JPS6219430B2

JPS6219430B2 -

Info

Publication number: JPS6219430B2
Application number: JP1786879A
Authority: JP
Inventors: Kazuya Sasaki; Yukio Inoe
Original assignee: Kaken Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Kaken Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1979-02-20
Filing date: 1979-02-20
Publication date: 1987-04-28
Also published as: JPS55111485A

Description

【発明の詳細な説明】

本発明はゲルダナマイシンの新規な誘導体、そ
の製法及びそれを有効成分とする抗腫瘍剤に関す
る。本発明の新規化合物は次式で表わされる。ゲルダナマイシンはストレプトミセス・ヒグロ
スコピクス・バル・ゲルダヌス・バル・ノバ株の
生産する抗原虫性抗生物質であることが知られて
り（ジヤーナル・オブ・アンチビオクテイクス第
23巻442頁1970年参照）、次式の化学構造を有する
（ジヤーナル・オブ・ジ・アメリカン・ケミカ
ル・ソサイエテイ第92巻7591頁1970年参照）。本発明者らは、ゲルダナマイシンの選択的酸化
反応により式の８・９−エポキシ−ゲルダナマ
イシンを合成し、生体に対する種々の作用を試験
した結果、この新規化合物が優れた抗腫瘍作用を
有し、また他の誘導体を合成するための中間体と
して有用であることを見出した。式の新規化合物は、式の化合物の８・９位
の二重結合を、酸化剤を用いてエポキシ化するこ
とにより製造することができる。エポキシ化反応は、酸化剤を用いて好ましくは
有機溶媒、例えばクロロホルム、ベンゼン等又は
その混合物の存在下に行われる。酸化剤として
は、好ましくは有機又は無機の過酸化物、例えば
過酢酸、過安息香酸、クロル過安息香酸、過フタ
ル酸等の有機過酸、三級ブチルハイドロパーオキ
シド等のアルキルハイドロパーオキシド又は過酸
化水素が用いられる。式の化合物及び過酸化物
は等モル当量で又は一方好ましくは過酸化物を過
剰に用いて反応させることができる。酸化剤とし
て有機過酸化物を用いる場合には、式の化合物
１モル当量に対し1.1〜1.5モル当量の割合が好ま
しく、特にヒドロパーオキシドの場合には触媒量
のバナジウム（）オキシアセチルアセトネート
を存在させることも好ましい。過酸化水素を用い
る場合には、式の化合物１モル当量に対して２
モル当量の過酸化水素水の割合で反応させ、その
際４モル当量のパラクロルフエニルイソシアネー
トを存在させることが好ましい。本反応は一般に
室温ないし混合物の沸騰温度で２〜80時間後に終
了する。酸化剤としての過酸化物を用いる前記のエポキ
シ化反応において、８・９位の二重結合だけがエ
ポキシ化される。目的物質の単離精製は常法により行われる。例
えば反応混合物を５％亜硫酸ナトリウム水溶液で
洗浄し、過剰の酸化剤を除去したのち、無水硫酸
ナトリウム上で乾燥し、減圧下に蒸発乾固させ、
残査をクロマトグラフイー及び／又は再結晶法に
より精製することができる。式の化合物は一般に黄橙ないし黄色の結晶性
物質であり、水に難溶であるが、例えばメタノー
ル、エタノール、アセトン、酢酸エチル、クロロ
ホルム、ジクロルエタン、エーテル、テトラヒド
ロフラン、ジオキサン、ジメチルスルホキシド、
ジメチルホルムアミド、ベンゼン、ピリジン等の
有機溶媒に溶解する。本発明の新規化合物は、癌細胞のモデルとして
広く認められている実験腫瘍細胞Ｗ−2K−11細
胞に対し著しい生育阻止作用を有し、抗腫瘍剤と
して有用である。従つて本発明は更に、式の化合物を有効成分
とする抗腫瘍剤である。新規化合物を単独で抗腫瘍剤として用いてもよ
いが、通常は普通に用いられる有機又は無機の固
体ないし液体の賦形剤又は補助剤を配合して経口
投与ならびに非経口投与に適する製剤の形で使用
することが好ましい。賦形剤又は補助剤として
は、例えば下記の有機もしくは無機の固体ないし
液状物質が用いられる。好適な賦形剤は、例えば
水、ゼラチン、乳糖、デンプン、繊維素、グリコ
ール酸カルシウム、微結晶セルロース、ステアリ
ルアルコール、ステアリン酸マグネシウム、タル
ク、植物油、ベンジルアルコール、プロピレング
リコール、ゴム、ポリアルキレングリコール、白
色石油、ゼリー、コレステロールなどである。補
助剤としては、例えば保存剤、湿潤剤、乳化剤、
溶解促進剤、浸透圧調整用塩、緩衝剤、結合剤、
懸濁分散剤などが用いられる。本発明の抗腫瘍剤は人の治療のためばかりでな
く、前記の形態で獣医用医薬として用いることも
できる。本発明の抗腫瘍剤を治療に用いる際には、有効
成分としての式の化合物の投与量は成人につき
１日当たり、非経口投与の場合は一般に0.5〜80
mg／Kg好ましくは１〜40mg／Kg、経口的投与の場
合は一般に１〜100mg／Kg好ましくは２〜50mg／
Kgである。実施例１ゲルダナマイシン5.6ｇを20％ベンゼン−クロ
ロホルム800mlに溶解し、これにメタクロロ過安
息香酸1.9ｇを加え、室温で５時間撹拌する。反
応混合物を５％亜硫酸ナトリウム水溶液で洗浄
し、続いて水及び飽和食塩水で順次洗浄したのち
無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、減圧下に蒸発乾
固する。得られた橙赤色の油状残査を３％メタノ
ール−クロロホルムを用いてシリカゲルクロマト
グラフイーにより精製する。所望の分画を減圧下
に蒸発乾固したのちエーテル−ｎ−ヘキサンから
再結晶すると、黄橙色結晶状の８・９−エポキシ
−ゲルダナマイシン4.84ｇが得られる。融点：148〜149℃ 元素分析値：C₂₉H₄₀N₂O₁₀・１／2H₂OとしてＣＨＮ計算値（％） 59.47 7.06 4.78 実測値（％） 59.54 6.96 4.71 赤外線吸収スペクトル（KBr錠剤法）： ν（cm^-1）3480、3370、2935、2860、2810、
1750、1708、1660、1605、1512、1460、1365、
1333、1247、1195、1140、1077、1004、963、
875、786 紫外部吸収スペクトル： λ^{ＣＨ３ＯＨ} _ｎａｘ（ｎｍ）254、303、407 NMRスペクトル（100MHz、CDCl₃中）： δ（ppm）0.88、0.93、0.99、1.05、1.20、
1.39、1.58、2.00、2.31、2.55、2.62、2.68、
3.00、3.09、3.32、3.36、3.68、4.07、4.58、
4.66、4.98、5.73、5.83、5.92、6.34、6.46、
6.57、6.89、7.01、7.19、8.66 実施例２ゲルダナマイシン1.4ｇをベンゼン1000mlに溶
解し、これに触媒量のバナジウム（）オキシア
セチルアセトネートを加え、油浴中で加熱還流し
ながら70％三級ブチルハイドロパーオキシド36mg
を滴加する。６時間還流したのち室温に冷却し、
0.1N−塩酸、５％亜硫酸ナトリウム、水、飽和
食塩水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾
燥したのち減圧下に蒸発乾固する。得られた残査
を2.5％メタノール−クロロホルムを用いてシリ
カゲルクロマトグラフイーにより精製する。所望
の分画を蒸発乾固したのちエーテルから再結晶す
ると、黄橙色の８・９−エポキシ−ゲルダナマイ
シン280mgが得られる。この化合物は、シリカゲル薄層クロマトグラフ
イー、融点、赤外線吸収スペクトル等の測定値か
ら、実施例１の化合物と同一物質であることが確
認された。製剤例８・９−エポキシ−ゲルダナマイシン2500ｇ、
乳糖1375ｇ、微結晶セルロース775ｇ及び繊維素
グリコール酸カルシウム375ｇを16メツシユの篩
を用いて篩過し、均一に混合したのち練合機に入
れ、これに３％ヒドロキシプロピルセルロース溶
液（イソプロピルアルコール：水＝３：７の混液
中）３を添加して練合する。混合物を押出造粒
機を用いて造粒し、50℃で６時間送風乾燥する。
次いで16〜60メツシユの範囲に整粒したのち、こ
の粒状物に対し0.3％のステアリン酸マグネシウ
ムを混合して打錠し、錠剤とする。試験例マウスの腎由来の線維芽細胞のC3H−2Kクロ
ーンをSV40発癌ウイルスによつて癌化させた癌
細胞Ｗ−2K−11を供試細胞とし、これを下記の
方法により培養した。 (1) 増植培養液の調製：イーグルMEM培地（日水製薬製）9.4ｇを蒸
留水900mlに溶解し、120℃で15分間加圧滅菌
し、冷却したのち仔牛血清100ml及び滅菌した
10％炭酸水素ナトリウム溶液３〜５mlを加えて
PH7.1〜7.2に調整する。培地使用直前にミリポ
アフイルターで過したＬ−グルタミン（2.92
ｇ／10ml）溶液100mlを加える。 (2) 移植細胞液の調製：ジープ・フリーザー（−80℃）で保存された
供試細胞を室温で溶解させ、670×ｇで５分間
遠心分離し、沈殿した細胞を(1)の増殖培養液50
mlに懸濁したのちルー・フラスコに移し、37℃
で培養すると細胞が増殖を始め、３〜４日で充
分に増殖する。培養液を傾瀉し、次いで0.2％
トリプシン溶液10mlを加え、室温で２〜３分間
放置したのちトリプシン溶液を傾瀉する。更に
(1)の増殖培養液50mlを加えて細胞浮遊液とす
る。 (3) 細胞培養と被験化合物の投与： (2)で得られた細胞浮遊液を1.8mlずつシヤー
レに分注し、炭酸ガスインキユベーター（５％
CO₂、95％空気）中で37℃において24時間培養
する。培養24時間後に被験化合物のエタノール
溶液0.2mlを投与して培養を継続する。培養48時間後に細胞増殖について顕微鏡下で細
胞の生存数を計測し、供試細胞増殖の抑制率を次
式により求めた。抑制率（％）＝（無投与シヤーレ中の細胞数）−（投与シヤーレ中の細胞数）／（無投与シヤーレ中の細胞数
）×100 得られた結果を次表に示す。

【表】急性毒性：８・９−エポキシ−ゲルダナマイシンのマウス
に対する50％致死量（LD₅₀）は、腹腔内投与で
240mg／Kgであつた。ゲルダナマイシンのLD₅₀は
15mg／Kgであり、これと比較して毒性が著しく減
少している。

Claims

【特許請求の範囲】１次式で表わされる化合物。２次式で表わされる化合物の８・９位の二重結合を、酸
化剤を用いてエポキシ化することを特徴とする、次式で表わされる化合物の製法。３次式で表わされる化合物を有効成分とする抗腫瘍剤。