JPS6219768A - 高比重リポ蛋白コレステロ−ル測定用沈殿試薬 - Google Patents

高比重リポ蛋白コレステロ−ル測定用沈殿試薬

Info

Publication number
JPS6219768A
JPS6219768A JP15771985A JP15771985A JPS6219768A JP S6219768 A JPS6219768 A JP S6219768A JP 15771985 A JP15771985 A JP 15771985A JP 15771985 A JP15771985 A JP 15771985A JP S6219768 A JPS6219768 A JP S6219768A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
compd
specific gravity
reagent
lead
precipitation
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
JP15771985A
Other languages
English (en)
Other versions
JPH0711525B2 (ja
Inventor
Iyoko Miki
三木 位代子
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
YATORON KK
Mitsubishi Kagaku Iatron Inc
Original Assignee
YATORON KK
Mitsubishi Kagaku Iatron Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by YATORON KK, Mitsubishi Kagaku Iatron Inc filed Critical YATORON KK
Priority to JP60157719A priority Critical patent/JPH0711525B2/ja
Publication of JPS6219768A publication Critical patent/JPS6219768A/ja
Publication of JPH0711525B2 publication Critical patent/JPH0711525B2/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Landscapes

  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 「産業上の利用分野」 本発明は血清中の高比重リポ蛋白コレステロール測定に
おいて1分離剤を使用する測定法に用いられる沈殿試薬
の改良に関する。
「従来の技術」 血液中に存在する脂質は遊離脂肪酸がアルブミンと結合
している以外はリポ蛋白の構造の中に組み込まれていて
、カイロミクロン(CHM ) 、 m低比重リポ蛋白
(VLDL)、低比重リポ蛋白(I、DI、 )、高比
重り一蛋白(HDL )等として存在し、その内=xv
ステロールは特にVLDL 、 LDL 、 HDLに
分布している。HDLは動脈硬化による心疾患の予防因
子とされてお夛、従ってHDLの代シに高比重リポ蛋白
コレステロール(HDL−コレステロール)t−測定す
ることは臨床的によル重要な意義を有している。
現在HDLコレステロール測定法としては、1)超遠心
法、2)電気泳動法、3)沈澱法が広く知られでいる。
1)は分離操作に長時間必要なのと機器そのものが高価
で安価な測定が望めない点など日常検査には不向きであ
シ、2)は支持体の違いによシ分離能が異なシ使用され
る検出試薬によって差異が生じるなど定量面で問題が残
っている。従って現在日常検査としては3)沈澱法が広
く使われている。
この沈澱法は沈澱試薬としてポリアニオンと二価金属イ
オンを使用してCHM 、 LDL 、 VLDLを沈
澱させ、上澄中に残るHDL中のコレステロール、即ち
HDL−コレステロールを化学的にあるいは酵素を使用
して測定する方法であって沈澱試薬としては従来、ヘパ
リン−カルシウム法、デキストラン硫酸−マグネシウム
法、リンタングステン酸−マグネシウム法等が広く使わ
れている。
これらの沈澱法では血清と沈澱試薬を混合し、一定時間
放置し、3000回転/回転後にて遠心分離させた後、
上澄部分を一定量別の試験管に採取し、化学反応あるい
は酵素反応を行なうというものである。
しかしながら、この方法は検体量を多量必要とする上に
二度の検体採取の手間がかかった。
これに対し、分離剤を使用した改良法(%開昭56−1
55853 )も報告されている。即ち血清と沈澱試薬
を混合し一定時間放置するまでは前法と同じであるが、
遠心分離の時に分離剤を試験管上にのせ分離し最下部に
沈澱層、中間部分に分離剤、最上部にはHDL分画の上
清を分離させ、上澄部分に直接酵素試薬を分注添加する
方法である。
この改良法によれば二度の検体採取を必要とせず、検体
が少量で済むという利点がある。ところで現在血液血清
分離剤としては比重1.030〜i、 o s oのシ
リコン・アクリル樹脂等の合成ポリマーが日常検査に一
般に広く普及しているが、これらの血液血清分離剤と従
来の沈澱試薬を組み合せて特開昭56−155853の
方法に従って分離を行なおうとしても、沈澱は分離剤上
に浮上してしまい全く使用できない。これは人の全血比
重は男子1.055〜1.063 、女子1.052〜
1.060、又血漿は1.024〜1.029で同一血
液の血清比   □重は血漿のそれよj!l)0.00
05小さいに過ぎず、使用した上記分離剤の比重が特開
昭56−155853に用いられている分離剤の比重と
異なっていた為であると思われる。
「発明が解決しようとする問題点」 そこで本発明者は上記の如き一般に普及している分離剤
を用いて血清を完全に沈殿分離させるのに適した沈殿試
薬を種々検討した結果、本発明に到達した。
本発明は検体の沈澱物、分離剤、上澄部分の各分離層を
鮮明に形成させ、かつ精度も高く、従来法とも相関の良
い方法の開発について研究した結果、沈殿試薬に鉛化合
物を添加することによシ目的を達し得ることを見出した
ものである。
「問題点を解決するための手段」 すなわち、本発明は血清試料にカイロミクロン、超低比
重リポ蛋白および低比重IJ 、39蛋白を沈殿させる
沈殿試薬を添加し、更に比重1.030〜1.050の
ペースト状分離剤を用いて遠心分離し沈殿させ、高比重
リポ蛋白を含む上澄を分離して高比重リポ蛋白コレステ
ロールを測定する高比重リポ蛋白コレステロール測定法
に用いられる沈殿試薬において、0.01〜2. 0w
/v %の水溶性鉛化合物もしくは0.01〜2. 0
w/v %の水溶性鉛化合物、0.5〜5. 0w/v
 %の水溶性中性重合体および0.01〜0.2 v/
v ’Aのニッケル化合物を含有し、デキストラン硫酸
ナトリウム、デキストラン硫酸マグネシウム、ヘノクリ
ンマンガン、ヘパリンカルシウム、ポリエチレングリコ
ールから選ばれる化    “合物を主成分とすること
を特徴とする高比重リポ    □蛋白コレステロール
測定用沈殿試薬である。
以下、本発明の詳細な説明する。
本発明の沈殿試薬の主成分は、従来広く使用されている
沈殿試薬の主成分のうちデキストラン硫酸ナトリウム、
デキストラン硫酸マグネシウム、ヘノヤリンマンガン、
ヘノクリンカルシウム、fすx     □チレングリ
コール等から選ばれる化合物である。
これ等の主成分に配合される他の化合物は、これ   
 ゛等の化合物を主成分とする従来の沈殿試薬に用いら
れているものがその!ま利用できる。
本発明に用いられる本発明の最も重要な要素である鉛化
合物は水溶性のものであシ、硝酸鉛および酢酸鉛である
。鉛化合物の含有量は0.01〜2、 0w/v %で
ある。0.01 w/v q6未満テハ沈殿分離の効果
に乏しく、逆に濃度をあげると上澄中のHDL−コレス
テロール値の測定値が高くなる傾向にあるので2. 0
w/v %までであシ、好ましくは0、2 w/vチ前
後である。
本発明に用いられる水溶性中性重合体は、沈殿を安定さ
せる働きをするものであシ、例えばポリビニルピロリド
ン、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコール等
があげられるが好ましくはポリエチレングリコール6o
ooである。
該重合体の使用濃度は沈殿安定効果の点から0、5〜5
. 0w/v%であシ、好ましくは0.2 w/v %
前後である。
本発明に用いられる二、ケル化合物は沈殿が浮遊しない
ようにしっかシしたものにして分離効果を高める働きを
するものであシ、塩化ニッケル、酢酸ニッケル、硝酸ニ
ッケル、硫酸ニッケル等が挙げられる。
ニッケル化合物の使用濃度は0.01φ〕未満では効果
に乏しく、逆に濃度をあげるとHDLコレステロール値
の測定値が低めになるので0.01〜0、2 w/vチ
であシ、好ましくはHDLコレステロール値が低めにな
らない0.1 w/v %以下である。
本発明においてはHDL−コレステロールの測定はすで
に確立されているどのコレステロール定量法を使用して
も良い。
又分離剤は比重が1.030〜1.050のペースト状
分離剤であシ、現在血液血清分離用に使用されているも
のでコレステロール測定値に影響を与えるものでなけれ
ばすべてのものに適用できる。
本発明は以上のような構成であるので、一般に広く使用
されている血液血清分離剤をそのまま使用できるHDL
−コレステロール用測定試薬を提供できる。     
                。
「実施例」 次に実施例によ)本発明およびその効果を詳しく説明す
る。
〈試験方法〉 1、本法 血清0.1−に沈澱試薬0.1 mを加え混和し1゜分
間放置後3000回転/分5分間遠心を行ない分離剤人
シキャップ式容器を試験にのせ更に3000回転/分5
分間遠心操作を行なう。最下部に沈澱物、中間部に分離
剤、最上部にはHDL上溌が形成されるので、この試験
管に直接コレステロール測定試薬を分注し、37℃5分
間加温し室温にもどした後120分以内に試薬ブランク
を対照とし、波長580 nmの吸光度を測定する。
2、従来法 血清0.2Mに沈澱試薬0.2dを加え混和し10分間
放置後3000回転/分10分間遠心させると、下部に
沈澱物、上部にHDL上澄が形成させるので、別の試検
管に上澄0.1 m採取し、コレステロール測定試薬を
分注し、37℃5分間加温し室温にもどした後120分
以内に試薬ブランクを対照とし波長580nmの吸光度
を測定する。
〈沈澱試薬〉 従来の組成物による沈澱試薬 デキストラン硫酸ナトリウムi、 Oi!−と塩化ナト
リ’7 m 8.5 N−1並びに塩化マグネシウム8
.1y−ヲ80 Qm/の再蒸溜で溶解し混合溶解し、
再蒸溜水を加えて11とする。
本発明の組成物による沈澱試薬 沈澱試薬1 デキストラン硫酸ナトリウム1.0?と塩化ナトリウム
8.5 iPを800m1の再蒸溜水で溶解し、酢酸鉛
3水和物2.0?を1%酢酸溶液20m1に溶かしてお
いたものを添加する。次に塩化マグネシウム8. I 
Ji’を混合溶解し再蒸溜水を加えて1ノとする。
沈澱試薬2 デキストラン硫酸ナトリウム1.0ノと塩化ナトリウム
8.5 Pを8001/の再蒸溜水で溶解し、ポリエチ
レングリコール600020.0 、Pを加え溶解させ
る。次に酢酸鉛3水和物2.o?を1チ酢酸溶液2oy
K溶かしておいたものを添加する。
次に塩化マグネシウム8.1?、塩化ニッケル0.7ノ
を溶解し、再蒸溜水を加えて11とする。
くコレステロール測定用試薬〉 コレステロールエステラーゼ500 u/l 、コレス
テロールオキシダーゼ600 u/13、ペルオキシダ
ーゼ5000 u/l、4アミノアンチピリy 0.5
蛎、3−5ジメトキシアニリノプe!パンスルホン酸0
、5 mM 、 p)(7,3、0,2Mリン酸緩衝液
に溶解し再蒸溜水で1)とする。
く分離剤〉 血液血清用分離剤比重1.035〜1.040シリコン
様合成プリマー(商品名タリンシール)実施例1 分離能の比較 表1は本発明の沈澱試薬1および2を用いる方法と従来
の沈澱試薬を用いる方法とで、分離剤を使用した前述の
試験方法1にて分離能を比較したものである。従来法の
組成物と比較して本発明の組成物の分離能は、澄明血清
孔ピ血清とも良好な結果を示している。
実施例2 コレステロール測定値の影響 第1図のグラフは従来の組成物による沈澱試薬で、分離
剤を使用しない従来法の試験方法によるコレステロール
測定法と本発明の組成物による沈澱試薬2で分離剤を使
用した試験方法によるコレステロール測定値の相関であ
るが、n=25、y−0,999x−2,0、γ=0.
995と良い相関を示し、コレステロール測定値への影
響は全くないことを示している。
実施例3 同時再現性 表−2は本発明の沈澱試薬2で分離剤を使用した試験方
法により HDL−コレステロール低値検体と高値検体
について同時再現性を調べたものである。検体i n 
= 10 、x 31.86 q/dl %SDO,5
29、CVl、66q6又検体2n=10.x89.8
6’f/dt。
SDo、828、CVo、922%  といずれも良好
な結果で、本発明の組成物による沈殿試薬が、精度の良
い試薬であることを示している。
表  2 同時再現性 以上のデータよシ拳法が日常検査に充分適用できること
は明らかである。
「発明の効果」 以上から明らかな如く、本発明によれば分離剤を用いる
血清中の高比重リポ蛋白コレステロール測定法において
、沈殿試薬中に鉛化合物及び必要に応じ水溶性中性重合
体、ニッケル化合物を配合することによシ、優れた沈殿
分離効果と検査処理の効率化をもたらし、しかも、従来
汎用の分離剤と組合せることのできる従来にない優れた
沈殿試薬を提供することが可能となった。
【図面の簡単な説明】
第1図は、本発明によるコレステロール測定値と従来の
分離剤を使用しない方法によるコレステロール測定値の
相関を示すグラフ図である。 X・・・従来法、y・・・拳法 第1図

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. 血清試料にカイロミクロン、超低比重リポ蛋白および低
    比重リポ蛋白を沈殿させる沈殿試薬を添加し、更に比重
    1.030〜1.050のペースト状分離剤を用いて遠
    心分離し沈殿させ、高比重リポ蛋白を含む上澄を分離し
    て高比重リポ蛋白コレステロールを測定する高比重リポ
    蛋白コレステロール測定法に用いられる沈殿試薬におい
    て、0.01〜2.0w/v%の水溶性鉛化合物もしく
    は0.01〜2.0w/v%の水溶性鉛化合物、0.5
    〜5.0w/v%の水溶性中性重合体および0.01〜
    0.2w/v%のニッケル化合物を含有し、デキストラ
    ン硫酸ナトリウム、デキストラン硫酸マグネシウム、ヘ
    パリンマンガン、ヘパリンカルシウム、ポリエチレング
    リコールから選ばれる化合物を主成分とすることを特徴
    とする高比重リポ蛋白コレステロール測定用沈殿試薬。
JP60157719A 1985-07-17 1985-07-17 高比重リポ蛋白コレステロ−ル測定用沈殿試薬 Expired - Lifetime JPH0711525B2 (ja)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP60157719A JPH0711525B2 (ja) 1985-07-17 1985-07-17 高比重リポ蛋白コレステロ−ル測定用沈殿試薬

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP60157719A JPH0711525B2 (ja) 1985-07-17 1985-07-17 高比重リポ蛋白コレステロ−ル測定用沈殿試薬

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JPS6219768A true JPS6219768A (ja) 1987-01-28
JPH0711525B2 JPH0711525B2 (ja) 1995-02-08

Family

ID=15655875

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP60157719A Expired - Lifetime JPH0711525B2 (ja) 1985-07-17 1985-07-17 高比重リポ蛋白コレステロ−ル測定用沈殿試薬

Country Status (1)

Country Link
JP (1) JPH0711525B2 (ja)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH02187664A (ja) * 1989-01-17 1990-07-23 Dai Ichi Pure Chem Co Ltd 高密度リポタンパク質分画剤
EP2065708A1 (en) 2007-11-28 2009-06-03 Fujifilm Corporation Method for measuring high-density lipoprotein cholesterol
EP2108961A1 (en) 2008-04-10 2009-10-14 Fujifilm Corporation Dry analytical element for measurement of high density lipoprotein cholesterol

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS55159158U (ja) * 1979-05-01 1980-11-15
JPS58127168A (ja) * 1982-01-25 1983-07-28 Eiken Kagaku Kk 血清中の高比重リポ蛋白コレステロ−ル定量用組成物

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS55159158U (ja) * 1979-05-01 1980-11-15
JPS58127168A (ja) * 1982-01-25 1983-07-28 Eiken Kagaku Kk 血清中の高比重リポ蛋白コレステロ−ル定量用組成物

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH02187664A (ja) * 1989-01-17 1990-07-23 Dai Ichi Pure Chem Co Ltd 高密度リポタンパク質分画剤
EP2065708A1 (en) 2007-11-28 2009-06-03 Fujifilm Corporation Method for measuring high-density lipoprotein cholesterol
EP2108961A1 (en) 2008-04-10 2009-10-14 Fujifilm Corporation Dry analytical element for measurement of high density lipoprotein cholesterol

Also Published As

Publication number Publication date
JPH0711525B2 (ja) 1995-02-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Seigler et al. Separation of serum high-density lipoprotein for cholesterol determination: ultracentrifugation vs precipitation with sodium phosphotungstate and magnesium chloride.
JP3193634B2 (ja) Ldlコレステロールの定量方法
US4115538A (en) Assay kit for cAMP and/or cGMP and method of using the same
Russell Warnick et al. HDL cholesterol quantitation by phosphotungstate-Mg2+ and by dextran sulfate-Mn2+-polyethylene glycol precipitation, both with enzymic cholesterol assay compared with the lipid research method
US4215993A (en) Precipitating reagent and method for isolation and determination of high density lipoproteins in human serum
JP3614514B2 (ja) 高比重リポ蛋白分画中のコレステロールの定量方法及び定量用試薬キット
JP3104988B2 (ja) 全血中のhdlの分離方法
US3894844A (en) Simultaneous determination of triglycerides, cholesterol and phospholipids
Gibson et al. Precipitation of apo E-containing lipoproteins by precipitation reagents for apolipoprotein B.
Yano et al. Comparison of two homogeneous LDL-cholesterol assays using fresh hypertriglyceridemic serum and quantitative ultracentrifugation fractions
JP3107474B2 (ja) リポ蛋白分画中の成分の定量方法
Roberts et al. Determination of thyroxine-binding globulin: A simplified procedure utilizing dextran-coated charcoal
JP4708531B2 (ja) Hdl亜画分中のコレステロールの測定法
JPS6219768A (ja) 高比重リポ蛋白コレステロ−ル測定用沈殿試薬
JP3677452B2 (ja) リポ蛋白質に含有されるトリグリセリドの測定のための手続および診断用製品
CN112695071B (zh) 一种高密度脂蛋白3的测定试剂、方法和试剂盒
CN110736846B (zh) 一种小而密脂蛋白的测定试剂、方法和试剂盒
JP2003028882A (ja) SmalldenseLDLの測定方法
Futterman et al. A simple biuret method for the estimation of protein in samples containing detergents
CN108535488B (zh) 利用含载脂蛋白e的高密度脂蛋白的值对冠心病发病风险的评价方法
WO1998059068A1 (fr) Procede servant a analyser des specimens biologiques afin de rechercher des substances contenues dans leurs constituants et reactif utilise dans ce procede
WO2005093415A1 (ja) アポリポタンパク質b-48の測定方法およびその用途
JPH0236182B2 (ja)
Tiyyagura et al. Standard lipid profile
JP4034851B2 (ja) 低密度リポタンパク質コレステロールの特異的測定方法及び測定用組成物、並びに低密度及び高密度リポタンパク質コレステロールの特異的測定方法