ることを特徴とする特許請求の範囲第１４項に
    記載の方法。
  16. （１６）後生的グリコシル化最終産物が、タンパク質性
    巨大分子と糖との反応生成物から成ることを特徴とする
    特許請求の範囲第１５項に記載の方法。
  17. （１７）後生的グリコシル化最終産物が、アルブミンと
    グルコースとの反応生成物、アルブミンとグルコース−
    ６−ホスフエートとの反応生成物、およびそれらの混合
    物から成る群から選択されることを特徴とする特許請求
    の範囲第１５項に記載の方法。
  18. （１８）担体が、炭水化物、タンパク質、脂質、合成ペ
    プチド、生物適合性天然および合成樹脂、抗原、および
    それらの混合物から成る群から選択されることを特徴と
    する特許請求の範囲第１５項に記載の方法。
  19. （１９）モノキンが、腫瘍壊死要因と確認されたポリペ
    プチドから成ることを特徴とする特許請求の範囲第１５
    項に記載の方法。
  20. （２０）共刺激剤が、インタールイキン−１およびガン
    マ−インターフエロンから成る群から選択されることを
    特徴とする特許請求の範囲第１５項に記載の方法。
  21. （２１）薬剤が、非経口的手段によって投与されること
    から成ることを特徴とする特許請求の範囲第１５項に記
    載の方法。
  22. （２２）非経口的手段が注射から成ることを特徴とする
    特許請求の範囲第２１項に記載の方法。
  23. （２３）非経口的手段がカテーテル法から成ることを特
    徴とする特許請求の範囲第２１項に記載の方法。
  24. （２４）薬剤が、経口手段で投与されることを特徴とす
    る特許請求の範囲第１５項に記載の方法。
  25. （２５）薬剤が、製薬的に許容される担体を使って製薬
    組成として調製されることを特徴とする特許請求の範囲
    第１５項に記載の方法。
  26. （２６）薬剤が、体液に非経口的および非肉体的に投与
    されることを特徴とする特許請求の範囲第１４項に記載
    の方法。
  27. （２７）多量のインシュリンが体に含有されており、方
    法が有効なインシュリンレベルを低下させるための体の
    処置を含むことを特徴とする特許請求の範囲第１４項に
    記載の方法。
  28. （２８）多量の細胞を動物から単離し、インシュリンを
    含まない栄養培地で単離食細胞からのさらに多量の食細
    胞を成長させ、成長した食細胞を収穫し、動物体内にそ
    れらを導入することから成る、後生的グリコシル化を受
    けた巨大分子の動物体内蓄積によって少くとも一部に生
    じる病状を有する動物の治療方法。
  29. （２９）動物から多量の食細胞を単離すること；後生的
    グリコシル化をうけた巨大細胞の認識および除去活性を
    食細胞に増加させることのできる薬剤でかかる単離食細
    胞を処理すること；および、 活性化した食細胞を動物体内へ導入することから成る、
    後生的グリコシル化最終産物の動物体内蓄積の有害な余
    病を回避する方法。
  30. （３０）薬剤が、後生的グリコシル化最終産物、担体に
    結合した後生的グリコシル化最終産物、担体に結合した
    けい光発色団２−（２−フロイル）−４（５）−（２−
    フラニル）−１￥Ｈ￥−イミダゾール、体を刺激して目
    標巨大分子に対する認識および除去活性を向上させるモ
    ノキン、共刺激剤と組合せた上記のいずれか、およびそ
    れらの混合物から成る群から選択されることを特徴とす
    る特許請求の範囲第２９項に記載の方法。
  31. （３１）後生的グリコシル化最終産物が、タンパク質性
    巨大分子と糖との反応生成物から成ることを特徴とする
    特許請求の範囲第３０項に記載の方法。
  32. （３２）後生的グリコシル化最終産物が、アルブミンと
    グルコースとの反応生成物、アルブミンとグルコース−
    ６−ホスフエートとの反応生成物、およびそれらの混合
    物から成る群から選択されることを特徴とする特許請求
    の範囲第３０項に記載の方法。
  33. （３３）担体が、炭水化物、タンパク質、脂質、合成ポ
    リペプチド、生物適合性天然および合成樹脂、抗原、お
    よびそれらの混合物から成る群から選択されることを特
    徴とする特許請求の範囲第３０項に記載の方法。
  34. （３４）モノキンが、腫瘍壊死要因と確認されたポリペ
    プチドから成ることを特徴とする特許請求の範囲第３０
    項に記載の方法。
  35. （３５）共刺激剤が、インタールイキン−１およびガン
    マ−インターフエロンから成る群から選択されることを
    特徴とする特許請求の範囲第３０項に記載の方法。
  36. （３６）処理細胞が非経口手段によつて体に導入される
    ことを特徴とする特許請求の範囲第２９項に記載の方法
    。
  37. （３７）非経口手段が注射から成ることを特徴とする特
    許請求の範囲第３６項に記載の方法。
  38. （３８）非経口手段がカテーテル法から成ることを特徴
    とする特許請求の範囲第２９項に記載の方法。
  39. （３９）薬剤を体内に非経口的に投与することを含む特
    許請求の範囲第２９項に記載の方法。
  40. （４０）多量のインシュリンが体に含まれており、方法
    が有効なインシュリンレベルを低下させるための体の処
    置を含むことを特徴とする特許請求の範囲第２９項に記
    載の方法。
  41. （４１）抗原と、後生的グリコシル化を受けた巨大分子
    の認識および除去活性を動物体内の食細胞に増加させる
    ことのできる薬剤との混合物を調製すること；および、 混合物を動物に投与し、抗原に対する抗体の動物の免疫
    システムによってその発生を刺激することから成る、特
    定抗原に対する動物の免疫方法。
  42. （４２）薬剤が、後生的グリコシル化最終産物、担体に
    結合した後生的グリコシル化最終産物、担体に結合した
    けい光発色団２−（２−フロイル）−４（５）−（２−
    フラニル）−１￥Ｈ￥−イミダゾール、体を刺激して目
    標巨大分子に対する認識および除去活性を向上させるモ
    ノキン、共刺激剤と組合せた上記のいずれか、およびそ
    れらの混合物から成る群から選択されることを特徴とす
    る特許請求の範囲第４１項に記載の方法。
  43. （４３）動物から多量の食細胞を単離すること；抗原と
    、後生的グリコシル化を受けた巨大分子の認識および除
    去活性を食細胞に増加させることのできる薬剤との混合
    物を調製すること；単離した食細胞を該混合物と培養し
    てそれに対する食細胞を活性化すること；および、 活性化した食細胞を動物体内に導入して抗原に対する抗
    体の生体内発生を促進することから成る、特定抗原に対
    する動物の免疫方法。
  44. （４４）薬剤が、後生的グリコシル化最終産物、担体に
    結合した後生的グリコシル化最終産物、担体に結合した
    けい光発色団２−（２−フロイル）−４（５）−（２−
    フラニル）−１￥Ｈ￥−イミダゾール、体を刺激して目
    標巨大分子に対する認識および除去活性を向上させるモ
    ノキン、共刺激剤と組合せた上記のいずれか、およびそ
    れらの混合物から成る群から選択されることを特徴とす
    る特許請求の範囲第４３項に記載の方法。
  45. （４５）混合物と培養する前に、細胞を固定基質に固着
    させ、混合物との培養後、細胞を基質から解放すること
    を特徴とする特許請求の範囲第４３項に記載の方法。
  46. （４６）動物から多量の食細胞を単離すること；抗原と
    、後生的グリコシル化を受けた巨大分子の認識および除
    去を活性を食細胞に増加させることのできる薬剤の混合
    物を調製すること；単離した食細胞を該混合物と培養し
    て食細胞をそれに対して活性化させること； 動物の免疫反応の発生に関係する動物から細胞物質を単
    離し、抗原に対する抗体を該細胞物資に発生させるのに
    十分な条件下で一定期間活性化食細胞をそれと一緒に培
    養すること；および、 抗原を無効にするために該細胞物質を動物に投与するこ
    とから成る、特定抗原に対する動物の免疫方法。
  47. （４７）薬剤が、後生的グリコシル化最終産物、担体に
    結合した後生的グリコシル化最終産物、担体に結合した
    けい光発色団２−（２−フロイル）−４（５）−（２−
    フラニル）−１￥Ｈ￥−イミダゾール、体を刺激して目
    標巨大分子に対する認識および除去活性を向上させるモ
    ノキン、共刺激剤と組合せた上記のいずれか、およびそ
    れらの混合物から成る群から選択されることを特徴とす
    る特許請求の範囲第４６項に記載の方法。
  48. （４８）細胞を固定基質に固着させることを特徴とする
    特許請求の範囲第４６項に記載の方法。
  49. （４９）特定抗原と、後生的グリコシル化を受けた巨大
    細胞の認識および除去活性を動物体内の食細胞に増加さ
    せることのできる薬剤との結合複合体を調製すること；
    および こうして形成した結合複合体を動物に投与して抗原に対
    する抗体の動物の免疫システムによってその発生を刺激
    することから成る特定抗原に対する動物の免疫方法。
  50. （５０）薬剤が、後生的グリコシル化最終産物、担体に
    結合した後生的グリコシル化最終産物、担体に結合した
    けい光発色団２−（２−フロイル）−４（５）−（２−
    フラニル）−１￥Ｈ￥−イミダゾール、およびそれらの
    混合物から成る群から選択される特許請求の範囲第４９
    項に記載の方法。
  51. （５１）体を刺激して目標巨大分子に対する認識および
    除去活性を向上させるモノキンも動物に投与されること
    を特徴とする特許請求の範囲第４９項に記載の方法。
  52. （５２）共刺激剤も動物に投与されることを特徴とする
    特許請求の範囲第４９項に記載の方法。
  53. （５３）動物から多量の食細胞を単離すること；抗原と
    、後生的グリコシル化をうけた巨大分子の認識および除
    去活性を該食細胞に増加させることのできる薬剤との結
    合複合体を調製すること； 単離した食細胞を該結合複合体と培養して食細胞をそれ
    に対して活性化させること；および、該活性化食細胞を
    動物体内に導入して抗原に対する抗体の生体内発生を促
    進することから成る、特定抗原に対する動物の免疫方法
    。
  54. （５４）薬剤が、後生的グリコシル化最終産物、担体に
    結合した後生的グリコシル化最終産物、担体に結合した
    けい光発色団２−（２−フロイル）−４（５）−（２−
    フラニル）−１￥Ｈ￥−イミダゾールおよびそれらの混
    合物から成る群から選択されることを特徴とする特許請
    求の範囲第５３項に記載の方法。
  55. （５５）結合複合体と培養する前に細胞を固定基質に固
    着させ、結合複合体と培養した後、該細胞を基質から解
    放することを特徴とする特許請求の範囲第５３項に記載
    の方法。
  56. （５６）体を刺激して目標巨大分子に対する認識および
    除去活性を向上させるモノキンも動物体内に導入される
    ことを特徴とする特許請求の範囲第５３項に記載の方法
    。
  57. （５７）共刺激剤も動物体内に導入されることを特徴と
    する特許請求の範囲第５３項に記載の方法。
  58. （５８）動物から多量の食細胞を単離すること；特定抗
    原と、後生的グリコシル化を受けた巨大細胞の認識およ
    び除去活性を該食細胞に増加させることのできる薬剤と
    の結合複合体を調製すること； 単離した食細胞を該結合複合体と培養し、食細胞をそれ
    に対して活性化させること； 動物の免疫反応の発生に関係する動物から細胞物質を単
    離し、活性化食細胞を、抗原に対する抗体を細胞物質に
    発生させるのに十分な条件下で一定期間それと培養する
    こと；および、該細胞物質を動物に投与して抗原を無効
    にすることから成る、特定抗原に対する動物の免疫方法
    。
  59. （５９）薬剤が、後生的グリコシル化最終産物、担体に
    結合した後生的グリコシル化最終産物、担体に結合した
    けい光発色団２−（２−フロイル）−４（５）−（２−
    フラニル）−１￥Ｈ￥−イミダゾール、およびそれらの
    混合物から成る群から選択されることを特徴とする特許
    請求の範囲第５８項に記載の方法。
  60. （６０）細胞を固定基質に固着させることを特徴とする
    特許請求の範囲第５８項に記載の方法。
  61. （６１）結合複合体を固定基質に固着させることを特徴
    とする特許請求の範囲第５８項に記載の方法。
  62. （６２）体を刺激して目標巨大分子に対する認識および
    除去活性を向上させるモノキンも動物に投与されること
    を特徴とする特許請求の範囲第５８項に記載の方法。
  63. （６３）共刺激剤も動物に投与されることを特徴とする
    特許請求の範囲第５８項に記載の方法。
  64. （６４）動物から多量の食細胞を単離すること；該細胞
    に放射性標識をつけること； 標識細胞を動物の体内に導入し、標識細胞の移動および
    活性経路を追跡して後生的グルコシル化最終産物の蓄積
    の位置および程度を決定し、またそれによつてその証明
    としてかかる蓄積を有する病状の相当する位置および程
    度を決定することから成る、動物の病的状態の程度の確
    認および測定方法。
  65. （６５）導入工程の前に食細胞を後生的グルコシル化を
    受けた巨大細胞の認識および除去活性を食細胞に増加さ
    せることのできる薬剤と培養することを特徴とする特許
    請求の範囲第６４項に記載の方法。
  66. （６６）非酵素的後生的グリコシル化をうけた巨大細胞
    の認識および除去活性を動物の食細胞に増加させること
    のできる薬剤を調製すること； 薬剤に適切な標識をつけること； 標識薬剤を動物に投与すること； 標識薬剤の認識および除去に体が必要とする時間を測定
    すること；および 得られた時間結果を正常状態の動物で観察した時間結果
    と比較することから成る、動物の病的事態の測定方法。
  67. （６７）非酵素的後生的グリコシル化を受けた巨大細胞
    の認識および除去活性を動物の食細胞に増加させること
    のできる薬剤を調製すること； 薬剤に適切な標識をつけること； 動物から食細胞試料を単離して標識薬剤とその細胞を培
    養すること； 標識薬剤の認識および除去に試料が必要とする時間を測
    定すること； 得られた時間結果を正常状態の動物の細胞試料で観察し
    た時間結果と比較することから成る、動物の病的事態の
    測定方法。
  68. （６８）動物の体から食細胞のコロニーを単離すること
    ； コロニーを標識をつけた後生的グリコシル化最終産物と
    培養すること； 標識後生的グリコシル化最終産物のコロニーによる取込
    みおよび／または分解を測定すること； 該測定結果を正常活性化のもとで細胞から得た異なる測
    定から誘導される結果と比較すること；および、 そこから後生的グリコシル化最終産物によるコロニー細
    胞の活性化の程度を決定し、それによって細胞試料中に
    存在する後生的グリコシル化最終産物の量および本質を
    決定することから成る、動物の体からの細胞試料中の後
    生的グルコシル化最終産物の本質および程度の測定方法
    。
  69. （６９）目標タンパク質または細胞に対する抗体および
    後生的グリコシル化を受けた巨大細胞の認識および除去
    活性を動物体内の食細胞に増加させることのできる薬剤
    の会合混合物を調製すること； 混合物を動物に投与して、混合物と目標タンパク質また
    は細胞との複合体を形成すること；および、 動物の食細胞を刺激して混合物の特異的認識および除去
    を増加させることから成り、該食細胞は混合物を認識お
    よび除去するように作用し、それによって目標タンパク
    質または細胞の崩壊が引きおこされることを特徴とする
    目的タンパク質または細胞の付随的衰弱で動物病状を処
    理する方法。
  70. （７０）薬剤が、後生的グリコシル化最終産物、担体に
    結合した後生的グリコシル化最終産物、担体に結合した
    けい光発色団２−（２−フロイル）−４（５）−（２−
    フラニル）−１￥Ｈ￥−イミダゾール、体を刺激して目
    標巨大分子に対する認識および除去活性を向上させるモ
    ノキン、共刺激剤と組合せた上記のいずれか、およびそ
    れらの混合物から成る群から選択されることを特徴とす
    る特許請求の範囲第６９項に記載の方法。
  71. （７１）後生的グリコシル化最終産物が、タンパク質性
    巨大分子と糖との反応生成物から成ることを特徴とする
    特許請求の範囲第７０項に記載の方法。
  72. （７２）後生的グリコシル化最終産物が、アルブミンと
    グルコースとの反応生成物、アルブミンとグルコース−
    ６−ホスフエートとの反応生成物、およびそれらの混合
    物から成る群から選択されることを特徴とする特許請求
    の範囲第７０項に記載の方法。
  73. （７３）担体が、炭水化物、タンパク質、脂質、合成ポ
    リペプチド、生物適合性天然および合成樹脂、抗原、お
    よびそれらの混合物から成る群から選択されることを特
    徴とする特許請求の範囲第７０項に記載の方法。
  74. （７４）モノキンが、腫瘍壊死要因として確認されたポ
    リペプチドから成ることを特徴とする特許請求の範囲第
    ７０項に記載の方法。
  75. （７５）共刺激剤が、インタールイキン−１およびガン
    マ−インターフエロンから成る群から選択されることを
    特徴とする特許請求の範囲第７０項に記載の方法。
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