JPS62206445A - クロマトグラフイ−用吸着剤、及びその製造方法、並びに該吸着剤を使用したクロマトグラフイ−カラム - Google Patents

クロマトグラフイ−用吸着剤、及びその製造方法、並びに該吸着剤を使用したクロマトグラフイ−カラム

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JPS62206445A
JPS62206445A JP61049699A JP4969986A JPS62206445A JP S62206445 A JPS62206445 A JP S62206445A JP 61049699 A JP61049699 A JP 61049699A JP 4969986 A JP4969986 A JP 4969986A JP S62206445 A JPS62206445 A JP S62206445A
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 イ、発明の目的 〔産業上の利用分野〕 本発明はクロマトグラフィー用吸着剤、更に詳しくはハ
イドロキシアパタイト粒子吸着剤に関する。又その製造
方法、並びに該吸着剤を使用したクロマトグラフィーカ
ラムに関する。
ココで本発明においてハイドロキシアパタイト（Ｈｙ４
ｒｏｘｙａｐａｔｉｔｅ）とは、ＭＩＯ（２０４）　６
　Ｘ２　（７）基本組成をもつ六方晶系Ｐ６３／ｍに属
するアパタイト系化合物群のうちの、Ｍ＝Ｃａ、Ｚ＝　
Ｐ、Ｘ−ＯＨであるリン酸カルシウムの一種としてのＣ
ａｌ。
（ＰＯ４）　Ｇ　（ＯＨ）２の化学組成物質（大方晶系
単位格子：ａΔｂ　＝１２０°、ａＡｃ＝ｂＡｃ＝９０
°、困−１ｂｌ＝　ｆｌ、４２人、ｌ　ｃｌ＝　ｅ、ｅ
ｅλ）を意味する。なお、上記基本組成を倍にした単斜
晶系Ｐ２１／ｂとしてとらえる場合もある。以下ハイド
ロキシアパタイトをＨＡｐと略記する。
〔従来の技術〕
）ＩＡｐ粒子はカラムクロマトグラフィーのカラム内充
填吸着剤（固定相剤）として優れたクロマト分離能（物
質分離・展開能）を有し、該粒子をカラム内充填吸着剤
とするクロマトグラフィー（ＨＡｐクロマトグラフィー
）は、他の吸着剤例えばイオン交換樹脂・活性アルミナ
・炭酸カルシウムなどを用いる場合には困難であった。
微細な構造差を有する物質量の相互分離、例えば分子量
１０４〜１０クダルトンの生体関連高分子（免疫グロブ
リン・インターフェロン・酵素類等の蛋白質類、ＲＮＡ
・　ＩＩＮＡ・プラスミド類の核耐類、ウィルス類など
）についても鋭敏・高精度に分取操作をすることが可能
であり、例えばバイオテクノロジー分野での遺伝子組換
え、細胞融合、細胞大量倍養法等により合成された各種
の目的有用物質の高純度分離精製等に不可欠な手段とし
て活用されるに至っている。
ところで、カラムクロマトグラフィーにおいて高精度φ
能率的なりロマト分離を安定に実行させるには、カラム
内に固定相として充填する吸着剤粒子物質それ自体のク
ロマト分離能の優秀性の他に、 ａ、その方ラム内に試料流体・キャリヤ流体を導入流通
させたとき、充填吸着剤粒子例々の相互間隙を流通する
流体の流れ速度がカラム横断面内各部に関して可及的に
均一なものであること、ｂ、導入流体のカラム内単位断
面積・単位時間当りの流通流量レベルが可及的に高いこ
と、が挙げられる。
而して上記ａ項のカラム断面に関する導入流体の流れ速
度は、カラム内に充填した吸着剤粒子側々の粒子の大き
さが小さく、且つその個々の粒子相互の大きさのバラツ
キ幅が小さければ、カラム横断面内各部に関しての充填
粒子側々の相互間隙の大きさのバラツキ幅が小さくなっ
て均一化される。しかし個々の粒子の大きさをあまりに
小さなものにしてしまうことは前記す項のカラム内導入
流体に対する流通抵抗を増加させ流通流量レベルを低下
させる結果となる。
従ってカラム内に充填する吸着剤粒子は、優れたクロマ
ト分離能を有する物質であると共に、個々の粒子の大き
さはカラム内導入流体のある程度以上の流通流量レベル
が確保される大きさのもので、且つその大きさのバラツ
キ幅が小さく粒の揃ったものであることが高精度・能率
的なりロマト分離を安定に実行させる上での大きな要因
となる。
そこで、ＨＡｐクロマトグラフィーにおいてはカラム内
に充填するＨＡｐ粒子として下記のＡタイプ若しくはＢ
タイプのものが一般に使用されている。又本出願人はＡ
タイプのものよりも推奨される下記Ｃタイプのものを開
発した。
（１）Ａタイプ チゼリウス式製造法（Ａ、　Ｔｉ５ｅｌｉｕｓ　、　Ｓ
、　Ｈｊｅｒｔ−ｅｎ　ａｎｄ　Ｏ，Ｌｅｗｉｎ　、　
Ａｒｃｈ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、。
豆、１３２（１９５６））で得たＨＡｐ結晶粒子。即ち
ブルスハイト結晶粒子（Ｂｒｕｓｈｉｔｅ＋（ＥａＨＰ
０４　ｍ　２Ｈ２０）を出発物質として該結晶を水中に
懸濁してアルカリを作用させることにより生成させたＨ
Ａｐ結晶粒子であり、出発物質たるブルスハイト結晶粒
子の形状を実質的にそのまま引き継いだ、通常厚さ１〜
３ｐｍ、平均直径（長軸方向）数１０ｐｍ程度の板状も
しくは鱗片状の比較的大型の実質的に単結晶の粒子であ
る。
（２）Ｂタイプ ）ＩＡｐ微細結晶一次粒子が凝集した二次粒子。このタ
イプの粒子は一般に下記のような要領で製造される。即
ちＣａ（Ｏ）ｌ）２　、０ａＣ１２、Ｃａ　（ＮＯ３）
　２、Ｃａ　（ＣＨ３Ｃｏｏ）２などの（ｌａ塩水溶液
又は懸濁液と、ＮＨ４Ｈ２ＰＯ４、（ＮＨ４）　２　　
ＨＰＯ４、Ｈ３ＰＯ４などのＰ０４塩水溶液とを塩基性
条件下で混合する。そうすると通常１μｍ以下の微細な
ＨＡｐ一次結晶粒子が生成する。その一次粒子懸濁液を
スプレー乾燥処理することによりＨＡｐ一次粒子が乾燥
凝集した直径１〜１１０７ｔ程度の実質的に球状の二次
粒子体が得られる。
（３）Ｃタイプ 本出願人の先の提案（特願昭８１−１８８６８号）に係
る製造法により得られるＨＡｐの実質的に単結晶の粒子
。即ちブルスハイト結晶粒子を出発物質とし、これを一
旦脱水相転移温度以上〜分解温度以下の範囲で加熱して
モネタイト結晶粒子（Ｍｏｎｅｔｉｔｅ：ｃａＨＰＯ４
）に脱水相転移させ、それにアルカリを作用させてＨＡ
ｐの実質的に単結晶の粒子を生成させる。これにより得
られるＨＡｐ粒子は出発物質たる比較的大型の板状もし
くは鱗片状のブルスハイト結晶粒子が結晶体面内で数ｇ
ｍ程度の大きさの細片に砕は状態となった厚さ１〜３ｐ
Ｌｍ、直径数ｇｍの全体的に大きさ・形の揃ったもので
、前記ＡタイプのＨＡｐ粒子即ち出発物質たるブルス／
＼イト結晶粒子の大きさΦ形をそのまま引き継いだ形態
の比較的大型の板状もしくは鱗片状粒子よりも大きさ・
形のバラツキ幅が小さく、該Ａタイプのものよりもクロ
マトグラフィー用吸着剤として優れる。
〔発明が解決しようとする問題点〕
而して前述ａ項の均一流れ性、及びｂ項の高流量レベル
性の総合的性能からいえば、上記Ａ・Ｂ・Ｃの３つのタ
イプのＩ（Ａｐ粒子のうちでもＢタイプのＨＡｐ一次粒
子凝集二次粒子が最も高く評価される。
しかし、該３７４７粒子を吸着剤として充填したカラム
の繰返し使用性（耐久性）はＡタイプやＣタイプの粒子
を充填したカラムのそれよりも格段に劣り、早期におい
てカラム交換もしくは吸着剤の詰め替えをよぎなくされ
る。
具体的にＡタイプやＣタイプ粒子の充填カラムについて
は実際上５０回以上の繰返し使用にも十分耐え得るが、
３７４７粒子の充填カラムについてはせいぜい１０回程
度の繰返し使用で異常もしくは不正確なりロマトグラム
が出力される耐久末期症状を呈して使用に耐えなくなる
。その理由は次の通りである。
従来のＢタイプ粒子即ちＨＡｐ微細結晶一次粒子が乾燥
凝集した二次粒子の凝集一次粒子相互の結合力は然程強
いものではなく、該粒子を固定相剤としてカラム内に充
填してクロマト操作を実行した場合その二次粒子表面部
の凝集一次粒子分が、カラム内への導入流体の流通力で
実際上比較的容易に逐次に離脱していく。そしてクロマ
ト操作が繰返して実行される間に上記のように逐次に離
脱していく微細な一成粒子分でカラム内充填二次粒子相
互間各部の流体流通隙間通路が局部的に次第に閉塞化し
ていき、カラム内導入流体は未だ閉塞していない二次粒
子相互間隙間通路に沿って集中的に流通する片寄り的流
通を生じるようになり、その結果カラム横断面内各部に
関する導入流体の流れ速度は経時的に次第に不均一化し
ていく。その不均一化がある程度以上進行した状態にな
ると、充填吸着剤に形成される試料物質吸着帯の態様、
その展開態様に不整を生じて出力クロマトグラムに異常
もしくは不正確を生じることになる。
本発明は上記に鑑みて、特にＢタイプ粒子即ち）ＩＡｐ
微細結晶一次粒子が凝集した二次粒子吸着剤についてそ
の繰返し使用性を大幅に向上させたもの（第１の発明）
を提供することを目的とする。
又そのような二次粒子吸着剤の製造方法（第２の発明）
を提供することを目的とする。
更にそのような二次粒子吸着剤を利用したクロマトグラ
フィーカラム（第３の発明）を提供することを目的とす
る。
口、発明の構成 〔問題点を解決するための手段〕 第１の発明は、ハイドロキシアパタイトの微細結晶一次
粒子が凝集した二次粒子であって、凝集一次粒子相互が
焼成結合している、ことを特徴とするクロマトグラフィ
ー用吸着剤を要旨とする。
又、第２の発明は、ハイドロキシアパタイトの微細結晶
一次粒子が凝集した二次粒子を約３００℃以上〜分解温
度以下の温度で加゛熱処理する、ことを特徴とするクロ
マトグラフィー用吸着剤の製造方法を要旨とする。
更に、第３の発明は、ハイドロキシアパタイトの微細結
晶一次粒子が凝集した二次粒子であって、凝集一次粒子
相互が焼成結合している吸着剤を充填した主カラムと、
該主カラムの流体導入口側に主カラムに対して連通接続
拳切離し自在に取付けられ、吸着剤としてカラム内導入
流体で受ける化学的φ物理的負荷に耐性を有する、凝集
二次粒子タイプ以外のハイドロキシアパタイト粒子を充
填した副カラム（プレカラム）とからなる、ことを特徴
とするクロマトグラフィーカラムを要旨とする。
〔作　用〕
第１の発明である吸着剤は、ＨＡｐの微細結晶一次粒子
の凝集二次粒子ではあるが、その凝集一次粒子相互が焼
成結合していることにより相互の結合力が従来のＢタイ
プ粒子即ち単なる乾燥凝集二次粒子体の場合よりもはる
かに強く、そのために該二次粒子吸着剤を固定相剤とし
てカラム内に充填してクロマト操作を実行した場合には
カラム内への導入流体の流通力による二次粒子表面部の
凝集一次粒子分の経時的逐次離脱量は従来のＢタイプ粒
子に比べて実際上極めてわずかずつに押えられる。従っ
て該二次粒子吸着剤を充填したカラムのカラム内横断面
各部に関する導入流体の均一流れ性、及び高流量レベル
性は長期にわたって良好に持続される。即ち繰返し使用
性が飛躍的に向上する。又後述の実施例に示すように従
来のＢタイプ粒子を使用する場合よりもカラム内への流
体導入圧力（カラム内に流体を所定供給量ｍｌ／ｍｉｎ
で流通状態にするために必要な流体導入圧力）はかなり
低くてすみ、　しかも良好なりロマトグラフィーを実行
させることができるという効果も見出された。
第２の発明である製造方法により、第１の発明に係る一
次粒子相互が全体に強固に焼成結合したタイプの二次粒
子吸着剤を容易に量産することができる。
更に第３の発明のようなカラムを構成することにより、
該二次粒子吸着剤を固定相剤として充填した主カラムの
使用寿命をのばすことができる。
即ち吸着剤充填カラムにクロマト操作のために流体を導
入流通させたとき、カラム内充填吸着剤のうちカラムの
流体導入口側寄りの吸着剤部分に対して特に大きな化学
的・物理的負荷が作用する。吸着剤粒子がＣタイプやＡ
タイプのＨＡｐ粒子の場合はそのような負荷の繰返し作
用にもとすく該充填吸着剤部分の劣化進行は緩慢である
が、凝集二次粒子の場合はそのような負荷の繰返し作用
に基づく該吸着剤部分の劣化が比較的早期に進行する。
そこで本発明では該二次粒子吸着剤を固定相剤として充
填してなる主カラムに対して、化学的・物理的繰返し負
荷に耐性を有するＣタイプやＡタイプのようなＩ（Ａｐ
顆粒子或はその他の粒子を充填した副カラムを用意し、
この副カラムをプレカラムとして」二記主カラムの流体
導入口側に連通接続・切離し自在に取付けて使用するこ
とにより前記の化学的・物理的負荷を該負荷に耐性を有
する副カラム内の上記充填吸着剤に担わせるものである
。そうすれば二次粒子吸着剤を充填した主カラムの該カ
ラム流体導入口側寄りの吸着剤部分に作用する化学的・
物理的負荷が軽減され、該主カラム全体の繰返し使用性
（寿命）が向上する。
〔実施例〕
（１）　ＨＡｐ微細結晶一次粒子が凝集した二次粒子の
製造 濃度２４．５ｇ／ｌ（０，３３Ｍ）のＣａ（ＯＨ）２懸
濁水と、濃度２３．０　ｇ／ｌ（０，２Ｍ）のＮＨ４Ｈ
２ＰＯ４水溶液とを　１：１の割合で混合し、４０℃で
３時間放置する。そうすると通常１ｇｍ以下（本実施例
では０．１７ｐｍ程度）の微細で実質的に格子欠陥のな
い即ちストイキオメトリツク（Ｓｔｏｉｃｈｉｏｍｅｔ
ｒｉｃ）なＨＡｐ一次結晶粒子が生成沈澱する。このＨ
Ａｐ一次結晶粒子の懸濁水をスプレー乾燥処理（ヤマト
化学（株）、スプレードライヤ、ＤＬ−４１型、商品コ
ード２１２７０８）　して、ＨＡｐ一次結晶粒子が凝集
した直径１〜１０μｍ程度の実質的に球状の二次粒子を
製造した。
上記で製造したＨＡｐの乾燥凝集二次粒子は前述従来の
Ｂタイプの吸着剤に相当する。該製造したＨＡｐ凝集二
次粒子の一部を比較試料として取り分けた。この試料を
非熱処理粒子Ｂ２とする。
（２）熱処理（シンターリング） 上記　（１）で製造したＨＡＰ凝集二次粒子を平炉つぼ
に入れて電気加熱炉により７００℃−３０分間熱処理し
て一次粒子の凝集二次粒子相互を焼成結合化させて本発
明に係るＨＡｐ二次粒子を得た。これを熱処理粒子Ｂ１
とする。
第１図はこの熱処理粒子Ｂ１の走査型電子顕微鏡写真で
ある。尚、非熱処理粒子Ｂ２も電子顕微鏡でみる限り外
見はこの熱処理粒子Ｂｌと実質的に同じで区別できるほ
どの差はみられない。
凝集一次粒子相互を焼成結合化させるためのＨＡｐ二次
粒子の熱処理温度は一般に３００℃以下の低い温度では
一次粒子相互の焼成結合化が実質的になされないか、生
じても焼成結合力が不十分のものとなったり、焼成時間
をかなり長くする等の処置をする必要があったりして好
ましくない。焼成時間は一度に熱処理する二次粒子量、
二次粒子の平均粒径の大小等によりケースバイケースで
異なるので、予備試験等により適正時間を決定する。一
般的には３０分程度或はそれ以上熱処理すればよい。
（３）クロマト操作 上記（２）項の熱処理粒子Ｂ１を、内径６ｍｍ、有効長
３ｃｍのステンレスカラムｌ（第２図）に固定相剤とし
て充填してクロマトグラフィーカラムとした。２・３は
該カラムの流体導入口キャップと同流出口キャップ、４
・５はカラム１内の流体導入口キャップ２側と同流出口
キャップ３側に存在させたフィルタ部材であり、固定相
剤としての熱処理粒子Ｂ１はこのフィルタ４−５間のカ
ラム内に充填しである。この方ラムを被検カラムとする
。
一方、上記被検カラムと同様のカラムに前記（１）項の
非熱処理粒子Ｂ２を同様に充填してクロマトグラフイー
カラムとし、これを比較カラムとする。
而して上記の被検カラムと比較カラムについて夫々下記
のクロマト操作を繰返し実行して繰返し使用性（耐久性
）を試験した。
■ニワトリの卵白リゾチームを試料とし、リン酸カリウ
ム緩衝液　（ｐ）Ｉｚ８．８）をキャリア液とする、線
形モル濃度勾配溶出法 ■リン酸カリウム緩衝液の初期濃度＝１ｍＭ、同線形濃
度勾配＝　７　ｒａ　Ｍ／ｍｌ■キャリア液のカラム自
供給量＝０．５ｍｌ／１ｎ■温度−室温 （４）実験結果 第３図グラフは横軸にクロマト操作の繰返し回数を、縦
軸に各回のクロマト操作時におけるカラム内導入流体圧
力（前記設定したキャリア液のカラム内供給量０．５　
ｍｌ／ｗｉｎを維持させるための圧力）を夫々とり、被
検カラムについての各クロマト操作回毎の上記圧力の推
移を（×）印で、比較カラムについてのそれを（−）印
でプロットしたものである。
この第３図グラフから、被検カラムの場合は各クロマト
操作口を通じて圧力レベルが比較カラムのそれよりもか
なり低くて足りること、そして比較カラムの場合は回を
重ねる毎に圧力が上昇していくことがわかる。従って被
検カラムの方が実用」二有利であることがわかる。
第４図（ａ）は被検カラムの場合に得られる正常状態の
クロマトグラム、第５図（ａ）は比較カラムの場合の同
クロマトグラムである。ここで１８５　図（ａ）の比較
カラムについての正常クロマトグラムの場合は第４図（
ａ）の被検カラムのそれとの比較において、得られるリ
ゾチームクロマトパターンは主ピーク直前にあられれる
べき微小ピークａ（第４図）が欠如しているという点で
すでにやや異常なものである。
而して比較カラムの場合は１０回目のクロマト操作時に
は第５図（ｂ）のように、１つであるべきクロマトピー
ク（２点鎖線示＝第５図（ａ）のクロマトピーク）が２
つ以上に分裂化した異常なりロマトダラムが出力される
に至り、以後正常なりロマトグラフィーの実行は不能と
なった。
一方被検力ラムの場合は２１回目のクロマト操作時には
じめて第４図（ｂ）のように、出力クロマトピークに極
くわずかなピーク分離がみられるようになった。このピ
ーク分離は精度的にいまだ十分に許容範囲内であり、カ
ラムは以後も引続き繰返し使用が可能である。
従って熱処理粒子Ｂ１を固定相剤として充填したクロマ
トグラフィーカラムは、非熱処理粒子Ｂ２を充填したカ
ラムよりも繰返し使用回数が大幅に多いものであること
がわかる。
第６図は熱処理粒子Ｂ１を固定相剤として充填したカラ
ムを主カラムＫｌ（構成は第２図のカラムと同じ）とし
、その主カラムに１に、前記ＣタイプやＡタイプのよう
なＨＡｐ単結晶粒子Ｇ（Ａ）を充填した副カラムに２を
主カラムＫｌの流体導入口側に連通接続・切離し自在に
取付けた一形態例を示すものである。作用・効果は前記
作用の項で説明した通りである。１１〜１５は副カラム
に２についてのカラム本体・流体導入ロキヤ・ンプ・同
流出口キャップΦ」二下フィルタである。１６は主カラ
ムＫｌと副カラムに２を着脱自在に連通接続する継手部
である。
ハ、発明の効果 以上のように本発明に依ればＨＡｐ微細結晶一次粒子の
凝集二次粒子タイプのクロマトグラフィー用吸着剤につ
いて繰返し使用性を大幅に向上したもの、或は繰返し使
用性に優れたクロマトグラフィーカラムを得ることがで
き、所期の目的がよく達成される。
【図面の簡単な説明】
第１図は熱処理したＨＡｐ微細結晶一次粒子凝集二次粒
子の走査型顕微鏡写真、第２図は試験に使用した直管形
被検カラム及び同比較カラムの形態を示す縦断面図、第
３図は被検カラムと比較カラムの繰返し使用性（耐久）
試験グラフ、第４図（ａ）は被検カラムについての正常
なりロマトグラム、第５図（ａ）は比較カラムにっての
同クロマトグラム、第４図（ｂ）は被検カラムについて
やや異常がみられはしめたクロマトグラム、第５図（ｂ
）は比較カラムについての異常クロマトグラム、第６図
は主・副２カラム式のカラム例の縦断面図。 ■はカラム本体、Ｂ１・Ｂ２・Ｃ（Ａ）は充填吸着剤、
Ｋ１は主カラム、Ｋ２は副カラム（プレカラム）。 第１図 一］勢。ニ 第５図（ｂ） 第５図（ａ） 咋問

Claims (8)

    【特許請求の範囲】
  1. （１）ハイドロキシアパタイトの微細結晶一次粒子が凝
    集した二次粒子であって、凝集一次粒子相互が焼成結合
    している、ことを特徴とするクロマトグラフィー用吸着
    剤。
  2. （２）ハイドロキシアパタイトの凝集二次粒子を構成す
    る一次粒子は直径１μｍ以下の粒子であり、その凝集二
    次粒子は直径１〜１０μｍ程度の実質的に球状粒子であ
    る、特許請求の範囲第１項に記載のクロマトグラフィー
    用吸着剤。
  3. （３）ハイドロキシアパタイトの凝集二次粒子を構成す
    る一次粒子は実質的にその化学組成がストイキオメトリ
    ックなものである、特許請求の範囲第１項に記載のクロ
    マトグラフィー用吸着剤。
  4. （４）ハイドロキシアパタイトの微細結晶一次粒子が凝
    集した二次粒子を約３００℃以上〜分解温度以下の温度
    で加熱処理する、ことを特徴とするクロマトグラフィー
    用吸着剤の製造方法。
  5. （５）ハイドロキシアパタイトの一次粒子の凝集二次粒
    子は、一次粒子の懸濁液をスプレー乾燥して製造された
    ものである、特許請求の範囲第４項に記載のクロマトグ
    ラフィー用吸着剤の製造方法。
  6. （６）ハイドロキシアパタイトの一次粒子懸濁液は、Ｃ
    ａ（ＯＨ）＿２、ＣａＣｌ＿２、Ｃａ（ＮＯ＿３）＿２
    、Ｃａ（ＣＨ＿３ＣＯＯ）＿２などのＣａ塩水溶液又は
    懸濁液と、ＮＨ＿４Ｈ＿２ＰＯ＿４、（ＮＨ４）＿２Ｈ
    ＰＯ＿４、Ｈ＿３ＰＯ＿４などのＰＯ＿４塩水溶液とを
    塩基性条件下で混合することにより生成されるハイドロ
    キシアパタイトの微細結晶一次粒子の懸濁液である、特
    許請求の範囲第５項に記載のクロマトグラフィー用吸着
    剤の製造方法。
  7. （７）ハイドロキシアパタイトの微細結晶一次粒子が凝
    集した二次粒子であって、凝集一次粒子相互が焼成結合
    している吸着剤を充填した主カラムと、該主カラムの流
    体導入口側に主カラムに対して連通接続・切離し自在に
    取付けられ、吸着剤としてカラム内導入流体で受ける化
    学的・物理的負荷に耐性を有する、凝集二次粒子タイプ
    以外のハイドロキシアパタイト粒子を充填した副カラム
    とからなる、ことを特徴とするクロマトグラフィーカラ
    ム。
  8. （８）副カラムに充填されるハイドロキシアパタイト粒
    子は、チゼリウス式製造法に従って製造したもの、或は
    ブルスハイト結晶粒子を出発物質としてこれを脱水相転
    移温度以上〜分解温度以下の範囲で加熱してモネタイト
    結晶粒子に脱水相転移させ、それにアルカリを作用させ
    て得たものである、特許請求の範囲第７項に記載のクロ
    マトグラフィーカラム。
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