JPS6234059A - 固相化試薬の安定化剤 - Google Patents
固相化試薬の安定化剤Info
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- JPS6234059A JPS6234059A JP17339485A JP17339485A JPS6234059A JP S6234059 A JPS6234059 A JP S6234059A JP 17339485 A JP17339485 A JP 17339485A JP 17339485 A JP17339485 A JP 17339485A JP S6234059 A JPS6234059 A JP S6234059A
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- Japan
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- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔発明の目的〕
本発明は固相化試薬を乾燥条件下で長期間、免疫化学的
活性を損うことなく安定に保存するための安定化剤に関
するものである。
活性を損うことなく安定に保存するための安定化剤に関
するものである。
ここに固相化試薬とは免疫化学的測定に用いる抗原また
は抗体な固相担体に物理的またアッセイが広く行なわれ
るよう罠なり、すでに多くの測定試薬が実用に供されて
いる。これらの測定試薬の多くは、抗原・抗体結合物を
分離する手段として固相化試薬を用いている。そこでこ
れらの固相化試薬の免疫活性を乾燥状態で長期間安定に
保つ方法がいくつか知られている（例えば英国特許２１
２４２３１号。
は抗体な固相担体に物理的またアッセイが広く行なわれ
るよう罠なり、すでに多くの測定試薬が実用に供されて
いる。これらの測定試薬の多くは、抗原・抗体結合物を
分離する手段として固相化試薬を用いている。そこでこ
れらの固相化試薬の免疫活性を乾燥状態で長期間安定に
保つ方法がいくつか知られている（例えば英国特許２１
２４２３１号。
西独特許２９１０７０７号９日本特開昭５１１−１２３
４５９号）。しかしイムノアッセイは増々高感度化の方
向にあり、それにともない固相化する抗原や抗体も増々
希薄な溶液を用いるよ５になって来ているので、従来法
では満足し得なくなり更に強力な安定化の手法の開発が
望まれていた。
４５９号）。しかしイムノアッセイは増々高感度化の方
向にあり、それにともない固相化する抗原や抗体も増々
希薄な溶液を用いるよ５になって来ているので、従来法
では満足し得なくなり更に強力な安定化の手法の開発が
望まれていた。
本発明者らは乾燥状態で免疫活性低下の少ない固相化試
薬を開発すべく種々検討の結果、本発明を完成した。
薬を開発すべく種々検討の結果、本発明を完成した。
本発明は■牛血清アルブミンならびに■ピロリドンカル
ボン酸塩類、デキストリンおよびポリビニルアルコール
から選ばれた１種または２ａ！以上からなる固相化試薬
の安定化剤である。
ボン酸塩類、デキストリンおよびポリビニルアルコール
から選ばれた１種または２ａ！以上からなる固相化試薬
の安定化剤である。
本発明による固相化試薬の安定化は前述の安定化剤を含
む水溶液に固相化試薬を浸漬し乾燥することによって得
られる。
む水溶液に固相化試薬を浸漬し乾燥することによって得
られる。
本発明に係る固相化担体には免疫化学測定法に用いる全
ての固相担体を包含するが、好ましくはプラスチック、
ガラス、紙などから作うれたチューブ、ビーズ、スティ
ック、マイクロタイタープレート状のものが用いられる
。固相担体と抗原または抗体の結合は物理的吸着または
化学的吸着のいずれでもよい。
ての固相担体を包含するが、好ましくはプラスチック、
ガラス、紙などから作うれたチューブ、ビーズ、スティ
ック、マイクロタイタープレート状のものが用いられる
。固相担体と抗原または抗体の結合は物理的吸着または
化学的吸着のいずれでもよい。
前述の■牛血清アルブミンならびに■ピロリドンカルボ
ン酸塩類、デキストリンおよびポリビニルアルコールか
ら選ばれた１種又は２種以上は適当な割合で混合して用
いることが出来る。混合割合は好適には１：０．５〜５
である。またピロリドンカルボン酸塩類としては例えば
ナトリウム、カリウムのようなアルカリ金属との塩また
はトリエタノールアミンのようなアミンとの塩が好適で
あり、特にナトリウム塩が好適である。安定化剤水溶液
の濃度は例えば０．１〜１０％の範囲から適当に決める
ことが出来る。好適には１〜５％である。
ン酸塩類、デキストリンおよびポリビニルアルコールか
ら選ばれた１種又は２種以上は適当な割合で混合して用
いることが出来る。混合割合は好適には１：０．５〜５
である。またピロリドンカルボン酸塩類としては例えば
ナトリウム、カリウムのようなアルカリ金属との塩また
はトリエタノールアミンのようなアミンとの塩が好適で
あり、特にナトリウム塩が好適である。安定化剤水溶液
の濃度は例えば０．１〜１０％の範囲から適当に決める
ことが出来る。好適には１〜５％である。
抗原または抗体を不溶化した固相化試薬の安定化剤を含
む水溶液への浸漬処理時間は３０分〜５０時間であるが
、一般に低温稈長時間を要する。好適には２℃で２４時
間或いは室温（２５℃）で１時間などである。固相化試
薬の浸漬処理後の乾燥は自然乾燥、通気乾燥、真空乾燥
、凍結乾燥のいずれの方法でもよい。
む水溶液への浸漬処理時間は３０分〜５０時間であるが
、一般に低温稈長時間を要する。好適には２℃で２４時
間或いは室温（２５℃）で１時間などである。固相化試
薬の浸漬処理後の乾燥は自然乾燥、通気乾燥、真空乾燥
、凍結乾燥のいずれの方法でもよい。
次に本発明を実施例をあげて効果について詳細に説明す
る。
る。
実施例１
抗ウサギ血清ヤギ抗体溶液を炭酸ナトリウム緩衝液（０
，０５Ｍ、 ＰＨ９，５）に５μｙ／−の濃度に溶解
させた液のうち、０．６−をポリスチレンチューブ（１
０Ｘ７Ｇｍｇ）に注入し、冷所で２４時間放置し不溶化
した。抗体溶液を吸引除去し、炭酸緩衝液で洗浄後、所
定の安定化剤水溶液を３耐充填し２℃、２４時間放置し
てコーティングした。安定化剤水溶液を吸引除去し、自
然乾燥して、抗体不溶化チューブ（乾燥品）を作った。
，０５Ｍ、 ＰＨ９，５）に５μｙ／−の濃度に溶解
させた液のうち、０．６−をポリスチレンチューブ（１
０Ｘ７Ｇｍｇ）に注入し、冷所で２４時間放置し不溶化
した。抗体溶液を吸引除去し、炭酸緩衝液で洗浄後、所
定の安定化剤水溶液を３耐充填し２℃、２４時間放置し
てコーティングした。安定化剤水溶液を吸引除去し、自
然乾燥して、抗体不溶化チューブ（乾燥品）を作った。
なお、対照品として０．３％牛血清アルブミン（Ｂ８Ａ
）処理、１％Ｂ８人処理、１％ピロリドンカルボン酸
ナトリウム（ＰＯＡ ）処理したものを列挙した。
）処理、１％Ｂ８人処理、１％ピロリドンカルボン酸
ナトリウム（ＰＯＡ ）処理したものを列挙した。
室温（３０℃）及び低温下（４℃）で経時的に抗体活性
を測定した。ポリスチレンチューブに不溶化した抗ウサ
ギ血清ヤギ抗体の活性測定は次の様に行つた。即ち、抗
体不溶化乾燥チューブに緩衝液０．３ｍｌ＋ グルコ
ースオキシダーゼ標識１７−α−ヒドロキシプロゲステ
ロン抗原液０．１露ｌおよび抗１Ｔ−α−ヒドロキシプ
ロゲステロンウサギ抗血清（５０万倍液）０．１＊／を
加えよく混和し、４℃・ １夜インキユベートした。反
応液を吸引除去したのち、緩衝液で３回洗浄した。これ
にグルコース、ｐ−ヒトミキシフェニル酢酸、ワサビパ
ーオキシダーゼを加え３７℃・２時間インキュベートし
た。反応停止液０．１＊／を加えたのちよく混和し螢光
測定（Ｂｘ３２５ｎｍ、 Ｂｍ４０７ｎｍ）した。抗
体活性（％）は次式を用いて計算した。
を測定した。ポリスチレンチューブに不溶化した抗ウサ
ギ血清ヤギ抗体の活性測定は次の様に行つた。即ち、抗
体不溶化乾燥チューブに緩衝液０．３ｍｌ＋ グルコ
ースオキシダーゼ標識１７−α−ヒドロキシプロゲステ
ロン抗原液０．１露ｌおよび抗１Ｔ−α−ヒドロキシプ
ロゲステロンウサギ抗血清（５０万倍液）０．１＊／を
加えよく混和し、４℃・ １夜インキユベートした。反
応液を吸引除去したのち、緩衝液で３回洗浄した。これ
にグルコース、ｐ−ヒトミキシフェニル酢酸、ワサビパ
ーオキシダーゼを加え３７℃・２時間インキュベートし
た。反応停止液０．１＊／を加えたのちよく混和し螢光
測定（Ｂｘ３２５ｎｍ、 Ｂｍ４０７ｎｍ）した。抗
体活性（％）は次式を用いて計算した。
表 １
註：ＩＢＳＡ：牛血溝アルノミン、 ＰＣλ：ピロリ
ドンカルボン酸ナトリウム、ＰＶＡニポリビニルアルコ
ールを示す。
ドンカルボン酸ナトリウム、ＰＶＡニポリビニルアルコ
ールを示す。
結果として１％Ｂ８Ａのみでの処理では調製直後は高い
活性を示すが経時的に低下が著しい。
活性を示すが経時的に低下が著しい。
また、１％ＰＯＡによる処理は調製直後７０％程度に低
下しており経時的にも安定でない。しかし、特に両者を
併用した場合調製直後高い活性を示し経時的にも安定な
ものが得られた。
下しており経時的にも安定でない。しかし、特に両者を
併用した場合調製直後高い活性を示し経時的にも安定な
ものが得られた。
実施例２
実施例１のポリスチレンチューブの代りに直ｉ６．ｔＫ
１ｍのポリスチレンボールを使用して同様に行った。安
定化剤の溶液は１％Ｂ８Ａ＋１％ＰＯＡを用いた。抗体
活性の測定は、実施例１のポリスチレンチューブの代り
にガラスの試験管に抗体不浴化ポリスチレンポールを入
れて行った。
１ｍのポリスチレンボールを使用して同様に行った。安
定化剤の溶液は１％Ｂ８Ａ＋１％ＰＯＡを用いた。抗体
活性の測定は、実施例１のポリスチレンチューブの代り
にガラスの試験管に抗体不浴化ポリスチレンポールを入
れて行った。
測定結果を表２に示す。
表 ２
□
結果は実施例１と同様であった。
実施例３
実施例１の抗ウサギ血清ヤギ抗体液（５μｆ／ｍｌ）を
抗サイロキシン・ウサギ抗体液（０，５μ９／ｍｌ）に
変えて行った。安定化剤の溶液は１％Ｂ８Ａ＋１％ＰＯ
人を用いた。抗体活性の測定はグルコースオキシダーゼ
標識１７−α−ヒドロキシプロゲステロン抗原液をグル
コースオキシダーゼ標識サイロキシン抗原液に変え、実
施例１に準じて測定した。この場合抗ＩＴ−α−ヒドロ
キシプロゲステロン・ウサギ抗血清は不要である。
抗サイロキシン・ウサギ抗体液（０，５μ９／ｍｌ）に
変えて行った。安定化剤の溶液は１％Ｂ８Ａ＋１％ＰＯ
人を用いた。抗体活性の測定はグルコースオキシダーゼ
標識１７−α−ヒドロキシプロゲステロン抗原液をグル
コースオキシダーゼ標識サイロキシン抗原液に変え、実
施例１に準じて測定した。この場合抗ＩＴ−α−ヒドロ
キシプロゲステロン・ウサギ抗血清は不要である。
測定結果を表３に示す。
表 ３
Claims (1)
- （１）牛血清アルブミンならびに（２）ピロリドンカル
ボン酸塩類、デキストリンおよびポリビニルアルコール
から選ばれた１種または２種以上からなる固相化試薬の
安定化剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17339485A JPS6234059A (ja) | 1985-08-07 | 1985-08-07 | 固相化試薬の安定化剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17339485A JPS6234059A (ja) | 1985-08-07 | 1985-08-07 | 固相化試薬の安定化剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6234059A true JPS6234059A (ja) | 1987-02-14 |
| JPH0566985B2 JPH0566985B2 (ja) | 1993-09-22 |
Family
ID=15959588
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP17339485A Granted JPS6234059A (ja) | 1985-08-07 | 1985-08-07 | 固相化試薬の安定化剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6234059A (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63135865A (ja) * | 1986-11-13 | 1988-06-08 | ベーリング・ダイアグノステイツクス・ゲゼルシヤフト・ミツト・ベシユレンクテル・ハフツング | 固相免疫測定アツセイ用のラクトフエリン含有インキュベーション媒質 |
| US4984398A (en) * | 1988-08-27 | 1991-01-15 | Kazuo Fujita | Folding stage unit |
| JPH04175657A (ja) * | 1990-11-08 | 1992-06-23 | Tokuyama Soda Co Ltd | 免疫学的凝集反応試薬の製造方法及び免疫学的凝集反応粒子溶解用液 |
| AU700355B2 (en) * | 1993-12-29 | 1999-01-07 | Dade Behring Marburg Gmbh | Process for preparing clear sera which are stable over a long period |
| JP2010112963A (ja) * | 2003-03-23 | 2010-05-20 | Gyros Patent Ab | 充填済みのマイクロスケール装置 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS53130425A (en) * | 1977-04-18 | 1978-11-14 | Squibb & Sons Inc | Test method and apparatus for separating solid phase |
| JPS54128396A (en) * | 1978-03-20 | 1979-10-04 | Abbott Lab | Reagent with sugar for testing solid phase immunity |
| JPS5622956A (en) * | 1979-07-09 | 1981-03-04 | Corning Glass Works | Manufacture of reagenttbinding agent film |
| JPS58179499A (ja) * | 1982-04-13 | 1983-10-20 | Wako Pure Chem Ind Ltd | 細菌感受性試験ディスク |
| JPS59206761A (ja) * | 1983-05-11 | 1984-11-22 | Igaku Seibutsugaku Kenkyusho:Kk | 酵素免疫測定法 |
| JPS6035263A (ja) * | 1983-08-05 | 1985-02-23 | Wako Pure Chem Ind Ltd | 不溶性担体に固定化された免疫活性物質の安定化法及び該物質を構成単位として含む生理活性物質測定用試薬 |
-
1985
- 1985-08-07 JP JP17339485A patent/JPS6234059A/ja active Granted
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS53130425A (en) * | 1977-04-18 | 1978-11-14 | Squibb & Sons Inc | Test method and apparatus for separating solid phase |
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| JPS5622956A (en) * | 1979-07-09 | 1981-03-04 | Corning Glass Works | Manufacture of reagenttbinding agent film |
| JPS58179499A (ja) * | 1982-04-13 | 1983-10-20 | Wako Pure Chem Ind Ltd | 細菌感受性試験ディスク |
| JPS59206761A (ja) * | 1983-05-11 | 1984-11-22 | Igaku Seibutsugaku Kenkyusho:Kk | 酵素免疫測定法 |
| JPS6035263A (ja) * | 1983-08-05 | 1985-02-23 | Wako Pure Chem Ind Ltd | 不溶性担体に固定化された免疫活性物質の安定化法及び該物質を構成単位として含む生理活性物質測定用試薬 |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63135865A (ja) * | 1986-11-13 | 1988-06-08 | ベーリング・ダイアグノステイツクス・ゲゼルシヤフト・ミツト・ベシユレンクテル・ハフツング | 固相免疫測定アツセイ用のラクトフエリン含有インキュベーション媒質 |
| US4984398A (en) * | 1988-08-27 | 1991-01-15 | Kazuo Fujita | Folding stage unit |
| JPH04175657A (ja) * | 1990-11-08 | 1992-06-23 | Tokuyama Soda Co Ltd | 免疫学的凝集反応試薬の製造方法及び免疫学的凝集反応粒子溶解用液 |
| AU700355B2 (en) * | 1993-12-29 | 1999-01-07 | Dade Behring Marburg Gmbh | Process for preparing clear sera which are stable over a long period |
| JP2010112963A (ja) * | 2003-03-23 | 2010-05-20 | Gyros Patent Ab | 充填済みのマイクロスケール装置 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0566985B2 (ja) | 1993-09-22 |
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