JP4307723B2 - Ｎ１−修飾グリコペプチド - Google Patents

Description

【０００１】
本発明は、グリコペプチド、特にＡ８２８４６Ｂ、及び、そのＮ^DISACC変形物に関する。特許請求される化合物では、最初のＮ¹アミノ酸、Ｎ-メチル-Ｄ-ロイシンが除かれ、アシル基、または、代わりのα-アミノ酸から誘導されたアシル基により置換されている。
【０００２】
本発明は、式：
【化４】

(式中、Ｒ¹は、無置換Ｃ₂〜Ｃ₁₀アルカノイル、フェニルで置換されたＣ₂〜Ｃ₁₀アルカノイル、または、α炭素原子以外でアミノ基、若しくは、保護されたアミノ基で置換されたＣ₂〜Ｃ₁₀のアルカノイルであるか；
ベンゾイル、または、各々独立してハロゲン、Ｃ₁〜Ｃ₄の低級アルキル、Ｃ₁〜Ｃ₄の低級アルコキシ、若しくは、フェニルである1、若しくは2個の置換基を有する置換されたベンゾイルであるか；
α-アミノ酸から誘導されたアシル、または、保護されたα-アミノ酸から誘導されたアシルであって、該α-アミノ酸がＤ-体、または、Ｌ-体の：
アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、３-フェニルアラニン、３-(ｐ-クロロフェニル)アラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、及び、バリン
からなる群から選択されるアシルであるか；または、
上に定義したα-アミノ酸から誘導されるアシルであって、そのアミノ酸がアミン上にＣ₁〜Ｃ₁₀のアルキル、ベンジル、フェニルベンジル、若しくは、ｐ-クロロベンジルである置換基を有するアシルであり、ここでＮ-メチル-Ｄ-ロイシンから誘導されるアシルは除く；
Ｒ²は、水素、または、式：
【化５】

(式中、Ｒ^2aは水素、または、−ＣＨ₂−Ｒ³であり、そして、Ｒ³は水素、Ｃ₁〜Ｃ₁₁のアルキル、Ｃ₁〜Ｃ₁₁のアルキル−Ｒ⁴、または、Ｒ⁴−(リンカー_{(0 または 1)}−Ｒ⁴)_{0 または 1}を表し、ここで、Ｒ⁴は各々独立して、フェニル、または1〜2個の置換基により置換されたフェニルであり、その置換基のそれぞれは独立にハロゲン、Ｃ₁〜Ｃ₈の低級アルキル、Ｃ₁〜Ｃ₈の低級アルコキシ、Ｃ₁〜Ｃ₄の低級アルキルチオ、または、トリフルオロメチルであり、「リンカー」は−Ｏ−、−ＣＨ₂−、または、−Ｏ−(ＣＨ₂)_n−であり、ここで、ｎは1〜3である)のエピバンコースアミニル(epivancosaminyl)を表す）
の化合物、並びに、その医薬的に許容される塩に関する。
【０００３】
Ｒ¹がＣ₂〜Ｃ₁₀のアルカノイルを表す場合、それは直鎖アルカノイル、または、いずれかの程度まで分枝したアルカノイルでもあり得る。同じ様に、Ｒ³がＣ₁〜Ｃ₁₁のアルキルを表す場合、それは直鎖、または、分枝状であり得る。
【０００４】
本発明の化合物は、式：
【化６】

(式中、Ｒ²は上述に定義されるとおりである)
の対応する「Ａ８２８４６Ｂヘキサペプチド」から製造される。これらの「Ａ８２８４６Ｂヘキサペプチド」は、標準のＮ¹アミノ酸Ｎ-メチル-Ｄ-ロイシンが除かれ、親グリコペプチドのアミノ酸数が7から6に減ったので、このように呼ばれている。
【０００５】
本発明の化合物は、Ａ８２８４６Ｂヘキサペプチドを所望のアシル基Ｒ¹のアルカン酸の活性化エステルと反応させることによって製造される。「活性化エステル」は、Ａ８２８４６Ｂヘキサペプチドのアミンとのカップリングに対して、カルボキシル官能基をより反応性にしたエステルを意味する。Ａ８２８４６Ｂヘキサペプチド、及び、活性化エステルの反応は、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルフォキシド、または、ジメチルホルムアミド、及び、ジメチルスルフォキシドの混合物等のふさわしくは極性溶媒である、有機溶媒中で行われる。反応は、25〜100℃等の広い範囲の温度下で行われるが、好ましくは約25〜35℃の温度で行われる。所望の産物のいくつかは反応物を接触させると直に作られるが、より高い収量は約1〜約24時間、しばしば約1〜約5時間の反応時間で得られる。単離、及び、精製は慣用の手順に従って行われる。
【０００６】
出発材料のＡ８２８４６Ｂヘキサペプチド自身は、親グリコペプチド：
【化７】

(式中、Ｒ^2aは上述に定義されるとおりである)
から合成される。この合成は、ペプチド、または、蛋白質のＮ末端残基の切断のための2工程反応である「エドマン分解」による。上述の親グリコペプチドをまず、式ＳＣＮ-Ｒ⁵のイソチオシアネートと反応させ、式：
【化８】

の中間体Ｎ^LEU-(チオカルバモイル)-Ａ８２８４６Ｂ化合物を得る。前述の式中、Ｒ⁵は、Ｃ₁〜Ｃ₁₀のアルキル、フェニル、ナフチル、または、各々が独立してハロゲン、Ｃ₁〜Ｃ₄の低級アルキル、Ｃ₁〜Ｃ₄の低級アルコキシ、ベンゾイロキシ、ニトロ、若しくは、
【化９】

(式中、各Ｒ⁶は独立してＣ₁〜Ｃ₄の低級アルキルである)
である、1若しくは2個の置換基により置換されたフェニルである。
【０００７】
この反応は、都合よくは水中で、ピリジンと共に、25〜30℃の温度で、イソチオシアネート反応物のわずかに過剰量を用いて行われる。Ｎ^LEU-(チオカルバモイル)Ａ８２８４６Ｂ中間体は、慣用の方法により分離され得るか、または、エドマン分解の第2工程において反応溶媒の除去後に使用し得る。
【０００８】
第2工程で、Ｎ^LEU-(チオカルバモイル)Ａ８２８４６Ｂを、好ましくはトリフルオロ酢酸である有機酸と、ジクロロメタン等の非極性溶媒中で反応させる。反応は、0℃〜35℃の温度で進行するが、好ましくは、0℃〜25℃の温度で行われる。反応は、一般には数時間で終了する。得られたヘキサペプチド生成物は、所望により慣用の方法により分離、及び、精製される。
【０００９】
エドマン分解の第2工程は場合により、二糖エピバンコースアミンの損失につながり得る。デス-エピバンコースアミニル化合物(Ｒ²＝水素)を得るには、より長い反応時間とし得る。
【００１０】
分子の二糖部位でのその他の変形は、慣用の方法により得られる。上述のように、エドマン分解、及び、それに続くアシル化は、天然の二糖(Ｒ²は、Ｒ^2a＝Ｈのエピバンコースアミニル)、または、二糖誘導体(Ｒ²は、Ｒ^2a＝ＣＨ₂-Ｒ³のエピバンコースアミニル)により行われ得る。本発明の化合物を合成するためのこの方法は、以下の実施例１２、及び、２６の製造例で例示される。しかしながら、これらの特許請求する二糖誘導体(Ｒ²は、Ｒ^2a＝ＣＨ₂-Ｒ³のエピバンコースアミニル)を有する化合物を、最初にエドマン分解を行い、続いてＡ８２８４６Ｂにおけるアシル化を天然のＲ²＝エピバンコースアミニルで行い、その後に所望のエピバンコースアミニル置換基−ＣＨ₂−Ｒ³を導入して製造することも可能である。これは、実施例３４、及び、３５に例示される。
【００１１】
−ＣＨ₂−Ｒ³置換基が、エドマン分解、及び、アシル化の前、または、後で導入されるかに拘わらず、同じ慣用の方法が使用される。この反応では、基質化合物は、所望の−ＣＨ₂−Ｒ³基を導入するのに適当なアルデヒドにより還元的にアルキル化される。この反応は、種々の文献で教示される(米国特許第5,591,714号、及び、欧州特許第667,353号参照)。
【００１２】
本発明の化合物は容易に塩を形成し、それらは、慣用の方法により製造され得る。
【００１３】
以下の実施例により、本発明の化合物の製造が例示される。
【００１４】
Ｎ ^LEU -( フェニルチオカルバモイル )- Ｎ ^DISACC -( ｐ -( ｐ - クロロフェニル )
ベンジル ) Ａ８２８４６Ｂの製造
Ｎ^DISACC-(ｐ-(ｐ-クロロフェニル)ベンジル)Ａ８２８４６Ｂトリ塩酸塩(100.0ｍｇ,0.0526ｍｍｏｌ)を、10ｍｌのＨ₂Ｏ-ピリジン(1：1 容量／容量)中に溶解し、そして、フェニルイソチオシアネート(0.010ｍｌ,0.083ｍｍｏｌ)で処理した。得られた混合物を室温で1時間攪拌し、その時点でＨＰＬＣ分析により出発材料の完全の消費が示された。反応混合物を真空下で濃縮し、粗生成物を分取ＨＰＬＣにより精製し、標題化合物を76.6ｍｇ(76％収量)得た。ＦＡＢ-ＭＳ：Ｃ₉₃Ｈ₁₀₂Ｃｌ₃Ｎ₁₁Ｏ₂₆Ｓについての計算値 1925.5、実測値 1928.5(Ｍ＋3)。
【００１５】
単離されたチオ尿酸からのＮ ^DISACC -( ｐ -( ｐ - クロロフェニル ) ベンジル )-
デスロイシルＡ８２８４６Ｂの製造
精製したＮ^LEU-(フェニルチオカルバモイル)-Ｎ^DISACC-(ｐ-(ｐクロロフェニル)ベンジル)Ａ８２８４６Ｂ(63.3ｍｇ,0.0327ｍｍｏｌ)の試料を、10ｍｌのＣＨ₂Ｃｌ₂中に懸濁し、0℃に冷却した後、トリフルオロ酢酸(0.10ｍｌ)で処理した。1時間後、反応混合物を室温まで温め、さらに2時間攪拌した。溶媒を真空で除去し、粗生成物を分取ＨＰＬＣにより精製し、標題化合物25.3ｍｇ(46％収量)を白色粉末として得た。ＦＡＢ-ＭＳ：Ｃ₇₉Ｈ₈₄Ｃｌ₃Ｎ₉Ｏ₂₅についての計算値 1663.5、実測値 1666.4(Ｍ＋3)。
【００１６】
チオ尿酸中間体の単離なしのＮ ^DISACC -( ｐ - フェニルベンジル )- デスロイシル
Ａ８２８４６Ｂの製造
Ｎ^DISACC-(ｐ-フェニルベンジル)Ａ８２８４６Ｂ(41.0ｍｇ,0.0233ｍｍｏｌ)を、4ｍｌのＨ₂Ｏ-ピリジン(1：1 容量／容量)中に溶解し、フェニルイソチオシアネート(0.0040ｍｌ,0.033ｍｍｏｌ)で処理した。反応混合物を室温で3時間攪拌し、この時点で、ＨＰＬＣ分析により出発材料の完全な消費が示された。反応混合物を真空下で濃縮し、粗チオ尿酸中間体を白色固体として得た。その後、チオ尿素誘導体を10ｍｌＣＨ₂Ｃｌ₂中に懸濁し、0℃に冷却した後、トリフルオロ酢酸(0.25ｍｌ)で処置した。30分後、反応混合物を室温まで温め、さらに1時間攪拌した。溶媒を真空下で除き、粗生成物を分取ＨＰＬＣにより精製し、標題化合物14.0ｍｇ(37％収量)を白色粉末として得た。ＦＡＢ-ＭＳ：Ｃ₇₉Ｈ₈₅Ｃｌ₂Ｎ₉Ｏ₂₅についての計算値 1629.5、実測値 1632.5(Ｍ＋3)。
【００１７】
実施例１の製造
デスロイシルＡ８２８４６Ｂ(101ｍｇ,0.0689ｍｍｏｌ)の試料、及び、４-フェニルベンゾイル酸のヒドロキシベンゾトリアゾール水和物活性エステル(47ｍｇ,0.149ｍｍｏｌ)を10ｍｌのＤＭＦ中に溶解した。得られた混合物を室温で2時間攪拌し、この時点で、ＨＰＬＣ分析により出発材料の完全な消費が示された。反応混合物を真空下で濃縮し、粗生成物を分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｎ¹-(ｐ-フェニルベンゾイル)デスロイシルＡ８２８４６Ｂを14ｍｇ(12％収量)得た。
【００１８】
実施例２６の製造
Ｎ^DISACC-(ｐ-フェニルベンジル)デスロイシルＡ８２８４６Ｂ(140ｍｇ,0.0858ｍｍｏｌ)の試料、及び、Ｎ-ＢＯＣ-Ｄ-プロリンのヒドロキシベンゾトリアゾール水和物活性エステル(66ｍｇ,0.199ｍｍｏｌ)を12ｍｌのＤＭＦ中に溶解した。得られた混合物を室温で1時間攪拌し、この時点で、ＨＰＬＣ分析により出発材料の完全な消費が示された。反応混合物を真空下で濃縮し、粗生成物を分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｎ^DISACC-(ｐ-フェニルベンジル)デスロイシルＡ８２８４６ＢのＮ¹-(Ｎ-ＢＯＣ-Ｄ-プロリン)誘導体を77.5ｍｇ(49％収量)得た。
【００１９】
実施例１２の製造
Ｎ^DISACC-(ｐ-フェニルベンジル)デスロイシルＡ８２８４６ＢのＮ¹-(Ｎ-ＢＯＣ-Ｄ-プロリン)誘導体(52.5ｍｇ,0.0287ｍｍｏｌ)の試料を、9ｍｌのＣＨ₂Ｃｌ₂中に溶解し、0℃に冷却した後、トリフルオロ酢酸(0.5ｍｌ)で処理した。10分後、反応混合物を室温まで温め、さらに50分間攪拌した。ＨＰＬＣ分析により出発材料の完全な消費が示された。溶媒を真空下で除き、粗生成物を分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｎ^DISACC-(ｐ-フェニルベンジル)デスロイシルＡ８２８４６ＢのＮ¹--Ｄ-プロリン誘導体を15ｍｇ(30％収量)得た。
【００２０】
実施例３４、及び、３５の製造
デスロイシルＡ８２８４６ＢのＮ¹-Ｄ-ロイシン誘導体(95ｍｇ,0.0602ｍｍｏｌ)の試料、及び、ｐ-フェニルベンズアルデヒド(14ｍｇ,0.0768ｍｍｏｌ)を、10ｍｌのＮ,Ｎ-ジメチルホルムアミド(ＤＭＦ)、及び、10ｍｌのメタノール(ＭｅＯＨ)中に溶解した。得られた混合物を75℃に加熱し、1時間15分攪拌した。この時点でシアンホウ化水素ナトリウム(26ｍｇ,0.413ｍｍｏｌ)を添加し、反応物を75℃でさらに1時間30分攪拌し、この時点で、ＨＰＬＣ分析により出発材料の完全な消費が示された。反応混合物を真空下で濃縮し、粗生成物を分取ＨＰＬＣにより精製し、デスロイシルＡ８２８４６ＢのＮ¹-(Ｎ-ｐ-フェニルベンジル)-Ｄ-ロイシン誘導体を32ｍｇ(30％収量)、及び、デスロイシルＡ８２８４６ＢのＮ^DISACC-(ｐ-フェニルベンジル)-Ｎ¹-(Ｎ-ｐ-フェニルベンジル)-Ｄ-ロイシン誘導体を3ｍｇ(2.6％)得た。
【００２１】
これらの実施例で報告されるＨＰＬＣの方法は、以下のように行った：
分析的：反応は、Ｗａｔｅｒｓ Ｃ₁₈ μＢｏｎｄａｐａｋ、または、Ｎｏｖａｐａｋ Ｃ₁₈カラム(3.9×300ｍｍ)、及び、280ｎｍでのＵＶ検出を用いた分析的ＨＰＬＣによりモニターした。溶出は、5％ＣＨ₃ＣＮ-95％緩衝液から、80％ＣＨ₃ＣＮ-20％緩衝液の30分間にわたる直線的勾配により行った。使用した緩衝液は、水中の0.5％トリエチルアミンであり、Ｈ₃ＰＯ₄によりｐＨ3に調整した。
分取：粗反応混合物を、Ｗａｔｅｒｓ Ｃ₁₈ Ｎｏｖａ-Ｐａｋカラム(40×300ｍｍ)、及び、280ｎｍでのＵＶ検出を用いた分取ＨＰＬＣにより精製した。溶出は、5％ＣＨ₃ＣＮ-95％緩衝液から、80％ＣＨ₃ＣＮ-20％緩衝液の30分間にわたる直線的勾配により行った。使用した緩衝液は、水中の0.5％トリエチルアミンであり、Ｈ₃ＰＯ₄によりｐＨ3に調整した。所望の画分は続いて、Ｗａｔｅｒｓ Ｃ₁₈ Ｓｅｐ-Ｐａｋカラム(35ｃｃ)により脱塩した後、凍結乾燥した。
【００２２】
化合物は以下のように脱塩した。Ｗａｔｅｒｓ Ｓｅｐ-Ｐａｋカートリッジをメタノール(2〜3カラム容量)で予め湿らせた後、水(2〜3カラム容量)で平衡化した。最低限の容量の水中に溶解された試料を、Ｓｅｐ-Ｐａｋカラムに載せた後、水(2〜3カラム容量)で洗浄し、望ましくない塩を除いた。その後、生成物を、典型的には1：1のＣＨ₃ＣＮ／Ｈ₂Ｏ、ＣＨ₃ＣＮ、及び／または、メタノールである適当な溶媒系で溶出する。有機溶媒成分を真空下で除き、得られた水溶液を凍結乾燥し、最終生成物を得る。
【００２３】
本発明の代表的な化合物を以下の表に示す：
【表１】

【表２−１】

【表２−２】

【表２−３】

【００２４】
本発明の化合物は、細菌感染の処置において有用である。従って、別の態様において、本発明は典型的には温血動物である宿主動物における細菌感染を抑制する方法であって、宿主動物に本発明の化合物の有効な、抗菌的な量を投与することを含む方法に関する。この態様では、化合物は、種々の細菌による感染を抑制、及び、処置するのに使用することができるが、特にグラム陽性細菌に用い得る。好ましい態様では、化合物は、現存の抗菌剤に耐性な細菌による感染を抑制、及び、処置するのに使用できる。例えば、或る細菌は、メチシリンに耐性であり、別のものはバンコマイシン、及び／またはテイコプラニンに耐性である。本化合物は、このような耐性細菌種による感染を抑制、及び、処置する技術を提供する。
【００２５】
本発明のこの態様を実施するため、本発明の化合物は、経口、並びに、静脈内、及び、筋肉内等の非経口経路を含む慣用の技術のいずれかにより投与され得る。用いられる化合物の量は決定的なものではなく、用いられる個々の化合物、投与経路、感染の重篤さ、投与間隔、及び、当業者に公知のその他の要因に依存して変化する。一般に、約0.5〜約100ｍｇ／ｋｇの用量で有効であり、多くの状況において、より少ない約0.5〜約50ｍｇ／ｋｇの用量で有効である。本発明の化合物は単一用量で投与できるが、細菌感染の抑制を確実にするために典型的には、抗菌治療において公知の方法により、本発明の化合物は実際、数日、または、数週間等の期間にわたって繰り返し投与される。
【００２６】
また、公知の抗菌治療に従って、本発明の化合物は、必要な用量の適切な運搬用に製剤される、従って、別の態様では本発明は、本発明の化合物を医薬的に許容される担体と共に含む医薬的製剤に向けられる。このような担体は、経口、及び、非経口の両方の運搬経路用が周知である。一般に、製剤は、本発明の化合物を約0.1〜約90重量％、しばしば約1.0〜約3重量％で含むであろう。
【００２７】
本発明の化合物の抗菌効力を表IIIに説明する。最小阻害濃度(ＭＩＣ)を、標準ブロス微希釈分析(micro-dilution assay)を用いて決定した。
【表３】

【表４−１】

【表４−２】

【表４−３】

【表５】

Claims (12)

1. 式：
   

   

   （式中、Ｒ^１は、
   無置換Ｃ_２〜Ｃ_１０アルカノイル、フェニルで置換されたＣ_２〜Ｃ_１０アルカノイル、または、α炭素原子以外でアミノ基、若しくは、保護されたアミノ基で置換されたＣ_２〜Ｃ_１０のアルカノイルであるか；
   ベンゾイル、または、各々独立してハロゲン、Ｃ_１〜Ｃ_４の低級アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_４の低級アルコキシ、若しくは、フェニルである１、若しくは２個の置換基を有する置換されたベンゾイルであるか；
   α−アミノ酸から誘導されたアシル、または、保護されたα−アミノ酸から誘導されたアシルであって、該α−アミノ酸がＤ−体、または、Ｌ−体の：
   アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、３−フェニルアラニン、３−（ｐ−クロロフェニル）アラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、及び、バリン
   からなる群から選択されるアシルであるか；または、
   上に定義したα−アミノ酸から誘導されるアシルであって、そのアミノ酸がアミン上にＣ_１〜Ｃ_１０のアルキル、ベンジル、フェニルベンジル、若しくは、ｐ−クロロベンジルである置換基を有するアシルであり、ここでＮ−メチル−Ｄ−ロイシンから誘導されるアシルは除く；
   Ｒ^２は、水素、または、式：
   

   

   （式中、Ｒ^２ａは水素、または、−ＣＨ_２−Ｒ^３であり、そして、Ｒ^３は水素、Ｃ_１〜Ｃ_１１のアルキル、Ｃ_１〜Ｃ_１１のアルキル−Ｒ^４、または、Ｒ^４−（リンカー_{（０または１）}−Ｒ^４）_{０または１}を表し、ここで、Ｒ^４は各々独立して、フェニル、または１〜２個の置換基により置換されたフェニルであり、その置換基のそれぞれは独立にハロゲン、Ｃ_１〜Ｃ_８の低級アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_８の低級アルコキシ、Ｃ_１〜Ｃ_４の低級アルキルチオ、または、トリフルオロメチルであり、「リンカー」は−Ｏ−、−ＣＨ_２−、または、−Ｏ−（ＣＨ_２）_ｎ−であり、ここで、ｎは１〜３である）のエピバンコースアミニルを表す）
   の化合物またはその医薬的に許容される塩。
2. Ｒ^２が、Ｒ^２ａが水素のエピバンコースアミニル基である、請求項１に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
3. Ｒ^２が、Ｒ^２ａが−ＣＨ_２−Ｒ^３のエピバンコースアミニル基である、請求項２に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
4. Ｒ^３がｐ−ビフェニリルである、請求項３に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
5. Ｒ^３がｐ−（ｐ−クロロフェニル）フェニルである、請求項３に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
6. 請求項１〜５のいずれかに記載の化合物またはその医薬的に許容される塩を、医薬的に許容され得る希釈剤、または、担体と共に含む医薬製剤。
7. 宿主における細菌感染を処置するために使用する請求項６に記載の医薬製剤。
8. 細菌感染がバンコマイシン耐性エンテロコッカスによるものである、請求項７に記載の医薬製剤。
9. 抗菌治療に使用するための、請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
10. バンコマイシン耐性エンテロコッカスに対する抗菌治療に使用するための、請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
11. 請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩の製造方法であって、式：
    

    

    （式中、Ｒ^２は請求項１に定義される通りである）
    の親グリコペプチドを、請求項１に定義される所望のＲ^１のアルカン酸の活性化エステルと反応させることを含む方法。
12. さらにＮ ^{ＤＩＳＡＣＣ} アミンを還元的にアルキル化することを含む、請求項１１記載の方法。