JPS6229747B2 - - Google Patents
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Description
本発明は、ホルモン、ビタミン及び医薬を免疫
学的に定量する際に抗体を固定化するためのアク
リルアミドを主体とするポリマーマトリツクスに
関する。 ホルモン、ビタミン又は医薬を免疫学的に定量
する際に、ホルモン、ビタミン又は医薬は抗体と
反応する。この反応の特異性は免疫学的相補性に
依存する。即ち、類似した化学的立体配置を示す
物質が交差反応性を有することがある。エストリ
オールC6抱合体では、エストリオールは、その
重要な官能基のほぼ全てが抗体の結合域にさらさ
れている免疫決定立体配置で存在する。それに対
して、硫酸又はグルクロン酸残基がフエノール性
のC3位を占めるエストリオール抱合体は、かな
りの程度抗体を結合している。これは遊離ステロ
イドの定量に不利であり、妊婦の血清中のエスト
ロゲンの場合のように、抱合体の濃度がステロイ
ド濃度を数桁超える場合には特に不利である。 上記の理由に基づいて、特異性が、免疫検定の
前に溶剤抽出によつて保証されるような方法が従
来より採用されている。溶剤抽出は、しかしなが
ら、試料の連続的及び機海械的処理を妨げる。 固相技術によつて放射免疫学的方法を簡易化す
る試みでは、米国特許第3793445号に示されるよ
うに、抗体は寒天、セルロース、ガラス粒子、ポ
リアミド、及びポリアクリルアミドのような種々
のマトリツクスに共有結合された。マトリツクス
により固定化された抗体の利点は、高分子量の妨
害分子の除去、ピペツト採取及び遠心分離工程の
省略、そして固定化した抗体の室温における安定
性の向上である。 抗体の結合特異性は、公知の方法でマトリツク
スに固定化された場合には、望ましい要求を満足
できないことが判明した。 従つて、本発明の目的はマトリツクス中の抗体
の結合特異性を向上させることができ、そして望
ましくない交差反応の発生を防止できるポリマー
マトリツクスを提供することである。 アクリルアミドの共重合体から成るポリマーマ
トリツクスを用いた場合、抗体の結合特異性の増
大および多様性が得られることが判明した。従つ
て本発明の要旨は、ホルモン、ビタミン及び医薬
の免疫学的定量において抗体を固定化するアクリ
ルアミドの共重合体を主体とするポリマーマトリ
ツクスである。特定の共重合体はアクリルアミド
とこれに共重合化能な1又はそれ以上の化合物と
の重合によつて形成され、この化合物はアクリル
酸、メタクリル酸、メタクリルアミド、これらの
誘導体、及びアクリル酸又はメタクリル酸の塩を
包含する。 ポリマーマトリツクスの微視的環境は、アクリ
ルアミドとこれに共重合可能な化合物との共重合
によつて影響される。ポリマーマトリツクス中に
おける疎水性及び親水性効果と静電効果はアクリ
ルアミド共重合体に依存し、そして特殊な望まし
い結合特異性を提供することが判明した。共重合
反応を通してポリマーマトリツクスを変化させる
ことにより、抗体の結合特異性を増大させ、そし
て望ましくない交差反応を抑制することが可能で
ある。ポリマーマトリツクスはハプテンと固定化
された抗体との特異反応を保証し、ハプテン交差
反応を防止するために、適切な共重合を通じて変
化させられる。向上した特異性のため、本発明の
ポリマーマトリツクスによつて、非抽出血清中に
おける直接的な定量が可能となる。 本発明のポリマーマトリツクスを用いた場合、
極めて正確なホルモン、ビタミン及び医薬の免疫
学的定量が可能となる。それは、ステロイド分子
とマトリツクスとの間の非特異結合に基づいて決
定される定量値の変動が、上記の共重合によつて
最小になるからである。 チロキシン及びトリヨードチロニンのような甲
状線ホルモンなどの種々の定量において、アニリ
ノナフトールスルホン酸、チメロサール、又はサ
リチレートなどの拮抗物質、血清中において様様
な結合性蛋白質と結合しているホルモン、ビタミ
ン又は医薬と置換させるために用いられる。しか
し、これらの拮抗物質の濃度が高い場合には、ホ
ルモン、ビタミン又は医薬と抗体との間の結合が
影響を受けることが知られている。本発明のポリ
マーマトリツクスを用いることにより、拮抗物質
の濃度を〔ホルモン、ビタミン又は医薬−抗体結
合〕を弱めることなく、100倍増大させることが
できる。この結果は、静電相互作用に基因するも
のと想像される。 本発明において用いられるアクリルアミド共重
合体は、アクリルアミドモノマーとその他の共重
合モノマーとを重合させる公知の方法にしたがつ
て製造できる。好ましい共重合体マトリツクスの
調製方法は以下の通りである。 共重合体中におけるアクリルアミドの比率は、
1〜99モル%、好ましくは5〜95モル%、最も好
ましくは20〜80モル%である。アクリルアミドと
メタクリル酸との共重合体が特に好ましく、特
に、メタクリル酸の比率が20〜60モル%のものが
好ましい。メタクリル酸は、一方において疎水性
マトリツクスを与え、他方において電荷効果を生
じて定量する物質の非特異結合を大巾に減少させ
る。 アクリル酸又はメタクリル酸又はこれらの塩を
含有する本発明の共重合体の使用を通じて、酸又
はアルカリ溶液に対する中和効果又は緩衝作用が
得られる。この効果は種々の定量において極めて
有利である。 アクリル酸又はメタクリル酸の好ましい塩はア
ルカリ又はアルカリ土類の塩である。ナトリウム
及びカリウム塩が特に好ましい。アクリル酸又は
メタクリル酸の好ましい誘導体はエステル、例え
ば、メチル及びエチルエステルである。メクリル
アミドの好ましい誘導体は、窒素が置換された化
合物、例えばN−ヒドロキシメチルメタクリルア
ミドなどである。アクリルアミドと共重合可能な
その他の化合物の例はN・N′−ジアルキルタル
タルジアミドである。 抗体の固定化は公知のようにポリマーマトリツ
クス中への導入及び/又はポリマーマトリツクス
中における共有結合的固定化を通じて起こる。放
射免疫検定の詳細な記載は、例えば、クリニカル
ケミストリー(Clinical Chemistry)、19巻、2
号、1973年、145頁に見い出される。クリニカル
ケミストリー、19巻、2号、1973年、1339頁及び
クリニカルケミストリー、21巻、7号、1975年
829頁において、放射免疫学的技術が述べられて
おり、固定化された抗体が用いられている。 本発明のポリマーマトリツクスは、血清又は血
しよう中に存在し、特異的又は非特異的な結合性
蛋白質に一部結合している種々のホルモン、ビタ
ミン及び医薬の定量に好適である。上記のホルモ
ンは、チロキシン及びトリヨードチロキシンのよ
うな甲状腺ホルモン:ヒドロコルチゾン、テスト
ステロン、プロゲステロン、エステロン、エスト
ラジオール及びエストリオールのようなステロイ
ドホルモン;ジギトキシンおよびジゴキシンのよ
うな強心配糖体を含むことができる。ビタミン、
特ビタミンB12及び葉酸、また、強い蛋白質結合
を有する医薬、例えば抗凝血剤、ジグマロール、
鎮痛剤及びサリチレートなども定量できる。 放射免疫学的定量に加えて、その他の定量方
法、例えば螢光免疫学的定量又は酵素標識を用い
る定量も考慮できる。 抗原の合成、例えば抗体の免疫化を通じての免
疫血清の製造も知られている。(クリニカルケミ
ストリー、19巻、2号、1973年146頁、参照) 固定化された抗体を有する本発明のポリマーマ
トリツクスの製造は、例えば抗体の溶液をモノマ
ー混合物に添加するることにより実施できる。最
初の混合物は、例えば遊離ラジカル重合によつて
重合され、そして得られたポリマーは細かに砕か
れ、洗浄され、そして乾燥される。 アクリルアミドに加えられる共重合体の選択お
よび添加率は、特異性に関して望まれるポリマー
マトリツクスの特性によつて決定される。特異性
はマトリツクスの疎水能力および電荷を変化させ
ることにより広範囲に影響されるであろう。メチ
ルアクリルアミドの添加は疎水性を増大させる。
アクリル酸又はこれらの塩の添加はマトリツクス
の電荷を変化させる。アクリル酸又はメタクリル
酸の塩を直接モノマー混合物に加えることも可能
であり、その他に、上記の酸を重合した後、イオ
ン交換を通じてポリマーマトリツクス中に塩を形
成することも可能である。 適切な孔径のポリマーマトリツクスを得るため
にモノマー濃度を変化させる。約20%のモノマー
濃度により約7〜10Åの孔寸法が得られる。 有利な共重合体は、例えば約20%のモノマー溶
液から調製されたアクリルアミドと20〜60モル%
のアクリル酸及び/又はメタクリル酸からなる。
ここでは、酸官能基の少なくとも一部は、アルカ
リ又はアルカリ土類の塩に変換されんている。 以下に本発明を具体的に用いて説盟する。 例 1 この例においては、エストリオール−3−グル
クロニドおよびエストリオール−3−サルフエイ
トの交差反応性(K)に対するポリマーマトリツクス
の効果が示される。 交差反応性Kは次式に従つて計算される。 交差反応性K =(ハプテンy=50に必要な量)×100/交差反
応するハプテンy=50に必要な量 式中の[ハプテンy=50]及び[交差反応する
ハプテンy=50]は、ゲルの全結合能の50%がそ
れぞれハプテン又は交差反応するハプテンによつ
て占められていることを意味している。この値は
ID50を基礎にして計算した。ID50については、ブ
リテンメデイカルブレチン(Brit.Med.Bull.)、30
巻、1974年3頁に説明されている。 選ばれた抗エストリオール抗体は、3−グルク
ロニド抱合体及び3−サルフエイト抱合体に体し
て高い交差反応性を示す。 それぞれの重合混合物に対して、全モノマー濃
度が2.9モル%になるように濃度が調節された。
一つの混合物に対して、例えば5gのアクリルア
ミドおよび1.25gのN・N′−メチルビスアクリル
アミドが、ガラスビーカー中で、PH7.2のリン酸
塩緩衝液の24mlに溶解された。1mlのリン酸塩緩
衝液中の抗体の添加の後、反応が0.15gのリボフ
ラビン及び0.10mlのN・N・N′・N′−テトラメチ
ルエチレンジアミンによつて開始され、そして紫
外線で照射された。黄色の塊はついで細かく砕か
れ、蒸留水で洗浄され、そして乾燥された。 22mgの乾燥抗エストリオール抗体ゲルが小さな
複数のカラムに量りとられ、0.150mlの培養液で
撹拌された。この培養液は、 3H−エストリオー
ル及び未標識のハプテン(エストリオール、エス
トリオール−3−グルクロニド、又はエストリオ
ール−3−サルフエイト)を含有した。反応温度
は0℃で一定に保たれた。30分の培養期間の後、
遊離ハプテンは、アルブミンを含有するリン酸塩
緩衝液を用いた溶離によつて、抗体に結合したハ
プテンから分離された。溶離液はシンチレーシヨ
ンガラスに集められ、15mlのシンチレーシヨン液
で希釈され、その後、放射能が液体シンチレータ
で測定された。遊離インジケーターハプテン 3H
−エストリオールの濃度がインパルスから計算さ
れた。 水性の系、アクリルアミドのポリマーマトリツ
クスを用いた場合、及び、アクリルアミド共重合
体のポリマーマトリツクスを用いた場合のそれぞ
れの定量結果を、次の表に示した。表中の値は上
述した交差反応性の値である。
学的に定量する際に抗体を固定化するためのアク
リルアミドを主体とするポリマーマトリツクスに
関する。 ホルモン、ビタミン又は医薬を免疫学的に定量
する際に、ホルモン、ビタミン又は医薬は抗体と
反応する。この反応の特異性は免疫学的相補性に
依存する。即ち、類似した化学的立体配置を示す
物質が交差反応性を有することがある。エストリ
オールC6抱合体では、エストリオールは、その
重要な官能基のほぼ全てが抗体の結合域にさらさ
れている免疫決定立体配置で存在する。それに対
して、硫酸又はグルクロン酸残基がフエノール性
のC3位を占めるエストリオール抱合体は、かな
りの程度抗体を結合している。これは遊離ステロ
イドの定量に不利であり、妊婦の血清中のエスト
ロゲンの場合のように、抱合体の濃度がステロイ
ド濃度を数桁超える場合には特に不利である。 上記の理由に基づいて、特異性が、免疫検定の
前に溶剤抽出によつて保証されるような方法が従
来より採用されている。溶剤抽出は、しかしなが
ら、試料の連続的及び機海械的処理を妨げる。 固相技術によつて放射免疫学的方法を簡易化す
る試みでは、米国特許第3793445号に示されるよ
うに、抗体は寒天、セルロース、ガラス粒子、ポ
リアミド、及びポリアクリルアミドのような種々
のマトリツクスに共有結合された。マトリツクス
により固定化された抗体の利点は、高分子量の妨
害分子の除去、ピペツト採取及び遠心分離工程の
省略、そして固定化した抗体の室温における安定
性の向上である。 抗体の結合特異性は、公知の方法でマトリツク
スに固定化された場合には、望ましい要求を満足
できないことが判明した。 従つて、本発明の目的はマトリツクス中の抗体
の結合特異性を向上させることができ、そして望
ましくない交差反応の発生を防止できるポリマー
マトリツクスを提供することである。 アクリルアミドの共重合体から成るポリマーマ
トリツクスを用いた場合、抗体の結合特異性の増
大および多様性が得られることが判明した。従つ
て本発明の要旨は、ホルモン、ビタミン及び医薬
の免疫学的定量において抗体を固定化するアクリ
ルアミドの共重合体を主体とするポリマーマトリ
ツクスである。特定の共重合体はアクリルアミド
とこれに共重合化能な1又はそれ以上の化合物と
の重合によつて形成され、この化合物はアクリル
酸、メタクリル酸、メタクリルアミド、これらの
誘導体、及びアクリル酸又はメタクリル酸の塩を
包含する。 ポリマーマトリツクスの微視的環境は、アクリ
ルアミドとこれに共重合可能な化合物との共重合
によつて影響される。ポリマーマトリツクス中に
おける疎水性及び親水性効果と静電効果はアクリ
ルアミド共重合体に依存し、そして特殊な望まし
い結合特異性を提供することが判明した。共重合
反応を通してポリマーマトリツクスを変化させる
ことにより、抗体の結合特異性を増大させ、そし
て望ましくない交差反応を抑制することが可能で
ある。ポリマーマトリツクスはハプテンと固定化
された抗体との特異反応を保証し、ハプテン交差
反応を防止するために、適切な共重合を通じて変
化させられる。向上した特異性のため、本発明の
ポリマーマトリツクスによつて、非抽出血清中に
おける直接的な定量が可能となる。 本発明のポリマーマトリツクスを用いた場合、
極めて正確なホルモン、ビタミン及び医薬の免疫
学的定量が可能となる。それは、ステロイド分子
とマトリツクスとの間の非特異結合に基づいて決
定される定量値の変動が、上記の共重合によつて
最小になるからである。 チロキシン及びトリヨードチロニンのような甲
状線ホルモンなどの種々の定量において、アニリ
ノナフトールスルホン酸、チメロサール、又はサ
リチレートなどの拮抗物質、血清中において様様
な結合性蛋白質と結合しているホルモン、ビタミ
ン又は医薬と置換させるために用いられる。しか
し、これらの拮抗物質の濃度が高い場合には、ホ
ルモン、ビタミン又は医薬と抗体との間の結合が
影響を受けることが知られている。本発明のポリ
マーマトリツクスを用いることにより、拮抗物質
の濃度を〔ホルモン、ビタミン又は医薬−抗体結
合〕を弱めることなく、100倍増大させることが
できる。この結果は、静電相互作用に基因するも
のと想像される。 本発明において用いられるアクリルアミド共重
合体は、アクリルアミドモノマーとその他の共重
合モノマーとを重合させる公知の方法にしたがつ
て製造できる。好ましい共重合体マトリツクスの
調製方法は以下の通りである。 共重合体中におけるアクリルアミドの比率は、
1〜99モル%、好ましくは5〜95モル%、最も好
ましくは20〜80モル%である。アクリルアミドと
メタクリル酸との共重合体が特に好ましく、特
に、メタクリル酸の比率が20〜60モル%のものが
好ましい。メタクリル酸は、一方において疎水性
マトリツクスを与え、他方において電荷効果を生
じて定量する物質の非特異結合を大巾に減少させ
る。 アクリル酸又はメタクリル酸又はこれらの塩を
含有する本発明の共重合体の使用を通じて、酸又
はアルカリ溶液に対する中和効果又は緩衝作用が
得られる。この効果は種々の定量において極めて
有利である。 アクリル酸又はメタクリル酸の好ましい塩はア
ルカリ又はアルカリ土類の塩である。ナトリウム
及びカリウム塩が特に好ましい。アクリル酸又は
メタクリル酸の好ましい誘導体はエステル、例え
ば、メチル及びエチルエステルである。メクリル
アミドの好ましい誘導体は、窒素が置換された化
合物、例えばN−ヒドロキシメチルメタクリルア
ミドなどである。アクリルアミドと共重合可能な
その他の化合物の例はN・N′−ジアルキルタル
タルジアミドである。 抗体の固定化は公知のようにポリマーマトリツ
クス中への導入及び/又はポリマーマトリツクス
中における共有結合的固定化を通じて起こる。放
射免疫検定の詳細な記載は、例えば、クリニカル
ケミストリー(Clinical Chemistry)、19巻、2
号、1973年、145頁に見い出される。クリニカル
ケミストリー、19巻、2号、1973年、1339頁及び
クリニカルケミストリー、21巻、7号、1975年
829頁において、放射免疫学的技術が述べられて
おり、固定化された抗体が用いられている。 本発明のポリマーマトリツクスは、血清又は血
しよう中に存在し、特異的又は非特異的な結合性
蛋白質に一部結合している種々のホルモン、ビタ
ミン及び医薬の定量に好適である。上記のホルモ
ンは、チロキシン及びトリヨードチロキシンのよ
うな甲状腺ホルモン:ヒドロコルチゾン、テスト
ステロン、プロゲステロン、エステロン、エスト
ラジオール及びエストリオールのようなステロイ
ドホルモン;ジギトキシンおよびジゴキシンのよ
うな強心配糖体を含むことができる。ビタミン、
特ビタミンB12及び葉酸、また、強い蛋白質結合
を有する医薬、例えば抗凝血剤、ジグマロール、
鎮痛剤及びサリチレートなども定量できる。 放射免疫学的定量に加えて、その他の定量方
法、例えば螢光免疫学的定量又は酵素標識を用い
る定量も考慮できる。 抗原の合成、例えば抗体の免疫化を通じての免
疫血清の製造も知られている。(クリニカルケミ
ストリー、19巻、2号、1973年146頁、参照) 固定化された抗体を有する本発明のポリマーマ
トリツクスの製造は、例えば抗体の溶液をモノマ
ー混合物に添加するることにより実施できる。最
初の混合物は、例えば遊離ラジカル重合によつて
重合され、そして得られたポリマーは細かに砕か
れ、洗浄され、そして乾燥される。 アクリルアミドに加えられる共重合体の選択お
よび添加率は、特異性に関して望まれるポリマー
マトリツクスの特性によつて決定される。特異性
はマトリツクスの疎水能力および電荷を変化させ
ることにより広範囲に影響されるであろう。メチ
ルアクリルアミドの添加は疎水性を増大させる。
アクリル酸又はこれらの塩の添加はマトリツクス
の電荷を変化させる。アクリル酸又はメタクリル
酸の塩を直接モノマー混合物に加えることも可能
であり、その他に、上記の酸を重合した後、イオ
ン交換を通じてポリマーマトリツクス中に塩を形
成することも可能である。 適切な孔径のポリマーマトリツクスを得るため
にモノマー濃度を変化させる。約20%のモノマー
濃度により約7〜10Åの孔寸法が得られる。 有利な共重合体は、例えば約20%のモノマー溶
液から調製されたアクリルアミドと20〜60モル%
のアクリル酸及び/又はメタクリル酸からなる。
ここでは、酸官能基の少なくとも一部は、アルカ
リ又はアルカリ土類の塩に変換されんている。 以下に本発明を具体的に用いて説盟する。 例 1 この例においては、エストリオール−3−グル
クロニドおよびエストリオール−3−サルフエイ
トの交差反応性(K)に対するポリマーマトリツクス
の効果が示される。 交差反応性Kは次式に従つて計算される。 交差反応性K =(ハプテンy=50に必要な量)×100/交差反
応するハプテンy=50に必要な量 式中の[ハプテンy=50]及び[交差反応する
ハプテンy=50]は、ゲルの全結合能の50%がそ
れぞれハプテン又は交差反応するハプテンによつ
て占められていることを意味している。この値は
ID50を基礎にして計算した。ID50については、ブ
リテンメデイカルブレチン(Brit.Med.Bull.)、30
巻、1974年3頁に説明されている。 選ばれた抗エストリオール抗体は、3−グルク
ロニド抱合体及び3−サルフエイト抱合体に体し
て高い交差反応性を示す。 それぞれの重合混合物に対して、全モノマー濃
度が2.9モル%になるように濃度が調節された。
一つの混合物に対して、例えば5gのアクリルア
ミドおよび1.25gのN・N′−メチルビスアクリル
アミドが、ガラスビーカー中で、PH7.2のリン酸
塩緩衝液の24mlに溶解された。1mlのリン酸塩緩
衝液中の抗体の添加の後、反応が0.15gのリボフ
ラビン及び0.10mlのN・N・N′・N′−テトラメチ
ルエチレンジアミンによつて開始され、そして紫
外線で照射された。黄色の塊はついで細かく砕か
れ、蒸留水で洗浄され、そして乾燥された。 22mgの乾燥抗エストリオール抗体ゲルが小さな
複数のカラムに量りとられ、0.150mlの培養液で
撹拌された。この培養液は、 3H−エストリオー
ル及び未標識のハプテン(エストリオール、エス
トリオール−3−グルクロニド、又はエストリオ
ール−3−サルフエイト)を含有した。反応温度
は0℃で一定に保たれた。30分の培養期間の後、
遊離ハプテンは、アルブミンを含有するリン酸塩
緩衝液を用いた溶離によつて、抗体に結合したハ
プテンから分離された。溶離液はシンチレーシヨ
ンガラスに集められ、15mlのシンチレーシヨン液
で希釈され、その後、放射能が液体シンチレータ
で測定された。遊離インジケーターハプテン 3H
−エストリオールの濃度がインパルスから計算さ
れた。 水性の系、アクリルアミドのポリマーマトリツ
クスを用いた場合、及び、アクリルアミド共重合
体のポリマーマトリツクスを用いた場合のそれぞ
れの定量結果を、次の表に示した。表中の値は上
述した交差反応性の値である。
【表】
表から明らかなように、水性の系及び本発明の
範囲外のアクリルアミドホモポリマーの場合に比
較して、本発明の共重合体を用いた場合には、結
合特異性の大きな増大が得られた。共重合体を適
切に選択することにより、水性の系に比べて15倍
高い特異性が、アクリルホモポリマーに比べて7
倍高い特異性が得られる。この値は、本発明の共
重合体がメタクリル酸ナトリウム塩40とアクリル
アミド60とからなるときの値である。 例 2 この例では、ペプシンを用いた酸素加水分解に
よりチロキシンを高感度に定量する場合において
本発明のポリマーマトリツクスの使用を示す。 抗体ゲルのポリマーマトリツクスは、20%モノ
マー溶液から製造された、アクリルアミドと、40
モル%のメタクリル酸のナトリウム塩との共重合
体からなる。 18μg/100mlのチロキシン量を有する10μ
の血清は160μの酵素溶液で希釈された。この
酵素溶液は0.1Nの塩酸に溶解された2mg/mlの
ペプシンから成る。 酵素反応は室温で30分間実施された。この反応
溶液に、反応的に(reactively)標識したチロキ
シンの5.2ng/ml量を有するトレーサー溶液が、
170μ続いて150μ加えられた。全溶液はつい
で60mgの抗体ゲル状に置かれた。培養期間は30分
間、温度は22℃であつた。 98%の極めもて高い回収が認められた。 例 3 この例では、コルチゾル(ヒドロコルチゾン)
の高感度定量における本発明のポリマーマトリツ
クスの使用を示す。 抗体ゲルのポリマーマトリツクスは、20%のモ
ノマー溶液から製造された、アクリルアミドと、
40モル%のメタクリル酸のナトリウム塩とカルシ
ウム塩の混合物との共重合体からなる。15μg/
100mlのコルチゾル量を有する血清又は血しよう
の10μが調製された。これにPH3.5のクエン酸
塩緩衝水溶液中に125I−コルチゾルを含むトレー
サー溶液の500μが添加された。全溶液は100mg
の抗体ゲル状に置かれた。培養時間は20分、温度
は25℃であつた。 99%の極めて高い回収が認められた。 例 4 この例では、拮抗物質を用いたチロキシンの高
感度定量における本発明のポリマーマトリツクス
の使用を示す。 抗体ゲルのポリマーマトリツクスは、20%モノ
マー溶液から製造された、アクリルアミドと、40
モル%のメタクリル酸のカルシウム−ナトリウム
混合物との共重合体からなる。PH9.6のリン酸塩
緩衝液中に125I−チロキシンを含むトレーサー溶
液(500μ)が抗体ゲルの80mg上に置かれた。
6mg/mlのアニリノナフトールスルホン酸を含有
する上記と同じトレーサー溶液の500μが抗体
ゲル80mg上に置かれた。両方の試料が22℃の温度
で20分間培養された。 拮抗物質のアニリノナフトールスルホン酸が高
濃度で存在するにもかかわらず、チロキシンと抗
体との結合は何ら妨害されないことが認められ
た。
範囲外のアクリルアミドホモポリマーの場合に比
較して、本発明の共重合体を用いた場合には、結
合特異性の大きな増大が得られた。共重合体を適
切に選択することにより、水性の系に比べて15倍
高い特異性が、アクリルホモポリマーに比べて7
倍高い特異性が得られる。この値は、本発明の共
重合体がメタクリル酸ナトリウム塩40とアクリル
アミド60とからなるときの値である。 例 2 この例では、ペプシンを用いた酸素加水分解に
よりチロキシンを高感度に定量する場合において
本発明のポリマーマトリツクスの使用を示す。 抗体ゲルのポリマーマトリツクスは、20%モノ
マー溶液から製造された、アクリルアミドと、40
モル%のメタクリル酸のナトリウム塩との共重合
体からなる。 18μg/100mlのチロキシン量を有する10μ
の血清は160μの酵素溶液で希釈された。この
酵素溶液は0.1Nの塩酸に溶解された2mg/mlの
ペプシンから成る。 酵素反応は室温で30分間実施された。この反応
溶液に、反応的に(reactively)標識したチロキ
シンの5.2ng/ml量を有するトレーサー溶液が、
170μ続いて150μ加えられた。全溶液はつい
で60mgの抗体ゲル状に置かれた。培養期間は30分
間、温度は22℃であつた。 98%の極めもて高い回収が認められた。 例 3 この例では、コルチゾル(ヒドロコルチゾン)
の高感度定量における本発明のポリマーマトリツ
クスの使用を示す。 抗体ゲルのポリマーマトリツクスは、20%のモ
ノマー溶液から製造された、アクリルアミドと、
40モル%のメタクリル酸のナトリウム塩とカルシ
ウム塩の混合物との共重合体からなる。15μg/
100mlのコルチゾル量を有する血清又は血しよう
の10μが調製された。これにPH3.5のクエン酸
塩緩衝水溶液中に125I−コルチゾルを含むトレー
サー溶液の500μが添加された。全溶液は100mg
の抗体ゲル状に置かれた。培養時間は20分、温度
は25℃であつた。 99%の極めて高い回収が認められた。 例 4 この例では、拮抗物質を用いたチロキシンの高
感度定量における本発明のポリマーマトリツクス
の使用を示す。 抗体ゲルのポリマーマトリツクスは、20%モノ
マー溶液から製造された、アクリルアミドと、40
モル%のメタクリル酸のカルシウム−ナトリウム
混合物との共重合体からなる。PH9.6のリン酸塩
緩衝液中に125I−チロキシンを含むトレーサー溶
液(500μ)が抗体ゲルの80mg上に置かれた。
6mg/mlのアニリノナフトールスルホン酸を含有
する上記と同じトレーサー溶液の500μが抗体
ゲル80mg上に置かれた。両方の試料が22℃の温度
で20分間培養された。 拮抗物質のアニリノナフトールスルホン酸が高
濃度で存在するにもかかわらず、チロキシンと抗
体との結合は何ら妨害されないことが認められ
た。
Claims (1)
- 1 ホルモン、ビタミン及び医薬を免疫学的に定
量するために抗体を固定化するポリマーマトリツ
クスであつて、アクリルアミドと、アクリル酸又
はメタクリル酸のアルカリ金属又はアルカリ土類
金属の塩との共重合体から成るポリマーマトリツ
クス。
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---|---|---|---|
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Publications (2)
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---|---|
JPS5417116A JPS5417116A (en) | 1979-02-08 |
JPS6229747B2 true JPS6229747B2 (ja) | 1987-06-27 |
Family
ID=6008655
Family Applications (1)
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---|---|---|---|
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JP (1) | JPS5417116A (ja) |
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AU (1) | AU519148B2 (ja) |
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BR (1) | BR7802600A (ja) |
CH (1) | CH637218A5 (ja) |
DD (1) | DD136185A5 (ja) |
DE (1) | DE2721267C2 (ja) |
DK (1) | DK181478A (ja) |
ES (1) | ES469830A1 (ja) |
FI (1) | FI781220A (ja) |
FR (1) | FR2390731A1 (ja) |
GB (1) | GB1603772A (ja) |
GR (1) | GR64474B (ja) |
HU (1) | HU178485B (ja) |
IL (1) | IL54558A (ja) |
LU (1) | LU79535A1 (ja) |
NL (1) | NL7804466A (ja) |
NO (1) | NO781473L (ja) |
NZ (1) | NZ187071A (ja) |
PL (1) | PL121950B1 (ja) |
SE (1) | SE7804801L (ja) |
ZA (1) | ZA782358B (ja) |
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JPS5729949A (en) * | 1980-07-30 | 1982-02-18 | Nippon Koutai Kenkyusho:Kk | Determination of sugar branch related to cancer and diagnostic technique of cancer |
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JPS61228351A (ja) * | 1985-04-02 | 1986-10-11 | Kyoto Ikagaku Kenkyusho:Kk | 糞便中のヘモグロビンの検出方法 |
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DE3921498A1 (de) * | 1988-09-28 | 1990-03-29 | Bayer Ag | Polymer-gebundene-farbstoffe, verfahren zu deren herstellung und verwendung |
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US5262297A (en) * | 1990-06-18 | 1993-11-16 | Eastman Kodak Company | Specific binding analytical and separation methods using carboxy containing polymers |
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US5149737A (en) * | 1990-06-18 | 1992-09-22 | Eastman Kodak Company | Carboxy containing monomers and polymers and latices prepared from same |
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EP2192409B1 (en) * | 2008-11-26 | 2014-04-23 | Corning Incorporated | Label independent detection biosensor composition and methods thereof |
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-
1977
- 1977-05-11 DE DE2721267A patent/DE2721267C2/de not_active Expired
-
1978
- 1978-04-19 GR GR56025A patent/GR64474B/el unknown
- 1978-04-20 IL IL54558A patent/IL54558A/xx unknown
- 1978-04-20 FI FI781220A patent/FI781220A/fi not_active Application Discontinuation
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