JPS6312291A - トランス−４−シアノシクロヘキサン−１−カルボン酸の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、トランス−４−シアノシクロヘキサン−１−
カルボン酸の新規な製造方法に関する。

本発明の目的は、止血剤等の医薬としてきわめて有効で
あるトランス−４−アミノメチルシクロヘキサン−１−
カルボン酸、および抗潰瘍剤等として著効を示す塩酸セ
トラキサートの製造中間体であるトランス−４−シアノ
シクロヘキサン−１−カルボン酸を、新規な手法を用い
て工業的に製造することにある。

（従来の技術） ４−シアノシクロヘキサン−１−カルボン酸の製造に関
する従来の方法としては、例えば、ヘキサテレフタル酸
にアンモニアガスを接触させる方法（特公昭４７−２３
５５５）、１，４−ジシアノシクロヘキサンをメタノー
ル中塩酸ガスを通じ、そのイミデートとし７ｔｆｆｌ、
加水分解して４−シアノシクロヘキサン−１−カルボン
酸メチルを製造する方法（特開昭５５−１５４５１）、
１．４−ジシアノシクロヘキサンにアンモニアガスを接
触させる方法＜ｆＦ開昭４８−３４１４４）等が知られ
ている。

（発明が解決しようとする問題点） 従来の製造方法は、すべて合成技術を用いる手法である
友め、高温、高圧な反応条件を必要とし、かつ副生物の
生成によシ、目的物の精製が煩雑である。ｉた、従来の
製造法においては、トランス体の原料からトランス−４
−シアノシクロヘキサン−１−カルボン酸を、立体配置
を保持させて製造することが困難である。

（問題点を解決する友めの手段） 本発明者らは、上記の問題点を解決する念め、常温常圧
で、かつ立体配置を保持させることのできる微生物の生
化学的作用を利用する新規な製造方法を見い出し友。す
なわち、式（Ｉ）Ｎ で示されるトランス−１，４−ジシアノシクロヘキサン
から、微生物の作用を用いて、式（ｎ）＝ Ｎ テ示すしるトランス−４−シアノシクロヘキサン−１−
カルボン酸を製造する方法である。

一般に、ニトリル基をカルボキシル基に変換する生化学
的作用、すなわち、酵素はニトリラーゼとして知られて
いる〔アーカイプス・バイオケミストリー・アンド・バ
イオフィジックス（Ａｒｃｈ。

Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　）第１０７巻、
６２頁へ６８頁（１９６４年）、または発酵と工業、第
４１巻。

３８２頁〜３８８頁（１９８３年）〕。しかし、シクロ
ヘキサン１ａを含むニトリル化合物を基質として対応す
るカルボン酸へ変換する反応＃−１ｔまったく知られて
いない。さらに、（Ｉ）の二つのニトリル基のうちの一
方のニトリル基のみを、カルボキシル基に立体配置を保
持し比まま変換することもまったく知られていない。

そこで、本発明者らは、σ）を（ｎ）に変換する能力を
持つ微生物を探索し、キヤンデイダ・ギアモンデイ（Ｃ
ａｎｄｉｄａ　ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ　）　Ｉ
　Ｆ　ＯＯ４５４に該変換能力を発見し、本発明を完成
するに至った。

次に、本発明の実施方法について説明する。

（１）反応方法 本発明における（Ｉ）ｉｎ）に変換する反応方法とは、
具体的には、前記微生物’ｋ　（Ｉ）の存在下に培養す
る方法と、微生物培養物、さらに、そこから集めた菌体
または菌体処理物（たとえば、菌体の破砕物ま友は菌体
よシ分離抽出した酵素）とσ）とを接触させる方法の二
つの方法がある。ま几、菌体。

菌体処理物、または菌体から抽出された酵素を適当な方
法によシ担体に固定化し７ｔｉ、（Ｉ）と反応させても
よい。

（１１）培養方法 本発明で使用される微生物の培養は、公知の方法に準じ
て行うことができる。使用する培地は。

一般微生物の栄養源として公知のものが利用でき、グル
コース、グリセリン、シュークロースマ几ハデキストリ
ン等の炭素源、硫酸アンモニウムまたは塩化アンモニウ
ム等の窒素源、酵母エキス、麦芽エキス、ペプトンま几
は肉エキス等の有機栄養源、リン酸、マグネシウム、カ
リウム、　鉄、−ｒ　ｙガン等の無機栄養源を適宜組合
わせて便用できる。

ｔた、微生物のσ）から（ｎ）への変換活性を促進する
物質として、ビタミン類ま友はトランス−１，４−ジシ
アノシクロヘキサン等の化合物全添加してもよい。

培地のｐＨは６〜１０の範囲で選べばよく、培養温度は
１８〜５７Ｃ１好ましくは２５〜３２Ｃの温度がよい。

培養日数は１〜５日の範囲で活性が最大になるまで培養
すればよい。

（ｍ　＞反応条件 反応媒体としては、水、緩衝液ま九は培養液等の水性媒
体が使用できる。反応媒体中へは、σ）を粉末のままで
、あるいは適当な溶媒に溶かして添加する。（Ｉ）の添
加濃度は０．０１〜１Ｘ量係程度がよく、反応媒体中に
完全溶解しなくてもよい。反応に菌体を使用する場合の
菌体の濃度は、通常０．０５〜５重量囁の範囲でよい。

反応温度は５〜５０Ｃ１好ましくは２５へ３７Ｃ１反応
ｐｎは４〜１１、好ましくは６〜９がよい。反応は通常
５〜１００時間の範囲で適当な時間を選べばよい。

消費される（Ｉ）は、連続的にまたは間歇的に補充して
、反応液中のＩＩＩ［が上記の範囲内に維持されるよう
に添加してもよい。

（１ｖ）回収 生成され友（ｎ）は、菌体等の不溶物を除去しｔ反応終
了液より、公知の方法（溶媒抽出あるいは晶析等）によ
シ容易に回収することかで酩。

（実施例） 次に、本発明を実施例をもって説明する。

実施例１ グルコース０．４ｆ、）ランス−１，４−ジシアノシク
ロヘキサン０．２り、リン酸二カリウム０．２ｆ。

塩化ナトリウム０．１　？、硫酸マグネシウム０．０２
　ｆ。

ビオチン１μ？、チアミン塩酸塩１μ２を含み、ｐＨを
９．０とし友殺菌培地１０（ｌｄに、あらかじめ同培地
で培養したキヤンデイダ・ギアモンデイ（Ｃａｎｄｉｄ
ａ　ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ　）　　ＩＦＯ０４
５４ｆｊＩ：植菌し、３２Ｃで４日間振盪培養した。

培養液から遠心分離にて菌体を除去した後、その上清液
に濃塩酸を加え、ｐ　Ｈｆ　１．０〜２．０に調整し、
５Ｃの冷蔵庫に放置し九ところ、トランス−４−シアノ
シクロヘキサン−１−カルボン駿Ｑ、１６２ｆ’に白色
結晶として得たう本製品は、高速液体クロマト分析で単
一ピークを示し、シス一体のピークはまったく見られな
かつ几。

元素分析値は次のとおシであり、 ＣＨ 計算＠　６２．７５係　　　７．１９％実測値　６１．
２　係　　　７．３　　％融点は１５０〜１５２Ｃとな
り、赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ　）においては２．
２５５（ｍ−’（シフ〕基）の吸収を示した。

なお、高速液体クロマト分析は、以下のようにして行っ
た。分析装ｒｊｊＬ：ウォーターズ社製６０００Ａ型ボ
ング、東洋ソーダ製ＲＩ−８型ＲＩ検出器、日本分光製
ＵＶＩＤＥＣ−１００型ＵＶ検出器。カラム；ユニシル
　Ｃ−１８゜溶媒；水／アセトニトリル−７７７２３（
容量比）−１−ＰＩＣＢ−７（ウォーターズ社製）１．
５容量鴨。

実施例２ グルコース０．８１、酵母エキス０．０２ｆ、　　リン
酸二カリウム０．２ｆ、塩化ナトリウム０．ＩＰ、硫酸
マグネシウム０．０２　Ｆ、トランス−１，４−ジシア
ノシクロヘキサン０．４ｔｆ含み、ｐＨ’に９・０とし
几殺菌培地１００−に、あらかじめ同培地で培養したト
ルロプシス・キシリナスＩＦＯＯ４５４を植菌し、３２
Ｃ，５日培養した優、遠心分離により菌体（湿１ｉｉ１
１．７　ｆ　）を得た。この菌体を、０．０１ＭＩＪン
酸カリウムバッファー２５ｍ？含Ｊ三角フラスコ中に懸
濁させ友後、トランス−１，４−ジシアノシクロへキサ
７０．１ｆｆ加え、３２Ｃ１２５０回転の振盪器を用い
て反応させ友。７０時間後に反応を終了し、遠心分離に
より菌体を除去した後、その上清液に製塩ｉ！！２を加
え、ｐＨを１．０〜２．０に調整し、５Ｃの冷蔵庫に一
晩放置した。

トランス−４−シアノシクロヘキサン−１−カルボン酸
０．０８２ｆｔ−白色結晶として得友。

本製品は、高速液体クロマト分析で単一ピークを示し、
シス体のピークはまつ友く見られなかった。

（発明の効果） 本発明を利用することによシ、トランス−４−シアノシ
クロヘキサン−１−カルボン酸ヲ常温常圧の反応条件下
で、高濃度に生成させることができ、さらに、立体配置
を保持させて製造することができるので、経済上非常に
有利である。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）キヤンデイダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属に属し、トラ
   ンス−１，４−ジシアノシクロヘキサンをトランス−４
   −シアノシクロヘキサン−４−カルボン酸に変換させる
   能力を有する微生物の作用により、トランス−１，４−
   ジシアノシクロヘキサンからトランス−４−シアノシク
   ロヘキサン−１−カルボン酸を生成させることを特徴と
   するトランス−４−シアノシクロヘキサン−４−カルボ
   ン酸の製造方法。
2. （２）キヤンデイダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属に属する微生
   物がキヤンデイダ・ギアモンデイ（Ｃａｎｄｉｄａｇｕ
   ｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ）ＩＦＯ０４５４である特許
   請求の範囲第１項記載の方法。