JPS58127168A - 血清中の高比重リポ蛋白コレステロ−ル定量用組成物 - Google Patents
血清中の高比重リポ蛋白コレステロ−ル定量用組成物Info
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- JPS58127168A JPS58127168A JP57009009A JP900982A JPS58127168A JP S58127168 A JPS58127168 A JP S58127168A JP 57009009 A JP57009009 A JP 57009009A JP 900982 A JP900982 A JP 900982A JP S58127168 A JPS58127168 A JP S58127168A
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- cholesterol
- lipo protein
- lipo
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-
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- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/92—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving lipids, e.g. cholesterol, lipoproteins, or their receptors
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は血清試料中の高比重リポ蛋白（以下ＨＤＬと略
称する）コレステロールを測定するに有用々定量用組成
物に関するものである。
称する）コレステロールを測定するに有用々定量用組成
物に関するものである。
ＨＤＬを血清より分画する報告は次の文献等により公知
である。（Ｍ、Ｂｕｒｓｔｅｉｎ、 Ｒ，Ｍｏｒｆｉｎ
：Ｒｅｖ、 Ｆｒａｎｃａｉｓｅ Ｅｔｕｄｅｓ Ｃ
１１ｎ、ｅｔ Ｂｉｏｌ。
である。（Ｍ、Ｂｕｒｓｔｅｉｎ、 Ｒ，Ｍｏｒｆｉｎ
：Ｒｅｖ、 Ｆｒａｎｃａｉｓｅ Ｅｔｕｄｅｓ Ｃ
１１ｎ、ｅｔ Ｂｉｏｌ。
１３．２７４〜２７７ （１’＋６８ ）、Ｐｅｔｅ
ｒ Ｂｅｒｒｆｅｌｄｅｔ ａｌ ： Ｊ、 Ｂｉｏｌ
、 Ｃｈｅｍ、 ２３５ （１０） ２８２５〜２８５
９ （１９６０）、Ｍ、Ｂｕｒｓｔｅｉｎ ： Ｎｏ
ｕｖ、 Ｒｅｖ、 Ｆｒａｎｃａｌｓｅ Ｈｅｍａｔ、
３ （２） １３９〜１４８ （１９６３） 、Ｍ
、Ｂｕｒｓｔｅｉｎ、 Ｒ，Ｍｏｒｆｉｎ ： Ｌｉｆ
ｅＳｃｉｅｎｃｅ ８ Ｐａｒｔｌ ３４５〜３４８
（１９６（１） ）しかしながら１これら従来の報告
をもって、 ＨＤＬの完全分離を試みることは非常に困
難であり１かつ生体内に膜力されたアスコルビン酸の影
響のだめ１分離後１上清中の１（Ｉ）Ｌ−コレステロー
ルの値が低値を示すということが避けられ々いという問
題があった。従来、アスコルビン酸の影響を回避するだ
めにはへコレステロール測定試薬系にアスコルビン酸オ
キシダーゼを含有せしめ１アスコルビン酸を消費せしめ
る方法がとられてきていたが１上清をアスコルビン酸オ
キシダーゼで処理を行ない）次いでコレステロール測定
を行なうという２ステップ操作を行ガわなければアスコ
ルビン酸の影響は完全に回避できないという操作上の繁
雑さを有しており、かつアスコルビン酸オキシダーゼが
高価であり１安定性にも問題がある等の欠点を有してい
た。
ｒ Ｂｅｒｒｆｅｌｄｅｔ ａｌ ： Ｊ、 Ｂｉｏｌ
、 Ｃｈｅｍ、 ２３５ （１０） ２８２５〜２８５
９ （１９６０）、Ｍ、Ｂｕｒｓｔｅｉｎ ： Ｎｏ
ｕｖ、 Ｒｅｖ、 Ｆｒａｎｃａｌｓｅ Ｈｅｍａｔ、
３ （２） １３９〜１４８ （１９６３） 、Ｍ
、Ｂｕｒｓｔｅｉｎ、 Ｒ，Ｍｏｒｆｉｎ ： Ｌｉｆ
ｅＳｃｉｅｎｃｅ ８ Ｐａｒｔｌ ３４５〜３４８
（１９６（１） ）しかしながら１これら従来の報告
をもって、 ＨＤＬの完全分離を試みることは非常に困
難であり１かつ生体内に膜力されたアスコルビン酸の影
響のだめ１分離後１上清中の１（Ｉ）Ｌ−コレステロー
ルの値が低値を示すということが避けられ々いという問
題があった。従来、アスコルビン酸の影響を回避するだ
めにはへコレステロール測定試薬系にアスコルビン酸オ
キシダーゼを含有せしめ１アスコルビン酸を消費せしめ
る方法がとられてきていたが１上清をアスコルビン酸オ
キシダーゼで処理を行ない）次いでコレステロール測定
を行なうという２ステップ操作を行ガわなければアスコ
ルビン酸の影響は完全に回避できないという操作上の繁
雑さを有しており、かつアスコルビン酸オキシダーゼが
高価であり１安定性にも問題がある等の欠点を有してい
た。
本発明者らは、これら繁雑々操作を行なわす１アスコル
ビン酸の影響を完全に回避し１かつ完全にＨＤＬとカイ
ロマイクロン、’Ｖ ＬＤＬ 、 Ｔ、ＤＬ 、とを分
離せしめるＨＤＬコレステロール測定用沈澱試薬を見出
し本発明を完成した。
ビン酸の影響を完全に回避し１かつ完全にＨＤＬとカイ
ロマイクロン、’Ｖ ＬＤＬ 、 Ｔ、ＤＬ 、とを分
離せしめるＨＤＬコレステロール測定用沈澱試薬を見出
し本発明を完成した。
すなわち、本発明はカイロマイクロンＸＶＬＤＬ、ＬＤ
Ｌを選択的に沈澱せしめる試薬組成系にＣｕ＋イオンお
よび／−！たはＦｅ１イオン、あるいはＣｕ＋イオンと
Ｆｅ＋イオンとを含有することを特徴とするは本発明の
範囲に含まない） 沈澱試薬系としては、硫酸多糖類（ヘパリン、デギスト
ラン硫酸、アミロペクチン硫酸、硫酸アミロース１Ｋ
アガー等）、無機ポリアニオン（リンタングステン酸λ
リンモリブデン酸）タングステン酸またはモリブデン
酸のナトリウム塩Ａカリウム塩およびアンモニウム塩）
、界面活性剤（コール酸ナトリウム１ラウリル硫酸すＩ
・リウム等）、ポリビニルピロリドン等の単独１もしく
は２価のカチオンと共存した試薬系であるが為これら試
薬丑 廿 系が龜 イオン）Ｆｅ イオン１Ｆｅ＠イオンを単独
あるいは混合で含む（ただしＦｅ’イオン単独は含捷々
い）ことを特徴とする組成物である。壕だこれら組成物
はアルカリ金属塩を同時に含有していてもかまわない。
Ｌを選択的に沈澱せしめる試薬組成系にＣｕ＋イオンお
よび／−！たはＦｅ１イオン、あるいはＣｕ＋イオンと
Ｆｅ＋イオンとを含有することを特徴とするは本発明の
範囲に含まない） 沈澱試薬系としては、硫酸多糖類（ヘパリン、デギスト
ラン硫酸、アミロペクチン硫酸、硫酸アミロース１Ｋ
アガー等）、無機ポリアニオン（リンタングステン酸λ
リンモリブデン酸）タングステン酸またはモリブデン
酸のナトリウム塩Ａカリウム塩およびアンモニウム塩）
、界面活性剤（コール酸ナトリウム１ラウリル硫酸すＩ
・リウム等）、ポリビニルピロリドン等の単独１もしく
は２価のカチオンと共存した試薬系であるが為これら試
薬丑 廿 系が龜 イオン）Ｆｅ イオン１Ｆｅ＠イオンを単独
あるいは混合で含む（ただしＦｅ’イオン単独は含捷々
い）ことを特徴とする組成物である。壕だこれら組成物
はアルカリ金属塩を同時に含有していてもかまわない。
本発明で用いられるＣｕ＋＋イオン・Ｆ’ｅ＋Ｆイオン
・Ｆ’ｅ”イオンは０．０１ｍＭ〜１０ｍＭの範囲で用
うることができるが１望捷しくけ０．０５ｍＭ〜２ｍＭ
が最適である。これらの範囲で添加されたＨＤＬ−コレ
ステロール定量用組成物は、血清中のアスコルビン酸の
影響を受けない、正確なＨＤ Ｌ−コレステロールを定
量することが可能となり１しかもビリルビンによる測定
への影響が低減されるようになった。
・Ｆ’ｅ”イオンは０．０１ｍＭ〜１０ｍＭの範囲で用
うることができるが１望捷しくけ０．０５ｍＭ〜２ｍＭ
が最適である。これらの範囲で添加されたＨＤＬ−コレ
ステロール定量用組成物は、血清中のアスコルビン酸の
影響を受けない、正確なＨＤ Ｌ−コレステロールを定
量することが可能となり１しかもビリルビンによる測定
への影響が低減されるようになった。
以下、実施例および試験例により本発明の詳細な説明す
る。
る。
実施例１゜
沈澱試薬
リンタングステン酸１０ｇを精製水で溶解し、塩化マグ
ネソウム９．５ｇＸ塩化ナトリウム９ｇ為硫酸銅０．１
ｇを加え混合し入水酸化すトリウムでｐＨ７，６とし、
精製水を加え１すとする。
ネソウム９．５ｇＸ塩化ナトリウム９ｇ為硫酸銅０．１
ｇを加え混合し入水酸化すトリウムでｐＨ７，６とし、
精製水を加え１すとする。
コレステロール測定試薬
微生物由来コレステロールエステラーゼ３００単位１コ
レステロールオキシダーゼ１０００単位１ヘルオキンダ
ーゼ２５００単位１４−アミノアンチピリン０．４ｇ、
Ｎ−エチル−Ｎ−（β−メチルスルホンエチル）−ｍ−
トルイジン１．４ｇ、 リン酸−カリウム３１．３ｇ
１ リン酸二ナトリウム２．８ｇを精製水で１ｕとする
。
レステロールオキシダーゼ１０００単位１ヘルオキンダ
ーゼ２５００単位１４−アミノアンチピリン０．４ｇ、
Ｎ−エチル−Ｎ−（β−メチルスルホンエチル）−ｍ−
トルイジン１．４ｇ、 リン酸−カリウム３１．３ｇ
１ リン酸二ナトリウム２．８ｇを精製水で１ｕとする
。
操作法
血９０．３ｍｌに沈澱試薬０．３ｍｌを加え１混合し放
で 直後３．０００ ｒｐ邑ｏ分間遠心を行カい・上清０．
０５ ｍｌにコレステロール測定試薬３ ｍｌを加え、
３７℃で５分間加温しλ生成する赤色キノンの吸光度を
波長５５５ｎｍにて測定する。
で 直後３．０００ ｒｐ邑ｏ分間遠心を行カい・上清０．
０５ ｍｌにコレステロール測定試薬３ ｍｌを加え、
３７℃で５分間加温しλ生成する赤色キノンの吸光度を
波長５５５ｎｍにて測定する。
実施例２゜
沈澱試薬
ヘパｌフッ２ｇ、塩化マンガン１９．８ｇ、硫酸銅０゜
１ｇ１硫酸第二鉄０．０１ｇを加え混合し、水酸化すト
リウムもしくは塩酸でｐＨ７，０とし１精製水を加え１
ρとする。
１ｇ１硫酸第二鉄０．０１ｇを加え混合し、水酸化すト
リウムもしくは塩酸でｐＨ７，０とし１精製水を加え１
ρとする。
コレステロール測定試薬および操作法は１実施例１．と
同様に行々う。
同様に行々う。
実施例３゜
沈澱試薬
タングステン酸ナトリウム１５ｇ１硫酸銅０．２ｇ、硫
酸第一鉄０．０１ ｇを精製水で溶解し）水酸化ナトリ
ウムもしくは塩酸でｐＨ５，７とし１精製水で１ρとす
る。
酸第一鉄０．０１ ｇを精製水で溶解し）水酸化ナトリ
ウムもしくは塩酸でｐＨ５，７とし１精製水で１ρとす
る。
コレステロール測定試薬および操作法は、実施例１．と
同様に行なう。
同様に行なう。
実施例４゜
沈澱試薬
リンタングステン酸ナトリウム１０ ｇ ％硫酸銅０・
１ｇ１塩化すトリウム９ｇを精製水で溶解し）水酸化ナ
トリウムもしくは塩酸でｐＨ６，５とし１精製水で１に
とする。
１ｇ１塩化すトリウム９ｇを精製水で溶解し）水酸化ナ
トリウムもしくは塩酸でｐＨ６，５とし１精製水で１に
とする。
コレステロール測定試薬および操作法は、実施例１．と
同様に行なう。
同様に行なう。
試験例１゜
アスコルビン酸の影響の比較
本発明による沈澱試薬と従来のものを用いてアスコルビ
ン酸を添加した血清におけるＨＤＬ−コレステロール測
定を行なった。その結果を第１表に示す。
ン酸を添加した血清におけるＨＤＬ−コレステロール測
定を行なった。その結果を第１表に示す。
第１表の結果よ！ｌｌ）本発明による組成物を用いると
、アスコルビン酸の影響は従来のものに比べ著しく低減
され１正確々ＨＤＬ−コレステロールの測定が可能とな
った。
、アスコルビン酸の影響は従来のものに比べ著しく低減
され１正確々ＨＤＬ−コレステロールの測定が可能とな
った。
試験例２８
ビリルビンの影響の比較
本発明による沈澱試薬と従来のものとを用いてビリルビ
ンを添加した血清におけるＨＤＬ−コレステロール測定
を行なった。その結果を第２表に示す。
ンを添加した血清におけるＨＤＬ−コレステロール測定
を行なった。その結果を第２表に示す。
第２表の結果より、本発明による組成物を用いると１ビ
リルビンの影響は従来のものに比べ、Ｊ・さくなシ）よ
り正確なＨＤＬ−コレステロールの演１１定が可能にな
った。
リルビンの影響は従来のものに比べ、Ｊ・さくなシ）よ
り正確なＨＤＬ−コレステロールの演１１定が可能にな
った。
特許出願人
栄研化学株式会社
Claims (1)
- 血清リポ蛋白の内１カイロマイクロン）超低比重リポ蛋
白（ＶＬＤＬ ） 、低比重リポ蛋白（ＬＤＬ ）を選
択的に沈澱させ、上清中に高比重リポ蛋白（ＨＤＬ ）
を分画せしめる沈澱試薬において１該沈澱試薬がＣｕ”
イオンおよび／または５″″イオン・あるいは０丑イオ
ンと胸 イオンとを０．０１ｍＭ 〜１０ｍＭ含有し
ていることを特徴とする高比重リポ蛋白（ＨＤＬ ）コ
レステロール定量用組成物
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57009009A JPS58127168A (ja) | 1982-01-25 | 1982-01-25 | 血清中の高比重リポ蛋白コレステロ−ル定量用組成物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57009009A JPS58127168A (ja) | 1982-01-25 | 1982-01-25 | 血清中の高比重リポ蛋白コレステロ−ル定量用組成物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58127168A true JPS58127168A (ja) | 1983-07-28 |
| JPH0145867B2 JPH0145867B2 (ja) | 1989-10-05 |
Family
ID=11708644
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57009009A Granted JPS58127168A (ja) | 1982-01-25 | 1982-01-25 | 血清中の高比重リポ蛋白コレステロ−ル定量用組成物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58127168A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6219768A (ja) * | 1985-07-17 | 1987-01-28 | Yatoron:Kk | 高比重リポ蛋白コレステロ−ル測定用沈殿試薬 |
| US5242833A (en) * | 1991-03-20 | 1993-09-07 | Reference Diagnostics, Inc. | Lipid fractionation |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS55132958A (en) * | 1979-03-12 | 1980-10-16 | Eiken Kagaku Kk | Composition for determining high specific gravity lipoprotein cholesterol |
-
1982
- 1982-01-25 JP JP57009009A patent/JPS58127168A/ja active Granted
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS55132958A (en) * | 1979-03-12 | 1980-10-16 | Eiken Kagaku Kk | Composition for determining high specific gravity lipoprotein cholesterol |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6219768A (ja) * | 1985-07-17 | 1987-01-28 | Yatoron:Kk | 高比重リポ蛋白コレステロ−ル測定用沈殿試薬 |
| US5242833A (en) * | 1991-03-20 | 1993-09-07 | Reference Diagnostics, Inc. | Lipid fractionation |
| US5595913A (en) * | 1991-03-20 | 1997-01-21 | Reference Diagnostics, Inc. | Lipid fractionation |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0145867B2 (ja) | 1989-10-05 |
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