JPS6236188A - 安定なカリジノゲナ−ゼ溶液の製造法 - Google Patents
安定なカリジノゲナ−ゼ溶液の製造法Info
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- JPS6236188A JPS6236188A JP17606585A JP17606585A JPS6236188A JP S6236188 A JPS6236188 A JP S6236188A JP 17606585 A JP17606585 A JP 17606585A JP 17606585 A JP17606585 A JP 17606585A JP S6236188 A JPS6236188 A JP S6236188A
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- kallidinogenase
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- protease
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は、安定なカリジノゲナーゼ溶液の製造法に関す
るものである。
るものである。
カリジノゲナーゼは人を含む哺乳動物の膵臓、尿、血液
等に分布している酵素であり、現在、豚の膵臓から製せ
られたものが各種循環器障害の治療薬として用いられて
いる。これを患者に用いる方法としては、経口投与、ま
たは筋肉的注射が行なわれている。
等に分布している酵素であり、現在、豚の膵臓から製せ
られたものが各種循環器障害の治療薬として用いられて
いる。これを患者に用いる方法としては、経口投与、ま
たは筋肉的注射が行なわれている。
従来の技術
カリジノゲナーゼは豚の膵臓を原料として用い、アクリ
ノール沈殿法（特公昭３５−３０４５）、弱塩基性陰イ
オン交換セルロース吸着法（特公昭３７−１１６９７）
等の方法で精製されている、しかしながらこれら従来の
方法では共存する異種蛋白質を完全に除去することが難
しく、高純度のカリジノゲナーゼを得ることが困難であ
る。
ノール沈殿法（特公昭３５−３０４５）、弱塩基性陰イ
オン交換セルロース吸着法（特公昭３７−１１６９７）
等の方法で精製されている、しかしながらこれら従来の
方法では共存する異種蛋白質を完全に除去することが難
しく、高純度のカリジノゲナーゼを得ることが困難であ
る。
膵臓に含まれる異種蛋白質のうちカリジノゲナーゼの効
果、安定性に最も影習を与えるものとしてプロテアーゼ
が知られている。このプロテアーゼのうち塩基性のトリ
プシン、キモトリプシン等は、通常の精製方法、例えば
上記の塩基性陰イオン交換セルロース吸着法によっても
除去しうるが、得られたカリジノゲナーゼ溶液にはまだ
カリジノゲナーゼの等電点に近い酸性域に等電点を有す
るプロテアーゼが共存するため、この溶液を用いて製造
された注射液、錠剤、カプセル剤等のカリジノゲナーゼ
製剤は製剤時あるいは保存中に活性低下が起こりやすく
、これの改善法が種々提案されてきた。
果、安定性に最も影習を与えるものとしてプロテアーゼ
が知られている。このプロテアーゼのうち塩基性のトリ
プシン、キモトリプシン等は、通常の精製方法、例えば
上記の塩基性陰イオン交換セルロース吸着法によっても
除去しうるが、得られたカリジノゲナーゼ溶液にはまだ
カリジノゲナーゼの等電点に近い酸性域に等電点を有す
るプロテアーゼが共存するため、この溶液を用いて製造
された注射液、錠剤、カプセル剤等のカリジノゲナーゼ
製剤は製剤時あるいは保存中に活性低下が起こりやすく
、これの改善法が種々提案されてきた。
例えばプロテアーゼの除去方法としては、近年、不溶性
プロテアーゼ阻害剤を用いてプロテアーゼを吸着除去す
るアフィニテイ吸着法（特開昭５ｌ−５４９１５）が、
また、粗カリジノゲナーゼ溶液からカリジノゲナーゼの
みを吸着分離する方法として不溶性コンカナバリンＡを
用いた吸着法（特公昭５８−２０５９２）や、不溶性抗
カリジノゲナーゼ抗体法（特開昭５６−５０９５）等が
開発されている。しかしながら上述のこれらの方法はプ
ロテアーゼやカリジノゲナーゼに特異的親和性を有する
リガンドが高価であり、また大量に得る事が困難である
為工業的な規模での使用が困難な状況にある。
プロテアーゼ阻害剤を用いてプロテアーゼを吸着除去す
るアフィニテイ吸着法（特開昭５ｌ−５４９１５）が、
また、粗カリジノゲナーゼ溶液からカリジノゲナーゼの
みを吸着分離する方法として不溶性コンカナバリンＡを
用いた吸着法（特公昭５８−２０５９２）や、不溶性抗
カリジノゲナーゼ抗体法（特開昭５６−５０９５）等が
開発されている。しかしながら上述のこれらの方法はプ
ロテアーゼやカリジノゲナーゼに特異的親和性を有する
リガンドが高価であり、また大量に得る事が困難である
為工業的な規模での使用が困難な状況にある。
発明が解決しようとする問題点
本発明者等はかかる現状に鑑み、カリジノゲナーゼ溶液
の安定性に影響を及ぼすプロテアーゼの内、等電点が酸
性域にあるプロテアーゼ群に着目しこれの除去法を鋭意
研究した結果、弱酸性陽イオン交換セルロースがｐＨ４
，０〜５．０の範囲においてプロテアーゼを特異的に吸
若し、しかもカリジノゲナーゼはほとんど損失なく回収
されると共に得られたカリジノゲナーゼの溶液は非常に
安定である事実を発見し本発明を完成するに至った。
の安定性に影響を及ぼすプロテアーゼの内、等電点が酸
性域にあるプロテアーゼ群に着目しこれの除去法を鋭意
研究した結果、弱酸性陽イオン交換セルロースがｐＨ４
，０〜５．０の範囲においてプロテアーゼを特異的に吸
若し、しかもカリジノゲナーゼはほとんど損失なく回収
されると共に得られたカリジノゲナーゼの溶液は非常に
安定である事実を発見し本発明を完成するに至った。
問題点を解決するための手段
すなわち本発明は、粗製カリジノゲナーゼ含有溶液を、
ｐＨ４，０〜５．０で弱酸性陽イオン交換セルロースに
接触させることにより酸性域に等電点を有するプロテア
ーゼを除去することを特徴とする安定なカリジノゲナー
ゼ溶液の製造法である。
ｐＨ４，０〜５．０で弱酸性陽イオン交換セルロースに
接触させることにより酸性域に等電点を有するプロテア
ーゼを除去することを特徴とする安定なカリジノゲナー
ゼ溶液の製造法である。
以下本発明につき詳細に説明する
本発明に使用する粗製カリジノゲナーゼ含有溶液とは、
健康な豚の膵臓を直接あるいはアセトン脱脂粉末とした
後に水抽出した溶液を公知の方法例えば、アクリノール
沈殿法（特公昭３５−３０４５）、塩基性陰イオン交換
樹脂吸着法（特公昭３７−１１６９７）等で粗精製して
得られるものの内、酸性域に等電点を有するプロテアー
ゼは残存するがトリプシン、キモトリプシン等の塩基性
蛋白質は実質的に残存しないカリジノゲナーゼ含有溶液
を指し、その製法については特に限定するものではない
。また酸性域に等電点を有するプロ白でカゼイン等の蛋
白分解活性を有するものをいう。弱酸性陽イオン交換セ
ルロースとは弱酸性陽イオン交換基を有するセルロース
またはセルロース誘導体であって例えばカルボキシ・メ
チル（ＣＭ−）セルロファインＣＭ、カルボキシ瞭メチ
ル（ＣＭ−）セルロファインＣＨ（チッソ株式会社）な
どが使用できる。粗製カリジノゲナーゼ含有溶液を弱酸
性陽イオン交換セ、ルロースに接触させる際のｐＨは、
４．０〜５．０の範囲であれば良い。この際のｐＨが４
．０より低いと、カリジノゲナーゼの吸着が起こり回収
率が低下する。またｐＨ５，０より高い場合には目的と
するプロテアーゼの吸着除去ができず不都合である。
健康な豚の膵臓を直接あるいはアセトン脱脂粉末とした
後に水抽出した溶液を公知の方法例えば、アクリノール
沈殿法（特公昭３５−３０４５）、塩基性陰イオン交換
樹脂吸着法（特公昭３７−１１６９７）等で粗精製して
得られるものの内、酸性域に等電点を有するプロテアー
ゼは残存するがトリプシン、キモトリプシン等の塩基性
蛋白質は実質的に残存しないカリジノゲナーゼ含有溶液
を指し、その製法については特に限定するものではない
。また酸性域に等電点を有するプロ白でカゼイン等の蛋
白分解活性を有するものをいう。弱酸性陽イオン交換セ
ルロースとは弱酸性陽イオン交換基を有するセルロース
またはセルロース誘導体であって例えばカルボキシ・メ
チル（ＣＭ−）セルロファインＣＭ、カルボキシ瞭メチ
ル（ＣＭ−）セルロファインＣＨ（チッソ株式会社）な
どが使用できる。粗製カリジノゲナーゼ含有溶液を弱酸
性陽イオン交換セ、ルロースに接触させる際のｐＨは、
４．０〜５．０の範囲であれば良い。この際のｐＨが４
．０より低いと、カリジノゲナーゼの吸着が起こり回収
率が低下する。またｐＨ５，０より高い場合には目的と
するプロテアーゼの吸着除去ができず不都合である。
作用
粗カリジノゲナーゼ溶液の２５°での安定性に及ぼすプ
ロテアーゼの影響と本発明によるカリジノゲナーゼ溶液
の安定性について以下の試験例にて実証する。
ロテアーゼの影響と本発明によるカリジノゲナーゼ溶液
の安定性について以下の試験例にて実証する。
なおりリジノゲナーゼのＮ−ベンゾイル・アルギニン・
エチルエステル（ＢＡＥＥ）分解活性、およびプロテア
ーゼのカゼイン分解活性の測定および蛋白質の高速液体
クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）は以下の方法によった
。
エチルエステル（ＢＡＥＥ）分解活性、およびプロテア
ーゼのカゼイン分解活性の測定および蛋白質の高速液体
クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）は以下の方法によった
。
■ＢＡＥＥ分解活性
トラウツホルド（１，Ｔｒａｕｔｓｃｈｏｌｄ）等の方
法［ホッペザイラーズ・ツアイトシュリフト・フユア・
フイジオロジツシェ・ヘミ−（Ｈｏｐｐｅ−３ｅｙｌｅ
ｒｓ ｚ、Ｐｈｙｓｉｕｌ、Ｃｈｅｍ、）３２５巻、
４８頁（１９６１年）］に準じて行なった。
法［ホッペザイラーズ・ツアイトシュリフト・フユア・
フイジオロジツシェ・ヘミ−（Ｈｏｐｐｅ−３ｅｙｌｅ
ｒｓ ｚ、Ｐｈｙｓｉｕｌ、Ｃｈｅｍ、）３２５巻、
４８頁（１９６１年）］に準じて行なった。
■カゼイン分解活性
クニツツ（Ｋｕｎｉｔｚ）の方法［ザ・ジャーナル・才
ブ・ゼネラル・ブイジオロジ−（Ｊ、Ｇｅｎ、ＰｈｙＳ
ｉｏｌ）３０巻、２９１頁（１９４７）］に準じてカゼ
イン分解活性をプロテアーゼ活性とした。
ブ・ゼネラル・ブイジオロジ−（Ｊ、Ｇｅｎ、ＰｈｙＳ
ｉｏｌ）３０巻、２９１頁（１９４７）］に準じてカゼ
イン分解活性をプロテアーゼ活性とした。
■ＨＰＬＣの条件
装置 二東洋曹達工業（株）製ＨＰＬＣ装置カラム：
ＴＳＫｇ ｅ ＩＤＥＡＥ−５ＦＷ内径７．５Ｘ７５１
１［［１ 移動相：Ａ液−Ｂ液 ６０分直線グラジェントＡ液 ０
．０２Ｍリン酸カリウム緩衝液（６，８） ＋０．１Ｍ
塩塩化ナトリウム液液０．０２Ｍリン酸カリウム緩衝液
（６，８） ＋０．５Ｍ塩化ナトリウム流速 ： ０
、８ ｍｌ／ｍｉｎ 温度 ：２５′″ 測定波長：ＵＶ２８０ｎｍ 試験例１ 健康な豚の膵臓の水抽出液から、（１）ＤＥＡＥ−セル
ロース吸着法（特公昭３７−１１６９７の実施例１によ
る公知の方法）により粗カリジノゲナーゼ溶液を得た。
ＴＳＫｇ ｅ ＩＤＥＡＥ−５ＦＷ内径７．５Ｘ７５１
１［［１ 移動相：Ａ液−Ｂ液 ６０分直線グラジェントＡ液 ０
．０２Ｍリン酸カリウム緩衝液（６，８） ＋０．１Ｍ
塩塩化ナトリウム液液０．０２Ｍリン酸カリウム緩衝液
（６，８） ＋０．５Ｍ塩化ナトリウム流速 ： ０
、８ ｍｌ／ｍｉｎ 温度 ：２５′″ 測定波長：ＵＶ２８０ｎｍ 試験例１ 健康な豚の膵臓の水抽出液から、（１）ＤＥＡＥ−セル
ロース吸着法（特公昭３７−１１６９７の実施例１によ
る公知の方法）により粗カリジノゲナーゼ溶液を得た。
（２）（１）で得た粗カリジノゲナーゼ溶液を実施例１
と同様の方法（本発明の方法）によって精製し、得られ
たカリジノゲナーゼ溶液についてＢＡＥＥ分解活性およ
びカゼイン分解活性を測定した。
と同様の方法（本発明の方法）によって精製し、得られ
たカリジノゲナーゼ溶液についてＢＡＥＥ分解活性およ
びカゼイン分解活性を測定した。
結果を表１に示した。
本発明の方法によって得られたカリジノゲナーゼ溶液は
、カゼイン分解活性が認められず、また蛋白質量あたり
のＢＡＥＥ分解活性も著しく高いことが認められた。
、カゼイン分解活性が認められず、また蛋白質量あたり
のＢＡＥＥ分解活性も著しく高いことが認められた。
試験例２
試験例１の（１）、（２）の方法で得られたカリジノゲ
ナーゼ溶液についてＨＰＬＣを行い、それぞれの両分に
分画し、ＢＡＥＥ分解活性およびカゼイン分解活性をそ
れぞれ測定した。
ナーゼ溶液についてＨＰＬＣを行い、それぞれの両分に
分画し、ＢＡＥＥ分解活性およびカゼイン分解活性をそ
れぞれ測定した。
結果を第１図および第２図に示した。
本発明の方法によって得られたカリジノゲナーゼ溶液中
にはカゼイン分解活性を有するプロテアーゼの存在が認
められなかった。これに対し、ＤＥＡＥ−セルロース吸
着法によって得られたカリジノゲナーゼ溶液中にはカゼ
イン分解活性を有するプロテアーゼの存在が認められた
。
にはカゼイン分解活性を有するプロテアーゼの存在が認
められなかった。これに対し、ＤＥＡＥ−セルロース吸
着法によって得られたカリジノゲナーゼ溶液中にはカゼ
イン分解活性を有するプロテアーゼの存在が認められた
。
試験例３
試験例１の（１）、（２）の方法で得られたカリジノゲ
ナーゼ溶液の安定性を試験するため、除菌フィルターを
通した溶液を無菌下２５°、２日間保存して、ＢＡＥＥ
分解活性およびカリジノゲナーゼのＨＰＬＣパターンの
変化を調べた。
ナーゼ溶液の安定性を試験するため、除菌フィルターを
通した溶液を無菌下２５°、２日間保存して、ＢＡＥＥ
分解活性およびカリジノゲナーゼのＨＰＬＣパターンの
変化を調べた。
ＢＡＥＥ分解活性の結果を表２に、ＨＰＬＣの結果を第
３図、第４図に示した。
３図、第４図に示した。
本発明のカリジノゲナーゼ溶液は、２５°、２日間保存
してもＢＡＥＥ分解活性の低下が認められず、カリジノ
ゲナーゼのＨＰＬＣパターンにも変化が認められなかっ
た。（第４図）これに対し、ＤＥＡＥ−セルロース吸着
法のみによるカリジノゲナーゼ溶液は、２５°、１日間
保存でＢＡＥＥ分解活性の低下が認められると共にＨＰ
ＬＣパターンにおいても、カリジノゲナーゼのピークの
減少が認められた。（第３図） 試験例４ 試験例１の（１）、（２）の方法で得られたカリジノゲ
ナーゼ溶液を水に対して透析後、凍結乾燥しその重量の
１０倍量の乳糖を混合してカリジノゲナーゼ粉末を得た
。この粉末を４０°、ＲＨ７５％で２ケ月間保存して、
ＢＡＥＥ分解活性の推移を調べた。
してもＢＡＥＥ分解活性の低下が認められず、カリジノ
ゲナーゼのＨＰＬＣパターンにも変化が認められなかっ
た。（第４図）これに対し、ＤＥＡＥ−セルロース吸着
法のみによるカリジノゲナーゼ溶液は、２５°、１日間
保存でＢＡＥＥ分解活性の低下が認められると共にＨＰ
ＬＣパターンにおいても、カリジノゲナーゼのピークの
減少が認められた。（第３図） 試験例４ 試験例１の（１）、（２）の方法で得られたカリジノゲ
ナーゼ溶液を水に対して透析後、凍結乾燥しその重量の
１０倍量の乳糖を混合してカリジノゲナーゼ粉末を得た
。この粉末を４０°、ＲＨ７５％で２ケ月間保存して、
ＢＡＥＥ分解活性の推移を調べた。
ＢＡＥＥ分解活性の結果を表３に示した。
本発明のカリジノゲナーゼ粉末は、４０°、ＲＨ７５％
、２ケ月間保存してもＢＡＥＥ分解活性の低下が認めら
れなかった。これに対し、ＤＥＡＥ−セルロース吸着法
のみにより得られたカリジノゲナーゼ粉末は、１ケ月間
で著しいＢＡＥＥ分解活性の低下が認められた。
、２ケ月間保存してもＢＡＥＥ分解活性の低下が認めら
れなかった。これに対し、ＤＥＡＥ−セルロース吸着法
のみにより得られたカリジノゲナーゼ粉末は、１ケ月間
で著しいＢＡＥＥ分解活性の低下が認められた。
試験例１．２．３．４に示した如く、本発明の方法によ
って得られるカリジノゲナーゼ溶液ならびに粉末は、原
料中に含まれるプロテアーゼが完全に除去されており、
このため溶液での２５°保存試験、粉末での４０°、Ｒ
Ｈ７５％保存試験においてＢＡＥＥ分解活性の低下や、
カリジノゲナーゼのＨＰＬＣパターンに変化を生ぜず、
きわめて安定であることが実証きれた。
って得られるカリジノゲナーゼ溶液ならびに粉末は、原
料中に含まれるプロテアーゼが完全に除去されており、
このため溶液での２５°保存試験、粉末での４０°、Ｒ
Ｈ７５％保存試験においてＢＡＥＥ分解活性の低下や、
カリジノゲナーゼのＨＰＬＣパターンに変化を生ぜず、
きわめて安定であることが実証きれた。
実施例
実施例１
豚の膵臓原末１ｋｇからＤＥＡＥ−セルロース処理（特
公昭３７−１１６９７の実施例１による公知の方法）す
ることによって粗製カリジノゲナーゼ含有溶液を５００
ｍ１を得た。次いでＣＭ−セルロファイン（チッソ株式
会社製弱酸性陽イオン交換セルロース）１００ｍｌを０
．０２Ｍ＃酸緩衝液（ｐＨ４，５）で平衡化した後方ラ
ムに充填する。上記粗製カリジノゲナーゼ含有溶液をｐ
Ｈ４，５に調整した後カラムに通液し、プロテアーゼを
ＣＭ−セルロファインに吸着せしめ、カリジノゲナーゼ
溶液を得た。この溶液を水に対して透析後、凍結乾燥を
行ない精製カリジノゲナーゼ２００ｍｇを得た。精製カ
リジノゲナーゼのＢＡＥＥ分解活性を測定したところ８
３ＥＵ／ｍｇであった。また粗カリジノゲナーゼ溶液か
らのＢＡＥＥ分解活性の活性回収率は９５％であった。
公昭３７−１１６９７の実施例１による公知の方法）す
ることによって粗製カリジノゲナーゼ含有溶液を５００
ｍ１を得た。次いでＣＭ−セルロファイン（チッソ株式
会社製弱酸性陽イオン交換セルロース）１００ｍｌを０
．０２Ｍ＃酸緩衝液（ｐＨ４，５）で平衡化した後方ラ
ムに充填する。上記粗製カリジノゲナーゼ含有溶液をｐ
Ｈ４，５に調整した後カラムに通液し、プロテアーゼを
ＣＭ−セルロファインに吸着せしめ、カリジノゲナーゼ
溶液を得た。この溶液を水に対して透析後、凍結乾燥を
行ない精製カリジノゲナーゼ２００ｍｇを得た。精製カ
リジノゲナーゼのＢＡＥＥ分解活性を測定したところ８
３ＥＵ／ｍｇであった。また粗カリジノゲナーゼ溶液か
らのＢＡＥＥ分解活性の活性回収率は９５％であった。
発明の効果
以上詳述した如く、本発明によれば従来公知の方法より
も安価にかつ簡便に安定なカリジノゲナーゼ溶液を得る
ことができこれをそのままあるいは適当な賦形剤ととも
に乾燥、粉末化することで長期保存に耐えられるカリジ
ノゲナーゼ粉末が得られるため、錠剤をはじめカプセル
剤、注射液剤等あらゆる剤形の製剤に使用できるため産
業上の利用価値は非常に大きい。
も安価にかつ簡便に安定なカリジノゲナーゼ溶液を得る
ことができこれをそのままあるいは適当な賦形剤ととも
に乾燥、粉末化することで長期保存に耐えられるカリジ
ノゲナーゼ粉末が得られるため、錠剤をはじめカプセル
剤、注射液剤等あらゆる剤形の製剤に使用できるため産
業上の利用価値は非常に大きい。
【図面の簡単な説明】
第１図は、本発明の方法により精製したカリジノゲナー
ゼ溶液のＨＰＬＣパターンを示すものである。 第２図は、ＤＥＡＥ−セルロース法により精製したカリ
ジノゲナーゼ溶液のＨＰＬＣパターンを示すものである
。 第３図は、本発明の方法により精製したカリジノゲナー
ゼ溶液の無菌下、２５°保存、０日目、１日目、２日目
のＨＰＬＣパターンを示すものである。 第４図は、ＤＥＡＥ−セルロース法により精製したカリ
ジノゲナーゼ溶液の無菌下、２５°保存、０日目、１日
目、２日目のＨＰＬＣのパターンを示すものである。
ゼ溶液のＨＰＬＣパターンを示すものである。 第２図は、ＤＥＡＥ−セルロース法により精製したカリ
ジノゲナーゼ溶液のＨＰＬＣパターンを示すものである
。 第３図は、本発明の方法により精製したカリジノゲナー
ゼ溶液の無菌下、２５°保存、０日目、１日目、２日目
のＨＰＬＣパターンを示すものである。 第４図は、ＤＥＡＥ−セルロース法により精製したカリ
ジノゲナーゼ溶液の無菌下、２５°保存、０日目、１日
目、２日目のＨＰＬＣのパターンを示すものである。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、粗製カリジノゲナーゼ含有溶液から酸性域に等電点
を有するプロテアーゼを吸着除去することを特徴とする
安定なカリジノゲナーゼ溶液の製造法。 ２、酸性域に等電点を有するプロテアーゼの吸着除去が
、ｐＨ４．０〜５．０に調整した粗製カリジノゲナーゼ
含有溶液を弱酸性陽イオン交換セルロースに接触させる
ことにより行なわれる特許請求の範囲第１項記載の安定
なカリジノゲナーゼ溶液の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17606585A JPS6236188A (ja) | 1985-08-10 | 1985-08-10 | 安定なカリジノゲナ−ゼ溶液の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17606585A JPS6236188A (ja) | 1985-08-10 | 1985-08-10 | 安定なカリジノゲナ−ゼ溶液の製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6236188A true JPS6236188A (ja) | 1987-02-17 |
Family
ID=16007097
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP17606585A Pending JPS6236188A (ja) | 1985-08-10 | 1985-08-10 | 安定なカリジノゲナ−ゼ溶液の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6236188A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7813514B2 (en) | 2005-05-09 | 2010-10-12 | Sony Corporation | Apparatus and method for checking loudspeaker |
-
1985
- 1985-08-10 JP JP17606585A patent/JPS6236188A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7813514B2 (en) | 2005-05-09 | 2010-10-12 | Sony Corporation | Apparatus and method for checking loudspeaker |
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