JPS62194461A - 全血用乾式分析要素用標準液 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分Ｗ］ 本発明は、シート状の乾式分析要素で液体試料中の化学
成分を定量する方法に用いる標準液に関するもので、さ
らに詳しく血液など体液試料中の種々の濃度の被検成分
をシート状の乾式分析要素で定量する際に、血液とよく
似た性質を有する標準液として調製された特定の水溶性
高分子を含む全血用乾式分析要素用標準液に関するもの
である。

（１行余白） ［従来技術］ シート状の乾式分析要素（一体型多層分析要素、一体型
多層分析素子、又は多層分析要素ともいわれる）によっ
て、全血中の被検成分を定量する場合、被検既知物質濃
度と全血を分析要素に滴状に付着供給（以下、点着とい
う）して得られた一定時間後の反射光学濃度とが一定の
関係にあることを利用して未知試料の反射光学濃度から
被検物質濃度を測定できることは周知である。乾式分析
要素用の標準液として例えば特開昭６１−４９６３実施
例３に記載のものがあるが、その標準液では乾式分析要
素用の全血にかわる標準液としては光学的性能及び再現
性が不充分であることが判明した。

［発明の目的］ 本発明は特定の水溶性高分子を含む全血状組成物にあら
かじめ濃度既知の被検物質を添加した水溶液状物（標準
液）であり、標準液は分析要素に点着して得られる一定
時間後の反射光学濃度が同じ濃度の被検物質を含む全血
試料を分析要素に点着して得られる一定時間後の反射光
学濃度と一致するようになされたもので、前述の特開昭
６１−４９６３に記載の標準液を改良するものである。

［発明の構成］ 本発明の全血用乾式分析要素用標準液は粘性を全血に似
せるため粘度ＵＲ整用の水溶性高分子、色調を全血に似
せるためヘモグロビン様色素、必要ならば界面活性剤、
防腐剤及び塩類、緩衝剤を溶解した水溶液に、１種また
は複数種の被検成分を添加したものであり、場合によっ
ては通常血液中に含まれる被検成分以外の成分を添加す
ることもできる。

本発明の全血用標準液をシート状乾式分析要素を用いる
定量法において、コントロールとして使用すればシート
状乾式分析要素が変質したり、破損していたり、規格に
合わないものである場合の検出に役立つ他、シート状乾
式分析要素を用いた定量法で用いられるアナライザーの
変調や誤動作を検出することにも役立つ。また、このよ
うな標準液をシート状乾式分析要素を用いる定量法にお
いて較正作業を行うときの濃度既知の標準液として用い
ることもできる。この場合、被検物質についての濃度が
２つ以上具なる標準液を用意して使用することもできる
。

粘度調整用の水溶性高分子として、ポリエチレングリコ
ール、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコールな
どの水溶性合成ポリマー、カルボキシメチルセルロース
などの半合成水溶性ポリマー等を用いることができる。

水溶性高分子は標準液の粘度が２５℃で３０Ｐ５〜２５
ＣＰ５．好ましくは５ｃＰｓ〜２５ｃｐｓの範囲になる
量を含有させ、展開層での展開時間が２秒〜１０秒にな
るようにする。具体的には、例えば平均分子量約２万の
ポリエチレングリコールの場合、水溶液濃度で約３Ｗ／
Ｗχ〜約１５Ｗ／Ｗ％。

好ましくは約５Ｗ／Ｗχ〜約１５Ｗ／Ｗχの範囲で含有
させる。着色剤としては、ヘモグロビン様色素を標準液
の吸光度が０．２以上になるような含有量で含有させる
。ヘモグロビン様色素の例として、ヒト由来のヘモグロ
ビン、真蹟類又はヒト科のサル由来のヘモグロビン、そ
の他の哺乳類由来のヘモグロビン等を約３Ｗ／Ｗχ〜約
１５ｇ／ｄｌの範囲で含有させる。

防腐剤として安息香酸またはその水溶性塩（す）・リウ
ム塩等）、フェノールまたは窒化ナトリウム等を、塩類
として塩化ナトリウム等を、緩衝剤として燐酸緩衝剤組
成物等を溶解した水溶液に、被検物質としてグルコース
、尿素、アンモニア、コレステロール、尿酸、クレアチ
ニン、ビリルビン、アミラーゼ等の血液”中の成分の１
種または２種以上の成分を必要な含有量だけ添加するこ
とができる。

界面活性剤としては、アニオン性、カチオン性、ノニオ
ン性いずれも用いられるが、好ましくはノニオン性界面
活性剤である。界面活性剤の濃度は０．０１〜ＩＷ／Ｗ
％、好ましくは０．０５〜０．５Ｗ／Ｗ％、特に好まし
くは０．０５〜０．２Ｗ／Ｗ％の範囲で含有させること
ができる。

被検物質濃度値が異なる２種の標準液（それぞれ標準液
レベル１、レベル２という）を用いた乾式分析要素の較
正方法の例を以下に説明する。

正常または基準とする乾式分析要素に標準液レベル１ま
たはレベル２を点着して得られる反射光学濃度値または
標準の検量線により求めた被検物質濃度値をそれぞれＹ
、、Ｙｌとする。較正すべき乾式分析要素（製造条件の
異なる要素、変質した要素、破損の疑いのある要素など
）に標準液レベル１またはレベル２を点着して得られる
反射光学濃度値または前述の標準の検量線により求めた
仮の被検物質濃度値をそれぞれＸ５、Ｘ２とする。この
とき直交座標軸Ｘ−Ｙ系をとり、Ｘ、とＸ２を含むＸｌ
とＸ２より広い特定の範囲とＹ、とＹｌを含むＹ、とＹ
、より広い特定の範囲でＸとＹの間には近似的に直線関
係が成立することが見出された。そこで前述の直線関係
を Ｙ＝ａＸ＋ｂ　　　　　　　　　　　　　　（１）で表
し、＆＝（Ｙｌ−Ｙｌ）／（ＸＩ−Ｘ２）　　　　　（
２）ｂ”（Ｙ２ＸＩ　　ＹＩＸ２）／（ＸＩ　　Ｘ２）
（３）とすることにより、（１）〜（３）式を用いて較
正すべき乾式分析要素について得られた仮の被検物質濃
度値Ｘは正常または基準とする乾式分析要素による被検
物質濃度値Ｙに換算することができる。ここで正常また
は基準とする乾式分析要素による被検物質濃度値のかわ
りに、例えば国際的な標準分折力法と認められている他
の分析方法による被検物質の濃度値を採用しても（１）
〜（３）式は同じく有効である。

参考例１ ゼラチン下塗りが施されである厚さ１８５ｐｍの透明ポ
リエチレングリコ−ル（ＰＥＴ）フィルムの上に、下記
組成から成る血中グルコース濃度定量用の試薬層を乾燥
後の膜厚がおよそ１５μｍになるようにして塗布、乾燥
した。

グルコース濃度定量用試薬層塗布液の組成ペルオキシダ
ーゼ　　　　　　　　　５００００１　Ｕｌ、７−シヒ
ドロキシナフタレン　　　　　　　２・５ｇ４−アミノ
−２，３−ジメチル−１−（２，４，６−トリクロロフ
ェニル）−３−ピラゾリン−５−オン　　　　　１８ｇ
脱イオンゼラチン　　　　　　　　　　　２００ｇノニ
オンＨ８２１０（日本油脂（株）製ノニオン性界面ｉ性
剤；ポリオキシエチレンノニルフェニルエーテル）　　
　　　　　　　　　　　　　　２ｇこの試薬層の上に、
０．２ｇのノニオンＨ８２１０、グルコースオキシダー
ゼ２５０００１　Ｕ　、二酸化チタン微粉末８ｇ、ゼラ
チン１ｇの割合で混合分散した水分散液を用いて光遮蔽
層を乾燥膜厚がおよそ１５μｍになるように塗布、乾燥
して設けた。

ついで、水１００ｍ１にゼラチン４ｇの割合で溶解し、
更にこれにノニオンＨ８２１０を０．２ｇの割合で加え
て、接着層塗布液とし、これを、光遮蔽層の上に乾燥膜
厚が４ｇｍとなるように塗布、乾燥し接着層を形成させ
た。次に、接着層に３０ｇ／＋ｎ２の割合で水を湿し水
として供給、湿潤させたのち、綿１００％のブロード（
１２０番手ブロード）を圧着ラミネートし、乾燥させて
多孔性展開層を設け、グルコース定量用一体型多層分析
要素を完成させた。

この要素を１５關×１５關の正方形のチップに裁断した
のち、特開昭５７−６２４５２に開示のプラスチックマ
ウントに収めて血中グルコース定量分析スライドを調製
した。

実施例１ 次の組成の水溶液を調製した。

ポリエチレングリコール（平均分子３１２００００）５
０．０ｇ ヒトヘモグロビン　　　　　　　　　　　７５．０ｇポ
リオキシエチレンノニルフェニルエーテル１．０ｇ 安息香酸　　　　　　　　　　　　　　　１．０ｇ燐酸
水素二ナトリウム−１２水塩　　　　　３．０ｇ燐酸二
水素ナトリウム−２水塩　　　　　６．５ｇ塩化ナトリ
ウム　　　　　　　　　　　　１８．Ｏｇ説イオン蒸留
水を加えて　　　　　１ｋｇにするこの水溶液１ｋｇに
対して、グルコースを２８０４■溶解し２５℃での粘度
が６，３ｃｐｓ、　ｐＨ５，１になるように燐酸ナトリ
ウム水溶液（０，５Ｍ）を添加し調整して全血用標準液
を調製した。

この標準液の６μｌを参考例１の血中グルコース定量分
析スライドの多層分析要素の展開層に点着したところ展
開を終了するまでに４〜５秒を要した。

この標準液６μｌを点着したスライドを３７℃で６分イ
ンクベーションし、多層分析要素のＰＥＴフィルム側か
ら測光して反射光学濃度を測定し、比色法によりグルコ
ース濃度を求めたところ２９４ｍｇ／ｄｉであった。

実施例２ 実施例１で調製したヒトヘモグロビン含有全血用標準液
の６μｌと、ヒトヘモグロビンを加えず、グルコース添
加景を２７１９ｍｇに変更した他は実施例１と同様にし
て調製したヘモグロビン不含の標準液６μＩとを、それ
ぞれ参考例１の血中グルコース定量分析用スライドの多
層分析要素の展開層に点着し、３７℃で６分インクベー
ションし多層分析要素のＰＥＴフィルム側から測光して
反射光学濃度を測定する操作を２５回くりかえし、比色
法によりグルコース濃度を求めたところ、ヒトヘモグロ
ビンを含む本発明の全血用標準液では２９４．４ｍｇ／
ｄ　ｌ　。

Ｃｖ（変動係数）１．８％、ヘモグロビン不含の比較標
準液テ１．？　２８５．５ｍｇ／ｄ　１．　ＣＶ　２．
６％テアツタ。

この結果から本発明のヘモグロビン含有全血用標準液は
測定値のバラツキが少なく再現性がきわめてよいことか
明らかである。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 粘度調節剤として３％以上の水溶性合成高分子を含み２
   ５℃での水溶液粘度が３ｃｐｓ〜２５ｃｐｓの範囲にあ
   り、乾式分析要素の展開層での展開時間が２秒〜１０秒
   の範囲にあり、着色剤として１％以上のヘモグロビン様
   色素を含み、吸光度が０．２以上であることを特徴とす
   る全血用乾式分析要素用標準液。