JPS6279778A - 新規ス−パ−オキシドデイスムタ−ゼ及びその製造方法 - Google Patents
新規ス−パ−オキシドデイスムタ−ゼ及びその製造方法Info
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- JPS6279778A JPS6279778A JP60220215A JP22021585A JPS6279778A JP S6279778 A JPS6279778 A JP S6279778A JP 60220215 A JP60220215 A JP 60220215A JP 22021585 A JP22021585 A JP 22021585A JP S6279778 A JPS6279778 A JP S6279778A
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0089—Oxidoreductases (1.) acting on superoxide as acceptor (1.15)
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- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
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- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
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- Medicinal Chemistry (AREA)
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、新規なスーパーオキシドディスムターゼ（ｓ
ｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ｄｉｓｍｕｔａｓｅ 、以下ＳＯ
Ｄと略称する）およびその製造法に関する。
ｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ｄｉｓｍｕｔａｓｅ 、以下ＳＯ
Ｄと略称する）およびその製造法に関する。
ＳＯＤはスーパーオキシドラジカルを過酸化水素分子と
酸素分子に不均化する酵素であり、広く動植物・微生物
にその存在が知られている。スーパーオキシドラジカル
は生体内で発生する活性酸素前の一つであり、ＳＯＤは
、スーパーオキシドラジカルを消去することにより、ス
ーパーオキシドラジカル自身、およびこれから生ずる他
の活性酸素から生体を守るために機能しているものと理
解されている。近年、活性酸素の様々な生理的作用が明
らかにされるに伴ないＳＯＤの生体防御酵素としての役
割が注目されている。たとえば、食品等の被酸化性物質
の酸化抑制（特開昭５Ｏ−４０７８５）、または化粧料
組成物の一成分として皮膚・毛髪の保護・皮膚への色素
沈着抑制、皮膚に対する抗炎症作用や化粧料組成物中の
成分の変敗防止（特開昭５１−６３９４９、特開５５−
８７７１２）などの作用やりウマチ関節炎等の治療（Ｍ
、Ｗａｌｒａｖｅｎｓ ＆ Ｊ、Ｄｅｑｕｅｋｅｒ 。
酸素分子に不均化する酵素であり、広く動植物・微生物
にその存在が知られている。スーパーオキシドラジカル
は生体内で発生する活性酸素前の一つであり、ＳＯＤは
、スーパーオキシドラジカルを消去することにより、ス
ーパーオキシドラジカル自身、およびこれから生ずる他
の活性酸素から生体を守るために機能しているものと理
解されている。近年、活性酸素の様々な生理的作用が明
らかにされるに伴ないＳＯＤの生体防御酵素としての役
割が注目されている。たとえば、食品等の被酸化性物質
の酸化抑制（特開昭５Ｏ−４０７８５）、または化粧料
組成物の一成分として皮膚・毛髪の保護・皮膚への色素
沈着抑制、皮膚に対する抗炎症作用や化粧料組成物中の
成分の変敗防止（特開昭５１−６３９４９、特開５５−
８７７１２）などの作用やりウマチ関節炎等の治療（Ｍ
、Ｗａｌｒａｖｅｎｓ ＆ Ｊ、Ｄｅｑｕｅｋｅｒ 。
カレント・セラピュテインク・リサーチ（ｃｕｒｒｅｎ
ｔＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｒｅｓ、） ２０巻、６２
−６９頁、 １９７６）に有効であることが見い出され
ている。
ｔＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｒｅｓ、） ２０巻、６２
−６９頁、 １９７６）に有効であることが見い出され
ている。
ＳＯＤは金属酵素であり、含有する金属により、銅、亜
鉛（ｃｕ、 Ｚｕ） Ｓ ＯＤ、マンガン（Ｍｎ）
−５ＯＤ、鉄（Ｆｅ）−３ＯＤの３種があり、Ｃｕ、Ｚ
ｕ−３ＯＤは真核生物の細胞質、Ｍｎ −３ＯＤは真核
生物のミトコンドリア、藻類、原核細胞、Ｆｅ−３ＯＤ
は藻類、原核細胞に分布することが知られている。しか
しながら、本発明のＳＯＤと同一のＳＯＤは知られてい
ない。
鉛（ｃｕ、 Ｚｕ） Ｓ ＯＤ、マンガン（Ｍｎ）
−５ＯＤ、鉄（Ｆｅ）−３ＯＤの３種があり、Ｃｕ、Ｚ
ｕ−３ＯＤは真核生物の細胞質、Ｍｎ −３ＯＤは真核
生物のミトコンドリア、藻類、原核細胞、Ｆｅ−３ＯＤ
は藻類、原核細胞に分布することが知られている。しか
しながら、本発明のＳＯＤと同一のＳＯＤは知られてい
ない。
本発明は新規なＳＯＤ及びその製造方法を提供しようと
するものである。
するものである。
上記の目的は、次に詳細に記載する性質を有する新規な
ＳＯＤ、及びノカルディオプシス（Ｎｏｃａｒｄｉ−ｏ
ｐｓ ｉｓ）属に属する放線菌を用いるその製造方法に
より解決される。
ＳＯＤ、及びノカルディオプシス（Ｎｏｃａｒｄｉ−ｏ
ｐｓ ｉｓ）属に属する放線菌を用いるその製造方法に
より解決される。
本発明者らは、ＳＯＤについて有用な給源を得るため、
広（自然界からＳＯＤ生産性の高い微生物を検索した結
果、鹿児島県屋久島の土壌より分離したノカルディオプ
シス（Ｎｏｃａｒｄ １ｏｐｓ ｉｓ）属に属する放線
菌が、新規ＳＯＤを著量生産することを見い出し、この
知見に基いて本発明を完成した。
広（自然界からＳＯＤ生産性の高い微生物を検索した結
果、鹿児島県屋久島の土壌より分離したノカルディオプ
シス（Ｎｏｃａｒｄ １ｏｐｓ ｉｓ）属に属する放線
菌が、新規ＳＯＤを著量生産することを見い出し、この
知見に基いて本発明を完成した。
以下に、本発明によって得られるＳＯＤの性質を記載す
る。
る。
（ａｌ 作用：スーパーオキシドラジカルを過酸化水
素分子と酸素分子とに不均化する。
素分子と酸素分子とに不均化する。
（ｂ） 基質特異性：スーパーオキシドラジカルに作
用する。
用する。
（ｃ１作用至適ｐＨ：本酵素の作用至適ｐＨは８付近に
ある。
ある。
（ｄｌ 安定ｐ Ｈ範囲： ｐ Ｈ４，５〜８．０で
は、２５°Ｃ６０分間処理後、８０％以上の残存活性が
ある（第１図）。
は、２５°Ｃ６０分間処理後、８０％以上の残存活性が
ある（第１図）。
（ｅ）熱安定性：本酵素をｐＨ７，８にて１０分間加熱
処理すると、５０℃付近までは安定であり、６０℃で９
０％、７０℃で５０％の残存活性がある（第２図）。
処理すると、５０℃付近までは安定であり、６０℃で９
０％、７０℃で５０％の残存活性がある（第２図）。
（ｆ） 分子量：約８８０００ （高速液体クロマ
トグラフィーによるゲル濾過法（０，２Ｍ塩化ナトリウ
ムを含む０．０１Ｍリン酸緩衝液ｐ Ｈ７，０で平衡化
したシンパック（Ｓｈｉｍｐａｋ）ＤＩＯＬ １５０（
島津製作所製）を用いた）による。）また、１％ラウリ
ル硫酸ナトリウム（以下ＳＤＳと略称する）で処理した
後、ＳＤＳ存在下のポリアクリルアミド電気泳動法〔ザ
・ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（
ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ
Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ） ２４４巻。
トグラフィーによるゲル濾過法（０，２Ｍ塩化ナトリウ
ムを含む０．０１Ｍリン酸緩衝液ｐ Ｈ７，０で平衡化
したシンパック（Ｓｈｉｍｐａｋ）ＤＩＯＬ １５０（
島津製作所製）を用いた）による。）また、１％ラウリ
ル硫酸ナトリウム（以下ＳＤＳと略称する）で処理した
後、ＳＤＳ存在下のポリアクリルアミド電気泳動法〔ザ
・ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（
ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ
Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ） ２４４巻。
５０７４〜５０８０頁、 １９６９年参照）により約２
２０００の分子量を得た。この結果、本酵素は分子量約
２２０００のサブユニットの４量体から成り立っている
ことがわかる。
２０００の分子量を得た。この結果、本酵素は分子量約
２２０００のサブユニットの４量体から成り立っている
ことがわかる。
（ｇ） 紫外部及び可視部領域の吸収スペクトル二図
３に示すように、本酵素は２８Ｏｎｍ付近に極大吸収を
、２５０ｎｍ付近に極小吸収があり、２９０ｎｍ付近に
肩をもっている。
３に示すように、本酵素は２８Ｏｎｍ付近に極大吸収を
、２５０ｎｍ付近に極小吸収があり、２９０ｎｍ付近に
肩をもっている。
（ｈ） 分子吸光係数：本酵素の２８０ｎｍにおける
分子吸光係数は約１．４５Ｘ １０’ Ｍ−’ａｍ−’
である。
分子吸光係数は約１．４５Ｘ １０’ Ｍ−’ａｍ−’
である。
（ｉ） シアン化カリウムによる活性阻害：後述する
チトクロームＣ法により、反応液中に１ｍＭのシアン化
カリウムを添加しても活性阻害はみられない。
チトクロームＣ法により、反応液中に１ｍＭのシアン化
カリウムを添加しても活性阻害はみられない。
０１ 過酸化水素による活性失活：本酵素溶液に５ｍ
Ｍになるよう過酸化水素を加えたものを用い、後述のチ
トクロームＣ法により活性を測定したところ、経時的指
数的に失活する（第４図）。
Ｍになるよう過酸化水素を加えたものを用い、後述のチ
トクロームＣ法により活性を測定したところ、経時的指
数的に失活する（第４図）。
（ｋｌ 金属分析：本酵素は原子吸光分析法により、
酵素１モル当り１．５６ｇ原子の鉄を含み、銅、マンガ
ンを含まない。
酵素１モル当り１．５６ｇ原子の鉄を含み、銅、マンガ
ンを含まない。
本発明のＳＯＤの活性測定法は次の通りである。
（１） チトクロームＣ法：ザ・ジャーナル・オブ。
バイオロジカル・ケミストリー（Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａ
ｌ ｏｆ １Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓ
ｔｒｙ）２４４巻、 ６０４９〜６０５５頁。
ｌ ｏｆ １Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓ
ｔｒｙ）２４４巻、 ６０４９〜６０５５頁。
１９６９年に記載の方法に従う。すなわち、最終濃度と
して５０ｍＭ リン酸緩衝液（ｐＨ７，８）、０．１ｍ
Ｍエチレンジアミン四酢酸ナトリウム、１０μｍフェリ
チトクロームＣ１５０μｍキサンチンとなるように反応
液（０，４ｍｊりを調製し、これにリン酸緩衝液（ｐＨ
７，８）で測定可能な範囲に希釈した酵素液（５０μｍ
）を添加し、さらにキサンチンオキシダーゼ溶液（５０
μｌ）を添加し、全量を０．５ｍＪとする。２５℃下に
おいて、分光光度計による５５０ｎｍにおけるチトクロ
ームＣ還元に基づく吸収増加の初速度（ｖ）を測定する
。
して５０ｍＭ リン酸緩衝液（ｐＨ７，８）、０．１ｍ
Ｍエチレンジアミン四酢酸ナトリウム、１０μｍフェリ
チトクロームＣ１５０μｍキサンチンとなるように反応
液（０，４ｍｊりを調製し、これにリン酸緩衝液（ｐＨ
７，８）で測定可能な範囲に希釈した酵素液（５０μｍ
）を添加し、さらにキサンチンオキシダーゼ溶液（５０
μｌ）を添加し、全量を０．５ｍＪとする。２５℃下に
おいて、分光光度計による５５０ｎｍにおけるチトクロ
ームＣ還元に基づく吸収増加の初速度（ｖ）を測定する
。
また酵素液のかわりにリン酸緩衝液（ｐＨ７，８）を添
加したときの上記吸収増加の初速度（Ｖ）をも測定する
。酵素力価は上記反応条件下において、チトクローム還
元に基づく吸収増加初速度を５０％阻害する酵素量を１
ユニツト（ｕ）とすると、（Ｖ／ｖ−１）の式から求め
ることができる。ただし、当チトクロームＣ法は、培養
上清などの粗Ｗ素商品を用いた場合にはこれに含まれる
夾雑物により著しい干渉がおきるため正しく活性測定を
：〒なうことができない。したがって、精製過程のとり
わけ粗精製段階では下記の方法により活性測ミを行なう
。
加したときの上記吸収増加の初速度（Ｖ）をも測定する
。酵素力価は上記反応条件下において、チトクローム還
元に基づく吸収増加初速度を５０％阻害する酵素量を１
ユニツト（ｕ）とすると、（Ｖ／ｖ−１）の式から求め
ることができる。ただし、当チトクロームＣ法は、培養
上清などの粗Ｗ素商品を用いた場合にはこれに含まれる
夾雑物により著しい干渉がおきるため正しく活性測定を
：〒なうことができない。したがって、精製過程のとり
わけ粗精製段階では下記の方法により活性測ミを行なう
。
（２）ニトロブルーテトラゾリウム（Ｎ Ｂ Ｔ）法：
バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ
・コミユニケーシヨンズ（Ｂｉｏｃｈｅｎｉｃａｌ＋ｎ
ｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ Ｃｏ
ｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ） ４６壱、８４９〜８５４
頁、 １９７２年に記載の方法を改変して行なった。す
なわち、最終濃度として０．１ Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ
７，５）、６μｍフェナジンメソサルフェート、０．１
ｍＭニトロブルーテトラゾリウムとなるように反応液（
０，４ｍｊ）を調製し、これにリン酸緩衝液（ｐＨ７，
（ｉ）で測定可能な範囲に希釈した酵素液（５０μｌ）
を添加し、さらシこ１．６ｍＭの還元型ニコチンアミド
アデニンジヌカレオチド溶液（５０μ＆）を添加し、全
量を０．５ｍｌとする。２５℃下において、分光光度計
による５６０ｎｍにおけるニトロブルーテトラゾリウム
の還元による吸収増加初速度を測定する。また対照とし
て酵素液のかわりにリン酸緩衝液（ｐＨ７，（ｉ）を添
加したときの上記吸収増加初速度をも測定する。酵素力
価の算出は、上記チトクロームＣ法の場合と同様に行な
う。
バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ
・コミユニケーシヨンズ（Ｂｉｏｃｈｅｎｉｃａｌ＋ｎ
ｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ Ｃｏ
ｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ） ４６壱、８４９〜８５４
頁、 １９７２年に記載の方法を改変して行なった。す
なわち、最終濃度として０．１ Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ
７，５）、６μｍフェナジンメソサルフェート、０．１
ｍＭニトロブルーテトラゾリウムとなるように反応液（
０，４ｍｊ）を調製し、これにリン酸緩衝液（ｐＨ７，
（ｉ）で測定可能な範囲に希釈した酵素液（５０μｌ）
を添加し、さらシこ１．６ｍＭの還元型ニコチンアミド
アデニンジヌカレオチド溶液（５０μ＆）を添加し、全
量を０．５ｍｌとする。２５℃下において、分光光度計
による５６０ｎｍにおけるニトロブルーテトラゾリウム
の還元による吸収増加初速度を測定する。また対照とし
て酵素液のかわりにリン酸緩衝液（ｐＨ７，（ｉ）を添
加したときの上記吸収増加初速度をも測定する。酵素力
価の算出は、上記チトクロームＣ法の場合と同様に行な
う。
蛋白質はローリ−法〔ザ・ジャーナル・オプ・バイオロ
ジカル・ケミストリー（Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）１９３巻
、 ２６５〜２７５頁。
ジカル・ケミストリー（Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）１９３巻
、 ２６５〜２７５頁。
１９５１年〕により定量される。
次に、前記新規ＳＯＤの生産菌の代表であるＳＡＭ−０
０８１株の菌学的性質を記載する。
０８１株の菌学的性質を記載する。
１、形態的所見
気菌糸は直径０．４−０．７μｍ、気菌糸の分岐は単純
分岐で車軸分岐は認められない。気菌糸の先端には螺旋
状の胞子の連鎖が認められる。胞子の連鎖は通常１０個
以上、基体菌糸は通常分断しない。胞子のうおよび鞭毛
胞子は認められない。胞子の表面は、電子顕微鏡観察に
よればいぼ状である。胞子は円筒形〜短円筒形で、長さ
０．９−１．７ｐｍ、幅０．６−１．１μｍ０ ２、各種培地上での生育性状 各種培地上での諸性状は第１表に示す通りである。観察
は３０℃、７日間培養後に行った。
分岐で車軸分岐は認められない。気菌糸の先端には螺旋
状の胞子の連鎖が認められる。胞子の連鎖は通常１０個
以上、基体菌糸は通常分断しない。胞子のうおよび鞭毛
胞子は認められない。胞子の表面は、電子顕微鏡観察に
よればいぼ状である。胞子は円筒形〜短円筒形で、長さ
０．９−１．７ｐｍ、幅０．６−１．１μｍ０ ２、各種培地上での生育性状 各種培地上での諸性状は第１表に示す通りである。観察
は３０℃、７日間培養後に行った。
以下奈白
３、生理的性質
１）生育温度範囲（ｃＹＣ液体培地、７日間培養）
往育可能温度 １６−５１℃
生育至適温度 ２４−３７℃
２）ゼラチンの液化 陽性
３）スターチの加水分解 陽性
４）脱脂乳の凝固 陰性
５）脱脂乳のペプトン化 陽性
６）メラニン様色素の生成
ペプトン・イースト鉄寒天培地 陽性
チロシン寒天培地 陽性
７）硝酸塩の還元 陰性
４、炭素源の利用（プリドハム・ブトリーブ寒天培地。
２８℃、７日間培養）
Ｌ−アラビノース ＋＋
Ｄ−キシロース ＋
Ｄ−グルコース ＋＋
Ｄ−フラクトース ＋＋
シュクロース 千十
イノシトール ＋
Ｌ−ラムノース ＋＋
ラフィノース ＋＋
Ｄ−マンニント ＋＋
Ｄ−ガラクトース ＋＋
サリシン −
（注）＋＋：よく利用する、＋：利用する。
−：利用しない。
５、細胞壁組成
５ｔａｎｅｃｋ、Ｊ、Ｌ、 ＆ Ｇ、Ｄ、Ｒｏｂｅｒｔ
ｓの方法（ＡｐｐｌｉｅｄＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ
、第２８巻、 ２２６−２３１ページ。
ｓの方法（ＡｐｐｌｉｅｄＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ
、第２８巻、 ２２６−２３１ページ。
１９７４年）に準拠して、２．６−ジアミツビメリン酸
の異性体について調べた結果、メゾ型であった。
の異性体について調べた結果、メゾ型であった。
また、上記の方法に準拠して、全菌体の加水分解物を薄
層クロマトグラフィーによって分析したところ、リボー
スおよびグルコースが明瞭に認められ、ガラクトースが
痕跡程変認められた。
層クロマトグラフィーによって分析したところ、リボー
スおよびグルコースが明瞭に認められ、ガラクトースが
痕跡程変認められた。
以上の分析結果から、ＳＡＭ−００８１株は細胞壁タイ
プ■型、糖パターンＣに属する。
プ■型、糖パターンＣに属する。
６、キノン系
山田雄三・金石 術の方法〔微生物の化学分類実験法（
駒形和実 編）、１４３−１５５ページ、学会出版セン
ター、東京、１９８２年〕に準拠して、キノン系の分析
を行ったところ、主成分（メイジャーコンポーネント）
としてＭＫ−９（Ｈ８）を、副成分（マイナーコンポー
ネント）としてＭＫ−９（Ｈ６，Ｈ４，ＨＩＯ）を持つ
ことが認められた。
駒形和実 編）、１４３−１５５ページ、学会出版セン
ター、東京、１９８２年〕に準拠して、キノン系の分析
を行ったところ、主成分（メイジャーコンポーネント）
としてＭＫ−９（Ｈ８）を、副成分（マイナーコンポー
ネント）としてＭＫ−９（Ｈ６，Ｈ４，ＨＩＯ）を持つ
ことが認められた。
以上の菌学的性質に従い、ＳＡＭ−００８１株の分類学
的位置の検索をＬｅｃｈｅｖａ １ ｉ ｅｒ 、 Ｈ
，＾、およびＭ、Ｐ。
的位置の検索をＬｅｃｈｅｖａ １ ｉ ｅｒ 、 Ｈ
，＾、およびＭ、Ｐ。
Ｌｅｃｈｅｖａ ｌ ｉｅｒ著、「イントロダクション
・トウ・ザ・オーダー・アクチノミセタレス」 （ザ・
プロカリオーツ・ア・ハンドブック・オブ・ハビテーツ
、アイソレーション・アンド・アイデンティフィケーシ
ョン・オブ・バクテリアｒ Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ
ｔｏ ｔｈｅ ０ｒｄｅｒ Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔａ
ｌｅｓＪ （Ｔｈｅ Ｐｒｏｋａｒｙ−ｏｔｓ Ａ Ｈ
ａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｈａｂｉｔａｔｓ、ｌ５ｏｌａ
ｔｉｏｎ、ａｎｄＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ
Ｂａｃｔｅｒｉａ） １９１５−１９２２ページ。
・トウ・ザ・オーダー・アクチノミセタレス」 （ザ・
プロカリオーツ・ア・ハンドブック・オブ・ハビテーツ
、アイソレーション・アンド・アイデンティフィケーシ
ョン・オブ・バクテリアｒ Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ
ｔｏ ｔｈｅ ０ｒｄｅｒ Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔａ
ｌｅｓＪ （Ｔｈｅ Ｐｒｏｋａｒｙ−ｏｔｓ Ａ Ｈ
ａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｈａｂｉｔａｔｓ、ｌ５ｏｌａ
ｔｉｏｎ、ａｎｄＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ
Ｂａｃｔｅｒｉａ） １９１５−１９２２ページ。
Ｍ、Ｐ、５ｔａｒｒらｇ 、 Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅ
ｒｌａｇ、Ｂｅｒｌｉｎ、１９８１年）に準拠して行っ
たところ、本菌株は細胞壁タイプが■型、全菌体加水分
解物中にマディロースが検出されない、気菌糸の先端に
長い胞子の連鎖が形成される、という点でＮｏｃａｒｄ
ｉｏｐｓｉｓ属の放線菌に良く類似している。しかし、
Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ属はキノン系として、ＭＫ−
１０（Ｈａ）又はＭＫｌｏ（Ｈａ）を主成分として持つ
とされているのに対して、本菌株のキノン系はＭＫ
９ （Ｈｓ）が主成分であり、また、気菌糸の先端に螺
旋状の胞子の連鎖をもつＮｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ属の
種類は知られておらず、本菌株が所属に分類される可能
性も否定できない。しかしながら、本発明者らは現時点
においては本菌株をＮｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ属の一種
と同定するのが、一番妥当であると判断し、ＳＡＭ−０
０８１株を、気菌糸の先端に螺旋状の通常１０個以上の
胞子の連鎖を形成する、基体菌糸の分断は通常見られな
い、キノン系は主成分がＭＫ−９（Ｈａ）、副成分がＭ
Ｋ ９ （Ｈ６，Ｈ４，ＨＩ。）ということを主要な
特徴とするＮｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ属の一種と同定し
、Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ ｓｐ、 ＳＡＭ−００８
１と命名した。
ｒｌａｇ、Ｂｅｒｌｉｎ、１９８１年）に準拠して行っ
たところ、本菌株は細胞壁タイプが■型、全菌体加水分
解物中にマディロースが検出されない、気菌糸の先端に
長い胞子の連鎖が形成される、という点でＮｏｃａｒｄ
ｉｏｐｓｉｓ属の放線菌に良く類似している。しかし、
Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ属はキノン系として、ＭＫ−
１０（Ｈａ）又はＭＫｌｏ（Ｈａ）を主成分として持つ
とされているのに対して、本菌株のキノン系はＭＫ
９ （Ｈｓ）が主成分であり、また、気菌糸の先端に螺
旋状の胞子の連鎖をもつＮｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ属の
種類は知られておらず、本菌株が所属に分類される可能
性も否定できない。しかしながら、本発明者らは現時点
においては本菌株をＮｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ属の一種
と同定するのが、一番妥当であると判断し、ＳＡＭ−０
０８１株を、気菌糸の先端に螺旋状の通常１０個以上の
胞子の連鎖を形成する、基体菌糸の分断は通常見られな
い、キノン系は主成分がＭＫ−９（Ｈａ）、副成分がＭ
Ｋ ９ （Ｈ６，Ｈ４，ＨＩ。）ということを主要な
特徴とするＮｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ属の一種と同定し
、Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ ｓｐ、 ＳＡＭ−００８
１と命名した。
ＳＡＭ−００８１株は、昭和６０年８月２４日に通商産
業省工業技術院微生物工業技術研究所（ＦＲＩ）に受託
番号ＦＥＲＭ Ｐ−８４２６として寄託されている。
業省工業技術院微生物工業技術研究所（ＦＲＩ）に受託
番号ＦＥＲＭ Ｐ−８４２６として寄託されている。
次に、上記菌株（以下上記菌株を単に本菌株と略す）を
用いるＳＯＤ製造法について述べる。
用いるＳＯＤ製造法について述べる。
目的とするＳＯＤの製造は、上記の菌株を培地に培養し
、培地中に生産された目的物を採取、精製することによ
って行なわれる。
、培地中に生産された目的物を採取、精製することによ
って行なわれる。
本菌株の培養に用いられる培地は、本菌株が利用し得る
栄養源を含むものであれば、液状でも固状でもよいが、
大量に行なう場合には液体培地が好ましい。
栄養源を含むものであれば、液状でも固状でもよいが、
大量に行なう場合には液体培地が好ましい。
培地には、本菌株が利用し得る栄養源すなわち炭素源、
窒素源、無機塩類、微量栄養素等が適宜配合される。炭
素源としては澱粉、グルコース、シュクロース等が、窒
素源としては、コーン・ステイープ・リカー゛、酵母エ
キス、酵母菌体、カゼイン、各種ペプトン類、硫酸アン
モニウムなどの窒素含有物が、無機塩類としては、塩化
ナトリ６ム、リン酸カリウム、硫酸マグネシウム、塩化
マンガン、塩化鉄、炭酸カルシウムなどをあげることが
できる。黴！栄養源としては、ビタミンＢＩ。
窒素源、無機塩類、微量栄養素等が適宜配合される。炭
素源としては澱粉、グルコース、シュクロース等が、窒
素源としては、コーン・ステイープ・リカー゛、酵母エ
キス、酵母菌体、カゼイン、各種ペプトン類、硫酸アン
モニウムなどの窒素含有物が、無機塩類としては、塩化
ナトリ６ム、リン酸カリウム、硫酸マグネシウム、塩化
マンガン、塩化鉄、炭酸カルシウムなどをあげることが
できる。黴！栄養源としては、ビタミンＢＩ。
ＢＺなどのビタミン類などがあげられる。また、消泡剤
として、界面活性剤たとえばアデカノール（登録商標、
旭電化工業株式会社製）などを添加してもよい。
として、界面活性剤たとえばアデカノール（登録商標、
旭電化工業株式会社製）などを添加してもよい。
培養は、静置培養、振とう培養または通気攪拌培養など
で行なうが、特に工業的規模で行なう場合には、深部通
気攪拌培養がより有利である。培養の条件は、培地の組
成や培養方法などにより異なるが、培養温度は２０〜４
０℃で、培養時間は１〜５日、培養ｐＨは４〜９、さら
に好ましくは６〜８で行なわれる。
で行なうが、特に工業的規模で行なう場合には、深部通
気攪拌培養がより有利である。培養の条件は、培地の組
成や培養方法などにより異なるが、培養温度は２０〜４
０℃で、培養時間は１〜５日、培養ｐＨは４〜９、さら
に好ましくは６〜８で行なわれる。
本菌株の生産する本発明ＳＯＤは、主として菌体外に放
出される。該酵素は、通常用いられる精製手段により分
離精製することができる。すなわち、培養終了後、培養
物から遠心分離法や濾過法など通常用いられる方法によ
り菌体および培地に含まれる残渣などを除去する。これ
により得られる培養上清あるいは濾液を用い、当分野に
おいて公知の分離精製方法、たとえば硫酸アンモニウム
等による塩析法、有機溶媒による沈澱法、等電点沈澱法
、透析、電気透析等による膜処理法、リン酸カルシウム
やアルミナ等による吸着法、ジエチルアミノエチル（以
下ＤＥＡＲと略称する）セルロース等によるイオン交換
クロマトグラフ法、セファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ
：ファルマシア社製）やウルトロゲル（Ｕｌｔｒｏｇ
ｅｌ ： Ｌ Ｋ Ｂ社製）等によるゲル濾過クロマト
グラフ法などを適宜に組合わせて精製し、使用目的に応
じた精製レベルの酵素剤を得ることができる。
出される。該酵素は、通常用いられる精製手段により分
離精製することができる。すなわち、培養終了後、培養
物から遠心分離法や濾過法など通常用いられる方法によ
り菌体および培地に含まれる残渣などを除去する。これ
により得られる培養上清あるいは濾液を用い、当分野に
おいて公知の分離精製方法、たとえば硫酸アンモニウム
等による塩析法、有機溶媒による沈澱法、等電点沈澱法
、透析、電気透析等による膜処理法、リン酸カルシウム
やアルミナ等による吸着法、ジエチルアミノエチル（以
下ＤＥＡＲと略称する）セルロース等によるイオン交換
クロマトグラフ法、セファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ
：ファルマシア社製）やウルトロゲル（Ｕｌｔｒｏｇ
ｅｌ ： Ｌ Ｋ Ｂ社製）等によるゲル濾過クロマト
グラフ法などを適宜に組合わせて精製し、使用目的に応
じた精製レベルの酵素剤を得ることができる。
本発明は新規なＳＯＤを提供する。ノカルディオプシス
属放線菌によるＳＯＤの製造は従来知られておらず、本
発明はさらにＳＯＤの新規な製造方法を提供する。この
方法によればＳＯＤは主として菌体外に蓄積されるから
、その回収・精製が極めて容易である。
属放線菌によるＳＯＤの製造は従来知られておらず、本
発明はさらにＳＯＤの新規な製造方法を提供する。この
方法によればＳＯＤは主として菌体外に蓄積されるから
、その回収・精製が極めて容易である。
次に、実施例によりこの発明をさらに具体的に説明する
。
。
去ｍ
培ｔｔＨ１当り、グルコース３ｇ１ トウモロコシデン
プン１０ｇ１酵母エキス２ｇ、ポリペプトンＬｏｇ、乾
燥酵母菌体３ｇ、リン酸二カリウム１ｇから成る液体培
地（ｐＨ７，０に調節）を１Ｑｒｒ＋４２ずつ２５φ試
験管２００本に入れ、１２０℃で１５分間蒸気滅菌した
ものに、本菌株を接種し、２８℃で９１時間振とう等培
養（３００ｒｐｍ） した。培養終了後、遠心分離法に
より除菌し、培養上清１５００ｍｌを得た。このものの
ＳＯＤ活性はＮＢＴ法で８３ｕ ／ ｍ ｌであった。
プン１０ｇ１酵母エキス２ｇ、ポリペプトンＬｏｇ、乾
燥酵母菌体３ｇ、リン酸二カリウム１ｇから成る液体培
地（ｐＨ７，０に調節）を１Ｑｒｒ＋４２ずつ２５φ試
験管２００本に入れ、１２０℃で１５分間蒸気滅菌した
ものに、本菌株を接種し、２８℃で９１時間振とう等培
養（３００ｒｐｍ） した。培養終了後、遠心分離法に
より除菌し、培養上清１５００ｍｌを得た。このものの
ＳＯＤ活性はＮＢＴ法で８３ｕ ／ ｍ ｌであった。
この培養上清に９０％飽和となるよう硫酸アンモニウム
を加え、生じた沈澱物を遠心分離法で集めた。この沈澱
物を少量の２０ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ７，（ｉ）に
溶解させ、同一緩衝液において透析した。この透析内液
を、あらかじめ同一緩衝液で平衡化したＤＥＡＲ・セル
ロース（ＤＥ−２３、ワットマン社製）のカラム（２，
４Ｘ１５ｃｍ）に負荷し５００ ｍ ｌの同一緩衝液で
洗浄後、同一緩衝液のＯ−ＬＭ塩化ナトリウム直線濃度
勾配により溶出し、酵素活性を有する画分１３６ｍ１を
集めた。
を加え、生じた沈澱物を遠心分離法で集めた。この沈澱
物を少量の２０ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ７，（ｉ）に
溶解させ、同一緩衝液において透析した。この透析内液
を、あらかじめ同一緩衝液で平衡化したＤＥＡＲ・セル
ロース（ＤＥ−２３、ワットマン社製）のカラム（２，
４Ｘ１５ｃｍ）に負荷し５００ ｍ ｌの同一緩衝液で
洗浄後、同一緩衝液のＯ−ＬＭ塩化ナトリウム直線濃度
勾配により溶出し、酵素活性を有する画分１３６ｍ１を
集めた。
この両分を再度９０％飽和となるよう硫酸アンモニウム
を加え、生じた沈澱物を遠心分離法で集め、これを少量
の水に溶解させ水で透析を行ない、透析内液を凍結乾燥
させることにより粉末１７２ｍｇを得た。この標品の比
活性はＮＢＴ法で２５６ ｕ ／ｍｇ蛋白、（チトクロ
ームＣ法で３９５０ ｕ ／ ｍｇ蛋白であった。）上
記標品を０．２Ｍ塩化ナトリウムを含むリン酸緩衝液（
ｐＨ７，（ｉ）に溶解させ、あらかじめ同一緩衝液で平
衡化させたウルトロゲルＡＣＡ−４４（ＬＫＢ社製）の
カラム（１，Ｉ Ｘ１４０〔）に負荷させ、同一緩衝液
で溶出させ、酵素活性を有する両分１１８ｍＩｌを集め
た。これを水で透析し凍結乾燥を行なうことにより５６
ｍｇの粉末標品を得た。本標品の比活性はチトクローム
Ｃ法で２７００ ｕ ／ ｍ ｇであった。
を加え、生じた沈澱物を遠心分離法で集め、これを少量
の水に溶解させ水で透析を行ない、透析内液を凍結乾燥
させることにより粉末１７２ｍｇを得た。この標品の比
活性はＮＢＴ法で２５６ ｕ ／ｍｇ蛋白、（チトクロ
ームＣ法で３９５０ ｕ ／ ｍｇ蛋白であった。）上
記標品を０．２Ｍ塩化ナトリウムを含むリン酸緩衝液（
ｐＨ７，（ｉ）に溶解させ、あらかじめ同一緩衝液で平
衡化させたウルトロゲルＡＣＡ−４４（ＬＫＢ社製）の
カラム（１，Ｉ Ｘ１４０〔）に負荷させ、同一緩衝液
で溶出させ、酵素活性を有する両分１１８ｍＩｌを集め
た。これを水で透析し凍結乾燥を行なうことにより５６
ｍｇの粉末標品を得た。本標品の比活性はチトクローム
Ｃ法で２７００ ｕ ／ ｍ ｇであった。
１施±１
実施例Ｉで使用した液体培地と同一組成の培地を２００
ｍ ｊ＋ずつ５００ｍＪのマイヤーフラスコ５本に分
注・滅菌し、この５本に本菌株を接種して、２８℃３０
０ｒｐｎ＋のロータリ一式振とう培養機で７１時間培養
し種培養物を調製した。同一組成の培地３０１を５ｉの
タンクに注入滅菌後、これに前記の種培養物を接種し、
培養温度３０℃で０、５ ｖｖｎ＋の通気攪拌培養を３
０時間行なった。培養終了後、培養物を遠心分離法によ
り除菌し、全量２１の培養上清を得た。培養上清のＳＯ
Ｄ活性はＮＢＴ法で６Ｑｕ／ｍｆｆ１であった。これを
実施例１と゛同様に、９０％飽和となるように硫酸アン
モニウムを加え、遠心分離法により沈澱物を得た。この
沈澱物を水で透析した後、透析内液をあらかじめ２０ｍ
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，（ｉ）で平衡化したＤＥＡＥ
型のポリマー樹脂（ＦＰ−ＤＡ１３ 、三菱化成工業株
式会社製）のカラム（１５Ｘ１７０ｃｓ＋）に負荷させ
、７１の同一緩衝液で洗浄後、０．３Ｍの塩化ナトリウ
ムを含む２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７，（ｉ）で溶出
し、５Ｉｌの酵素活性を有する両分を得た。これをペリ
コンラボカセット（ミリボア社製、ポアサイズ１０’
、６Ｏ−ｘ４）による限外濾過法により３７０ ｍ
ＩＩにまで濃縮した後、９０％飽和となるように硫酸ア
ンモニウムを加え、生じた沈澱物を遠心分離法で集めた
。この沈澱物に１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７，（ｉ）
を加え、１００ｍＪの溶解液とした。この溶解液を、あ
らかじめ０．２ Ｍ塩化ナトリウムを含む前記緩衝液で
平衡化させたウルトロゲルＡＣＡ４４のカラム（３，Ｉ
Ｘ１３５ｃｍ）に２Ｑｍｌずつ負荷し、同一緩衝液で
溶出させ、酵素活性を有する両分を合計４００ｍ／得た
。これを水で透析し凍結乾燥を行なうことにより、１．
２ ｇのＳＯＤ標品を得た。本標品の比活性はチトクロ
ーム法で２４００ ｕ ／ ｍ ｇであった。さらに得
られたＳＯＤ標品は先述の物性及び酵素化学的性質を有
し、既知のＳＯＤと異なる新規なものであった。
ｍ ｊ＋ずつ５００ｍＪのマイヤーフラスコ５本に分
注・滅菌し、この５本に本菌株を接種して、２８℃３０
０ｒｐｎ＋のロータリ一式振とう培養機で７１時間培養
し種培養物を調製した。同一組成の培地３０１を５ｉの
タンクに注入滅菌後、これに前記の種培養物を接種し、
培養温度３０℃で０、５ ｖｖｎ＋の通気攪拌培養を３
０時間行なった。培養終了後、培養物を遠心分離法によ
り除菌し、全量２１の培養上清を得た。培養上清のＳＯ
Ｄ活性はＮＢＴ法で６Ｑｕ／ｍｆｆ１であった。これを
実施例１と゛同様に、９０％飽和となるように硫酸アン
モニウムを加え、遠心分離法により沈澱物を得た。この
沈澱物を水で透析した後、透析内液をあらかじめ２０ｍ
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，（ｉ）で平衡化したＤＥＡＥ
型のポリマー樹脂（ＦＰ−ＤＡ１３ 、三菱化成工業株
式会社製）のカラム（１５Ｘ１７０ｃｓ＋）に負荷させ
、７１の同一緩衝液で洗浄後、０．３Ｍの塩化ナトリウ
ムを含む２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７，（ｉ）で溶出
し、５Ｉｌの酵素活性を有する両分を得た。これをペリ
コンラボカセット（ミリボア社製、ポアサイズ１０’
、６Ｏ−ｘ４）による限外濾過法により３７０ ｍ
ＩＩにまで濃縮した後、９０％飽和となるように硫酸ア
ンモニウムを加え、生じた沈澱物を遠心分離法で集めた
。この沈澱物に１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７，（ｉ）
を加え、１００ｍＪの溶解液とした。この溶解液を、あ
らかじめ０．２ Ｍ塩化ナトリウムを含む前記緩衝液で
平衡化させたウルトロゲルＡＣＡ４４のカラム（３，Ｉ
Ｘ１３５ｃｍ）に２Ｑｍｌずつ負荷し、同一緩衝液で
溶出させ、酵素活性を有する両分を合計４００ｍ／得た
。これを水で透析し凍結乾燥を行なうことにより、１．
２ ｇのＳＯＤ標品を得た。本標品の比活性はチトクロ
ーム法で２４００ ｕ ／ ｍ ｇであった。さらに得
られたＳＯＤ標品は先述の物性及び酵素化学的性質を有
し、既知のＳＯＤと異なる新規なものであった。
第１図は実施例１で得られたＳＯＤのｐＨ安定性を、第
２図は温度安定性を、第３図はその紫外部および可視部
領域における吸収スペクトルを、そして第４図は過酸化
水素処理による失活をそれぞれ表わす。 処 理 ｐＨ （ｐＨ安定性） 第１図 処理温度（’Ｃ） （温度安定性） 第２図 （吸吸スペクトル） 過酸化水素処理時間分 （過酸化水素処理による失活）
２図は温度安定性を、第３図はその紫外部および可視部
領域における吸収スペクトルを、そして第４図は過酸化
水素処理による失活をそれぞれ表わす。 処 理 ｐＨ （ｐＨ安定性） 第１図 処理温度（’Ｃ） （温度安定性） 第２図 （吸吸スペクトル） 過酸化水素処理時間分 （過酸化水素処理による失活）
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、次の性質を有する新規なスーパーオキシドディスム
ターゼ： （ａ）作用：スーパーオキシドラジカルを過酸化水素分
子と酸素分子とに不均化する； （ｂ）基質特異性：スーパーオキシドラジカルに作用す
る； （ｃ）至適ｐＨ：約８； （ｄ）ｐＨ安定性：ｐＨ４．５〜８．０（２５℃ ６０
分処理後の残存活性は８０％以上）； （ｅ）熱安定性：ｐＨ７．８にて、１０分間加熱処理後
、残存活性を測定した場合、５０℃付近までは安定、６
０℃で９０％、７０℃で５０％（ｆ）分子量：約８．８
×１０＾４（ゲル濾過法）；（ｇ）紫外部および可視部
吸収スペクトル；２８０ｎｍ付近（極大吸収）、２５０
ｎｍ付近（極小吸収）２９０ｎｍ付近（肩）； （ｈ）分子吸光係数：２８０ｎｍにおいて約１．４５×
１０＾５Ｍ＾−＾１ｃｍ＾−＾１； （ｉ）阻害：１ｍＭシアン化カリウム添加で活性阻害は
みられず、５ｍＭ過酸化水素添加で経時的指数的な失活
がみられる； （ｊ）金属分析：酵素１モル当り、１．５６ｇ原子の鉄
を含み、銅およびマンガンは含まない。 ２、ノカルディオプシス属（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ
）に属するスーパーオキシドディスムターゼ生産菌を培
地に培養し、培養液中にスーパーオキシドディスムター
ゼを生成蓄積せしめ、該培養物からこれを採取すること
を特徴とするスーパーオキシドディスムターゼの製造方
法。 ３、前記スーパーオキシドディスムターゼが次の性質： （ａ）作用：スーパーオキシドラジカルを過酸化水素分
子と酸素分子とに不均化する； （ｂ）基質特異性：スーパーオキシドラジカルに作用す
る； （ｃ）至適ｐＨ：約８； （ｄ）ｐＨ安定性：ｐＨ４．５〜８．０（２５℃ ６０
分処理後の残存活性は８０％以上）； （ｅ）熱安定性：ｐＨ７．８ １０分間加熱処理後、残
存活性を測定した場合、５０℃付近までは安定、６０℃
で９０％、７０℃で５０％； （ｆ）分子量：約８．８×１０＾４（ゲル濾過法）；（
ｇ）紫外部および可視部吸収スペクトル：２８０ｎｍ付
近（極大吸収）、２５０ｎｍ付近（極小吸収）２９０ｎ
ｍ付近（肩）； （ｈ）分子吸光係数：２８０ｎｍにおいて約１．４５×
１０＾５Ｍ＾−＾１ｃｍ＾−＾１； （ｉ）阻害：１ｍＭシアン化カリウム添加で活性阻害は
みられず、５ｍＭ過酸化水素添加で経時的指数的な失活
がみられる； （ｊ）金属分析：酵素１モル当り、１．５６ｇ原子の鉄
を含み、銅およびマンガンは含まない； を有する特許請求の範囲第２項記載の方法。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60220215A JPS6279778A (ja) | 1985-10-04 | 1985-10-04 | 新規ス−パ−オキシドデイスムタ−ゼ及びその製造方法 |
| US06/915,026 US4774185A (en) | 1985-10-04 | 1986-10-03 | Novel superoxide dismutase and process for preparation thereof |
| EP86307659A EP0218480A3 (en) | 1985-10-04 | 1986-10-03 | Novel superoxide dismutase and process for preparation thereof |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60220215A JPS6279778A (ja) | 1985-10-04 | 1985-10-04 | 新規ス−パ−オキシドデイスムタ−ゼ及びその製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6279778A true JPS6279778A (ja) | 1987-04-13 |
Family
ID=16747685
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60220215A Pending JPS6279778A (ja) | 1985-10-04 | 1985-10-04 | 新規ス−パ−オキシドデイスムタ−ゼ及びその製造方法 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4774185A (ja) |
| EP (1) | EP0218480A3 (ja) |
| JP (1) | JPS6279778A (ja) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA1289092C (en) * | 1987-01-15 | 1991-09-17 | Robert A. Hallewell | Thermostable human cu/zn superoxide dismutase muteins |
| AU607764B2 (en) * | 1987-05-21 | 1991-03-14 | Masayasu Inoue | Acylated derivative of superoxide dismutase and composition containing same |
| JP2978187B2 (ja) * | 1989-11-02 | 1999-11-15 | 日本ケミカルリサーチ株式会社 | 修飾スーパーオキサイドディスムターゼの製造法 |
| FR2656874B1 (fr) * | 1990-01-11 | 1992-04-03 | Commissariat Energie Atomique | Procede de production et d'extraction d'anti-oxydants a partir d'une culture de micro-organismes et photobioreacteur pour la mise en óoeuvre de ce procede. |
| JPH0568541A (ja) * | 1990-12-28 | 1993-03-23 | Asahi Chem Ind Co Ltd | 活性なエクストラセルラー・スーパーオキシドジスムターゼの製造方法 |
| DE4239877C1 (de) * | 1992-11-27 | 1994-03-17 | Boehringer Ingelheim Int | Stabilisierte Superoxid-Dismutase (SOD)-Zusammensetzung |
| FR2706465B1 (fr) * | 1993-06-11 | 1995-08-25 | Heliosynthese Sa | Procédé de production et d'extraction de superoxyde-dismutases thermostables à partir d'une culture de micro-organismes photosynthétiques. |
| CN112107505B (zh) * | 2020-10-15 | 2023-01-24 | 上海枭特生物科技有限公司 | 一种含超氧化物歧化酶的洗发组合物、洗发液及其制备方法 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5535983A (en) * | 1978-09-08 | 1980-03-13 | Babcock Hitachi Kk | Sea water preheater in manufacture of fresh water |
| JPS5729285A (en) * | 1980-07-30 | 1982-02-17 | Takeda Chem Ind Ltd | Superoxide dismutase and its preparation |
| US4563349A (en) * | 1980-07-30 | 1986-01-07 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Superoxide dismutase, its immobilized form, and their production and use |
-
1985
- 1985-10-04 JP JP60220215A patent/JPS6279778A/ja active Pending
-
1986
- 1986-10-03 EP EP86307659A patent/EP0218480A3/en not_active Withdrawn
- 1986-10-03 US US06/915,026 patent/US4774185A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US4774185A (en) | 1988-09-27 |
| EP0218480A3 (en) | 1988-04-20 |
| EP0218480A2 (en) | 1987-04-15 |
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