JPS6259293A - 螢光性ヌクレオシド又はヌクレオチド - Google Patents
螢光性ヌクレオシド又はヌクレオチドInfo
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- JPS6259293A JPS6259293A JP19769085A JP19769085A JPS6259293A JP S6259293 A JPS6259293 A JP S6259293A JP 19769085 A JP19769085 A JP 19769085A JP 19769085 A JP19769085 A JP 19769085A JP S6259293 A JPS6259293 A JP S6259293A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、螢光を発するヌクレオシド又はヌクレオチド
及びこれらを分子中又は分子末端に含むオリゴ又はポリ
ヌクレオチドに関する。
及びこれらを分子中又は分子末端に含むオリゴ又はポリ
ヌクレオチドに関する。
生体高分子、特に蛋白質や核酸にお番フる構造と機能の
相関を明らかにするために、螢光プ［１−ブを利用した
研究が広く行なわれている。そして核酸の研究において
は、核酸中に存在する螢光１１１０ｍ１塩基をプローブ
として用いる方法や、核酸へ螢光分子を化学的に導入し
てこれをプローブとして用いる方法がある。螢光性塩基
を有するヌクレオシドの例としては、アデノシン類やシ
チジン類をり［１ルアセトアルデヒドで化学修飾して得
られる、下記式で示されるような螢光性のエテノ誘導体
がある。
相関を明らかにするために、螢光プ［１−ブを利用した
研究が広く行なわれている。そして核酸の研究において
は、核酸中に存在する螢光１１１０ｍ１塩基をプローブ
として用いる方法や、核酸へ螢光分子を化学的に導入し
てこれをプローブとして用いる方法がある。螢光性塩基
を有するヌクレオシドの例としては、アデノシン類やシ
チジン類をり［１ルアセトアルデヒドで化学修飾して得
られる、下記式で示されるような螢光性のエテノ誘導体
がある。
ｉ、ＮＧ Ｈテノア ３．Ｎ４−Ｔ−テノシ
デノシン チジン 特４．：、Ｉテノアデノシン類は、中性で強く螢光を発
することから、これをプローブとして用いて種々の研究
が行なわれてぎた。しかし、これらは塩基対形成能を右
しない。
デノシン チジン 特４．：、Ｉテノアデノシン類は、中性で強く螢光を発
することから、これをプローブとして用いて種々の研究
が行なわれてぎた。しかし、これらは塩基対形成能を右
しない。
本発明者らは、螢光性を有しグアニンあるいはアデニン
との塩基対形成が可能な、ビリミジンヌクレオシド又は
ヌクレオチド誘導体を得るべく鋭意研究を行ない、本発
明に到達した。
との塩基対形成が可能な、ビリミジンヌクレオシド又は
ヌクレオチド誘導体を得るべく鋭意研究を行ない、本発
明に到達した。
即ち、本発明は、
一般式（Ｉ）で表わされる螢光性ヌクレオシド又はヌク
レオチドである。
レオチドである。
一般式＜ｒ＞においτ特に好ま（）いのは、×１どＹｌ
が共にＨ（’） −”Ｃ，７＋が１−１−又は１１０−
でＷｌが１１−の化合物、あるいは×１及び／又はＩ ＹｌがＩｔ Ｏ（Ｖ −（’ｌ）ｎ （ｎ Ｔ、Ｌ
１ 、２又は３の整数を承り）で２１＋が１１−■は１
−１０−でＷｌが１１−−て・・ある。水酸基が公知の
適当（ｉ保護基Ｃ゛保護され（いるしの１）、本発明の
節回に含まれる。
が共にＨ（’） −”Ｃ，７＋が１−１−又は１１０−
でＷｌが１１−の化合物、あるいは×１及び／又はＩ ＹｌがＩｔ Ｏ（Ｖ −（’ｌ）ｎ （ｎ Ｔ、Ｌ
１ 、２又は３の整数を承り）で２１＋が１１−■は１
−１０−でＷｌが１１−−て・・ある。水酸基が公知の
適当（ｉ保護基Ｃ゛保護され（いるしの１）、本発明の
節回に含まれる。
一般Ｊ（： （Ｉ’ ）の化合物の製造法を、×１とＹ
１ツノ（共に１１０−で、／１どＷｌが共に１１−の場
合を例にとって説明する。
１ツノ（共に１１０−で、／１どＷｌが共に１１−の場
合を例にとって説明する。
一ヅ）の方法は、糖部の水酸基を保護した５−ヨートデ
ＡキシシチジンにＯ−ヨードベンゾイルクロライドを作
用さ１！、１りられた化合物をＤ Ｍ Ｆ中で、２１１
ＩＩｌのｐ （＋の存在下に加熱処理し、次いで保護基
を除去する方法である。
ＡキシシチジンにＯ−ヨードベンゾイルクロライドを作
用さ１！、１りられた化合物をＤ Ｍ Ｆ中で、２１１
ＩＩｌのｐ （＋の存在下に加熱処理し、次いで保護基
を除去する方法である。
他の方法は、デＡギシシチジンから容易に得られるＮ４
−ペンゾイルデＡキシシチジン誘導体を、メタノール中
Ｊ、うヨウ素の存７１下で光照射し、次いで常法により
脱保護を行４丁う方法である。
−ペンゾイルデＡキシシチジン誘導体を、メタノール中
Ｊ、うヨウ素の存７１下で光照射し、次いで常法により
脱保護を行４丁う方法である。
Ｌ記の如くしてｊｑられた螢光性ヌクレオシドは、その
３′情又は５′位に後述の如き方法でリン酸基を導入し
ヌクレオチドとすることができる。
３′情又は５′位に後述の如き方法でリン酸基を導入し
ヌクレオチドとすることができる。
かくして得らだ一般式（Ｉ）の化合物は、螢光性であり
かつ核酸塩基のグアニンあるいはアデニンと塩基対を形
成Ｊ゛る能力があるので、これを分子中又は分子末端に
有するオリゴ又はポリヌクレオチドは、螢光プｎ−ブど
して利用できる。あるい（５１、これらの化合物ｌま、
ｒ）ＮＡ二重らせん中に組み入れた際に、塩基部分は空
間的に適合しておリ、相補的な塩１１１間の水素結合形
成能力やスタッギング作用をを増強づる可能性も考えら
れる。
かつ核酸塩基のグアニンあるいはアデニンと塩基対を形
成Ｊ゛る能力があるので、これを分子中又は分子末端に
有するオリゴ又はポリヌクレオチドは、螢光プｎ−ブど
して利用できる。あるい（５１、これらの化合物ｌま、
ｒ）ＮＡ二重らせん中に組み入れた際に、塩基部分は空
間的に適合しておリ、相補的な塩１１１間の水素結合形
成能力やスタッギング作用をを増強づる可能性も考えら
れる。
従つ−Ｃ１本発明はまた、分子中又は分子末端に、一般
式（ＩＩ）で表わされる螢光竹タクレＡ−チドを、少な
くと６１個含有Ｊるオリゴ又はポリヌクレオチドをも含
むものである。
式（ＩＩ）で表わされる螢光竹タクレＡ−チドを、少な
くと６１個含有Ｊるオリゴ又はポリヌクレオチドをも含
むものである。
〇
が−Ｐ−０−であり、Ｙ２が一〇−でＷ２がｌｌ −Ｏ
ト（ である、オリゴ又はポリヌクレオチドである。
ト（ である、オリゴ又はポリヌクレオチドである。
螢光１４ヌクレＡシト又はヌクレオチドをＯＮＡオリゴ
マーあるはポリマーへ導入するには、有機化学的に合成
する方法と、酵素化学的に導入する２通りの方法がとら
れる。
マーあるはポリマーへ導入するには、有機化学的に合成
する方法と、酵素化学的に導入する２通りの方法がとら
れる。
有機化学的に合成する方法は、螢光性ヌクレオシド（Ｆ
）を含むオリゴヌクレオチドを直接合成する方法である
。ｌ ｔａｋｕｒａらが開発した、固相リン酸トリエス
テル法を用いて、第１図に示すサイクルに従って合成を
行なった。
）を含むオリゴヌクレオチドを直接合成する方法である
。ｌ ｔａｋｕｒａらが開発した、固相リン酸トリエス
テル法を用いて、第１図に示すサイクルに従って合成を
行なった。
すなわちステップ１として、ベンゼンスルホンＭ （Ｂ
ＳＡ）で、５′−水酸基のジメトキシトリチル基（ＤＮ
Ｔｒ Ｗ）を除去し、ステップ２で、ダイマーブロック
をメシチレンスルボン酸ニトロ］・リアゾール（Ｍ Ｓ
Ｎ Ｔ ）で縮合し、固相■に担持されＦ含有オリゴ
マーの鎖を伸長した。また、目的と異なる配列のオリゴ
マー生成を防ぐために、綜合反応において未反応の５′
−水酸基は、４−ジメチルアミノピリジン（ｒｌＭＡＰ
）存在下無水酢酸（ＡＣ２０）でキャッピングを行なっ
た。
ＳＡ）で、５′−水酸基のジメトキシトリチル基（ＤＮ
Ｔｒ Ｗ）を除去し、ステップ２で、ダイマーブロック
をメシチレンスルボン酸ニトロ］・リアゾール（Ｍ Ｓ
Ｎ Ｔ ）で縮合し、固相■に担持されＦ含有オリゴ
マーの鎖を伸長した。また、目的と異なる配列のオリゴ
マー生成を防ぐために、綜合反応において未反応の５′
−水酸基は、４−ジメチルアミノピリジン（ｒｌＭＡＰ
）存在下無水酢酸（ＡＣ２０）でキャッピングを行なっ
た。
このサイクルをくり返すことにＪ：って、目的とするオ
リゴマーを合成した。オリゴマヌクレオチドのポリマー
支持体からの切り出しとリン酸の保護基の除去は、室温
でアンモニア水で処理することにより行なった。
リゴマーを合成した。オリゴマヌクレオチドのポリマー
支持体からの切り出しとリン酸の保護基の除去は、室温
でアンモニア水で処理することにより行なった。
更にアンモニア水で加熱処理することにより、塩基部の
アシル基を除去した。次いで逆層のシリカゲルカラムク
ロマトグラフィーで精製し、必要なフラクションを分取
し、５′末端のｆ）ＭＴｒ Ｍを除去し、更に高速液体
クロマトグラフィーで精製した。
アシル基を除去した。次いで逆層のシリカゲルカラムク
ロマトグラフィーで精製し、必要なフラクションを分取
し、５′末端のｆ）ＭＴｒ Ｍを除去し、更に高速液体
クロマトグラフィーで精製した。
螢光性ヌクレオシド又はヌクレオチドをＤＮＡオリゴマ
ーあるいはポリマーに酵素化学的に導入する方法として
は、例えば、 （＋）ＤＮＡポリメラーゼを用いるニックトランスレー
ション （ＲｉｇＩ＋ｙ、 Ｐ、 Ｗ、ら、 Ｊ 、 ＭＯｌ、
Ｂ ｉｏｌ、、 １１３゜２３７ （１９７７）参
照） （ｉ） 末端デＡキシヌクレオチドトランスフェラー
ゼを用いる３′−末端付加反応 （Ｆ、 Ｊ、 Ｂｏｌｌｕｍ 、 Ｔｈｅ Ｅｎｚｙ
ｗｅｓ、 （Ｐ、Ｄ。
ーあるいはポリマーに酵素化学的に導入する方法として
は、例えば、 （＋）ＤＮＡポリメラーゼを用いるニックトランスレー
ション （ＲｉｇＩ＋ｙ、 Ｐ、 Ｗ、ら、 Ｊ 、 ＭＯｌ、
Ｂ ｉｏｌ、、 １１３゜２３７ （１９７７）参
照） （ｉ） 末端デＡキシヌクレオチドトランスフェラー
ゼを用いる３′−末端付加反応 （Ｆ、 Ｊ、 Ｂｏｌｌｕｍ 、 Ｔｈｅ Ｅｎｚｙ
ｗｅｓ、 （Ｐ、Ｄ。
Ｂｏｗｅｒ、 ｅｄ、 ） 、 ３ｒｒｌ
Ｅｄ、 Ｖｏｌ、１０ 、 ｐｐ、１４５−１７
１． Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、 Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ 、 Ｎ。
Ｅｄ、 Ｖｏｌ、１０ 、 ｐｐ、１４５−１７
１． Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、 Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ 、 Ｎ。
Ｙ 、（１９７４）参照）
０２つが、通常用いられる。
いずれの酵素を用いる場合にも、基質としては、好まし
くは、メクレＡシト５′−モノリン酸が用いられる。螢
光性ヌクレオシドの５１−トリリン酸の合成は、Ｙ ｏ
ｓｈｉｋａｗａら（Ｉｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ １．
ｅｔｔ、、 ５０６５ （１９６７） ）の方法に従っ
て合成できる。
くは、メクレＡシト５′−モノリン酸が用いられる。螢
光性ヌクレオシドの５１−トリリン酸の合成は、Ｙ ｏ
ｓｈｉｋａｗａら（Ｉｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ １．
ｅｔｔ、、 ５０６５ （１９６７） ）の方法に従っ
て合成できる。
また、５′ −七ノリン酸をイミダゾリドとした後シリ
ン酸と反応させる、５′−トリリン酸の合成は、□ ｔ
ｔｏらの方法（Ｊ 、 Ａ ｎ、Ｃｈｅｍ、ｓ ｏｃ、
、１７８５−１７８８ （１９６５） ）に従って行な
うことができる。
ン酸と反応させる、５′−トリリン酸の合成は、□ ｔ
ｔｏらの方法（Ｊ 、 Ａ ｎ、Ｃｈｅｍ、ｓ ｏｃ、
、１７８５−１７８８ （１９６５） ）に従って行な
うことができる。
次に合成した５′−トリリン酸を基質として用い、ＤＮ
Ａポリメラーゼを用いて、ニック・１−ランスレージョ
ンを行なうと、シチジンの代りに、螢光性ヌクレオチド
が導入され螢光標識されたオリゴマーあるいはポリマー
を調製することができる。また、末端デオキシヌクレオ
チドトランスフＪラーゼを用いると、３′−末端に螢光
性ヌクレオチドボリマーを付加することができる。
Ａポリメラーゼを用いて、ニック・１−ランスレージョ
ンを行なうと、シチジンの代りに、螢光性ヌクレオチド
が導入され螢光標識されたオリゴマーあるいはポリマー
を調製することができる。また、末端デオキシヌクレオ
チドトランスフＪラーゼを用いると、３′−末端に螢光
性ヌクレオチドボリマーを付加することができる。
以下、実施例により本発明を詳述する。
実施例１
＋ｃｂ ＋
ｅ＋（１）５−ヨードデオキシシチジン＋ａ＋ ５００
ＩＲｇを無水ピリジン１０−に、懸濁させ、これに １
．１，３．３−テ１ヘライソプロピル−１，３−ジクロ
ルジシ日キリ“ン０．！ｉ７ ｄ （１，２当品）を水
冷下で加え、その後室温で２時間反応さ１また。
ｅ＋（１）５−ヨードデオキシシチジン＋ａ＋ ５００
ＩＲｇを無水ピリジン１０−に、懸濁させ、これに １
．１，３．３−テ１ヘライソプロピル−１，３−ジクロ
ルジシ日キリ“ン０．！ｉ７ ｄ （１，２当品）を水
冷下で加え、その後室温で２時間反応さ１また。
水冷下で、水２ｍを加えて反応を停止し、１０分間放置
した後、溶媒を減圧下留去した。残渣を水−クロロホル
ム系で抽出し、クロロホルム層を無水硫酸す１〜リウム
で乾燥した。クロロホルムを留去した後、シリカゲルク
ロマトグラフィーにより精製し、メタノールで再結晶し
で、３’ 、５’ −０−（１，１，３，３−テトライ
ソプロピルジシロキサン−１，３−ジイル）−５−ヨー
ドデオキシシチジン山） ７５０ ｍｇを得た。物性値
は次の通りであった。
した後、溶媒を減圧下留去した。残渣を水−クロロホル
ム系で抽出し、クロロホルム層を無水硫酸す１〜リウム
で乾燥した。クロロホルムを留去した後、シリカゲルク
ロマトグラフィーにより精製し、メタノールで再結晶し
で、３’ 、５’ −０−（１，１，３，３−テトライ
ソプロピルジシロキサン−１，３−ジイル）−５−ヨー
ドデオキシシチジン山） ７５０ ｍｇを得た。物性値
は次の通りであった。
ｍ、ｐ、 ２１０−２１１℃
メタ／−１し
ｔＪ Ｖ λ＋ｎ ａ ｘ ２９３ ｎ ｒａ
ｖａｓｓ ｍ／ｅ ５９５ （Ｍ中 ）、
５５２（Ｍ−４３）［２＋ ３’ 、５’ −０
−（１，１，３，３−テトライソプロピルジシロキサン
−１，３−ジイル）−５−ヨードデオキシシチジン＋ｔ
ｎ ７００ｔｙ）を無水ピリジン１０＃ｌｌ！に溶かし
、水冷下で、２−ヨードベンゾイルクロリド３４０ｍｇ
（１，２当艶）を加えて、５０分間反応させた。水冷下
で水２ｍｌ’を加えて反応を停止し、１０分間放置した
後、溶媒を減圧下留去した。残漬を水−クロロホルム系
で抽出し、りロロホルム層を無水硫酸す１ヘリウムで乾
燥した。クロロホルムを減圧下で留去した後、シリカゲ
ルクロマトグラフィーにより精製しく０．５％メタノー
ル／クロロホルム）、３’ 、５’ −０−（１，１，
３，３−テトライソプロピルジシロキサン−１，３−ジ
イル）−Ｎ４−（２−ヨードベンゾイル）−５−ヨード
デオキシシチジン（Ｃ１８８０ｍｇを１ｑだ。物性値は
次の通りであった。
ｖａｓｓ ｍ／ｅ ５９５ （Ｍ中 ）、
５５２（Ｍ−４３）［２＋ ３’ 、５’ −０
−（１，１，３，３−テトライソプロピルジシロキサン
−１，３−ジイル）−５−ヨードデオキシシチジン＋ｔ
ｎ ７００ｔｙ）を無水ピリジン１０＃ｌｌ！に溶かし
、水冷下で、２−ヨードベンゾイルクロリド３４０ｍｇ
（１，２当艶）を加えて、５０分間反応させた。水冷下
で水２ｍｌ’を加えて反応を停止し、１０分間放置した
後、溶媒を減圧下留去した。残漬を水−クロロホルム系
で抽出し、りロロホルム層を無水硫酸す１ヘリウムで乾
燥した。クロロホルムを減圧下で留去した後、シリカゲ
ルクロマトグラフィーにより精製しく０．５％メタノー
ル／クロロホルム）、３’ 、５’ −０−（１，１，
３，３−テトライソプロピルジシロキサン−１，３−ジ
イル）−Ｎ４−（２−ヨードベンゾイル）−５−ヨード
デオキシシチジン（Ｃ１８８０ｍｇを１ｑだ。物性値は
次の通りであった。
Ｍａｓｓ ｍ／ｅ ８２５（Ｍ”）、 ７８
２（Ｍ−４３）ｆ３１ ３’ 、５’ −０−（１，１
，３，３−テトライソプロピルジシロキサン−１，３−
ジイル）−Ｎ４−（２−ヨードベンゾイル）−５−ヨー
ドデオキシシチジン（Ｃ） ５ （００ｓ＋ｇを無水ジ
メチルホルムアミド５１ｄｌに溶かし、酢酸パラジウム
１４＋＋ｙ、ｉ−リフェニルホスフィン３０ｑ、 ト
リエチルアミン０．３７を加え、アルゴン気流下で、１
６時間１００℃に加熱した。溶媒を留去し、残漬を水−
クロロホルム系で抽出し、クロロボルム層は無水硫酸ナ
トリウムで乾燥した。
２（Ｍ−４３）ｆ３１ ３’ 、５’ −０−（１，１
，３，３−テトライソプロピルジシロキサン−１，３−
ジイル）−Ｎ４−（２−ヨードベンゾイル）−５−ヨー
ドデオキシシチジン（Ｃ） ５ （００ｓ＋ｇを無水ジ
メチルホルムアミド５１ｄｌに溶かし、酢酸パラジウム
１４＋＋ｙ、ｉ−リフェニルホスフィン３０ｑ、 ト
リエチルアミン０．３７を加え、アルゴン気流下で、１
６時間１００℃に加熱した。溶媒を留去し、残漬を水−
クロロホルム系で抽出し、クロロボルム層は無水硫酸ナ
トリウムで乾燥した。
クロロホルムを留去した後、シリカゲルクロマトグラフ
ィーにより精製しく３％メタノール／クロ［］ホルム）
、２− ［３’ 、５’ −０−（１，１，３，３−
テトライソプロピルジシロキサン−１，３−ジイル）−
β−Ｄ−デオキシリボフラノシル］−３，６−シオキソ
ビリミド［４，５−ｃ］イソキノリン（小１１５ｍｇを
得た。物性値は以下の通りであった。
ィーにより精製しく３％メタノール／クロ［］ホルム）
、２− ［３’ 、５’ −０−（１，１，３，３−
テトライソプロピルジシロキサン−１，３−ジイル）−
β−Ｄ−デオキシリボフラノシル］−３，６−シオキソ
ビリミド［４，５−ｃ］イソキノリン（小１１５ｍｇを
得た。物性値は以下の通りであった。
Ｍａｓｓ ｍ／ｅ Ｆ１７１（Ｍ” ）、 ５２
ｇ（Ｍ−４３）ＮＭＲ（ＣＤ（Ｊ３）δ４ ９．０９
（Ｓ 、 Ｈ−１） 。
ｇ（Ｍ−４３）ＮＭＲ（ＣＤ（Ｊ３）δ４ ９．０９
（Ｓ 、 Ｈ−１） 。
８．８９ （ｂｒ ｓ、 Ｎ−Ｈ） ８．４〜７．
５（Ａｒｏｅ＋ａｔｉｃ 。
５（Ａｒｏｅ＋ａｔｉｃ 。
４Ｈ）、 ６．１２ （ｄ 、 Ｊ
＝ ５．９． Ｈｚ 、 Ｈ−１’
＞（４） 上記（３）で得られた化合物（市の１１
０ＯＲをテトラヒドロフラン５ｄに溶解し、１Ｍデトラ
ブチルアンモニウムフルオリド０，２ｄ （テトラヒド
ロフラン溶液を室温で１時間撹拌した溶媒を画人後、シ
リカゲルクロマトグラフィー（１０％メタノール／クロ
ロホルム）により精製して２−β−Ｄ−デオキシリボフ
ラノシル−３，６−シオキソビリミド［４，５−Ｃ］イ
ソキノリン（ｅ）４８１ｒｒ９を得た。
＝ ５．９． Ｈｚ 、 Ｈ−１’
＞（４） 上記（３）で得られた化合物（市の１１
０ＯＲをテトラヒドロフラン５ｄに溶解し、１Ｍデトラ
ブチルアンモニウムフルオリド０，２ｄ （テトラヒド
ロフラン溶液を室温で１時間撹拌した溶媒を画人後、シ
リカゲルクロマトグラフィー（１０％メタノール／クロ
ロホルム）により精製して２−β−Ｄ−デオキシリボフ
ラノシル−３，６−シオキソビリミド［４，５−Ｃ］イ
ソキノリン（ｅ）４８１ｒｒ９を得た。
物性値は以下の通りであった。
ＵＶλ１ｌｌａＸ ２５２ｎｌｌｌ （６＝ ３６
５００）３４３ｎｍ （ｅ ＝ １１７００）ＮＭＲ
（ＤＭＳＯ−ｄ ａ ）δ １２．０２ （ｂｒ ｓ 、 Ｎ
−ト１）、 ９．５９ （Ｓ、 ｌ−１
−１）８．２〜７．４（芳香族４Ｈ）、 ６，１９
（ｔ 、 Ｊ＝５．５Ｈｚ 、 Ｈ−１’ ） λｅＸ ３４３０１ （螢光スペクトルの励起波長
）λｅｎ＋ ３８５ｎｍ （発光波長）なお、化合
物＋０１の相対螢光強度は、ピリドピリミジンヌクレオ
シドの約７０％であった。
５００）３４３ｎｍ （ｅ ＝ １１７００）ＮＭＲ
（ＤＭＳＯ−ｄ ａ ）δ １２．０２ （ｂｒ ｓ 、 Ｎ
−ト１）、 ９．５９ （Ｓ、 ｌ−１
−１）８．２〜７．４（芳香族４Ｈ）、 ６，１９
（ｔ 、 Ｊ＝５．５Ｈｚ 、 Ｈ−１’ ） λｅＸ ３４３０１ （螢光スペクトルの励起波長
）λｅｎ＋ ３８５ｎｍ （発光波長）なお、化合
物＋０１の相対螢光強度は、ピリドピリミジンヌクレオ
シドの約７０％であった。
＋ａ＋ ＜Ｉｎ３’ 、５’−
０−（１，１，３，３−テ１〜ライソプロピルジシロキ
４ｊンー １．３−ジイル）−Ｎ’−ペンゾイルデオギ
シシチジン（ａ） ３００ｍｇを、メタノール３００
ｍｅに溶かして、これにヨウ素４０ｍｇを加え、高圧水
銀灯で２４時間、光照射した。反応液を重曹水で中和し
５０−まで減圧上濃縮した。これに、水１００ｄを加え
て、り「ｌロホルムで抽出し、クロロホルム層を無水硫
酸す１〜リウムで乾燥した。りロロホルムを留去した後
、シリカゲルクロマ１へグラフィーにより精製し、（３
％メタノール／クロロホルム） 、 ２− ［３’ 、
５’−０−（１，１，３，３−テトライソブ［１ビルジ
シロキ１ノン−１，３−ジイル）−β−Ｄ−デＡキシリ
ボフラノシル］−３，６−シオキソビリミド［４，５−
ｃ］イソニ１ノリン市１８６＃１ｇを得た。
０−（１，１，３，３−テ１〜ライソプロピルジシロキ
４ｊンー １．３−ジイル）−Ｎ’−ペンゾイルデオギ
シシチジン（ａ） ３００ｍｇを、メタノール３００
ｍｅに溶かして、これにヨウ素４０ｍｇを加え、高圧水
銀灯で２４時間、光照射した。反応液を重曹水で中和し
５０−まで減圧上濃縮した。これに、水１００ｄを加え
て、り「ｌロホルムで抽出し、クロロホルム層を無水硫
酸す１〜リウムで乾燥した。りロロホルムを留去した後
、シリカゲルクロマ１へグラフィーにより精製し、（３
％メタノール／クロロホルム） 、 ２− ［３’ 、
５’−０−（１，１，３，３−テトライソブ［１ビルジ
シロキ１ノン−１，３−ジイル）−β−Ｄ−デＡキシリ
ボフラノシル］−３，６−シオキソビリミド［４，５−
ｃ］イソニ１ノリン市１８６＃１ｇを得た。
物性値は、実施例１において合成したものと一致した。
なお、糖水酸基の保護基をア［チル基にした場合にも、
はぼ同様の条件で目的物が得られた。
はぼ同様の条件で目的物が得られた。
実施例３
実施例１で得られた２−β−Ｄ−デオキシリボフラノシ
ルー３，６−シオキリビリミド［４，５−ｃｌイソキノ
リン＋ｅ＋ ６５５ｍｇを、無水トリエチルホスフェ−
１〜５ ｍｅに溶かし、０℃に冷却して、これにＡキシ
塩化リン６１３ｍ１を加えて、６時間反応させた後、氷
１ｇを加えて加水分解した。減圧上濃縮した後、残漬を
蒸留水１ｍに溶かして、ＤＥＡＥ−セファデックスＡ−
２５（ＨＣＯ３−型）を用い、１〜す］−チルアンモニ
ラ１８ビカーボネートの直線濃度勾配にて、精製し、２
−（５’−０−ホスホリル−β−Ｄ〜デオキシリボフラ
ノシル） −３，６−シＡキソビリミド［４，５−ｃ
ｌイソキノリン（ｆ）６５２ ｍ９をｉ！Ｊ １．：。
ルー３，６−シオキリビリミド［４，５−ｃｌイソキノ
リン＋ｅ＋ ６５５ｍｇを、無水トリエチルホスフェ−
１〜５ ｍｅに溶かし、０℃に冷却して、これにＡキシ
塩化リン６１３ｍ１を加えて、６時間反応させた後、氷
１ｇを加えて加水分解した。減圧上濃縮した後、残漬を
蒸留水１ｍに溶かして、ＤＥＡＥ−セファデックスＡ−
２５（ＨＣＯ３−型）を用い、１〜す］−チルアンモニ
ラ１８ビカーボネートの直線濃度勾配にて、精製し、２
−（５’−０−ホスホリル−β−Ｄ〜デオキシリボフラ
ノシル） −３，６−シＡキソビリミド［４，５−ｃ
ｌイソキノリン（ｆ）６５２ ｍ９をｉ！Ｊ １．：。
実施例４
腔
２０一
実施例３で得られた２−（５’−０−ホスホリル−β〜
Ｄ−デ第１シリボフラノシル）−３，６−シオキソビリ
ミド［４，５−ｃ］ｌイソキノリン０１００ｍｇを、無
水ジメチルホルムアミド５−に溶かし、カルボニルジイ
ミダゾール４００１１ｒ９を加えて、室温で１時間反応
させた。その後、反応液を、２０ｄの１％ヨウ化ナトリ
ウム／アセトンに注ぎ、生成した沈澱は濾別して、アセ
トンで洗浄し、減圧下で乾燥した。沈澱を無水ジメチル
ホルムアミド５Ｉｌｌ！！に溶かし、モノ−トリーｎ−
ブチルアンモニウムホスフェート２ｇを加えて、室温で
２４時間反応さゼた。減圧下、濃縮した後、残渣を蒸留
水３−に溶かして、ＤＥＡＥ−セファデックスＡ−２５
（ＨＣＯａ−型）を用い、トリエチルアンモニウムビカ
ーボネートの直線濃度勾配にて精製し、２−（５’ −
０−ジホスホリルーβ−Ｄ−デオキシリボフラノシル）
−３，６−シオキソビリミド［４，５−ｃ］ｌイソキノ
リン０）６０ｍｇを得た。
Ｄ−デ第１シリボフラノシル）−３，６−シオキソビリ
ミド［４，５−ｃ］ｌイソキノリン０１００ｍｇを、無
水ジメチルホルムアミド５−に溶かし、カルボニルジイ
ミダゾール４００１１ｒ９を加えて、室温で１時間反応
させた。その後、反応液を、２０ｄの１％ヨウ化ナトリ
ウム／アセトンに注ぎ、生成した沈澱は濾別して、アセ
トンで洗浄し、減圧下で乾燥した。沈澱を無水ジメチル
ホルムアミド５Ｉｌｌ！！に溶かし、モノ−トリーｎ−
ブチルアンモニウムホスフェート２ｇを加えて、室温で
２４時間反応さゼた。減圧下、濃縮した後、残渣を蒸留
水３−に溶かして、ＤＥＡＥ−セファデックスＡ−２５
（ＨＣＯａ−型）を用い、トリエチルアンモニウムビカ
ーボネートの直線濃度勾配にて精製し、２−（５’ −
０−ジホスホリルーβ−Ｄ−デオキシリボフラノシル）
−３，６−シオキソビリミド［４，５−ｃ］ｌイソキノ
リン０）６０ｍｇを得た。
実施例５
（ｈ）
実施例１１にａ；ＩＩる−しノー１〜リ−ｎ−ブヂルア
ントニウム小スーツＪｌ −１−の代りに、ジーＬ・リ
ーｎ−／Ｊルアン【＝ニウムジ小スノ１−１−を用いて
、同（じ操ｒ１三を行）τい、２−（５’ −ｉ’）ｉ
〜リボスホリルーβ−Ｄ−デオキシリボフラノシル）
−３，６−ジＡキリピリミド［４，５−ｃ］イソキノリ
ン（ｈ）を１９た。
ントニウム小スーツＪｌ −１−の代りに、ジーＬ・リ
ーｎ−／Ｊルアン【＝ニウムジ小スノ１−１−を用いて
、同（じ操ｒ１三を行）τい、２−（５’ −ｉ’）ｉ
〜リボスホリルーβ−Ｄ−デオキシリボフラノシル）
−３，６−ジＡキリピリミド［４，５−ｃ］イソキノリ
ン（ｈ）を１９た。
実施例６
木弁明の螢光性ヌクレオシドを含むドデカマーの合成を
以下の如きホスホ［−リエステル固相合成法（４１１図
参照）で行なった。固相支持体は、１％架橋ポリスチレ
ン樹脂を用い、３′−末９η１となるシチジンは、３′
−水酸Ｌ（と樹脂とをこはく耐］−ステルで結合し、担
持した。合成は、第１図に示すリーイクルに従って、ダ
イマーブロック縮合を行なった。
以下の如きホスホ［−リエステル固相合成法（４１１図
参照）で行なった。固相支持体は、１％架橋ポリスチレ
ン樹脂を用い、３′−末９η１となるシチジンは、３′
−水酸Ｌ（と樹脂とをこはく耐］−ステルで結合し、担
持した。合成は、第１図に示すリーイクルに従って、ダ
イマーブロック縮合を行なった。
ステン′７Ｌ（脱トリチル化反応）
５／、ＺＩｌｌＱＩヌクレオシド相当の樹脂を用いて、
２％ベンｔ！ンスル小ン酸（ＢＳ△）クロロボルム溶液
２ｄで１分間！ｉｉ埋した（２回くり返した）。
２％ベンｔ！ンスル小ン酸（ＢＳ△）クロロボルム溶液
２ｄで１分間！ｉｉ埋した（２回くり返した）。
ステップ上（綜合反応）
ダイマー２０７１ｍｏｌを２００〜３００ｆｌＱのピリ
ジンに溶かし、縮合剤として、メシヂレンスルホン酸：
ｌ−［１１−リアゾール（Ｍ Ｓ Ｎ Ｔ ） ７（
Ｄｌｍｏｌを加えて、４０℃で２０分間反応させた。
ジンに溶かし、縮合剤として、メシヂレンスルホン酸：
ｌ−［１１−リアゾール（Ｍ Ｓ Ｎ Ｔ ） ７（
Ｄｌｍｏｌを加えて、４０℃で２０分間反応させた。
ステラＩｒｅ（キｔ・ラビング反応）（未反応物の非反
応化反応） 無水Ｆ＋Ｉ’Ｍ （Ａｃ ２０） ０．２ｍｌを Ｏ
，１ｆｖ１４−ジメヂルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）の
ピリジン溶液１．８ｍｌと混合しく用Ｂ、’を調製）、
反応さけた。
応化反応） 無水Ｆ＋Ｉ’Ｍ （Ａｃ ２０） ０．２ｍｌを Ｏ
，１ｆｖ１４−ジメヂルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）の
ピリジン溶液１．８ｍｌと混合しく用Ｂ、’を調製）、
反応さけた。
この操作（ステップ１〜３）を、５回くり返しドデカマ
ーを合成した。
ーを合成した。
合成したドデカマー（（ＩＧＧＧ△ΔＦＴＴＴＣＣＣ・
・・・・・Ｆｌｌｆｆｌ光竹ヌクレＡシト）１Ａ５、次
の順序の操作に従って、説保護し精うツした、。
・・・・・Ｆｌｌｆｆｌ光竹ヌクレＡシト）１Ａ５、次
の順序の操作に従って、説保護し精うツした、。
（１）淵アンモニア水１６ ｐｉｅとピリジン４ ｍＱ
を加え、室ンム１で２４Ｂ１間ｆ２応さＵｌこ。
を加え、室ンム１で２４Ｂ１間ｆ２応さＵｌこ。
（６） さらに、５０℃に加熱して４時ｔｉｌ１反応
させた。
させた。
１３ｉＤ 逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー
（Ｃ１８カラム：ウォータース社製，３５〜１００μｍ
）で、ＩＡ Ｅｌした（アセトニトリルグラジエン１〜
：１０％−３５％）。
（Ｃ１８カラム：ウォータース社製，３５〜１００μｍ
）で、ＩＡ Ｅｌした（アセトニトリルグラジエン１〜
：１０％−３５％）。
０８０％酢酸に溶かし、至淘で２０分間すｌ理しで、−
２ ＝ｌ− ５′〜末端のジメトキシトリチル基を除去した。
２ ＝ｌ− ５′〜末端のジメトキシトリチル基を除去した。
（ν） 逆相高速液体クロマトグラフィーにて精製した
く東）ＹソーダーニーｒｓＫ− ４１０ＡＫ）。
く東）ＹソーダーニーｒｓＫ− ４１０ＡＫ）。
ＱＯ イＡン交後．高速液体夕日マドグラフィーにτ
椅簿゛シーして、甲−ピークを１ｑだ（東）エソ−ダニ
ＴＳ Ｋｏｅｌ Ｉ Ｅ Ｘ．５４０Ｋ ＞。
椅簿゛シーして、甲−ピークを１ｑだ（東）エソ−ダニ
ＴＳ Ｋｏｅｌ Ｉ Ｅ Ｘ．５４０Ｋ ＞。
１デカマーのすｖスペクトルにおいて、３４３ｎｍσ）
Ｉｌｌｊν，Ｊ，す、螢光，性ヌクレオシドの存在が確
認された。
Ｉｌｌｊν，Ｊ，す、螢光，性ヌクレオシドの存在が確
認された。
１・ご゛シ→ツマー５′−末端を放射性標識（ Ｐ）し
、フィン＃’−’プリントを行なった結果、ｊｎ基配列
の正しいことを示していた。
、フィン＃’−’プリントを行なった結果、ｊｎ基配列
の正しいことを示していた。
実施例γ・
ニックトランスレーション法によるｈ法但）用いた試薬
大錫菌Ｄ Ｎ Ａ ７Ｉ￥リメラ□． −”ｔｉ’ Ｉ
（ Ｂ ｏｅｈｒｉｎｇｅｒ − □Ｍａｎ
ｎｌｌｅｉｍなど＞’． 、’．５ ｉｉ’ｊ．ｊ．／
ｍ Ｃｌ） ５０％／ １，１ ｔ Ｄ −ル溶液を
原液のまま使Ｆｎ”） ’，肋５ａ ｌ） Ｎ ａｓｅ
ｌ ［ １ ｒｎｙ／２６一 ｍ（ｌとなルヨう１．Ｔ ０１０１ Ｎｊ１ｍ１１ｍ酸
二Ｌ、−２０℃で保存。使用時に希釈液（１０１１Ｍ
Ｔｒｉｓ −ＨＣｌ 。
（ Ｂ ｏｅｈｒｉｎｇｅｒ − □Ｍａｎ
ｎｌｌｅｉｍなど＞’． 、’．５ ｉｉ’ｊ．ｊ．／
ｍ Ｃｌ） ５０％／ １，１ ｔ Ｄ −ル溶液を
原液のまま使Ｆｎ”） ’，肋５ａ ｌ） Ｎ ａｓｅ
ｌ ［ １ ｒｎｙ／２６一 ｍ（ｌとなルヨう１．Ｔ ０１０１ Ｎｊ１ｍ１１ｍ酸
二Ｌ、−２０℃で保存。使用時に希釈液（１０１１Ｍ
Ｔｒｉｓ −ＨＣｌ 。
ｒ）Ｈ７，５，５１１１Ｍ Ｍ（ｌ Ｏｆ ２ 、１
＃１ｇ／＃＋１！ウシ而漬アルブミン）にで１０倍に希
釈し、０℃で２時間ｈ（置して活性化したあとさらに終
濃度０．１４ｍｇ／ｍｅにして用いるコ、ニックトラン
スレーション緩衝液（１０倍（ｉ、 ５００ ｍＭ
Ｔｒｉｓ−ｆｉｃｌ 、 ｐ）−１７，５，５Ｏｎ
＋Ｍ ＭＵ ＣＩ ２ 、１０ ｍＭ２−メルカプト
エタノール＞、ＩＩＮＴＰ溶液（各０．１１１ＭのｄＴ
Ｔ Ｐ 、 ｄＧ Ｔ Ｐ 、 ｄＡ Ｔ Ｐお
よびピリミドイソキノリンヌクレオシド−５′−トリホ
スフェート（（ＩＦＴＰ）溶液）、試料ｒ）ＮＡ（１０
ｍＭ Ｔｒｉｓ −１−ＩＣＩ 、 ｐｌ−１７，
５，１０ｍＭ ＫＣＩ 、 ０．２ｍＭ ＥＤＴ
Ａに１μｇ／μρとなるようにλファージＨｉｎｄｌフ
ラグメントＤＮＡを溶か１−）。
＃１ｇ／＃＋１！ウシ而漬アルブミン）にで１０倍に希
釈し、０℃で２時間ｈ（置して活性化したあとさらに終
濃度０．１４ｍｇ／ｍｅにして用いるコ、ニックトラン
スレーション緩衝液（１０倍（ｉ、 ５００ ｍＭ
Ｔｒｉｓ−ｆｉｃｌ 、 ｐ）−１７，５，５Ｏｎ
＋Ｍ ＭＵ ＣＩ ２ 、１０ ｍＭ２−メルカプト
エタノール＞、ＩＩＮＴＰ溶液（各０．１１１ＭのｄＴ
Ｔ Ｐ 、 ｄＧ Ｔ Ｐ 、 ｄＡ Ｔ Ｐお
よびピリミドイソキノリンヌクレオシド−５′−トリホ
スフェート（（ＩＦＴＰ）溶液）、試料ｒ）ＮＡ（１０
ｍＭ Ｔｒｉｓ −１−ＩＣＩ 、 ｐｌ−１７，
５，１０ｍＭ ＫＣＩ 、 ０．２ｍＭ ＥＤＴ
Ａに１μｇ／μρとなるようにλファージＨｉｎｄｌフ
ラグメントＤＮＡを溶か１−）。
山） 方法
＋ｌ） ６．５μ磨のニックトランスレーション緩衝
液、１０μｐのｄＮ王Ｐ溶液、２μρの試ＦＩＤＮＡ（
１１１’Ｊ／Ｉｔρ）と水を加えて全量を６５μｐとし
、よく撹拌した。
液、１０μｐのｄＮ王Ｐ溶液、２μρの試ＦＩＤＮＡ（
１１１’Ｊ／Ｉｔρ）と水を加えて全量を６５μｐとし
、よく撹拌した。
（２）活性化したＤＮａＳｅ■溶液５ ＩＩすを加えて
室温に２分間放置してニックを入れた。ついで、大腸菌
ＤＮＡポリメラーゼ■を２ ＩＩ Ｑ加えて１４℃で１
時間反応させた。
室温に２分間放置してニックを入れた。ついで、大腸菌
ＤＮＡポリメラーゼ■を２ ＩＩ Ｑ加えて１４℃で１
時間反応させた。
＋３１ ０．２５Ｍ Ｅｌ’）ＴＡを３５μす加えて
６８℃で１０分間加温し、酵素反応を止めた。フェノー
ル抽出を２回、エタノール沈澱を２回繰り返した。
６８℃で１０分間加温し、酵素反応を止めた。フェノー
ル抽出を２回、エタノール沈澱を２回繰り返した。
最後の沈澱を０，５ｆＲＲの１０ ｍＭ Ｔｒｉｓ
−ＣＩ 。
−ＣＩ 。
ｐＨ７，５，１０１Ｍ ＫＣＩ 、 ０．２＋＋＋
Ｍ Ｅｌ’）ＴＡに溶かして使用時まで一２０℃に保
存した。
Ｍ Ｅｌ’）ＴＡに溶かして使用時まで一２０℃に保
存した。
第１図は、同相リン酸トリエステル法によるオリゴヌク
レオチドの合成システムを示す。
レオチドの合成システムを示す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、一般式（Ｉ）で表わされる螢光性ヌクレオシド又は
ヌクレオチド。 ▲数式、化学式、表等があります▼・・・・・・（ I
） 〔式（ I ）において、Ｘ＿１とＹ＿１は各々▲数式、
化学式、表等があります▼を表わす（ｎは０、１、２ 又は３の整数を示す）。Ｚ＿１はＨ−又は ▲数式、化学式、表等があります▼を表わす（ｍは０、
１、２ 又は３の整数を示す）。Ｗ＿１はＨ−又はＨＯ−を表わ
す。〕 ２、一般式（ I ）において、Ｘ＿１とＹ＿１が共にＨ
Ｏ−でＺ＿１がＨ−又はＨＯ−でＷ＿１がＨ−である、
特許請求の範囲第１項記載の螢光性ヌクレオシド。 ３、一般式（ I ）において、Ｘ＿１及び／又はＹ＿１
が▲数式、化学式、表等があります▼（ｎは１、２又は
３の整数を 示す）でＺ＿１がＨ−又はＨＯ−でＷ＿１がＨ−である
、特許請求の範囲第１項記載の螢光性ヌクレオチド。 ４、分子中又は分子末端に、一般式（II）で表わされる
螢光性ヌクレオチド単位を、少なくとも１個含有するオ
リゴ又はポリヌクレオチド。 ▲数式、化学式、表等があります▼・・・・・・（II） 〔式（II）において、Ｘ＿２は▲数式、化学式、表等が
あります▼ 又は▲数式、化学式、表等があります▼を表わし、Ｘ＿
２が ▲数式、化学式、表等があります▼のときＹ＿２又はＺ
＿２は−Ｏ −を表わし（但し他方はＨ−又はＨＯ−を表わす）、 Ｘ＿２が▲数式、化学式、表等があります▼のときＹ＿
２又はＺ＿２は−Ｏ−又は▲数式、化学式、表等があり
ます▼を表わす（但し他方 はＨ−又はＨＯ−を表わす）（ｒは０、１、２又は３の
整数を示し、ｓは１、２又は３の整数を示す）Ｗ＿２は
Ｈ−又はＨＯ−を表わす。〕５、一般式（II）において
、Ｘ＿２が−Ｐ−Ｏ−であり、Ｙ＿２が−Ｏ−でＷ＿２
がＨ−である、特許請求の範囲第４項記載のオリゴ又は
ポリヌクレオチド。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19769085A JPS6259293A (ja) | 1985-09-09 | 1985-09-09 | 螢光性ヌクレオシド又はヌクレオチド |
| JP3144090A JPH0798834B2 (ja) | 1985-09-09 | 1991-05-21 | 螢光性ポリヌクレオチド |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19769085A JPS6259293A (ja) | 1985-09-09 | 1985-09-09 | 螢光性ヌクレオシド又はヌクレオチド |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3144090A Division JPH0798834B2 (ja) | 1985-09-09 | 1991-05-21 | 螢光性ポリヌクレオチド |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6259293A true JPS6259293A (ja) | 1987-03-14 |
| JPH0371437B2 JPH0371437B2 (ja) | 1991-11-13 |
Family
ID=16378729
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP19769085A Granted JPS6259293A (ja) | 1985-09-09 | 1985-09-09 | 螢光性ヌクレオシド又はヌクレオチド |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6259293A (ja) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0549709A1 (en) * | 1990-09-20 | 1993-07-07 | Amoco Corp | PROBE COMPOSITIONS FOR CHROMOSOME IDENTIFICATION AND METHOD. |
| WO1995005391A1 (en) * | 1993-08-18 | 1995-02-23 | Chromagen, Inc. | Applications of fluorescent n-nucleosides and fluorescent structural analogs of n-nucleosides |
| WO1995007918A2 (en) * | 1993-09-17 | 1995-03-23 | Gilead Sciences, Inc. | Pyrimidine derivatives for labeled binding partners |
| US6007992A (en) * | 1997-11-10 | 1999-12-28 | Gilead Sciences, Inc. | Pyrimidine derivatives for labeled binding partners |
| US6028183A (en) * | 1997-11-07 | 2000-02-22 | Gilead Sciences, Inc. | Pyrimidine derivatives and oligonucleotides containing same |
| WO2004046147A1 (ja) * | 2002-11-18 | 2004-06-03 | Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. | ポリヌクレオチド誘導体及びその利用 |
| US7144995B2 (en) | 2002-03-08 | 2006-12-05 | Glen Research Corporation | Fluorescent nitrogenous base and nucleosides incorporating same |
-
1985
- 1985-09-09 JP JP19769085A patent/JPS6259293A/ja active Granted
Cited By (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0549709A4 (en) * | 1990-09-20 | 1994-07-27 | Amoco Corp | Probe compositions for chromosome identification and methods |
| EP0787805A3 (en) * | 1990-09-20 | 2004-01-02 | Amoco Corporation | Probe compositions for chromosome identification and method |
| EP0549709A1 (en) * | 1990-09-20 | 1993-07-07 | Amoco Corp | PROBE COMPOSITIONS FOR CHROMOSOME IDENTIFICATION AND METHOD. |
| WO1995005391A1 (en) * | 1993-08-18 | 1995-02-23 | Chromagen, Inc. | Applications of fluorescent n-nucleosides and fluorescent structural analogs of n-nucleosides |
| US6617437B1 (en) | 1993-09-17 | 2003-09-09 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Pyrimidine derivatives for labeled binding partners |
| WO1995007918A2 (en) * | 1993-09-17 | 1995-03-23 | Gilead Sciences, Inc. | Pyrimidine derivatives for labeled binding partners |
| WO1995007918A3 (en) * | 1993-09-17 | 1995-08-03 | Gilead Sciences Inc | Pyrimidine derivatives for labeled binding partners |
| US5502177A (en) * | 1993-09-17 | 1996-03-26 | Gilead Sciences, Inc. | Pyrimidine derivatives for labeled binding partners |
| US5763588A (en) * | 1993-09-17 | 1998-06-09 | Gilead Sciences, Inc. | Pyrimidine derivatives for labeled binding partners |
| US6005096A (en) * | 1993-09-17 | 1999-12-21 | Gilead Sciences, Inc. | Pyrimidine derivatives |
| US6967079B2 (en) | 1993-09-17 | 2005-11-22 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Pyrimidine derivatives for labeled binding partners |
| US6414127B1 (en) | 1997-11-07 | 2002-07-02 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Pyrimidine derivatives for labeled binding partners |
| US6028183A (en) * | 1997-11-07 | 2000-02-22 | Gilead Sciences, Inc. | Pyrimidine derivatives and oligonucleotides containing same |
| US6800743B2 (en) | 1997-11-07 | 2004-10-05 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Pyrimidine derivatives for labeled binding partners |
| US6951931B2 (en) | 1997-11-07 | 2005-10-04 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Pyrimidine derivatives for labeled binding partners |
| USRE39324E1 (en) * | 1997-11-07 | 2006-10-03 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Pyrimidine derivatives and oligonucleotides containing same |
| US7511125B2 (en) | 1997-11-07 | 2009-03-31 | Carlsbad | Pyrimidine derivatives for labeled binding partners |
| US6007992A (en) * | 1997-11-10 | 1999-12-28 | Gilead Sciences, Inc. | Pyrimidine derivatives for labeled binding partners |
| US7144995B2 (en) | 2002-03-08 | 2006-12-05 | Glen Research Corporation | Fluorescent nitrogenous base and nucleosides incorporating same |
| WO2004046147A1 (ja) * | 2002-11-18 | 2004-06-03 | Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. | ポリヌクレオチド誘導体及びその利用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0371437B2 (ja) | 1991-11-13 |
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