JPS6251695A - ホスホロアミダイト類の合成法 - Google Patents
ホスホロアミダイト類の合成法Info
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- JPS6251695A JPS6251695A JP60191507A JP19150785A JPS6251695A JP S6251695 A JPS6251695 A JP S6251695A JP 60191507 A JP60191507 A JP 60191507A JP 19150785 A JP19150785 A JP 19150785A JP S6251695 A JPS6251695 A JP S6251695A
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- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明はホスファイト法によるオリゴヌクレオチド合成
に必要なホスホロアミダイト類の簡便な合成法に関する
。
に必要なホスホロアミダイト類の簡便な合成法に関する
。
本発明により得られるホスホロアミダイト類は、迫伝子
工学における重要な素材であるオリゴヌクレオチドを合
成するための原料として、きわめて有用な化合物である
。
工学における重要な素材であるオリゴヌクレオチドを合
成するための原料として、きわめて有用な化合物である
。
（従来の技術）
従来オリゴヌクレオチドの合成法としては、ヌクレオシ
ドの３′−位と他のヌクレオシドのダー位とをリン酸エ
ステルの形で結合させる縮合反応の種類によって、トリ
エステル法、ジエステル法、ホスファイト法などが知ら
れている。
ドの３′−位と他のヌクレオシドのダー位とをリン酸エ
ステルの形で結合させる縮合反応の種類によって、トリ
エステル法、ジエステル法、ホスファイト法などが知ら
れている。
これらの縮合反応のうちトリエステル法は下記の反応式
〔目 反応式口〕 ０−Ｒ” ″ （反応式（１）において ＢｌおよびＢ！は保護基を有
することもある核酸塩基残基を、几８は水酸基の保護基
を、Ｒ″はリン酸の保護基を、ＴＬ４は水：に原子また
は保護基を有する水酸基を、Ｖは水酸基の保護基を表わ
す） で示されるように、縮合剤の存在下にヌクレオシド３′
−リン酸エステルとヌクレオシドダーアルコールを縮合
させてリン酸トリエステルとする反応であシ、反応収率
、反応の容易さなどの点から現在比較的多く用いられて
いる合成法であるが、反応速度が遅く、また縮合剤によ
るダー位水酸基のスルホニル化という副反応のため、収
率が低下するなどの欠点を有しているＱこれに対して寸
スファイト法による縮合反応は下記の反応式〔…〕 反応式〔璽〕 （反応式〔■〕ニオイテ、ｉｌｌ” ｌ Ｂｍｌ Ｂ！
、 Ｒ”ｌ Ｒ４および几−は前記と同一の意味を、Ｗ
はクロル基またはナト２ゾール基を我わす） で示されるように、ホスファイト体はすでに活性化され
ているため縮合剤を必要とせず、従って縮合剤による副
反応もおこらず、反応も数分間で完結するという利点を
有する。
〔目 反応式口〕 ０−Ｒ” ″ （反応式（１）において ＢｌおよびＢ！は保護基を有
することもある核酸塩基残基を、几８は水酸基の保護基
を、Ｒ″はリン酸の保護基を、ＴＬ４は水：に原子また
は保護基を有する水酸基を、Ｖは水酸基の保護基を表わ
す） で示されるように、縮合剤の存在下にヌクレオシド３′
−リン酸エステルとヌクレオシドダーアルコールを縮合
させてリン酸トリエステルとする反応であシ、反応収率
、反応の容易さなどの点から現在比較的多く用いられて
いる合成法であるが、反応速度が遅く、また縮合剤によ
るダー位水酸基のスルホニル化という副反応のため、収
率が低下するなどの欠点を有しているＱこれに対して寸
スファイト法による縮合反応は下記の反応式〔…〕 反応式〔璽〕 （反応式〔■〕ニオイテ、ｉｌｌ” ｌ Ｂｍｌ Ｂ！
、 Ｒ”ｌ Ｒ４および几−は前記と同一の意味を、Ｗ
はクロル基またはナト２ゾール基を我わす） で示されるように、ホスファイト体はすでに活性化され
ているため縮合剤を必要とせず、従って縮合剤による副
反応もおこらず、反応も数分間で完結するという利点を
有する。
（発明が解決しようとする問題点）
ホスファイト法によるオリゴヌクレオチド合成は、レツ
テンゲル（Ｌ・ｔｓｌｎｇ・ｒ）らによシ提案〔ジャー
ナル・オブ・ザ・アメリカン・ケミカル・ソサイエテイ
（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ ＡｍｅｒｉｃａｎＯ
ｈ＠ｍ１ｃａｌ ５ｏｅｌｅｔｙ）、 ９８． ３６５
５ （１９７６）１され九もので、下記の反応式（１） 反応式（１） −ＴＯＥ （反応式（１）において、Ｒは２−フェノキシアセチル
基を、ＴｏＦＸは２，２．２−）リクロロエチル基を、
ＭＴｒはメトキシトリチル基を、Ｔはテミ／を表わす） で示されるように、ダー位水酸基を２−フェノキシアセ
チル基で保護したチミジンにリン酸化剤（トリクロロエ
チルジクロリダイト）を反応させてホスホロアミダイト
としたのち、このホスホロアミダイトと３′−位水酸基
をメトキシトリチル基で保護したチミジンとを反応し、
次いでヨウ素−水によシ酸化してチミジンのダイマーを
得ている。しかし、このリン酸化剤は湿気に対して非常
に不安定であるため、カル−チル（０ａｒｕｔｈ＠ｒｓ
）らは下記の反応式［ＩＶ］反応式ＣＪＹ） ００Ｈ。
テンゲル（Ｌ・ｔｓｌｎｇ・ｒ）らによシ提案〔ジャー
ナル・オブ・ザ・アメリカン・ケミカル・ソサイエテイ
（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ ＡｍｅｒｉｃａｎＯ
ｈ＠ｍ１ｃａｌ ５ｏｅｌｅｔｙ）、 ９８． ３６５
５ （１９７６）１され九もので、下記の反応式（１） 反応式（１） −ＴＯＥ （反応式（１）において、Ｒは２−フェノキシアセチル
基を、ＴｏＦＸは２，２．２−）リクロロエチル基を、
ＭＴｒはメトキシトリチル基を、Ｔはテミ／を表わす） で示されるように、ダー位水酸基を２−フェノキシアセ
チル基で保護したチミジンにリン酸化剤（トリクロロエ
チルジクロリダイト）を反応させてホスホロアミダイト
としたのち、このホスホロアミダイトと３′−位水酸基
をメトキシトリチル基で保護したチミジンとを反応し、
次いでヨウ素−水によシ酸化してチミジンのダイマーを
得ている。しかし、このリン酸化剤は湿気に対して非常
に不安定であるため、カル−チル（０ａｒｕｔｈ＠ｒｓ
）らは下記の反応式［ＩＶ］反応式ＣＪＹ） ００Ｈ。
（反応式〔■〕において、ＤＭＴｒはジメトキシトリチ
ル基を、Ｒ′は４−オキツノ々レリル基を、Ｔは前記と
同一の意味を表わす） で示すように、反応式［０で用いたリン酸化剤のクロル
基の１つをジメチルアミノ基に代えたリン酸化剤を、ダ
ー位水＃１基をジメトキシトリチル基で保護したチミジ
ンと反応させてチミジン−ホスホロアミダイトを得てい
る。このホスホロアミダイトは比較的安定であシ、抽出
操作によシ精製することが可能である。このホスホロア
ミダイトはテトラゾールにより活性化したのち次の縮合
反応に用いられる〔ナト２ヘドロン・レターズ（Ｔ＊ｔ
ｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ ）、 １８５９
（１９８１）］。なお、現在はジメチルアミノ基の代り
にジイソプロピルアミノ基を導入し次ホスホロアミダイ
トが一般に用いられている。
ル基を、Ｒ′は４−オキツノ々レリル基を、Ｔは前記と
同一の意味を表わす） で示すように、反応式［０で用いたリン酸化剤のクロル
基の１つをジメチルアミノ基に代えたリン酸化剤を、ダ
ー位水＃１基をジメトキシトリチル基で保護したチミジ
ンと反応させてチミジン−ホスホロアミダイトを得てい
る。このホスホロアミダイトは比較的安定であシ、抽出
操作によシ精製することが可能である。このホスホロア
ミダイトはテトラゾールにより活性化したのち次の縮合
反応に用いられる〔ナト２ヘドロン・レターズ（Ｔ＊ｔ
ｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ ）、 １８５９
（１９８１）］。なお、現在はジメチルアミノ基の代り
にジイソプロピルアミノ基を導入し次ホスホロアミダイ
トが一般に用いられている。
すなわち、現在通常に用いられているホスホロアミダイ
トの合成法では、下記の反応式〔ｖ〕反応式（Ｖ） （反応式〔ｖ〕において、ＩＰｒはイソプロピル基を、
几８は置換基を有することもあるアルキル基またはアリ
ール基であシリン酸保護基となりうる芯を Ｂｌおよび
Ｒ２は前記と同一の意味を表わす） で示すように、まず脂肪族または芳香族アルコールと三
塩化リンを反応させてジクロリダイト体とし、次いでジ
イソゾロビルアミンと反応させて得られたリン酸化剤を
、ダー位水酸基を保護したヌクレオシドと反応させてホ
スホロアミダイトとするものであり、この方法では得ら
れたホスホロアミダイトのリン酸保謔基几凰が、リン酸
化剤合成に用いるアルコールに対応して決定されるため
、１種類のリン酸化剤からは１種類のリン酸保護基をも
つホスホロアミダイトしか合成できず、従ってホスホロ
アミダイトのリン酸保護基に対応する数だけのリン酸化
剤を必要とする。またこの方法ではリン酸保護基として
導入される保護基Ｒ１の種類も限定されるという問題点
を有する。
トの合成法では、下記の反応式〔ｖ〕反応式（Ｖ） （反応式〔ｖ〕において、ＩＰｒはイソプロピル基を、
几８は置換基を有することもあるアルキル基またはアリ
ール基であシリン酸保護基となりうる芯を Ｂｌおよび
Ｒ２は前記と同一の意味を表わす） で示すように、まず脂肪族または芳香族アルコールと三
塩化リンを反応させてジクロリダイト体とし、次いでジ
イソゾロビルアミンと反応させて得られたリン酸化剤を
、ダー位水酸基を保護したヌクレオシドと反応させてホ
スホロアミダイトとするものであり、この方法では得ら
れたホスホロアミダイトのリン酸保謔基几凰が、リン酸
化剤合成に用いるアルコールに対応して決定されるため
、１種類のリン酸化剤からは１種類のリン酸保護基をも
つホスホロアミダイトしか合成できず、従ってホスホロ
アミダイトのリン酸保護基に対応する数だけのリン酸化
剤を必要とする。またこの方法ではリン酸保護基として
導入される保護基Ｒ１の種類も限定されるという問題点
を有する。
（問題点を解決する九めの手段）
本発明者らは上記の如き問題点を解決するために検討を
加え九結果、下記の反応式〔■〕に示すホスホロアミダ
イトの新規な合成法を見い出し、本発明を完成し穴もの
である。
加え九結果、下記の反応式〔■〕に示すホスホロアミダ
イトの新規な合成法を見い出し、本発明を完成し穴もの
である。
（反応式〔■〕において、ＸはＯ９ＳまたはＮＨを、Ｂ
’ 、 Ｒ１１Ｒ”およびｉＰｒは前記と同一の意味を
表わす） すなわち、ジイソプロピルアミンと三塩化リンを反応さ
せてリン酸化剤（Ｎ、Ｎ−ジイソプロビルアミノホスホ
ジクロリダイト）を合成したのち、このリン酸化剤を用
いてダー位水酸基を保護し念ヌクレオシドの３′−位水
酸基のリン酸化を行い、引続き対応するアルコール類、
フェノール類、チオール類もしくはアミン類のいずれか
と反応させることで、リン酸保護基Ｒ１を自由に選択し
、かつ容易に導入することを可能にしたものである。
’ 、 Ｒ１１Ｒ”およびｉＰｒは前記と同一の意味を
表わす） すなわち、ジイソプロピルアミンと三塩化リンを反応さ
せてリン酸化剤（Ｎ、Ｎ−ジイソプロビルアミノホスホ
ジクロリダイト）を合成したのち、このリン酸化剤を用
いてダー位水酸基を保護し念ヌクレオシドの３′−位水
酸基のリン酸化を行い、引続き対応するアルコール類、
フェノール類、チオール類もしくはアミン類のいずれか
と反応させることで、リン酸保護基Ｒ１を自由に選択し
、かつ容易に導入することを可能にしたものである。
さらに本発明を上記の反応式〔■〕により具体的に脱刷
すると、三塩化リン■と２当量のジイソプロピルアミン
■とを、エーテル溶媒中、反応温度１０Ｃ以下で１〜５
時間反応する。反応終了後、析出した塩をｒ別し、ン４
液を常圧で蒸留してエーテルを留去し次のち、オイル状
の残渣を更に減圧蒸留して無色透明液体のリン酸化剤Ｎ
、Ｎ−ジインプロピルアミノホスホジクロリダイト■が
得られる。次に、このリン酸化剤■と、。ダー位水酸基
を保護基Ｒ２例えばトリチル基、メトキシトリチル基、
ジメトキシトリチル基などの脱保護反応のさい選択的に
脱離する保護基により保護したヌクレオシド■とを、ジ
イソプロピルエチルアミンの存在下に、−１００前後の
低温で１５〜６０分間反応を行い、ヌクレオシド■の３
′−位水竣基をリン酸化した反応中間体■とする。次い
で、この反応中間体■を単離することなく、引続き一般
式（１） Ｒ１） （式中、Ｒ１およびＸは前記と同一の意味を表わす） で示される化合物■とを、ジイソプロピルエチルアミン
の存在下に、室温で１５〜６０分間反応させることで、
リン酸保護ＭＲ”を導入し九ホスホロアミダイト■が好
収率で得られる。なお、一般式（１）において Ｒ１は
置換基を有することもあるアルキル基゛ま良はアリール
基であり、リン酸保護基となシ得るものである。従って
一般式（１）で示される化合物■としては、アルコール
類、フェノール類、チオール類もしくはアミン類が用い
られ、代表的なものとしてはメタノール、２−シアノエ
タノール、トリクロロエタノール、トリクロロジメチル
エタノール、クロロフェノール、ベンゼンチオール、
−二トロベンゼンチオール、アニリンなどが例示される
が、本発明の目的を達成する化合物であればこれらに限
定されるものではない。
すると、三塩化リン■と２当量のジイソプロピルアミン
■とを、エーテル溶媒中、反応温度１０Ｃ以下で１〜５
時間反応する。反応終了後、析出した塩をｒ別し、ン４
液を常圧で蒸留してエーテルを留去し次のち、オイル状
の残渣を更に減圧蒸留して無色透明液体のリン酸化剤Ｎ
、Ｎ−ジインプロピルアミノホスホジクロリダイト■が
得られる。次に、このリン酸化剤■と、。ダー位水酸基
を保護基Ｒ２例えばトリチル基、メトキシトリチル基、
ジメトキシトリチル基などの脱保護反応のさい選択的に
脱離する保護基により保護したヌクレオシド■とを、ジ
イソプロピルエチルアミンの存在下に、−１００前後の
低温で１５〜６０分間反応を行い、ヌクレオシド■の３
′−位水竣基をリン酸化した反応中間体■とする。次い
で、この反応中間体■を単離することなく、引続き一般
式（１） Ｒ１） （式中、Ｒ１およびＸは前記と同一の意味を表わす） で示される化合物■とを、ジイソプロピルエチルアミン
の存在下に、室温で１５〜６０分間反応させることで、
リン酸保護ＭＲ”を導入し九ホスホロアミダイト■が好
収率で得られる。なお、一般式（１）において Ｒ１は
置換基を有することもあるアルキル基゛ま良はアリール
基であり、リン酸保護基となシ得るものである。従って
一般式（１）で示される化合物■としては、アルコール
類、フェノール類、チオール類もしくはアミン類が用い
られ、代表的なものとしてはメタノール、２−シアノエ
タノール、トリクロロエタノール、トリクロロジメチル
エタノール、クロロフェノール、ベンゼンチオール、
−二トロベンゼンチオール、アニリンなどが例示される
が、本発明の目的を達成する化合物であればこれらに限
定されるものではない。
また、本発明におけるヌクレオシド■は／−位が水素原
子である２′−デオキシリ７１？ヌクレオシドのほか、
１−位が水酸基であるリゼヌクレオシドの場合も、２′
−位水酸基を適切な保段基により保護することによシ、
ｌ−デずキシリゾヌクレオシドと同様に用いることがで
きる。
子である２′−デオキシリ７１？ヌクレオシドのほか、
１−位が水酸基であるリゼヌクレオシドの場合も、２′
−位水酸基を適切な保段基により保護することによシ、
ｌ−デずキシリゾヌクレオシドと同様に用いることがで
きる。
ま危、本発明の如き合成法をとることにより、従来のホ
スホロアミダイトはＰ−０結合によりリン酸保護基が結
合しているのみであつ九のに対し、本発明ではＰ−０結
合のほかＰ−８結合、Ｐ−Ｎ結合によるリン酸保護基の
結合を可能とじ九ものであシ、ｐ−ｓ結合、Ｐ−Ｎ結合
を有するホスホロアミダイトは新規な化合物である。
スホロアミダイトはＰ−０結合によりリン酸保護基が結
合しているのみであつ九のに対し、本発明ではＰ−０結
合のほかＰ−８結合、Ｐ−Ｎ結合によるリン酸保護基の
結合を可能とじ九ものであシ、ｐ−ｓ結合、Ｐ−Ｎ結合
を有するホスホロアミダイトは新規な化合物である。
さらに本発明で得られたホスホロアミダイトを用い、下
記の反応式〔■〕 反応式〔■〕 （反応式〔■〕において、” ＋ Ｂ” Ｊ Ｒ” ｌ
” ＋Ｒ１およびｉＰｒは前記と同一の意味を表わす
）で示すように、ホスホロアミダイト３′−位水酸基を
保護し九ヌクレオシドとをアセトニトリル中テトラゾー
ルの存在下に縮合反応を行い、次（・でヨウ素−水で酸
化して完全保獲したジヌクレオチドを得る。このジヌク
レオチドの保護基を選択的に部分脱離し、更に縮合反応
をくり返すことにより、鎖長が２個以上のオリゴヌクレ
オチドを合成することができる。
記の反応式〔■〕 反応式〔■〕 （反応式〔■〕において、” ＋ Ｂ” Ｊ Ｒ” ｌ
” ＋Ｒ１およびｉＰｒは前記と同一の意味を表わす
）で示すように、ホスホロアミダイト３′−位水酸基を
保護し九ヌクレオシドとをアセトニトリル中テトラゾー
ルの存在下に縮合反応を行い、次（・でヨウ素−水で酸
化して完全保獲したジヌクレオチドを得る。このジヌク
レオチドの保護基を選択的に部分脱離し、更に縮合反応
をくり返すことにより、鎖長が２個以上のオリゴヌクレ
オチドを合成することができる。
（発明の効果）
本発明で用いるリン酸化剤Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルアミ
ノホスホジクロリダイトは、三塩化リンとジイソプロピ
ルアミンより容易に合成でき、従来のリン酸化剤に比し
て保存安定性が良好である。を九、本発明のホスホロア
ミダイトの合成法は、従来の合成法では導入しにくかつ
７ｔ ＩＪン酸保護基を容易に導入可能にすると共に、
従来得られなかったＰ−８結合、Ｐ−Ｎ結合によるリン
酸保護基の結合を可能としたものであるＯ （実施例および実験例） 実施例１ ■リン酸化剤（Ｎ、Ｎ−ジインプロビルアミノホスホジ
クロリダイト）の合成 三塩化リン２１．８ ｄ （０，２５モル）を含む乾燥
エーテル１００−を塩化す） ＩＪウムー氷で約−１０
０に冷却した中へ、攪拌しながら乾燥エーテル７０１１
Ｌｔに溶解したジイソプロピルアミン７０．１ ｄ （
０，５モル）！、約２．５時間を要して滴下する。滴下
終了後、反応液の温度を室ｉｔで戻し、更に１時間攪拌
を続けて反応を完結させる。次いで析出した塩をＰ別し
、ｒ液を常圧で蒸留してエーテルを留去する。更に黄色
オイル状の残渣を減圧ｌ蒸留して、無色透明液体のＮ、
Ｎ−ジイソゾロビルアミノホスホジクロリダイトを６７
％の収率で得た。
ノホスホジクロリダイトは、三塩化リンとジイソプロピ
ルアミンより容易に合成でき、従来のリン酸化剤に比し
て保存安定性が良好である。を九、本発明のホスホロア
ミダイトの合成法は、従来の合成法では導入しにくかつ
７ｔ ＩＪン酸保護基を容易に導入可能にすると共に、
従来得られなかったＰ−８結合、Ｐ−Ｎ結合によるリン
酸保護基の結合を可能としたものであるＯ （実施例および実験例） 実施例１ ■リン酸化剤（Ｎ、Ｎ−ジインプロビルアミノホスホジ
クロリダイト）の合成 三塩化リン２１．８ ｄ （０，２５モル）を含む乾燥
エーテル１００−を塩化す） ＩＪウムー氷で約−１０
０に冷却した中へ、攪拌しながら乾燥エーテル７０１１
Ｌｔに溶解したジイソプロピルアミン７０．１ ｄ （
０，５モル）！、約２．５時間を要して滴下する。滴下
終了後、反応液の温度を室ｉｔで戻し、更に１時間攪拌
を続けて反応を完結させる。次いで析出した塩をＰ別し
、ｒ液を常圧で蒸留してエーテルを留去する。更に黄色
オイル状の残渣を減圧ｌ蒸留して、無色透明液体のＮ、
Ｎ−ジイソゾロビルアミノホスホジクロリダイトを６７
％の収率で得た。
沸点 ７２〜７３ Ｃ／ ７１０１Ｈｇ”Ｐ−ＮＭＲス
ペクトルを第１図に示す。
ペクトルを第１図に示す。
■チミジンーホスホロアミダイトの合成兄 ※
実
乾燥ジクロロメタン２ ＃ＥＪおよび乾燥Ｎ、Ｎ−ジイ
ソプロピルエチルアミン１ ｍｌ中に、前記■で得たリ
ン酸化剤−Ｌ４５０μｌを溶解し、食塩−氷で一１０Ｃ
に冷却、窒素雰囲気下で攪拌しながら、乾燥ジクロロメ
タン３ ｆｆ１ｅに溶解した５′−〇−ジメトキシトリ
チルーチミジンミ０．５ ｍ ｍｏｌを１０分間で滴下
し念。滴下終了後約３０分間攪拌を絖けてリン酸化反応
を行い、反応中間体ユとする。反応中間体見を含む反応
液中に、乾燥ジクロロメタン３１１Ｌｌに溶解したメタ
ノール１０当量を滴下したのち、室温で３０分間攪拌を
続けてリン酸保護基としてメトキシ基を有するチミジン
−アミダイト乏を得た。このチミジン−アミダイト４は
シリカゲルカラム（φ２ｃｒｎ×５０）（メルクタイプ
６０）でジクロロメタン／酢酸エチル／トリエチルアミ
ン＝５０１５０／２ （Ｖ／Ｖ／Ｖ）により精製し九
。収率７６％。
ソプロピルエチルアミン１ ｍｌ中に、前記■で得たリ
ン酸化剤−Ｌ４５０μｌを溶解し、食塩−氷で一１０Ｃ
に冷却、窒素雰囲気下で攪拌しながら、乾燥ジクロロメ
タン３ ｆｆ１ｅに溶解した５′−〇−ジメトキシトリ
チルーチミジンミ０．５ ｍ ｍｏｌを１０分間で滴下
し念。滴下終了後約３０分間攪拌を絖けてリン酸化反応
を行い、反応中間体ユとする。反応中間体見を含む反応
液中に、乾燥ジクロロメタン３１１Ｌｌに溶解したメタ
ノール１０当量を滴下したのち、室温で３０分間攪拌を
続けてリン酸保護基としてメトキシ基を有するチミジン
−アミダイト乏を得た。このチミジン−アミダイト４は
シリカゲルカラム（φ２ｃｒｎ×５０）（メルクタイプ
６０）でジクロロメタン／酢酸エチル／トリエチルアミ
ン＝５０１５０／２ （Ｖ／Ｖ／Ｖ）により精製し九
。収率７６％。
施例２〜９
実施例１−■で得られた反応中間体３に、実施例１−■
のメタノールの代りに第１表記載のアルコール、フェノ
ール、チオフェノール、アニリン（以下、アルコール等
と総称）それぞれ１０当量を実施例１−■と同じ条件で
反応させ、精製して、用いたアルコール等に対応するリ
ン酸保護基を有するチミジン−アミダイトを第１表記載
の収率で得た。代表的なアミダイトの’ＩＰ−ＮＭ几ス
ペクトルを第２〜４図に示す。
のメタノールの代りに第１表記載のアルコール、フェノ
ール、チオフェノール、アニリン（以下、アルコール等
と総称）それぞれ１０当量を実施例１−■と同じ条件で
反応させ、精製して、用いたアルコール等に対応するリ
ン酸保護基を有するチミジン−アミダイトを第１表記載
の収率で得た。代表的なアミダイトの’ＩＰ−ＮＭ几ス
ペクトルを第２〜４図に示す。
（以下余白）
第１表
実験例１〜５ ジヌクレオチドの合成前記実施例で得
られたチミジン−アミダイト４′（リン酸保護基Ｒは第
２表に記載） ０．１５ ｍｍｏｌと３′−〇−ベンゾ
イルーチミジン５０．１ ｍｍｏｌを合わせてピリジン
共沸し、窒素置換し次のち、アセトニトリル３ゴに溶解
し九テトラゾール１．５ ｍ ｍｏｊを加えて、室温で
３０分間縮合反応を行う。次に室温下に０．１ Ｍヨウ
素（テトラヒドロフラン／ピリジン／ 水＝ ４０／１
０／１ ）をヨウ素の色が持続するまで加え、更に３０
分間攪拌して酸化を行う。反応の進行はそれぞれの段階
において、ＴＬＯ（クロロホルム／メタノール−１０／
１ ）あるいはＲＴＩ、Ｏ（アセトン／水＝’ｌ／３
）で確認した。酸化反応終了後、ジクロロメタン−５％
亜硫酸水素ナトリウム水溶液で抽出し、有機層を水で２
回洗浄したのち濃縮する。残渣をシリカゲルカラム（メ
ルクタイプ６０Ｈ）により精製し、少量のクロロホルム
に溶解し九のちｎ−（フランに滴下して粉末化し九ジヌ
クレオチドを第２表記載の収率で得たＯ 第２表
られたチミジン−アミダイト４′（リン酸保護基Ｒは第
２表に記載） ０．１５ ｍｍｏｌと３′−〇−ベンゾ
イルーチミジン５０．１ ｍｍｏｌを合わせてピリジン
共沸し、窒素置換し次のち、アセトニトリル３ゴに溶解
し九テトラゾール１．５ ｍ ｍｏｊを加えて、室温で
３０分間縮合反応を行う。次に室温下に０．１ Ｍヨウ
素（テトラヒドロフラン／ピリジン／ 水＝ ４０／１
０／１ ）をヨウ素の色が持続するまで加え、更に３０
分間攪拌して酸化を行う。反応の進行はそれぞれの段階
において、ＴＬＯ（クロロホルム／メタノール−１０／
１ ）あるいはＲＴＩ、Ｏ（アセトン／水＝’ｌ／３
）で確認した。酸化反応終了後、ジクロロメタン−５％
亜硫酸水素ナトリウム水溶液で抽出し、有機層を水で２
回洗浄したのち濃縮する。残渣をシリカゲルカラム（メ
ルクタイプ６０Ｈ）により精製し、少量のクロロホルム
に溶解し九のちｎ−（フランに滴下して粉末化し九ジヌ
クレオチドを第２表記載の収率で得たＯ 第２表
第２図はそれぞれ次のチミジン−アミダイト△
の”Ｐ−ＮＭ几スペクトルを示す。
第２図
第３図
第４図
特許出、願人 有機合成薬品工業株式会社代理人 弁
理士 月 村 茂 外１名大°す〕訃υメナ
ル ２℃Ｘフ
Ｑ（ρｐｍ）ｊ 竺汀 か１シコ−ｙリメテル
理士 月 村 茂 外１名大°す〕訃υメナ
ル ２℃Ｘフ
Ｑ（ρｐｍ）ｊ 竺汀 か１シコ−ｙリメテル
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、三塩化リンとジイソプロピルアミンを反応させて得
られるリン酸化剤Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノホスホ
ジクロリダイトと、５′−位水酸基を保護基により保護
したヌクレオシドとを反応させて、該ヌクレオシドの３
′−位水酸基をリン酸化したのち、一般式（１） Ｒ＾１−ＸＨ （１） （式中、ＸはＯ、ＳまたはＮＨを、Ｒ＾１は置換基を有
することもあるアルキル基また はアリール基であり、リン酸保護基とな りうる基を表わす） で示されるアルコール類、フェノール類、チオール類も
しくはアミン類のいずれかと反応させて一般式（２） ▲数式、化学式、表等があります▼（２） （式中、Ｂは保護基を有することもある核 酸塩基残基を、Ｒ＾２は水酸基の保護基を、ｉＰｒはイ
ソプロピル基を、ＸおよびＲ＾１は前記と同一の意味を
表わす） で示されるホスホロアミダイト類を合成することを特徴
とするホスホロアミダイト類の合成法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60191507A JPS6251695A (ja) | 1985-08-29 | 1985-08-29 | ホスホロアミダイト類の合成法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60191507A JPS6251695A (ja) | 1985-08-29 | 1985-08-29 | ホスホロアミダイト類の合成法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6251695A true JPS6251695A (ja) | 1987-03-06 |
| JPH0588240B2 JPH0588240B2 (ja) | 1993-12-21 |
Family
ID=16275800
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60191507A Granted JPS6251695A (ja) | 1985-08-29 | 1985-08-29 | ホスホロアミダイト類の合成法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6251695A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH03501128A (ja) * | 1988-05-26 | 1991-03-14 | ユニバーシティ パテンツ，インコーポレイティド | ヌクレオシドおよびポリヌクレオチドチオホスホラミダイトおよびホスホロジチオエイト化合物並びに方法 |
| GR890100349A (el) * | 1989-05-26 | 1994-03-31 | University Patents Inc | Ενώσεις νουκλεοσιδίων & πολυνουκλεοτιδίων, θειοφωσφοραμιδίων & φωσφοροδιθειικών εστέρων & μέθοδοι. |
| WO2005082923A1 (ja) * | 2004-03-01 | 2005-09-09 | Japan Science And Technology Agency | 塩基部無保護法による新規核酸合成法 |
| KR20160147973A (ko) * | 2014-04-30 | 2016-12-23 | 애질런트 테크놀로지스, 인크. | 인 보호 기 및 이의 제조 방법 및 용도 |
-
1985
- 1985-08-29 JP JP60191507A patent/JPS6251695A/ja active Granted
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH03501128A (ja) * | 1988-05-26 | 1991-03-14 | ユニバーシティ パテンツ，インコーポレイティド | ヌクレオシドおよびポリヌクレオチドチオホスホラミダイトおよびホスホロジチオエイト化合物並びに方法 |
| GR890100349A (el) * | 1989-05-26 | 1994-03-31 | University Patents Inc | Ενώσεις νουκλεοσιδίων & πολυνουκλεοτιδίων, θειοφωσφοραμιδίων & φωσφοροδιθειικών εστέρων & μέθοδοι. |
| WO2005082923A1 (ja) * | 2004-03-01 | 2005-09-09 | Japan Science And Technology Agency | 塩基部無保護法による新規核酸合成法 |
| US7807821B1 (en) | 2004-03-01 | 2010-10-05 | Japan Science And Technology Agency | Method for the synthesis of nucleic acid without protecting base moiety |
| KR20160147973A (ko) * | 2014-04-30 | 2016-12-23 | 애질런트 테크놀로지스, 인크. | 인 보호 기 및 이의 제조 방법 및 용도 |
| JP2017518966A (ja) * | 2014-04-30 | 2017-07-13 | アジレント・テクノロジーズ・インクＡｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ， Ｉｎｃ． | リン保護基ならびにそれらの調製方法および使用 |
| US11104699B2 (en) | 2014-04-30 | 2021-08-31 | Agilent Technologies, Inc. | Phosphorous protecting groups and methods of preparation and use thereof |
| US11584773B2 (en) | 2014-04-30 | 2023-02-21 | Agilent Technologies, Inc. | Phosphorous protecting groups and methods of preparation and use thereof |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0588240B2 (ja) | 1993-12-21 |
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Legal Events
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|---|---|---|---|
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