JPS62295A - コレシストキニンパンクレオザイミンｃ端ペプチドおよびその類縁体の製造方法 - Google Patents
コレシストキニンパンクレオザイミンｃ端ペプチドおよびその類縁体の製造方法Info
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- JPS62295A JPS62295A JP13915485A JP13915485A JPS62295A JP S62295 A JPS62295 A JP S62295A JP 13915485 A JP13915485 A JP 13915485A JP 13915485 A JP13915485 A JP 13915485A JP S62295 A JPS62295 A JP S62295A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はコレシストキニンパンクレオザイミンＣ端ペプ
チドおよびその類縁体の製造方法の改良に関する。さら
に詳しく言えば、本発明は、一般式、 Ｘ−Ｔｙｒ−Ｙ−Ｇｔｙ−Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｐ
ｈｅ−ＮＨ２〔式中、Ｔｙｒ％Ｇｔｙ、 Ｔｒｐ１Ｍｅ
ｔ％ＡｓＴ）ｓ Ｐｈｅは、それぞトボリゝプチドにお
ける下記に示すとおりの構成アミノ酸単位のアミノ酸残
基な示し、又は、下記に示すとおりのアミノ酸単位のア
ミノ酸残基の結合した基、Ａｓｐ−１Ｐｙ ｒ −（Ｍ
ｕ−又はＰｙｒ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−を表わすか又は上記
式中の−Ｔｙｒ−のＮ端が遊離のアミン基であることを
表わし、Ｙは下記に示すとおりのアミノ酸単位のアミノ
酸残基、−Ｍｅ ｔ−１−Ｌｅｕ−１−Ｎｌｅ−又は−
Ｔｈｒ−を表わし、−Ｐｈｅ−ＮＨ２はフェニルアラニ
ンアミドであることを示す〕 で表わされるポリペプチドに、硫酸基供与体の存在下で
アリルスルフオドランスフェラーゼを作用させ、そのチ
ロシン残基（−Ｔｙｒ−）中のＯＨ基を硫酸エステル化
するにあたり、反応液中に、その反応液中濃度が６〜１
００ ｍＭの金属塩を添加しておこなうことを特徴とす
るコレシストキニンパンクレオザイミンＣ端ペプチドお
よびその類縁体の製造方法を提供するものである。
チドおよびその類縁体の製造方法の改良に関する。さら
に詳しく言えば、本発明は、一般式、 Ｘ−Ｔｙｒ−Ｙ−Ｇｔｙ−Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｐ
ｈｅ−ＮＨ２〔式中、Ｔｙｒ％Ｇｔｙ、 Ｔｒｐ１Ｍｅ
ｔ％ＡｓＴ）ｓ Ｐｈｅは、それぞトボリゝプチドにお
ける下記に示すとおりの構成アミノ酸単位のアミノ酸残
基な示し、又は、下記に示すとおりのアミノ酸単位のア
ミノ酸残基の結合した基、Ａｓｐ−１Ｐｙ ｒ −（Ｍ
ｕ−又はＰｙｒ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−を表わすか又は上記
式中の−Ｔｙｒ−のＮ端が遊離のアミン基であることを
表わし、Ｙは下記に示すとおりのアミノ酸単位のアミノ
酸残基、−Ｍｅ ｔ−１−Ｌｅｕ−１−Ｎｌｅ−又は−
Ｔｈｒ−を表わし、−Ｐｈｅ−ＮＨ２はフェニルアラニ
ンアミドであることを示す〕 で表わされるポリペプチドに、硫酸基供与体の存在下で
アリルスルフオドランスフェラーゼを作用させ、そのチ
ロシン残基（−Ｔｙｒ−）中のＯＨ基を硫酸エステル化
するにあたり、反応液中に、その反応液中濃度が６〜１
００ ｍＭの金属塩を添加しておこなうことを特徴とす
るコレシストキニンパンクレオザイミンＣ端ペプチドお
よびその類縁体の製造方法を提供するものである。
Ａｓｐ：アス／ゼラギン酸 Ｇｌｕ ：グルタミ
ン酸Ｇｌｎ ：グルタミン ｏｚｙ ニゲリシンＬ
ｅｕ ：ロイシン Ｍｅｔ：メチオニンＮｔｅ
：ノルロイシン Ｐｈｅ ：フェニルアラニン
Ｐｙｒ：ピログルタミンｉ１２ Ｔｈｒ ：スレ
オニンＴｒｐ ： ）リプトファン Ｔｙｒ ：
チロシンなお、上記のアミノ酸単位の略号は、いずれも
、アミノ酸化学、ポリペプチド化学において慣用のもの
と同義であり、その構造中に有する一ＮＨ２基と一〇〇
〇Ｈ基との間でペプチド結合を形成しているため厳密に
は化学構造そのものを意味していない。
ン酸Ｇｌｎ ：グルタミン ｏｚｙ ニゲリシンＬ
ｅｕ ：ロイシン Ｍｅｔ：メチオニンＮｔｅ
：ノルロイシン Ｐｈｅ ：フェニルアラニン
Ｐｙｒ：ピログルタミンｉ１２ Ｔｈｒ ：スレ
オニンＴｒｐ ： ）リプトファン Ｔｙｒ ：
チロシンなお、上記のアミノ酸単位の略号は、いずれも
、アミノ酸化学、ポリペプチド化学において慣用のもの
と同義であり、その構造中に有する一ＮＨ２基と一〇〇
〇Ｈ基との間でペプチド結合を形成しているため厳密に
は化学構造そのものを意味していない。
コレンストキニンバンクレオザ゛イミン（以下ＣＣＫと
略記する）は、６３個のアミノ酸残基よりなるポリはプ
チドであり、胆のうの収縮や膵消化酵素放出作用をもつ
、消化管ホルモンとして知られている。このＣＣＫは、
近年脳内にも存在することが判明しており、生体内で重
要な役割をはたしているホルモンとして多（の研究者の
関心を集めている。また、生体内にはアミノ酸残基が３
６個というこのポリペプチドの他に、アミノ基側に６個
のアミノ酸が延びたもの（ＣＣＫ−６９）や、カルボキ
シ末端側より４個、７個又は８個のアミノ酸単位の迷っ
た短鎖ペプチド（ＣＣＫ−４、ＣＣＫ−７およびＣＣＫ
−８）も見出されている。
略記する）は、６３個のアミノ酸残基よりなるポリはプ
チドであり、胆のうの収縮や膵消化酵素放出作用をもつ
、消化管ホルモンとして知られている。このＣＣＫは、
近年脳内にも存在することが判明しており、生体内で重
要な役割をはたしているホルモンとして多（の研究者の
関心を集めている。また、生体内にはアミノ酸残基が３
６個というこのポリペプチドの他に、アミノ基側に６個
のアミノ酸が延びたもの（ＣＣＫ−６９）や、カルボキ
シ末端側より４個、７個又は８個のアミノ酸単位の迷っ
た短鎖ペプチド（ＣＣＫ−４、ＣＣＫ−７およびＣＣＫ
−８）も見出されている。
ＣＣＫに見られる前述の生理作用は、ＣＣＫ−４を除（
これらのポリペプチドの全てに見られるが何れの場合も
Ｃ末端から７番目のＴｙｒにおける水酸基が硫酸エステ
ル型となっていることが活性発現に必須であることが判
明している。このことは、ＣＣＫの類縁体として知られ
るセルレイン（前記一般式においてＸがＰｙｒ−Ｃ）ｔ
ｎ−Ａｓｐ−１Ｙが一Ｔｈｒ−であるもの）やフィロセ
ルレイン（前記一般式においてＸがＰｙｒ−Ｇｌｕ−１
Ｙが−Ｔｈｒ−であるもの）においても見られているの
でこれらのポリペプチド類を合成しようとする場合、そ
の構造中に存在するチロシンの水酸基のＯ−’ａＷエス
テル化は極めて重要な技術的課題となっている。
これらのポリペプチドの全てに見られるが何れの場合も
Ｃ末端から７番目のＴｙｒにおける水酸基が硫酸エステ
ル型となっていることが活性発現に必須であることが判
明している。このことは、ＣＣＫの類縁体として知られ
るセルレイン（前記一般式においてＸがＰｙｒ−Ｃ）ｔ
ｎ−Ａｓｐ−１Ｙが一Ｔｈｒ−であるもの）やフィロセ
ルレイン（前記一般式においてＸがＰｙｒ−Ｇｌｕ−１
Ｙが−Ｔｈｒ−であるもの）においても見られているの
でこれらのポリペプチド類を合成しようとする場合、そ
の構造中に存在するチロシンの水酸基のＯ−’ａＷエス
テル化は極めて重要な技術的課題となっている。
本発明者等は、先にチロシンの構造単位（−Ｔｙｒ−）
を有する種々のアミノ酸誘導体ないしポリベプチドにお
けるそのチロシン構造中の一〇Ｈ基の硫酸エステル化に
ついて鋭意研究を行った結果、硫酸基供与体の存在下で
、細菌由来のアリールスルフオドランスフェラーゼを作
用させることにより、極めて容易に、上記チロシン構造
（−′Ｉ′！／ｒ −）中の一〇Ｈ基の硫酸エステル化
が達成し得ることを見出した（特願昭５９−０５１２３
６号）が、さらに研究を重ねた結果、上記の硫酸エステ
ル化にあたり、その反応液中に過剰の（反応液濃度で３
〜１００ｍＭ）金属塩を存在せしめると、生成物の収率
を著しく向上せしめ得ることを見出した。
を有する種々のアミノ酸誘導体ないしポリベプチドにお
けるそのチロシン構造中の一〇Ｈ基の硫酸エステル化に
ついて鋭意研究を行った結果、硫酸基供与体の存在下で
、細菌由来のアリールスルフオドランスフェラーゼを作
用させることにより、極めて容易に、上記チロシン構造
（−′Ｉ′！／ｒ −）中の一〇Ｈ基の硫酸エステル化
が達成し得ることを見出した（特願昭５９−０５１２３
６号）が、さらに研究を重ねた結果、上記の硫酸エステ
ル化にあたり、その反応液中に過剰の（反応液濃度で３
〜１００ｍＭ）金属塩を存在せしめると、生成物の収率
を著しく向上せしめ得ることを見出した。
本発明は、かかる知見に基づくものである。
これまでに、酵素を用いてチロシンの−ＯＨ基をＢ、Ｊ
ａｋｏｂｙ、 Ａｒｃｈ Ｂｉｏｃｈｅｍ、 Ｂｉｏｐ
ｈｙ、 ２１１３５２〜５５９ （１９８１） ）、本
発明者等は、先の特願昭５９−０５１２６６号の方法に
より、セクラ等が酵素法として、／、 Ｔｙｒの〇−硫
酸エステル化をなし得なかったＡｃ−Ｔｙｒ−ＯＫｔ、
Ａｃ−Ｔｙｒ−ＮＨ２、やアンジオテンシン等につい
ても、その−Ｔｙｒ−構造中の〇−硫酸エステル化を行
うことに成功したものであるが、さらに本発明の方法に
より生成物の収率な著しく向上することに成功した。
ａｋｏｂｙ、 Ａｒｃｈ Ｂｉｏｃｈｅｍ、 Ｂｉｏｐ
ｈｙ、 ２１１３５２〜５５９ （１９８１） ）、本
発明者等は、先の特願昭５９−０５１２６６号の方法に
より、セクラ等が酵素法として、／、 Ｔｙｒの〇−硫
酸エステル化をなし得なかったＡｃ−Ｔｙｒ−ＯＫｔ、
Ａｃ−Ｔｙｒ−ＮＨ２、やアンジオテンシン等につい
ても、その−Ｔｙｒ−構造中の〇−硫酸エステル化を行
うことに成功したものであるが、さらに本発明の方法に
より生成物の収率な著しく向上することに成功した。
本発明の最も大きな特徴的利点は前記の一般式で表わさ
れるポリペプチドを化学合成した後の最終段階で、しか
もペプチド主鎖その他に影響を与えない温和な条件下に
Ｔｙｒを特異的に〇−硫酸エステル化する反応を行い、
しかも、その生成物収率を著しく向上せしめたことにあ
る。
れるポリペプチドを化学合成した後の最終段階で、しか
もペプチド主鎖その他に影響を与えない温和な条件下に
Ｔｙｒを特異的に〇−硫酸エステル化する反応を行い、
しかも、その生成物収率を著しく向上せしめたことにあ
る。
本発明方法に使用される原料である前記一般式で表わさ
れるポリペプチドは、それ自体公知の方法によってその
構成アミノ酸を任意の順序でペプチド結合させることに
より製造することができる。酵素としてはアリルスルフ
オドランスフェラーゼ活性を有するものであれば特に限
定されるものではないが例えば本発明者の一人、小橋ら
がヒト腸内細菌より見出した（小橋恭−１深谷洋−１赤
尾光昭、竹部幸子、日本薬学会第１０２年会講演要旨集
１７７頁、および同１０３年会講演要旨集４４２頁）、
ユウパクテリウムレクテール（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ｒｅｃｔａｌｅ ）菌の産生ずる、アリルスルフオド
ランスフェラーゼ等が使用される。硫酸基の供与体とし
ては、アリールサルフェートあるいはその塩が用いられ
るが、その例を示すと以下のとおりである。なお、これ
らアリールサルフェートの塩としては、例えば、ナトリ
ウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、
アンモニウム塩などがあげられる。
れるポリペプチドは、それ自体公知の方法によってその
構成アミノ酸を任意の順序でペプチド結合させることに
より製造することができる。酵素としてはアリルスルフ
オドランスフェラーゼ活性を有するものであれば特に限
定されるものではないが例えば本発明者の一人、小橋ら
がヒト腸内細菌より見出した（小橋恭−１深谷洋−１赤
尾光昭、竹部幸子、日本薬学会第１０２年会講演要旨集
１７７頁、および同１０３年会講演要旨集４４２頁）、
ユウパクテリウムレクテール（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ｒｅｃｔａｌｅ ）菌の産生ずる、アリルスルフオド
ランスフェラーゼ等が使用される。硫酸基の供与体とし
ては、アリールサルフェートあるいはその塩が用いられ
るが、その例を示すと以下のとおりである。なお、これ
らアリールサルフェートの塩としては、例えば、ナトリ
ウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、
アンモニウム塩などがあげられる。
了り−ルサルフエート 式アリール
サルフェート 式０８Ｏ３Ｈ 本発明方法は、前記一般式で表わされるポリペプチドを
ホウ酸す） ＩＪウム緩衝液等に溶解し、前述した細菌
由来の酵素群より選ばれた一種および、前記の硫酸基の
供与体群より選ばれた一種あるいは数種の混合物を用い
、反応系中に、反応液中濃度で６〜１００ ｍＭの金属
塩を加えて、反応させることにより行われる。反応温度
および−は使用する酵素の最適条件とするのが好ましい
。本発明方法により温和な条件下、簡単な操作でしかも
極めて好収率をもって、コレシストキニンパンクレオザ
イミンＣ５１ｉハプチドおよびその類縁体を製造するこ
とができる。
サルフェート 式０８Ｏ３Ｈ 本発明方法は、前記一般式で表わされるポリペプチドを
ホウ酸す） ＩＪウム緩衝液等に溶解し、前述した細菌
由来の酵素群より選ばれた一種および、前記の硫酸基の
供与体群より選ばれた一種あるいは数種の混合物を用い
、反応系中に、反応液中濃度で６〜１００ ｍＭの金属
塩を加えて、反応させることにより行われる。反応温度
および−は使用する酵素の最適条件とするのが好ましい
。本発明方法により温和な条件下、簡単な操作でしかも
極めて好収率をもって、コレシストキニンパンクレオザ
イミンＣ５１ｉハプチドおよびその類縁体を製造するこ
とができる。
以下実施例により本発明の詳細な説明するが、これらの
例により本発明の技術的範囲は制限されるものではない
。
例により本発明の技術的範囲は制限されるものではない
。
実施例１． コレシストキニンパンクレオザイミ／Ｃ端
オクタペプチド（ＣＣＫ−８）の製造ＣＣＫ−８の非硫
酸エステル体（ＣＣ’に−８−Ｎ８ ） ３３鳳ｇ（３
１μｍｏｔ）を１００ ｍＭ−グリシン−水酸化ナトリ
ウム緩衝液（ｐｉ−１＝８．５ ） １１０−に溶解す
る。小橋らの方法（前出、日本薬学会講演要旨集）によ
り調製した酵素溶液４０ ｔｄ （５，０ｕｎｉｔ／ｍ
）、４００ｍＭ−塩化マグネシウム１２．５ｄ、およ
び１０ ｍＭｐ−二トロフェニルサルフエート（ＰＮＳ
） ７−ヲ加えた後、全体を２００艷に調製し、６７℃
で２４時間靜装した。次いで反応液をミリポアフィルタ
−（ミリボアー社製、ボアーサイズ０．４５μｍ）を用
いて不溶物を戸別した後、炉液をＯＤＳ−シリカゲル（
山村化学研究所展、ＹＭＣ−ＧＥＬ ）のカラム（２，
ＯＸ ２０ｃｍ ）に通す。次に、１０％のメタノール
水溶液１５０−で洗い、次いで４０チメタノール水溶液
で溶出、目的物を含む両分を集める。減圧にてメタノー
ルを留去した後、予め０．１Ｍ酢酸アンモニウム緩衝液
（ｐＩ（８，０）で平衝化したＤＥＡＥ−セルロース（
ワラ）−ｒン社製ＤＥ−５２）のカラム（１，５Ｘ１６
ｃｙ＋＋）にチャージする。
オクタペプチド（ＣＣＫ−８）の製造ＣＣＫ−８の非硫
酸エステル体（ＣＣ’に−８−Ｎ８ ） ３３鳳ｇ（３
１μｍｏｔ）を１００ ｍＭ−グリシン−水酸化ナトリ
ウム緩衝液（ｐｉ−１＝８．５ ） １１０−に溶解す
る。小橋らの方法（前出、日本薬学会講演要旨集）によ
り調製した酵素溶液４０ ｔｄ （５，０ｕｎｉｔ／ｍ
）、４００ｍＭ−塩化マグネシウム１２．５ｄ、およ
び１０ ｍＭｐ−二トロフェニルサルフエート（ＰＮＳ
） ７−ヲ加えた後、全体を２００艷に調製し、６７℃
で２４時間靜装した。次いで反応液をミリポアフィルタ
−（ミリボアー社製、ボアーサイズ０．４５μｍ）を用
いて不溶物を戸別した後、炉液をＯＤＳ−シリカゲル（
山村化学研究所展、ＹＭＣ−ＧＥＬ ）のカラム（２，
ＯＸ ２０ｃｍ ）に通す。次に、１０％のメタノール
水溶液１５０−で洗い、次いで４０チメタノール水溶液
で溶出、目的物を含む両分を集める。減圧にてメタノー
ルを留去した後、予め０．１Ｍ酢酸アンモニウム緩衝液
（ｐＩ（８，０）で平衝化したＤＥＡＥ−セルロース（
ワラ）−ｒン社製ＤＥ−５２）のカラム（１，５Ｘ１６
ｃｙ＋＋）にチャージする。
０．１Ｍ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ８，０）約１０
０−で洗滌した後０，６Ｍ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐ
ｉ（８，０）で溶出する。目的物を含む両分を集め、そ
のまま０ＤＳ−シリカゲル（前述と同じカラム）に通し
、前述と同様にして処理する。減圧にてメタノールを留
去した後、残った水溶液を凍結乾燥して、ＣＣＫ−８の
無定形粉末３１ ＩＩ？ （８７，７％）を得た。この
物は標準品と薄層クロマトグラフィー（展開溶媒■ｎ−
ブタノール：酢酢酸氷水４：１：５（上相）、■ｎ−ブ
タノール：酢酸：水：ピリジン＝１５ ： ３ ： １
２ ： １０、発色法■０，１％ニンヒドリン噴霧後加
熱＠ケイ光〕にて、Ｒｆ■＝０．１７、Ｒｆ■＝０．５
４と完全に一致し、ＨＰＬＣにても標準品と一致した。
０−で洗滌した後０，６Ｍ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐ
ｉ（８，０）で溶出する。目的物を含む両分を集め、そ
のまま０ＤＳ−シリカゲル（前述と同じカラム）に通し
、前述と同様にして処理する。減圧にてメタノールを留
去した後、残った水溶液を凍結乾燥して、ＣＣＫ−８の
無定形粉末３１ ＩＩ？ （８７，７％）を得た。この
物は標準品と薄層クロマトグラフィー（展開溶媒■ｎ−
ブタノール：酢酢酸氷水４：１：５（上相）、■ｎ−ブ
タノール：酢酸：水：ピリジン＝１５ ： ３ ： １
２ ： １０、発色法■０，１％ニンヒドリン噴霧後加
熱＠ケイ光〕にて、Ｒｆ■＝０．１７、Ｒｆ■＝０．５
４と完全に一致し、ＨＰＬＣにても標準品と一致した。
さらに、モルモットの胆のうを用い、マグヌス法により
、その収縮を測定する。生物活性試験においても、その
最大収縮濃度（Ｅｍａｘ ）は５．ＯＸ １０−８ Ｍ
を与え、標準品と完全に二致した。
、その収縮を測定する。生物活性試験においても、その
最大収縮濃度（Ｅｍａｘ ）は５．ＯＸ １０−８ Ｍ
を与え、標準品と完全に二致した。
実施例２、 フィロセルレインの製造
フィロセルレインの非硫酸エステル体２５ Ｑ（２０μ
ｍｏｔ）をＩ Ｄ ＯｍＭ−グリシン−水酸化ナトリウ
ム緩衝液４０ｒ！１ｔに溶解し、実施例１の方法により
調製した酵素溶液１６ ｍ／ （５，０ｕｎｉｔ／ｍ／
）、４００ｍＭ−塩化マグネシウム５−および１０ｍ
Ｍｐ−ニトロフェニルサルフェート（ＰＮＳ） ５．４
ａｔを加えた後、全体を８０−に調製し、３７℃で２
４時間靜渡した。反応液をミリポアフィルタ−（ミリボ
アー社製、ボアーサイズ０．４５μｍ）を用いて不溶物
を戸別した後、実施例１と同様に処理してフィロセルレ
イン１７．４Ｑ（７０，１％）を得た。本品はアニソー
ル存在下６ Ｎ −ＨＣ１加水分解（１０８℃、２４時
間）後のアミノ酸分析値が、Ａｓｐ ＝ １．０５、Ｔ
ｈｒ ＝ ０．９７、Ｇｌｕ ＝ ２．１１、Ｇｔｙ
＝ １．０１、Ｍｅ ｔ ＝ ０．９１、Ｔｙｒ ＝
０．９４、Ｐｈｅ ＝ １．０３、で薄層クロマトグラ
フィー〔展開溶媒■ｎ−ブタノール：酢酢酸氷水４ ：
１ ： ５ （上相）、■ｎ−ブタノール：酢酸：水
二ピリジン＝１５：１１２：１０、発色法０４８％ＨＢ
ｒ水噴霧加熱後、０．１％ニンヒドリン噴霧＠ケイ光Ｏ
エールリッヒ試薬〕にて、Ｒｆ■＝０．１５、Ｒｆ■＝
０．４９の単一スポットを与えた。また高速液体クロマ
トグラフィー〔カラム；４．６Ｘ２５０ｍゾルパックス
ー〇ＤＢ、溶離液；０．５−トリフロロ酢酸水溶液：メ
タノール＝５２：４８（ｖ／ｖ ）、検出：２３０ｎｍ
ＵＶ吸収、流速：１．Ｏｍ／ｍｉｎ ］で１０．６分に
単一ピークを与えた（非硫酸エステル体は同一条件で２
０．７分）。
ｍｏｔ）をＩ Ｄ ＯｍＭ−グリシン−水酸化ナトリウ
ム緩衝液４０ｒ！１ｔに溶解し、実施例１の方法により
調製した酵素溶液１６ ｍ／ （５，０ｕｎｉｔ／ｍ／
）、４００ｍＭ−塩化マグネシウム５−および１０ｍ
Ｍｐ−ニトロフェニルサルフェート（ＰＮＳ） ５．４
ａｔを加えた後、全体を８０−に調製し、３７℃で２
４時間靜渡した。反応液をミリポアフィルタ−（ミリボ
アー社製、ボアーサイズ０．４５μｍ）を用いて不溶物
を戸別した後、実施例１と同様に処理してフィロセルレ
イン１７．４Ｑ（７０，１％）を得た。本品はアニソー
ル存在下６ Ｎ −ＨＣ１加水分解（１０８℃、２４時
間）後のアミノ酸分析値が、Ａｓｐ ＝ １．０５、Ｔ
ｈｒ ＝ ０．９７、Ｇｌｕ ＝ ２．１１、Ｇｔｙ
＝ １．０１、Ｍｅ ｔ ＝ ０．９１、Ｔｙｒ ＝
０．９４、Ｐｈｅ ＝ １．０３、で薄層クロマトグラ
フィー〔展開溶媒■ｎ−ブタノール：酢酢酸氷水４ ：
１ ： ５ （上相）、■ｎ−ブタノール：酢酸：水
二ピリジン＝１５：１１２：１０、発色法０４８％ＨＢ
ｒ水噴霧加熱後、０．１％ニンヒドリン噴霧＠ケイ光Ｏ
エールリッヒ試薬〕にて、Ｒｆ■＝０．１５、Ｒｆ■＝
０．４９の単一スポットを与えた。また高速液体クロマ
トグラフィー〔カラム；４．６Ｘ２５０ｍゾルパックス
ー〇ＤＢ、溶離液；０．５−トリフロロ酢酸水溶液：メ
タノール＝５２：４８（ｖ／ｖ ）、検出：２３０ｎｍ
ＵＶ吸収、流速：１．Ｏｍ／ｍｉｎ ］で１０．６分に
単一ピークを与えた（非硫酸エステル体は同一条件で２
０．７分）。
モルモットの胆のうを用い、マグヌス法によりその収縮
を測定する。生物活性の試験において、非硫酸エステル
体の７００〜１０００倍の強い収縮作用を示した。
を測定する。生物活性の試験において、非硫酸エステル
体の７００〜１０００倍の強い収縮作用を示した。
実施例３． セルレインの製造
セルレインの非硫酸エステル体１３Ｑ（１０μｍｏｔ）
を０．１Ｍ−グリシン−水酸化ナトリウム緩衝液（ｐＩ
（８，６）３０ｒＩｔｔに溶解する。酵素溶液１２ ｍ
ｌ （５，０ｕｎｉｔ／−）、４００ ｍＭ−塩化マグ
ネシウム６．８−およヒ１０ ｍＭ ｐ−二トロフェニ
ルサルフエー） （ＰＮＳ）２．５−を加えた後、全量
を６０−に調製し６７℃で２４時間靜渡した。反応液を
ミリポアフィルターを用いて不溶物を戸別した後、実施
例１と同様に処理して、セルレイン４．１１９（３０，
４％）を得た。
を０．１Ｍ−グリシン−水酸化ナトリウム緩衝液（ｐＩ
（８，６）３０ｒＩｔｔに溶解する。酵素溶液１２ ｍ
ｌ （５，０ｕｎｉｔ／−）、４００ ｍＭ−塩化マグ
ネシウム６．８−およヒ１０ ｍＭ ｐ−二トロフェニ
ルサルフエー） （ＰＮＳ）２．５−を加えた後、全量
を６０−に調製し６７℃で２４時間靜渡した。反応液を
ミリポアフィルターを用いて不溶物を戸別した後、実施
例１と同様に処理して、セルレイン４．１１９（３０，
４％）を得た。
本品はアニソール存在下６Ｎ−ＨＣ１加水分解（１０８
℃、２４時間）後のアミノ酸分析値がＡｓｐ＝２．１５
、Ｔｈｒ ＝ ０．９６、（）ｔｕ ＝ ２．０８、Ｇ
ｔｙ ＝ ｔ ｏ ’ｏ、Ｍｅｔ、−＝０．８９、Ｔｙ
ｒ ＝ ０．９８、Ｐｈｅ ＝ １．０１で、薄層クロ
マトグラフィー〔展開溶媒■ｎ−ブタノール：酢酢酸氷
水４＋１：５ （上相）、■ｎ−ブタノール：酢酸：水
：ピリジン＝１５：３：１２：１・０１発色法■４８
％ ＨＢｒ水噴霧加熱後、０．１％ニンヒドリン噴霧＠
ケイ光Ｏエールリッヒ試薬〕にて単一スポットを、また
、高速液体クロマトグラフィー〔カラム？４．６Ｘ２５
０ｍ、ゾ／Ｌ／パックス−０ＤＳ。
℃、２４時間）後のアミノ酸分析値がＡｓｐ＝２．１５
、Ｔｈｒ ＝ ０．９６、（）ｔｕ ＝ ２．０８、Ｇ
ｔｙ ＝ ｔ ｏ ’ｏ、Ｍｅｔ、−＝０．８９、Ｔｙ
ｒ ＝ ０．９８、Ｐｈｅ ＝ １．０１で、薄層クロ
マトグラフィー〔展開溶媒■ｎ−ブタノール：酢酢酸氷
水４＋１：５ （上相）、■ｎ−ブタノール：酢酸：水
：ピリジン＝１５：３：１２：１・０１発色法■４８
％ ＨＢｒ水噴霧加熱後、０．１％ニンヒドリン噴霧＠
ケイ光Ｏエールリッヒ試薬〕にて単一スポットを、また
、高速液体クロマトグラフィー〔カラム？４．６Ｘ２５
０ｍ、ゾ／Ｌ／パックス−０ＤＳ。
溶離液；０．５％トリフロロ酢酸水溶液：メタノール＝
５２ ： ４８ （ｖ／ｖ）、検出： ２３０ ｎｍ
ＵＶ吸収、流速： １． Ｏｍｌｍｉｎ ）で１０．
１分に単一ピークを与えた（非硫酸エステル体は同一条
件で１８．６分である）。
５２ ： ４８ （ｖ／ｖ）、検出： ２３０ ｎｍ
ＵＶ吸収、流速： １． Ｏｍｌｍｉｎ ）で１０．
１分に単一ピークを与えた（非硫酸エステル体は同一条
件で１８．６分である）。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）一般式 Ｘ−Ｔｙｒ−Ｙ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｐ
ｈｅ−ＮＨ＿２〔式中、Ｔｙｒ、Ｇｌｙ、Ｔｒｐ、Ｍｅ
ｔ、Ａｓｐ、Ｐｈｅは、それぞれ、ポリペプチドにおけ
る下記に示すとおりの構成アミノ酸単位のアミノ酸残基
を示し、Ｘは、下記に示すとおりのアミノ酸単位のアミ
ノ酸残基の結合した基、Ａｓｐ−、Ｐｙｒ−Ｇｌｕ−又
はＰｙｒ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−を表わすか又は上記式中の
−Ｔｙｒ−のＮ端が遊離のアミノ基であることを表わし
、Ｙは下記に示すとおりのアミノ酸単位のアミノ酸残基
、−Ｍｅｔ−、−Ｌｅｕ−、−Ｎｌｅ−又は−Ｔｈｒ−
を表わし、−Ｐｈｅ−ＮＨ＿２はフェニルアラニンアミ
ドであることを示す〕 で表わされるポリペプチドに、硫酸基供与体の存在下で
アリルスルフォトランスフェラーゼを作用させ、チロシ
ン残基（−Ｔｙｒ−）中のＯＨ基を硫酸エステル化する
にあたり、反応液中にその反応液中濃度が３〜１００ｍ
Ｍの金属塩を添加して行なうことを特徴とするコレシス
トキニンパンクレオザイミンＣ端ペプチドおよびその類
縁体の製造方法。 Ａｓｐ：アスパラギン酸 Ｇｌｕ：グルタミン酸Ｇｌｎ
：グルタミン Ｇｌｙ：グリシン Ｌｅｕ：ロイシン Ｍｅｔ：メチオニン Ｎｌｅ：ノルロイシン Ｐｈｅ：フェニルアラニンＰｙ
ｒ：ピログルタミン酸 Ｔｈｒ：スレオニンＴｒｐ：ト
リプトファン Ｔｙｒ：チロシン２）前記の硫酸基供与
体としてアリールサルフェート類を使用する特許請求の
範囲第１項に記載の方法。 ３）前記のアリールサルフェート類として、フェニル硫
酸、ｐ−またはｍ−ニトロフェニル硫酸、ｐ−またはｍ
−アセチルフェニル硫酸、チラミン硫酸、ｐ−ニトロカ
テコール硫酸、ｐ−ニトロカテコールジ硫酸、ピコサル
フェート、フェノールフタレンジ硫酸、４−メチルウン
ベリフェリル硫酸、１−または２−ナフチル硫酸、４−
ニトロ１−ナフチル硫酸、４−フェナントリル硫酸およ
びそれらの塩の中から選択されたアリールサルフェート
を使用する特許請求の範囲第２項に記載の方法。 ４）添加する金属塩として、マグネシウム、バリウム、
アニン、カルシウム、ニッケル、銅、マンガン、コバル
ト、鉄、錫、水銀、鉛、カドミウム、ストロンチウム、
モリブデン、アルミニウム、セレンから選ばれる金属の
塩化物、硫化物および水酸化物の中から選択された金属
塩を使用する特許請求の範囲第１項に記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13915485A JPS62295A (ja) | 1985-06-27 | 1985-06-27 | コレシストキニンパンクレオザイミンｃ端ペプチドおよびその類縁体の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13915485A JPS62295A (ja) | 1985-06-27 | 1985-06-27 | コレシストキニンパンクレオザイミンｃ端ペプチドおよびその類縁体の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62295A true JPS62295A (ja) | 1987-01-06 |
| JPH0545239B2 JPH0545239B2 (ja) | 1993-07-08 |
Family
ID=15238825
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13915485A Granted JPS62295A (ja) | 1985-06-27 | 1985-06-27 | コレシストキニンパンクレオザイミンｃ端ペプチドおよびその類縁体の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS62295A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01250396A (ja) * | 1988-03-31 | 1989-10-05 | Shin Etsu Chem Co Ltd | ポリペプチドの製造方法 |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101240732B1 (ko) | 2005-02-18 | 2013-03-07 | 아이로보트 코퍼레이션 | 습식 및 건식 청소를 위한 자동 표면 청소 로봇 |
| ES2778199T3 (es) | 2013-10-11 | 2020-08-10 | Kaneka Corp | Composición de resina epoxi que contiene polímero de núcleo-cubierta, producto curado de la misma y método para preparación de la misma |
-
1985
- 1985-06-27 JP JP13915485A patent/JPS62295A/ja active Granted
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01250396A (ja) * | 1988-03-31 | 1989-10-05 | Shin Etsu Chem Co Ltd | ポリペプチドの製造方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0545239B2 (ja) | 1993-07-08 |
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