JPS63119674A

JPS63119674A - プロテア−ゼ液の製造方法

Info

Publication number: JPS63119674A
Application number: JP26708986A
Authority: JP
Inventors: Sumio Maekawa; 前川　澄生; Yoshihiro Watanabe; 渡辺　良弘
Original assignee: Lion Corp
Current assignee: Lion Corp
Priority date: 1986-11-10
Filing date: 1986-11-10
Publication date: 1988-05-24

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は液体洗剤等に対する添加剤として使用されるプ
ロテアーゼ液の製造方法に関し、特に無着色のプロテア
ーゼ液を製造する方法に係る。

〔従来の技術〕

液体ヘビー洗剤、液体漂白剤、台所用液体洗剤等では、
プロテアーゼ液を添加してその能力を増強することが従
来広く行なわれている。添加されたプロテアーゼ液は、
洗浄または漂白の対象に付着している蛋白質を分解する
ことにより、洗浄能力或いは漂白能力を増強する。

上記洗浄剤用あるいは漂白剤用のプロテアーゼとしては
、微生物により産生されたものが用いられている。この
プロテアーゼ産生微生物の大部分は色素も同時に産生ず
るから、得られたプロテアーゼを濃縮し、または顆粒に
したときの着色が激しいため、この状態で添加すると洗
浄剤等の商品価値が低下してしまう。

従って、上記目的に使用するプロテアーゼ液の製造では
脱色を行なう必要があるが、脱色時にプロテアーゼの失
活を伴う方法は用いられない。そこで、従来は微生物由
来のプロテアーゼを含んだ酵素液をイオン交換樹脂に通
し、液中に含まれる色素を吸着して除去する方法が用い
られている（特公昭３２−２０９４号）。

〔発明が解決しようとする問題点〕

しかしながら、上記従来の方法では酵素液中の不純物の
ためにイオン交換樹脂の再生使用が困難であるため、必
然的にコストが高くなってしまう問題があった。

上記事情に鑑み、本発明は微生物由来のプロテアーゼ液
をプロテアーゼの失活を伴うことなく低コストで脱色し
、着色の少ないプロテアーゼ液を製造できる方法を提供
しようとするものである。

〔発明の概要〕

本発明によるプロテアーゼ液の製造方法は、微生物由来
のプロテアーゼを含む着色した溶液を、ｐＨ６〜１２．
温度０〜４０℃の条件下において、亜二チオン酸ナトリ
ウムまたは過炭酸ナトリウムを添加することにより脱色
する工程を含むことを特徴とするものである。

本発明において、亜二チオン酸ナトリウムまたは過炭酸
ナトリウムの添加量は５％以上とするのが望ましい。

本発明による製造方法は、プロテアーゼ産生微生物とし
てバチルス・エスピー・Ｙ　株（Ｂ　ａｃｌｌｕｓｓｐ
、Ｙ　；微工研菌寄第１０２９号）を用いる場合に特に
効果的である。このバチルス・エスピー・Ｙ株について
は特願昭００−１２３０２１号として先に特許出願して
おり、その主な菌学的性質は次の通りである。

（１）　０．４〜０．５　ｐｘ　Ｘ　１．７〜１．９ｐ
の大きさの桿菌。

（２）多形性なし。

（３）周鞭毛を有し、運動性あり。

（４）胞子形成能あり。成熟した胞子はレモン型で、大
きさは０．７〜０．９４　Ｘ　１．０〜１．２４０（５
）ダラム染色陽性。

（６）抗酸性は陰性。

（７）肉汁寒天平板培養すると、ｐｘ７．ｏにて生育し
、円形偏平状、金縁のコロニーを形成する。

該コロニーの表面は滑らかで光沢あり、その周辺部は単
用色、中心部は半透明の単用色。また、ｐＨ１ｏ、０に
て生育して円形、平板状、金縁コロニーを形成する。該
コロニーの表面は滑らかで光沢があり、クリーム色。

（８）肉汁寒天斜面培養すると、ｐＨ７，０〜ｐＨ１０
，０にて拡帯状に生育し、光沢のあるクリーム色ないし
淡褐色のコロニーを形成する。赤褐色の色素を僅かに生
成する。

（９）肉汁液体培養では、ｐＨ７，０で生育するが、菌
膜は形成しない。ｐ　Ｈ１０，０で生育が良好で、菌膜
は形成しない。

（１０）肉汁ゼラチン穿刺培養では、ｐＨ７，０にて僅
かに液化する。Ｉ）　Ｈ１０，０では液化する。

（１１）リドマス・ミルク培養すると、ｐＨ７，０にお
いて生育が非常に悪いが、ｐ　Ｈ１０，０では生育する
。ミルクの凝固は見られない。培地がアルカリ性のため
、リドマス変色は不明。

（１２）硝酸塩の還元：陽性（１３）脱窒反応：陽性（１４）ＭＲテスト：陰性。

（１５）ＶＰテスト：陰性。

（ｌＢ）インドールの生成：陰性。

（１７）硫化水素の生成：陰性。

（１８）デンプンの加水分解：陽性。

（１９）　Ｋ　ｏｓｅｒの培地ではクエン酸の利用なし
。Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎの培地では僅かに利用する。

（２０）無機窒素源として硝酸塩は利用しない。アンモ
ニウム塩も利用しない。

（２１）色素は生成しない。

（２２）ウレアーゼ活性：陽性。

（２３）オキシダーゼ活性：陽性。

（２４）カタラーゼ活性：陽性。

（２５）生育の温度範囲は３３〜３５°Ｃ付近が良好。

（２Ｂ）生育のｐＨ範囲は１０．０付近が良好。

（２７）酸素に対する態度：好気性（２８）Ｏ−Ｆテスト：陰性。

〔作用〕

本発明で使用する亜二チオン酸ナトリウム（）１イドロ
サルフアイトナトリウム）は還元剤であり、この場合の
脱色作用は色素等の着色物質の還元によるものである。

また、過炭酸ナトリウムによる脱色作用は色素等の着色
物質の酸化による。何れの場合にもプロテアーゼ活性は
ほとんど失活しない。

なお、還元剤または酸化剤による脱色方法は一般に公知
であるから、本発明における要点は、上記特定の還元剤
または酸化剤を用いることでプロテアーゼ活性の失活を
防止する点にある。

また、特に亜二チオン酸ナトリウムには酵素を安定化さ
せる作用が認められた。

〔実施例〕

実施例１酵素濃縮液の製造まず、脱脂大豆粉８００ｇおよび燐酸二カリウム４０ｇ
を水８ｉ中に溶解したものと、可溶性デンプン２．００
０ｇおよび硫酸マグネシウム４ｇを水８ノ中に溶解した
ものと、炭酸ソーダ２００ｇを水４ノ中に溶解したもの
とを調製し、この夫々を１２０℃で１５分間滅菌した。

これを予め滅菌しである操作容ｆｆ１２０．ｌ’のジャ
ーファーメンタに収容し、混合して培地を調製した。

次いで、上記の培地に前培養した特願昭６０−１２３０
２１号に記載のバチルスやエスピー・Ｙ　株（Ｂ　ａｃ
ｌｌｕ’ｓ　ｓｐ、Ｙ　；微工研菌寄第１０２９号）を
接種し、３７℃で通気攪拌しながら４０時間培養した。

この培養液から遠心分離により菌体およびその他の不溶
分を除去した。菌体分離後の上澄液は、除外濾過膜を用
いて濃縮し、２４０ｇの濃縮液を得た。この濃縮液の酵
素力価は５３万ＰＵ／ｇで、色素濃度はり、ＯＱＯであ
った。なお、色素濃度は次のようにしてａ＃１定計算し
たものである。即ち、光路長１ｃｆｆｌの石英セルを用
い、波長４２０ｎｍにおける吸光度を測定する。吸光度
が０゜５を越える場合には適宜純水にて稀釈し、下式で
計算される値を色素濃度とする。

色素濃度−稀釈液の吸光度×稀釈倍率×１０脱色上記濃縮液Ｌｏｇは全酵素力価が５３０万ＰＵで、全色
素量は１万である。この１０ｇの濃縮液をビー力に取り
、亜二チオン酸ナトリウムＩｇ（１０％）を添加し、ｐ
Ｈ８，５，温度５℃で２時間放置後の全色素量（色素濃
度に液量を乗したもの）は３，０００で、脱色率は７０
％であった。また、酵素液の全活性は５３０万ＰＵで、
全く低下しなかった（活性残存率１００％）。尚、脱色
率および活性残存率の意味は次の通りである。

く脱色率〉脱色前の全色素ニー脱色後の全色素−八としたとき、脱色率＝（Ａ／脱色前の全色素Ｑ）Ｘ１００く活性残存
率〉処理前の全酵素力価−Ｂ処理後の全酵素力価−Ｃとしたとき、活性残存率−（Ｃ／Ｂ）　Ｘ１００更に、脱色剤の種類を変えて上記と同様の条件で処理し
たところ、第１表に示す結果が得られた。

第１表実施例２実施例１で得られた酵素濃縮液（酵素力価５３万ＰＵ／
ｇ、色素濃度１，０００　）を二つのサンプル瓶に各々
１０ｇづつ取り、このうちの一つに亜二チオン酸ナトリ
ウムＩｇ　　（１０％）を添加した。この二つのサンプ
ル瓶は、中の濃縮液が乾燥しないように蓋をした上、３
５℃、ｐＨ８，５で１ケ月保存した。

その結果、第２表に示すように亜二チオン酸ナトリウム
を添加したものは活性残存率９５％であった。

第２表実施例３実施例１で得られた酵素濃縮液（酵素力価５３万ＰＵ／
ｇ、色素濃度１，０００　）を１０ｇづつを五つのビー
カーに取り、亜二チオン酸ナトリウム１ｇづつを以下の
温度下で加えたところ、脱色率、活性残存率は第３表の
ようになった。

この結果から、５０℃では温度により酵素の失活が大き
くなるため、４０℃を越える温度での操作は困難である
ことが分る。

第３表実施例４実施例１で得られた酵素濃縮液を１０ｇづつ五つのビー
カーに取り、これに夫々Ｉｇ（１０％）の亜二チオン酸
ナトリウムを加え、ｐＨを下表のようにコントロールし
て５°Ｃで２時間処理した後の脱色率および活性残存率
を調べたところ、第４表に示す結果が得られた。

この結果から、ｐＨ３，０以下またはｐ　Ｈ１３，５以
上では酵素の失活が大きくなるため、ｐＨ６，０〜ｐ　
Ｈ１２，０の範囲外での操作は困難であることが分る。

第４表実施例５実施例１で得られた酵素濃縮液を１０ｇづつ五つのビー
カーに取り、これに亜二チオン酸ナトリウムを第５表に
示すように添加し、ｐＨを８．５にコントロールして５
°Ｃで２時間処理した後の活性残存率および脱色率を調
べた。その結果を第５表に示す。

この結果から、亜二チオン酸のナトリウムの添加量が５
重工％以上で良好な結果を得られることが分る。

第５表〔発明の効果〕以上詳述したように、本発明によれば安価な脱色剤を用
いることにより、微生物由来のプロテアーゼ液をプロテ
アーゼの失活を伴うことなく脱色でき、着色の少ないプ
ロテアーゼ液を低コストで製造できる等、顕著な効果が
得られるものである。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）微生物由来のプロテアーゼを含む着色した溶液を
、ｐＨ６〜１２、温度０〜４０℃の条件下において、亜
二チオン酸ナトリウムまたは過炭酸ナトリウムを添加す
ることにより脱色する工程を含むことを特徴とするプロ
テアーゼ液の製造方法。
（２）前記微生物由来のプロテアーゼを含む着色した溶
液が、バチルス・エスピー・Ｙ株（Ｂａｃｉｌｕｓ　ｓｐ．Ｙ：微工研条寄第１０２９号
）の産生したプロテアーゼを含む着色した溶液であるこ
とを特徴とする特許請求の範囲第（１）項記載のプロテ
アーゼ液の製造方法。