CN102478569A - 一种西红花酸对AGEs抑制效果的检测方法 - Google Patents

一种西红花酸对AGEs抑制效果的检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN102478569A
CN102478569A CN2010105581262A CN201010558126A CN102478569A CN 102478569 A CN102478569 A CN 102478569A CN 2010105581262 A CN2010105581262 A CN 2010105581262A CN 201010558126 A CN201010558126 A CN 201010558126A CN 102478569 A CN102478569 A CN 102478569A
Authority
CN
China
Prior art keywords
crocetin
ages
effect
detection method
inhibition effect
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN2010105581262A
Other languages
English (en)
Inventor
向敏
周成华
钱之玉
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Suzhou Vocational Health College
Original Assignee
Suzhou Vocational Health College
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Suzhou Vocational Health College filed Critical Suzhou Vocational Health College
Priority to CN2010105581262A priority Critical patent/CN102478569A/zh
Publication of CN102478569A publication Critical patent/CN102478569A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Landscapes

  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明公开了一种西红花酸对AGEs抑制效果的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、细胞分离液的配制；步骤二、晚期糖基化终产物(AGEs)的制备；步骤三、牛中性粒细胞与单核细胞的分离与纯化；步骤四、检测西红花酸对单核细胞和中性粒细胞的影响；步骤五、利用统计学处理西红花酸对单核细胞和中性粒细胞的影响即可得知西红花酸对AGEs的抑制效果。本发明的检测方法简单、有效的检测出了西红花酸对AGEs抑制效果。

Description

一种西红花酸对AGEs抑制效果的检测方法
技术领域
本发明属于病理检测领域，具体的涉及一种一种西红花酸对AGEs抑制效果的检测方法。
背景技术
糖尿病(DM)血管病变的发生是一个复杂的病理生理过程，白细胞粘附于血管内皮、穿透血管内膜、聚集于血管壁是DM血管病变的早期事件，并惯穿其整个过程。在糖尿病患者体内有高浓度的晚期糖基化产物(AGEs)蓄积，AGEs通过与内皮细胞上晚期糖基化产物受体(RAGE)结合，诱发氧化应激，释放大量活性氧自由基(ROS)，ROS又通过氧化敏感机制激活MAPK、NF-κB、PKC等信号传导物，使内皮细胞分泌粘附分子如细胞间粘附分子(ICAM-1)、E-选择素(E-selectin)、细胞粘附分子-1(VCAM-1)等，这些粘附分子介导了单核细胞/中性粒细胞与血管内皮细胞粘附和跨内皮迁移，导致白细胞在血管内皮下募集和滞留，同时，这些细胞还可分泌致炎因子如TNF-α，IL-2等，进一步加重血管内皮的损伤，促进DM血管病变的发生发展。
我们前期研究发现，西红花酸具有抑制晚期糖基化产物(AGEs)的作用，但抑制效果如何却没有一个有效的手段实现。
发明内容
为克服现有技术中的不足，本发明的目的在于提供一种西红花酸对AGEs抑制效果的检测方法。
为解决上述技术问题，本发明采用了以下技术方案：一种西红花酸对AGEs抑制效果的检测方法，包括以下步骤：
步骤一、细胞分离液的配制；
步骤二、晚期糖基化终产物(AGEs)的制备；
步骤三、牛中性粒细胞与单核细胞的分离与纯化；
步骤四、检测西红花酸对单核细胞和中性粒细胞的影响；
步骤五、利用统计学处理西红花酸对单核细胞和中性粒细胞的影响即可得知西红花酸对AGEs的抑制效果。
本发明的检测方法简单、有效的检测出了西红花酸对AGEs抑制效果。
具体实施方式
一种西红花酸对AGEs抑制效果的检测方法，包括以下步骤：
步骤一、细胞分离液的配制备；
所述细胞分离液包括I液和II液，所述I液用10份33.9％的复方泛影葡胺加上24份9％的聚蔗糖制成；所述II液：由10份50％的复方泛影葡胺加上20份9％的聚蔗糖制成。全部溶液用双蒸水配成所需浓度，过滤除菌，4℃保存备用。
步骤二、晚期糖基化终产物(AGEs)的制备；
将5mg/ml BSA与浓度为50mmol/L的d-葡萄糖溶于含EDTA(0.5mmol/L)的PBS(PH7.4)中，混匀，无菌过滤后，置于37℃，CO2培养箱避光孵育3个月后，用透析膜充分透析以去除未结合的葡萄糖，过滤除菌后4℃存放备用。
步骤三、牛中性粒细胞与单核细胞的分离与纯化；
抽取健康小牛全血，肝素抗凝，用PBS等倍稀释混匀。预先在离心管内依次加入细胞分离液II液与I液，使二液界面清晰，将肝素抗凝血缓慢平铺在梯度分离液上。II液、I液、抗凝血之间的比例为3∶3∶4。室温下(25℃)离心，2500rpm，20min；离心后可见到三种不同的细胞层，小心吸取第一层细胞层(单个核细胞)与第二层细胞层(中性粒细胞)，分别移入离心管中，纯化细胞。
步骤四、检测西红花酸对单核细胞和中性粒细胞的影响
传至96孔板的EC融合生长成单层时，分为6组，即control组，AGEs模型组(100g/mlAGEs)，葛根素阳性对照组，西红花酸(0.01μM，0.1μM，1μM)组，每组8个复孔。不同剂量西红花酸预孵12h，再换培养液，模型组和药物实验组分别加入100g/mlAGEs，作用24h，37℃温育，然后吸出培养液，PBS洗1次，加入新分离的单核细胞(1×105个/孔)或中性粒细胞(2×105个/孔)，37℃，5％CO2培养箱继续培养1h，PBS轻洗去未粘附细胞；加入0.25％虎红，1001/孔。室温作用10min，PBS洗去游离虎红，加入PBS-乙醇(1∶1)200 1/孔，室温作用1h后，用酶标仪于570nm处测吸光值(OD)。
步骤五、利用统计学处理西红花酸对单核细胞和中性粒细胞的影响即可得知西红花酸对AGEs的抑制效果。
上述实施例只是为了说明本发明的技术构思及特点，其目的是在于让本领域内的普通技术人员能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡是根据本发明内容的实质所作出的等效的变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围内。

Claims (1)

1.一种西红花酸对AGEs抑制效果的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一、细胞分离液的配制；
步骤二、晚期糖基化终产物(AGEs)的制备；
步骤三、牛中性粒细胞与单核细胞的分离与纯化；
步骤四、检测西红花酸对单核细胞和中性粒细胞的影响；
步骤五、利用统计学处理西红花酸对单核细胞和中性粒细胞的影响即可得知西红花酸对AGEs的抑制效果。
CN2010105581262A 2010-11-25 2010-11-25 一种西红花酸对AGEs抑制效果的检测方法 Pending CN102478569A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2010105581262A CN102478569A (zh) 2010-11-25 2010-11-25 一种西红花酸对AGEs抑制效果的检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2010105581262A CN102478569A (zh) 2010-11-25 2010-11-25 一种西红花酸对AGEs抑制效果的检测方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN102478569A true CN102478569A (zh) 2012-05-30

Family

ID=46091281

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2010105581262A Pending CN102478569A (zh) 2010-11-25 2010-11-25 一种西红花酸对AGEs抑制效果的检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN102478569A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103884787A (zh) * 2014-02-21 2014-06-25 华南理工大学 一种肽-晚期糖基化终末产物的检测方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0259893A2 (en) * 1986-09-12 1988-03-16 The Rockefeller University Agents for removing advanced glycosylation endproducts

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0259893A2 (en) * 1986-09-12 1988-03-16 The Rockefeller University Agents for removing advanced glycosylation endproducts

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
向敏等: "西红花酸对晚期糖基化终产物诱导牛血管内皮细胞 E-选择素表达的抑制作用", 《中国临床药理学与治疗学》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103884787A (zh) * 2014-02-21 2014-06-25 华南理工大学 一种肽-晚期糖基化终末产物的检测方法
CN103884787B (zh) * 2014-02-21 2015-06-03 华南理工大学 一种肽-晚期糖基化终末产物的检测方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Narauskaitė et al. Extracellular vesicles in skin wound healing
Xin et al. The inhibitory effect of a polysaccharide from Codonopsis pilosula on tumor growth and metastasis in vitro
Carvalhal et al. Antithrombotics from the sea: Polysaccharides and beyond
CN106047968B (zh) 大鲵活性肽及用途
Majdoub et al. Anticoagulant activity of a sulfated polysaccharide from the green alga Arthrospira platensis
Cao et al. Anticoagulant and antithrombotic properties in vitro and in vivo of a novel sulfated polysaccharide from marine green alga Monostroma nitidum
Mapoung et al. Skin wound-healing potential of polysaccharides from medicinal mushroom Auricularia auricula-judae (Bull.)
Park et al. Functional polysaccharides from Grifola frondosa aqueous extract inhibit atopic dermatitis-like skin lesions in NC/Nga mice
Hu et al. Therapeutic potentials of extracellular vesicles for the treatment of diabetes and diabetic complications
CN102618614B (zh) 一种同时制备单环刺螠糖胺聚糖和抗菌肽的方法
Liu et al. Anticoagulant properties of a green algal rhamnan-type sulfated polysaccharide and its low-molecular-weight fragments prepared by mild acid degradation
CN105483183A (zh) 一种马尾藻寡糖的制备方法及其在降血糖药物中的应用
Guo et al. Structural characterization and repair mechanism of Gracilaria lemaneiformis sulfated polysaccharides of different molecular weights on damaged renal epithelial cells
CN104591334B (zh) 一种紫球藻胞外多糖吸附金属离子的方法
Kim et al. Isolation of aloe saponaria-derived extracellular vesicles and investigation of their potential for chronic wound healing
CN108553481A (zh) 一种具有促进伤口愈合作用的糖类组合物及其应用
CN105585639A (zh) 一种蛹虫草子实体杂聚多糖及其应用
CN104278077B (zh) 一种高通量快速筛选罗氏沼虾免疫增强剂的方法
CN101974085B (zh) 一种从天然水蛭中提取高抗凝活性水蛭素的方法
CN101220100B (zh) 一种南瓜多糖分离纯化的方法及所得组分的用途
Severo et al. Microalgae-derived polysaccharides: Potential building blocks for biomedical applications
Ren et al. Structural characteristics of Rehmannia glutinosa polysaccharides treated using different decolorization processes and their antioxidant effects in intestinal epithelial cells
CN102478569A (zh) 一种西红花酸对AGEs抑制效果的检测方法
Piccapane et al. A novel formulation of glucose-sparing peritoneal dialysis solutions with L-carnitine improves biocompatibility on human mesothelial cells
CN104370984B (zh) 高效低毒匹马霉素衍生物及其制备方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20120530