JPS6227079B2

JPS6227079B2 -

Info

Publication number: JPS6227079B2
Application number: JP54078317A
Authority: JP
Inventors: Tetsuo Shiba; Shozo Kotani; Juichi Yamamura; Osamu Nagase; Hidemasa Ogawa
Original assignee: Daiichi Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Daiichi Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1979-06-21
Filing date: 1979-06-21
Publication date: 1987-06-12
Also published as: ZA803483B; ES492664A0; DE3062609D1; PH15892A; AU5910180A; US4317771A; JPS5618996A; CA1183128A; ES8200645A1; SU1190990A3; EP0021367A1; ATE2958T1; AU534233B2; EP0021367B1

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は優れたアジユバント活性及び／又は微
生物感染予防・治療効果を有する新規ムラミルジ
ペプチド誘導体、更に詳しくは一般式（）で示されるムラミルジペプチド誘導体に関する。上記式中ＸはＬ−アラニン、Ｌ−セリン及びＬ
−バリンより選ばれるアミノ酸残基を、Ｙは−
NH−Ａ基又は

【式】基を意味し、R₁はカルボキシル基を、ｎは１〜
６の整数を、Ａは炭素原子数７〜29の分枝を有す
ることもある飽和脂肪族炭化水素残基を、Acyl
は炭素原子数２〜６のアシル基を意味する。近年、白血病、悪性リンパ腫、各種癌疾患、更
には臓器の代謝不全状態に陥つた患者の経過、予
後についての観察で、微生物感染症殊にその難治
感染症の併発（特にその末期感染症例）が多発の
傾向にある。細菌学的検索が進み、治療行為にも十分な配慮
が払われ、感染に対する予防技術の向上、更には
各種化学療法剤の普及にもかかわらず、一般感染
症並びに難治感染症によつて死に至る背景として
は、疾病自体に対する宿主感染防禦能の低下に加
え、抗癌剤、免疫抑制剤、副腎皮質低下剤等の医
原的要因が加算され、特に多形核白血病を初めと
する各種貧食細胞が有する感染に対する抵抗因子
が障害されることが原因と考えられる。従つて、
上述の感染症に対し予防及び治療効果を有する薬
剤の開発が近年とみに望まれるところとなつてい
るが、特に化学療法剤の繁用による耐性菌の出現
と菌交代現象に基づく弱毒菌による感染病の治療
が問題となつている今日、菌への直接的殺菌作用
を有さず、かつ感染症の予防治療効果を有する新
しいタイプの薬剤の開発が強く望まれている。従来、かかる作用効果を呈するものとしてはコ
リネバクテリア又はミコバクテリア属のある種菌
体及びそれ等の細胞壁成分もしくはグラム陰性菌
のリボ多糖類（LST）抽出物等の若干例は知ら
れている。しかしながら、これ等のものはそれ自
体の免疫原性（抗原性）、発熱原性等の副作用か
ら人体に投与することは不可能であつた。又、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ
−イソグルタミン（以下ムラミルジペプチド）
が、ある種細菌感染に対して防禦作用を有するこ
とが発表されている（Proc.Natl.Acad.Sci.USA
Vol 74、No.５、P2089〜2093）。しかしながら、上記化合物の呈する効果は必ず
しも満足できるものではない。そこで本発明者等は特に人体投与可能にしてか
つ優れた感染予防・治療効果を有する化合物につ
いて鋭意探索を試みた結果、前記一般式（）で
示めされる化合物が優れた微生物感染予防・治療
効果及び／又はアジユバント活性を有することを
見い出し本発明を完成した。本発明化合物の効果は下記する方法で確認され
た。微生物感染防禦効果一群20匹のStd−ddYマウス（26ｇ±１ｇ、
５週令）に本発明化合物１〜７及び対照化合物
１〜４の各々0.1mgを皮下投与し、次いで24時
間後にE.coli E77156株を６×10⁶、９×10⁶及
び1.2×10⁷cells／マウスの接種菌量で皮下感染
させた。効果判定は感染７日後のマウス生存率
（％）から求めた。結果は表−１に示される通
り本発明化合物は優れた感染防禦効果を呈し
た。

【表】群の差を示した。
アジユバント活性本発明者の１人である小谷等が考案した方法
（Biken Journal、20巻、95〜103 1977年）に従
い、アジユバント活性の一つの指標である角膜
反応をモルモツトを使用して調べた。結果は表
−２に示される通り本発明化合物はムラミルジ
ペプチドと同等以上の活性を呈した。

【表】

【表】表１及び２に記した対照化合物１〜４及び本発
明化合物１〜11は下記の通りである。対照化合物−１：Ｎ〓−（Ｎ−アセチルムラミル
−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル）−Ｌ
−リジン対照化合物−２：Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−ア
ラニル−Ｄ−イソグルタミン対照化合物−３：Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−セ
リル−Ｄ−イソグルタミン対照化合物−４：Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−バ
リル−Ｄ−イソグルタミン本発明化合物−１：Ｎ〓−（Ｎ−アセチルムラミ
ル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル）−
Ｎ〓−オクタノイル−Ｌ−リジン本発明化合物−２：Ｎ〓−（Ｎ−アセチルムラミ
ル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル）−
Ｎ〓−ラウロイル−Ｌ−リジン本発明化合物−３：Ｎ〓−（Ｎ−アセチルムラミ
ル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル）−
Ｎ〓−ステアロイル−Ｌ−リジン本発明化合物−４：Ｎ〓−（Ｎ−アセチルムラミ
ル−Ｌ−セリル−Ｄ−イソグルタミニル）−Ｎ
〓−ステアロイル−Ｌ−リジン本発明化合物−５：Ｎ〓−（Ｎ−アセチルムラミ
ル−Ｌ−バリル−Ｄ−イソグルタミニル）−Ｎ
〓−ステアロイル−Ｌ−リジン本発明化合物−６：Ｎ〓−（Ｎ−アセチルムラミ
ル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル）−
Ｎ〓−トリアコンタノイル−Ｌ−リジン本発明化合物−７：Ｎ〓−（Ｎ−アセチルムラミ
ル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル）−
Ｎ〓−イソペンタデカノイル−Ｌ−リジン本発明化合物−８：Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−
アラニル−Ｄイソグルタミンオクチルアミド本発明化合物−９：Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−
アラニル−Ｄ−イソグルタミンラウリルアミド本発明化合物−10：Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−
アラニル−Ｄ−イソグルタミンステアリルアミ
ド本発明化合物−11：Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−
バリル−Ｄ−イソグルタミンステアリルアミド本発明化合物は下記反応工程に従つて製するこ
とができる。（式中、ｎ、置換基R₁、Ａ、Ｘ、Ｙ及びAcylは前
記定義の通り。）即ち、本発明化合物（）はムラミン酸のジペ
プチド体（）に式（）で示めされる化合物を
反応させる方法（ａ法）を採用してもよく、又ム
ラミン酸のトリペプチド体（）に式（）で示
めされる化合物を反応させる方法（ｂ法）を採用
してもよい。ａ法を採用する場合に於ける縮合反応、即ち
（）＋（）→（）の反応は一般にペプチド合
成に使用される方法、カルボジイミド法、活性エ
ステル法及び酸無水物法が採用しえる。例えば、
式（）及び（）で示さめされる化合物をＮ・
Ｎ−ジメチルホルムアミド（以下DMFと略す。）
又はテトラヒドロフラン或いはこれらの混合物に
溶解或いは懸濁させ、これにＮ−ヒドロキシコハ
ク酸イミド、１−ヒドロキシベンゾトリアゾー
ル、Ｎ−ヒドロキシ−５−ノルボルネン−２・３
−ジカルボキシイミド、ペンタクロロフエノール
等の一種とカルボジイミド〔ジシクロヘキシル−
カルボジイミド又は１−エチル−３−（３−ジメ
チルアミノプロピル）−カルボジイミド或いはそ
の塩酸塩〕を加え通常室温〜約60℃で数時間ない
し数日間反応させることにより達せられる。ｂ法を採用する場合の縮合反応、即ち（）＋
（）→（）の反応に際してはａ法の反応条件
がほぼ同様に採用しうる。例えば、式（）で示
される化合物をテトラヒドロフラン又はクロロホ
ルム或いはこれらの混合物に溶解或いは懸濁さ
せ、これにＮ−ヒドロキシコハク酸イミド、１−
ヒドロキシベンゾトリアゾール、Ｎ−ヒドロキシ
−５−ノルボルネン−２・３−ジカルボキシイミ
ド、ペンタクロロフエノール等の一種とカルボジ
イミドとを加え通常室温〜約60℃で数時間から一
晩反応させ、その活性エステル体とし、これに式
（）で示めされる化合物を縮合させればよい。縮合反応は通常のペプチド合成に用いられる溶
媒、例ええば、DMF、テトラヒドロフラン、
水、クロロホルム等の単独又は混合溶媒中０〜60
℃、好ましくは約25〜40℃で数時間〜約２日間撹
拌することにより達せられる。以下実施例及び参考例を挙げて本発明を説明す
る。実施例１Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イ
ソグルタミン300mgをDMF2mlに溶解しオクチル
アミン72mg、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド64mg
（0.56ｍmole）、テトラヒドロフラン７mlを加え
る。氷冷撹拌下ジシクロヘキシルカルボジイミド
115mg（0.56ｍmole）を加え、30分後、徐々に室
温にもどし一晩反応させる。析出したジシクロヘ
キシル尿素を濾去後、減圧濃縮し、残留物に水を
加えて沈殿を得る。次いでDMF−エーテルから
再結晶し、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル
−Ｄ−イソグルタミンオクチルアミド165mgが
得られる。融点174.0〜175.5℃（分解）。〔α〕^２５ _Ｄ＋30.5゜（Ｃ＝0.4、酢酸、21時間後）元素分析値 C₂₇H₄₉O₁₀N₅・H₂Oとして計算値（％）Ｃ 52.15、Ｈ 8.26、Ｎ 11.26 実測値（％）Ｃ 51.88、Ｈ 8.00、Ｎ 11.35 同様にして下記化合物を製した。Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イ
ソグルタミンラウリルアミド融点186〜187℃（分解）、〔α〕^２５ _Ｄ＋30.0゜（Ｃ＝
0.5、酢酸、21時間後）。元素分析値 C₃₁H₅₇O₁₀N₅・１ 1/2H₂Oとして計算値（％）Ｃ 54.20、Ｈ 8.82、Ｎ 10.20 実測値（％）Ｃ 54.43、Ｈ 8.60、Ｎ 9.88 Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イ
ソグルタミンステアリルアミド融点189〜190℃（分解）、〔α〕^２５ _Ｄ＋28.0゜（Ｃ
＝0.5、酢酸、21時間後）元素分析値 C₃₇H₆₉O₁₀N₅・1/2H₂Oとして計算値(%) Ｃ 59.00、Ｈ 9.39、Ｎ 9.30 実測値(%) Ｃ 58.80、Ｈ 9.37、Ｎ 9.33 Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−バリル−Ｄ−イソ
グルタミンステアリルアミド融点217〜219℃（分解）元素分析値 C₃₉H₇₃O₁₀N₅・1/2H₂Oとして計算値(%) Ｃ 59.96、Ｈ 9.57、Ｎ 8.97 実測値(%) Ｃ 59.73、Ｈ 9.58、Ｎ 9.16 実施例２Ｎ〓−（１−α−Ｏ−ベンジル−４・６−Ｏ−
ベンジリデン−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラ
ニル−Ｄ−イソグルタミニル）−Ｎ〓−ベンジル
オキシカルボニル−Ｌ−リジンベンジルエステ
ル11.4ｇを60％酢酸115mlに懸濁し、沸騰水浴上
約１時間加熱する。室温に冷却後、減圧濃縮し残
留物に水を加える。析出した結晶を濾取し、
DMF−酢酸エチルエステルから再結晶し、Ｎ〓
−（１−α−Ｏ−ベンジル−Ｎ−アセチルムラミ
ル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル）−Ｎ
〓−ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−リジンベ
ンジルエステル7.6ｇを得る。融点207〜210℃（分解）、〔α〕^２５ _Ｄ56.6゜（Ｃ＝
0.3、DMF）。元素分析値 C₄₇H₆₂O₁₄N₆・1/2H₂Oとして計算値(%) Ｃ 59.80、Ｈ 6.73、Ｎ 8.90 実測値(%) Ｃ 59.65、Ｈ 6.67、Ｎ 8.96 この様にして得られた上記化合物を約20倍量の
酢酸に溶解し、パラジウム炭素の存在下、水素気
流中で室温にて加水素分解を行なう。反応後、触
媒を濾去し、濾液を減圧濃縮し、残留物をシリカ
ゲルクロマトグラフイーに付し、ｎ−ブタノール
−酢酸−水（４：１：２）で溶出して精製する。
目的画分を減圧濃縮し、塩基性イオン交換樹脂
（アセテート型）を通す。通液を凍結乾燥するこ
とによりＮ〓−（Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−ア
ラニル−Ｄ−イソグルタミニル）−Ｌ−リジンが
得られる。この様にして得られたＮ〓−（Ｎ−アセチルム
ラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル）
−Ｌ−リジン300mgをDMF7mlに懸濁し、氷冷
下、オクタン酸のＮ−ハイドロキシ−５−ノルボ
ルネン−２・３−ジカルボキシイミド活性エステ
ル148mg、Ｎ−メチルモルホリン0.05mlを加え
る。30分後、徐々に室温にもどし、一晩撹拌反応
する。反応液を減圧濃縮し、残渣にエーテルを加
え、析出する結晶を濾取する。次いでエーテル、
水で順次洗浄後、DMF−エーテルで再結晶する
ことによりＮ〓−（Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−
アラニル−Ｄ−イソグルタミニル）−Ｎ〓−オク
タノイル−Ｌ−リジン310mgを得る。融点126〜
130℃（分解）、〔α〕^２５ _Ｄ＋28.8゜（Ｃ＝0.2、
DMF、17時間後）。元素分析値 C₃₃H₅₈O₁₃N₆・2H₂Oとして計算値（％）Ｃ 50.63、Ｈ 7.98、Ｎ 10.74 実測値（％）Ｃ 50.32、Ｈ 7.54、Ｎ 11.00 同様にして下記化合物を製した。Ｎ〓−（Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル
−Ｄ−イソグルタミニル）−Ｎ〓−ラウロイル−
Ｌ−リジン融点174.5〜176.5℃（分解）、〔α〕^２５ _Ｄ＋30.2゜
（Ｃ＝0.6、DMF、17時間後）。元素分析値 C₃₇H₆₆O₁₃N₆・H₂Oとして計算値（％）Ｃ 54.13、Ｈ 8.35、Ｎ 10.24 実測値（％）Ｃ 53.90、Ｈ 8.40、Ｎ 10.17 Ｎ〓−（Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル
−Ｄ−イソグルタミニル）−Ｎ〓−ステアロイル
−Ｌ−リジン融点175.0〜177.0℃（分解）、〔α〕^２５ _Ｄ＋25.9゜
（Ｃ＝0.6、DMF、17時間後）。元素分析値 C₄₃H₇₈O₁₃N₆・H₂Oとして計算値(%) Ｃ 57.06、Ｈ 8.91、Ｎ 9.29 実測値(%) Ｃ 57.21、Ｈ 8.87、Ｎ 9.19 Ｎ〓−（Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル
−Ｄ−イソグルタミニル）−Ｎ〓−トリアコンタ
ノイル−Ｌ−リジン融点165.0〜168℃（分解）。元素分析値 C₅₅H₁₀₂O₁₃N₆・１ 1/2H₂Oとして計算値(%) Ｃ 61.03、Ｈ 9.78、Ｎ 7.76 実測値(%) Ｃ 60.89、Ｈ 9.58、Ｎ 7.63 Ｎ〓−（Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル
−Ｄ−イソグルタミニル）−Ｎ〓−イソペンタデ
カノイル−Ｌ−リジン融点144.5〜147.5℃（分解）、〔α〕^２５ _Ｄ＋20.2゜
（Ｃ＝0.3、DMF、17時間後）。元素分析値 C₄₀H₇₂O₁₃N₆として計算値(%) Ｃ 56.85、Ｈ 8.59、Ｎ 9.95 実測値(%) Ｃ 57.26、Ｈ 8.63、Ｎ 9.81 Ｎ〓−（Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−セリル−
Ｄ−イソグルタミニル）−Ｎ〓−ステアロイル−
Ｌ−リジン融点175.0〜177.0℃（分解）、〔α〕^２５ _Ｄ＋27.8゜
（Ｃ＝0.5、DMF、17時間後）。元素分析値 C₄₃H₇₈O₁₄N₆・１ 1/2H₂Oとして計算値(%) Ｃ 55.52、Ｈ 8.78、Ｎ 9.04 実測値(%) Ｃ 55.46、Ｈ 8.62、Ｎ 9.06 Ｎ〓−（Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−バリル−
Ｄ−イソグルタミニル）−Ｎ〓−ステアロイル−
Ｌ−リジン融点182.0〜185.0℃（分解）、〔α〕^２５ _Ｄ＋22.8゜
（Ｃ＝0.5、DMF、17時間後）。元素分析値 C₄₅H₈₂O₁₃N₆・1/2H₂Oとして計算値(%) Ｃ 58.48、Ｈ 9.05、Ｎ 9.09 実測値(%) Ｃ 58.48、Ｈ 8.89、Ｎ 9.12 参考例脂肪酸の活性エステルの調製脂肪酸1.0ｍmoleをテトラヒドロフラン10mlに
溶解し、氷冷撹拌下、ジシクロヘキシルカルボジ
イミド206mg及びＮ−ヒドロキシ−５−ノルボル
ネン−２・３−ジカルボキシイミド179mgを加え
る。30分後、徐々に室温に戻し５時間反応する。
析出したジシクロヘキシル尿素を濾去し、濾液を
濃縮する。乾燥エーテルを加えて不溶物を濾去
後、濾液を減圧濃縮乾固すると脂肪酸のＮ−ヒド
ロキシ−５−ノルボルネン−２・３−ジカルボキ
シイミド活性エステル体の白色結晶が得られる。なお、トリアコンタン酸の場合は反応溶媒とし
てテトラヒドロフラン：クロロホルム（１：１）
の混合溶液を用いた。

Claims

【特許請求の範囲】１一般式で示されるムラミルジペプチド誘導体。上記式中ＸはＬ−アラニン、Ｌ−セリン及びＬ
−バリンより選ばれるアミノ酸残基を、Ｙは−
NH−Ａ又は【式】を意味し、R₁はカルボキシル基を、ｎは１〜６の整
数を、Ａは炭素原子数７〜29の分枝を有すること
もある飽和脂肪族炭化水素残基を、Acylは炭素
原子数２〜６のアシル基を意味する。