JPS6222728A - Ｂ型肝炎ワクチンの製造方法 - Google Patents
Ｂ型肝炎ワクチンの製造方法Info
- Publication number
- JPS6222728A JPS6222728A JP16097085A JP16097085A JPS6222728A JP S6222728 A JPS6222728 A JP S6222728A JP 16097085 A JP16097085 A JP 16097085A JP 16097085 A JP16097085 A JP 16097085A JP S6222728 A JPS6222728 A JP S6222728A
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- JP
- Japan
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- hbsag
- hepatitis
- formaldehyde
- vaccine
- infectious
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- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は遺伝子操作によって得られたＢ型肝炎表面抗原
（以下、ＨＢｓＡｇという）を主成分とするＢ型肝炎ワ
クチンの製造方法に関する。
（以下、ＨＢｓＡｇという）を主成分とするＢ型肝炎ワ
クチンの製造方法に関する。
一般に、ウィルスの不活化法としてホルムアルデヒド処
理が優れており、ＨＢウィルス（以下、ＨＢＶという）
以外にもエンテロウィルス、レトロウィルス等多くのウ
ィルスや感染物質を不活化することが知られている。
理が優れており、ＨＢウィルス（以下、ＨＢＶという）
以外にもエンテロウィルス、レトロウィルス等多くのウ
ィルスや感染物質を不活化することが知られている。
ＨＢＶ−ｒ）ＮＡクローンの形質発現の研究より、遺伝
子操作においてはＨＢｓＡｇをコードする部位のみでＨ
ＢｓＡｇがつくられることがわかっている。従って、Ｈ
ＢｓＡｇのみのＤＮＡでＨＢｓＡｇをつくればＨＢｃＡ
ｇや感染性のＨＢウィルスはできない。その意味で遺伝
子操作で得られたＨＢｓＡｇよりつくられるワクチンは
、ＨＢＶの不活化の必要はない。しかし、本ワクチン中
に外来性の感染物質の混入を否定することはできない。
子操作においてはＨＢｓＡｇをコードする部位のみでＨ
ＢｓＡｇがつくられることがわかっている。従って、Ｈ
ＢｓＡｇのみのＤＮＡでＨＢｓＡｇをつくればＨＢｃＡ
ｇや感染性のＨＢウィルスはできない。その意味で遺伝
子操作で得られたＨＢｓＡｇよりつくられるワクチンは
、ＨＢＶの不活化の必要はない。しかし、本ワクチン中
に外来性の感染物質の混入を否定することはできない。
本発明は、遺伝子操作によって得られたＨＢｓＡｇを主
成分とするＢ型肝炎ワクチンの製造方法において、ＨＢ
ｓＡｇ活性を低下させることなく外来性の感染物質によ
る感染の危惧のないワクチンの製造方法を提供すること
を目的とするものである。
成分とするＢ型肝炎ワクチンの製造方法において、ＨＢ
ｓＡｇ活性を低下させることなく外来性の感染物質によ
る感染の危惧のないワクチンの製造方法を提供すること
を目的とするものである。
ｃ問題点を解決するための手段〕
本発明は、遺伝子操作によって得られたＢ型肝炎表面抗
原を主成分とするＢ型肝炎ワクチンの製造方法において
、Ｂ型肝炎表面抗原を含有する水溶液をホルムアルデヒ
ド処理することを特徴とするＢ型肝炎ワクチンの製造方
法に関する。
原を主成分とするＢ型肝炎ワクチンの製造方法において
、Ｂ型肝炎表面抗原を含有する水溶液をホルムアルデヒ
ド処理することを特徴とするＢ型肝炎ワクチンの製造方
法に関する。
＋１１出発原料
本発明における出発原料は、遺伝子操作を経てＨＢｓＡ
ｇを発現した菌体からＨＢＳＡｇを抽出、要すれば精製
したものであれば特に限定されない。
ｇを発現した菌体からＨＢＳＡｇを抽出、要すれば精製
したものであれば特に限定されない。
菌体は特に限定されるものではなく、たとえば大腸菌、
酵母、枯草菌などが例示される。
酵母、枯草菌などが例示される。
遺伝子操作によってＨＢｓＡｇ産生菌を産生させる方法
、抽出法、さらには精製法は、既知の方法またはそれに
準する方法に従えばよい。
、抽出法、さらには精製法は、既知の方法またはそれに
準する方法に従えばよい。
かかる方法としては、例えば、大腸菌を使用する方法と
しては特開昭５８−１０４８８７号明細書に、又、酵母
を使用する方法としては特開昭５９−４８０８２号明細
書に、更にＨＢｓＡｇ抽出・精製法に関しては特開昭５
９−１０１４２６号及び特開昭５９−１１５１８９号明
細書にその開示がある。
しては特開昭５８−１０４８８７号明細書に、又、酵母
を使用する方法としては特開昭５９−４８０８２号明細
書に、更にＨＢｓＡｇ抽出・精製法に関しては特開昭５
９−１０１４２６号及び特開昭５９−１１５１８９号明
細書にその開示がある。
（２）ホルムアルデヒド処理
ホルムアルデヒドによる処理は、ＨＢＳＡｇの水溶液に
対して行われる。ホルムアルデヒドは、終濃度０．００
９〜０．０２ｗ／ｖ％となるように加えて、本処理に付
される。その際、ＨＢｓＡｇの蛋白濃度は０．０２〜０
．０５Ｗ ／ Ｖ％に調整されていることが好ましく、
この調整は、通常、緩衝液（好ましくはｐｌ＋ ６〜８
程度）〔例えば、１０〜３０Ｗ／ｖ％シヨ糖を含む１０
〜５０ｍＭリン酸緩衝液〕にて行うことが好ましい。ホ
ルムアルデヒドによる処理は、例えば３５〜４０℃、９
４〜９８時間にて行うことが好ましい。
対して行われる。ホルムアルデヒドは、終濃度０．００
９〜０．０２ｗ／ｖ％となるように加えて、本処理に付
される。その際、ＨＢｓＡｇの蛋白濃度は０．０２〜０
．０５Ｗ ／ Ｖ％に調整されていることが好ましく、
この調整は、通常、緩衝液（好ましくはｐｌ＋ ６〜８
程度）〔例えば、１０〜３０Ｗ／ｖ％シヨ糖を含む１０
〜５０ｍＭリン酸緩衝液〕にて行うことが好ましい。ホ
ルムアルデヒドによる処理は、例えば３５〜４０℃、９
４〜９８時間にて行うことが好ましい。
次に、かくして得られたＨＢｓＡｇ溶液からホルムアル
デヒドを除去する。その好ましい方法としては、ｐＨ６
〜８の１０〜５０ｍＭリン酸緩衝液等の緩衝液を用いて
、好ましくは３０時間以上透析をする方法が例示される
。
デヒドを除去する。その好ましい方法としては、ｐＨ６
〜８の１０〜５０ｍＭリン酸緩衝液等の緩衝液を用いて
、好ましくは３０時間以上透析をする方法が例示される
。
こうして得られたＨＢＳＡｇは、好適には除菌濾過を行
い、また、公知の添加剤、即ち、賦形剤（例えばマンニ
ット、乳糖、デンプン）、免疫補助剤（例えば水酸化ア
ルミニウム、硫酸アルミニウム）、防腐側等を加えるこ
とにより、Ｂ型肝炎ワクチンとして調製されうる。
い、また、公知の添加剤、即ち、賦形剤（例えばマンニ
ット、乳糖、デンプン）、免疫補助剤（例えば水酸化ア
ルミニウム、硫酸アルミニウム）、防腐側等を加えるこ
とにより、Ｂ型肝炎ワクチンとして調製されうる。
本発明によれば、ＨＢＳＡｇ溶性を低下させることなく
、夾雑が危惧される外来性の感染性物質が不活化される
。従って、本発明方法によって得られたＢ型肝炎ワクチ
ンは、そのＨＢｓＡｇ価８性は良好で、外来性感染物質
による感染の危惧のないものである。
、夾雑が危惧される外来性の感染性物質が不活化される
。従って、本発明方法によって得られたＢ型肝炎ワクチ
ンは、そのＨＢｓＡｇ価８性は良好で、外来性感染物質
による感染の危惧のないものである。
２０ｗ／ｖ％シヨ糖を含む２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ
７，２＞で平衡化した４００／Ｉｇ／ｍｌの精製ＨＢｓ
Ａｇ溶液〔サン力ロマイセス セレビジア（Ｓａｃ−ｃ
ｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ ） Ｇ
ＲＦ １８ ｐｈｏ ８０株〕５００１に、上記緩衝
液中に０．０３６ ｗ／ｖ％のホルムアルデヒドを含む
溶液５００１を攪拌下に静かに加え、均一な溶液とした
。容器を密栓した後、３７℃で９６時間加温した。加温
終了後、２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６，６）で透析す
ることによって、残存するホルムアルデヒドを除いた。
７，２＞で平衡化した４００／Ｉｇ／ｍｌの精製ＨＢｓ
Ａｇ溶液〔サン力ロマイセス セレビジア（Ｓａｃ−ｃ
ｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ ） Ｇ
ＲＦ １８ ｐｈｏ ８０株〕５００１に、上記緩衝
液中に０．０３６ ｗ／ｖ％のホルムアルデヒドを含む
溶液５００１を攪拌下に静かに加え、均一な溶液とした
。容器を密栓した後、３７℃で９６時間加温した。加温
終了後、２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６，６）で透析す
ることによって、残存するホルムアルデヒドを除いた。
ホルムアルデヒド処理前後のＨＢｓＡｇにつし）で、Ｅ
Ｌ Ｉ ＳＡ法でＨＢｓＡｇ価を、モルモ・ノドに免疫
して力価を求め、それぞれ平行線検定により、ホルムア
ルデヒド処理前液に対する相対値を算出し、比較した。
Ｌ Ｉ ＳＡ法でＨＢｓＡｇ価を、モルモ・ノドに免疫
して力価を求め、それぞれ平行線検定により、ホルムア
ルデヒド処理前液に対する相対値を算出し、比較した。
結果を表１及び表２に示す。
表Ｉ ＥＬＩＳＡ法によるＨＢｓＡｇ価＊：ホルムア
ルデヒド未処理液のＨＢｓＡｇ価を１．０としたときの
値を示す。
ルデヒド未処理液のＨＢｓＡｇ価を１．０としたときの
値を示す。
表２ モルモットにおける力価
＊：ホルムアルデヒド未処理液の力価を１．０としたと
きの値を示す。
きの値を示す。
Claims (3)
- （１）遺伝子操作によって得られたＢ型肝炎表面抗原を
主成分とするＢ型肝炎ワクチンの製造方法において、Ｂ
型肝炎表面抗原を含有する水溶液をホルムアルデヒド処
理することを特徴とするＢ型肝炎ワクチンの製造方法。 - （２）ホルムアルデヒド処理におけるホルムアルデヒド
の終濃度が０．００９〜０．０２ｗ／ｖ％である特許請
求の範囲第（１）項記載の製造方法。 - （３）ホルムアルデヒド処理が３５〜４０℃、９４〜９
８時間の条件にて行われることを特徴とする特許請求の
範囲第（１）項又は第（２）項記載の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60160970A JPH0780785B2 (ja) | 1985-07-19 | 1985-07-19 | Ｂ型肝炎ワクチンの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60160970A JPH0780785B2 (ja) | 1985-07-19 | 1985-07-19 | Ｂ型肝炎ワクチンの製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6222728A true JPS6222728A (ja) | 1987-01-30 |
| JPH0780785B2 JPH0780785B2 (ja) | 1995-08-30 |
Family
ID=15726099
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60160970A Expired - Lifetime JPH0780785B2 (ja) | 1985-07-19 | 1985-07-19 | Ｂ型肝炎ワクチンの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0780785B2 (ja) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59101426A (ja) * | 1982-11-29 | 1984-06-12 | Green Cross Corp:The | Ｂ型肝炎感染予防用ワクチンの製造方法 |
| JPS6089431A (ja) * | 1983-08-22 | 1985-05-20 | メルク エンド カムパニ− インコ−ポレ−テツド | 形質転換酵母から誘導される免疫原性ＨＢｓＡｇ |
-
1985
- 1985-07-19 JP JP60160970A patent/JPH0780785B2/ja not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59101426A (ja) * | 1982-11-29 | 1984-06-12 | Green Cross Corp:The | Ｂ型肝炎感染予防用ワクチンの製造方法 |
| JPS6089431A (ja) * | 1983-08-22 | 1985-05-20 | メルク エンド カムパニ− インコ−ポレ−テツド | 形質転換酵母から誘導される免疫原性ＨＢｓＡｇ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0780785B2 (ja) | 1995-08-30 |
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