JPS6219090A - 酵素法によるジグリセリドの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は酵素法により高濃度でジグリセリドを製造する
方法に関する。

〔従来の技術〕

グリセリドの内、モノグリセリドとトリグリセリド°は
産業的利用価値が古（から知られ、その利用面や製造技
術に関してこれまで多（の提案がなされている。

しかしジグリセリドはあまり注目されろこともな（、む
しろモノグリセリドやトリグリセリドに混入又は中間体
として副生するあまり利用価値のない生成物として取扱
われている。そのため、高濃度にジグリセリドを製造す
る方法に関してはこれまで有効な提案はない。

化学的なジグリセリドの製造性に関しては、ジクロロヒ
ドリンに石ケンを作用させる方法とか。

ジ硫酸エステルに脂肪酸を作用させる方法、モノトリチ
ルグリセリンより合成する方法などが提案されているが
、いづれも複雑な反応過程や熱エネルギーを必要とし経
済的に実用化出来る方法ではない。

一方、リパーゼによるエステル合成やグリセロリシスに
より起るグリセリド生成反応物中にもモノグリセリドや
トリグリセリドと共に中間体としてジグリセリドが生成
することが知られている。

例えば山板らは、クロモバクテリウム・ビスコサム・バ
ール・バラリポリテイカム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ
ｉｕｍｖｉｓｃｏｓｕｍ　ｖａｒ　ｐａｒａｌｉｐｏｌ
ｙｔｉｃｕｍｌのソノ９−ゼを用い、ポリエチレン膜の
持つ性質なた（みに利用したバイオリアクターシステム
により、グリセリンとオレイン酸からのグリセリドの合
成を３〜４ｔ％の水を含有する系で行い、約１０％の脂
肪酸がエステル結合した時のグリセリド組成比Ｃモル％
］が約３乙％のモノグリセリド、３グ％のジグセリド、
／θ％のトリグリセリド、更に未反応のオレイン酸が２
θ％であったことを報告しているＣ　ＪＡＯＣ８、。

乙／〔グ）、２７に（／９♂グ）〕。

又給田らも、リパーゼとしてクロモバクテリウム・ビス
コサムの生産するリパーゼ等３種のリパーゼを用い、基
質としては含水量の異るグリセ９７５〜３０モルに対し
、オレイン酸又はその低級アルコールエステル１七ルヲ
加工てエマルジョン系にてエステル合成又はアルコリシ
スを行わせ合成率及び生成グリセリド組成について調べ
ている。

その結果、最も合成率の高かったクロモバクテリウムの
リパーゼを用いた場合、エステル合成反応においては約
３♂〜ｇａｐ（ｗｔ）のジグリセリドを、またオレイン
酸メチルを用いたアルコリシスにおいては約グθ〜４ｔ
７％（ｗｔ）のジグリセリドがモノグリセリドやトリグ
リセリド、更に未反応の脂肪酸と共に生成したことを報
告している〔日本化学会誌、／２．／７９７．Ｃ／９ざ
３）〕０〔発明が解決しようとする問題点〕 上記したようにジグリセリドの化学的合成法は多数提案
されているが、経済的に実用化しうるものはない。

一方、リパーゼを用いる酵素反応法は、常温。

常圧の温和な条件での反応が可能であり、グリセリンや
その生成物であるグリセリドにも何等の悪影響を与える
ことはない。しかし、従来の酵素法によるグリセリドの
製造法の提案においては、ジグリセリドに着目し、ジグ
リセリドを主成分として生成させろための技術的提案は
なされていない。

その理由として、ジグリセリドは、これまであまり積極
的に利用開発がされず、その有用性が認識されておらず
、むしろモノグリセリドやトリグリセリド中にあって無
用のものとしてジグリセリドの生成量を抑制しようとす
る傾向すらあったためである。

又、従来の酵素法によるジグリセリドのＭ　１ｉｆｔの
提案においては、いづれも反応系に水が用いられている
。しかし、リパーゼは本来プロテアーゼやアミラーゼと
並ぶ代表的な加水分解酵素として知られており、その一
般的機能としては、水の存在下においては、エステルを
生成する方向での働きを低下させるだけでなど、折角生
成したエステルの再分解や、更には脂肪酸の結合位置の
入れ換えをも引き起こす恐れがある。また、水エマルジ
ヨン反応によって得られるエステル生成物を反応後乳化
液より分離するためには１強力な遠心分離処理を必要と
するなど、ジグリセリド生成濃度の低さとともに従来の
提案にはいづれも問題がある０そこで本発明はリパーゼ
を用いて高い生成率でジグリセリドを容易に得る方法を
提供するという問題を解決したものである０ 〔問題点を解決するための手段〕 本発明者らは、上記した事情に鑑み、従来のどとぐ酵素
の作用が水の存在と不可欠と考え、水系での反応を考え
るかぎりにおいて、グリセリド生成反応は必然的に加水
分解と合成反応との反応平　。

衡則に従わざるを得す、低い合成率や再分解、更には脂
肪酸の入れ換えを伴う再合成等をまぬがれ得ないとの考
えに立ち、従来の概念にとられれずに、実質的に水を加
えることな（、有機溶媒の存在下もしくは不存在下での
ジグリセリドの生成を可能にするリパーゼについて鋭意
研究した。

その結果、キャンデイダ・シリンドラセ（Ｃａｎｄｉｄ
ａ化性がな（、培地中にｒθθ単位単位／ｍ上以上パー
ゼを生産する能力を有するキャンデイダ・シリンドラセ
の変異菌の生成するリパーゼを、実質的に水を加えるこ
とな（、有機溶媒の存在下もしくは不存在下に、脱水し
て作用させると、広範囲な脂肪酸とグリセリン１との間
で高濃度の王にジグリセリドからなるグリセリドを生成
するという驚（べき現象のあることを見出した。本発明
はこの発明に基いて完成されたものである。

即ち１本発明はグリセリンと炭素数Ｃ４〜Ｃ２２の飽和
もしくは不飽和の脂肪酸に、実質的に水を加えることな
（、有機溶媒〔但し、第１級アルコール溶媒を除く）の
存在下もしくは不存在下に、脱水して、キヤンデイダ・
シリンドラセ（Ｃａｎｄｉｄａｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ
　１から変異誘導され、キシロースの資化性がな（、培
地中にｒθθθθ／ｍ６以上のリパーゼを生産する能力
を有するキャンデイダ拳シリンドラセの変異菌の生成す
るリパーゼを作用させることを特徴とする酵素法による
ジグリセリドの製造法であり、その目的とするところは
、従来の酵素法では不可能であった高い生成率で容易に
ジグリセリドを得ろ方法を提供することにある。

以下１本発明について詳細に説明する。

本発明で用いるグリセリンは、天然グリセリンでも合成
グリセリンでも使用できる。

また１本発明の方法で用いる脂肪酸とは、飽和もしくは
不飽和の炭素数Ｃ２〜Ｃ２２の脂肪酸を言う。

そして０４〜Ｃ２□の脂肪酸としては、例えばブタン酸
、バレリン酸、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、
ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン
酸、イソステアリン酸、／２−ヒト０ロキシステアリン
酸、オレイン酸、リシルイン酸、リノール酸、リルイン
酸、エイコサン酸、トコサン酸、アラキドン酸などがあ
げられる。

つぎに本発明で使用する上記リパーゼは、キャンディグ
０シリンドラセ（Ｃａｎｄｉｄａ　ｃｙｌｉｎｄｒａｃ
ｅａ　１例えばキヤンデイダ・シリンドラセＡＴＣＣ／
ｇ、ｒ３θから変異誘導された変異菌である微工研菌寄
第６／３４１号、第乙／３３号、第ご１３≦号、第乙７
３２号などにより生成されろリパーゼで、このリパーゼ
は特開昭　　　　　　　　　号公報に記載の方法により
製造することができる。そしてこのようなリパーゼの具
体例としては１例えば名糖産業株式会社により製造、販
売されているリパーゼ−ＯＦを挙げることができる。

本発明で使用するリパーゼは溶剤耐性にすぐれている。

この点に関し実験例を示して説明する。

実験例 リパーゼ−０Ｆ（多糖産業製）の粉末２！ｆｍ９を７　
ｒｎ１３の栓付き遠沈管に取り、これに各種溶媒、即ち
ｎ−ヘキサン、ｎ−ペンタン、ｎ−へブタン。

石油エーテル、シクロヘキサン、シクロペンタン。

第三級ブチルアルコール、ジアセトンアルコール。

アセトン、アセトニトリル、ジイソブチルケトン。

ベンゼン、四塩化炭素、水を２ｍｌ加え充分攪拌し。

３２℃で２ｙ時間振盪し、残存活性をリパーゼ力価測定
法で測定した。

上記リパーゼの測定は、山田らの方法〔日農化誌、３６
．Ｆ６θ（／９ｔ２）〕を一部改良した方法〔多糖産業
Ｃ株）の油脂分解酵素リノ（−ゼーＯＦ。

／９♂１．＋月発行参照〕で行った０その結果を第１表
に示す。なお１表中の数字はリパーゼ残存率（係）を示
ｉ。

第　　　　　１　　　　　表 本発明において１反応系に加える上記リノく−ゼは精製
品でも粗製品でもよ（、その形態としては粉末状または
顆粒状の上記ＩＪ　／々−ゼあるいは上記リパーゼを生
成する菌体の乾燥品を使用することができる。

更に、固定化担体１例えばポリプロピレン膜。

イオン交換樹脂のごとき各種重合体や、セライト。

ガラスピーズ、ゼオライト、ベントナイト等の無機材料
等に上記リパーゼを担持固定化した乾燥固定化酵素を利
用することもできるＯそしてこれ等の担体に上記リパー
ゼを固定化することによって基質と上記リパーゼの接触
面を広げることができ。

上記リパーゼの粉末を用いるよりも反応を進める土で有
利となる。

本発明で有機溶媒の存在下に反応を行う場合に用いる有
機溶媒【但し、第１級アルコール溶媒な除く］は１反応
温度において液状をなし、上記リパーゼ活性を安定的に
維持し、且つ不溶状態の上記リパーゼが、グリセリンと
脂肪酸のジエステルを生起させつるものであるかぎり、
なんでもよいが、上記条件を満足する限りにおいて、更
にグリセリン、脂肪酸の両基質を同時に溶解しつる有機
溶媒またはそのような有機溶媒と混合して使用すること
が望ましい。

本発明で用いる有機溶媒の例としては１例えばｎ−へブ
タン、ｎ−ペンタン、ｎ−ヘキサン、石油エーテル、イ
ソオクタンなどの如き脂肪族炭化水素類；シクロペンタ
ン、シクロヘキサン、シクロブタンなどのごとき脂環式
炭化水素類；ベンゼン、トルエン、キシレン、フェノー
ルナトのごとき芳香族炭化水素類−了七トン、メチルイ
ソブチルケトンなどのごときケトン類ニアセトニトリル
。

コーニトロプロパン、ピリジン、キノリン、ジメチルホ
ルムアミドなどのごとき含窒素溶媒類；ジメチルエーテ
ル、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ジオ
キサンなどのごときエーテル類；四塩化炭素、クロロホ
ルム、塩化メチレンなどのごときハロゲン化炭化水素類
；ジメチルスルホキシドのごときスルホキシド溶媒類：
２．４１−ジメチル−３−ペンタノール、２１ｇ−ジメ
チル−グーヘプタツールのごとき第２級アルコール類；
第３級ブチルアルコール、　第３ｍアミルアルコール。

ジアセトンアルコール、３−メチル−３−ペンタノール
、３−エチル−３−ペンタノール、コーメチルーコーヘ
キサノールのとと＠　第３　Ｒ７／ｌ／　：Ｉ−ル類な
どを例示することができる。

これらの中で特に好ましいのは、ｎ−へブタン、ｎ−ヘ
キサン、イソオクタン、ｎ−ペンタン、石油エーテル、
シクロヘキサン、シクロペンタン。

四塩化炭素などであり、中でもｎ　−、ヘキサンの如き
脂肪族炭化水素類が好ましい。

また１反応溶媒は単独でも使用できるが、２種以上の溶
媒を自由に混ぜ合せて使用することもできる。

脂肪酸とグリセリンとを有機溶媒の存在下で上記リパー
ゼと接触せしめジグリセリドを生起させつるだめの態様
は、適宜に選択できるが、攪拌もしくは振盪条件下に行
うことができる。両基質が有機溶媒に溶解できる反応条
件においては、固形の上記リパーゼ粉末もしくはベント
ナイト等に担持固定化・脱水した上記リパーゼを反応塔
に充填し、この中を反応液を循環させる方法によって行
うことができる。

つぎに１本発明において有機溶媒を使用しない場合は、
脂肪酸を必要な場合には加温液化し、グリセリンと脂肪
酸を液状の混合物として上記リパーゼを作用させればよ
い。

本発明において、グリセリンと脂肪酸との混合モル比や
、上記リパーゼの使用量、有機溶媒の使用量などは適宜
に選択でき、最もよ〈反応を促進し、高い収率が得られ
、かつ反応操作のしやすい条件を採用すればよい。

脂肪酸７モルに対するグリセリンの添加モル比としては
、例えば０．５〜２．０モル、好ましくは０．３〜７．
０モルの反応比を例示することができる。

つぎに、上記リパーゼの使用量に制限はないが。

例えば脂肪酸／ｉＰ当り／θ〜３乙θθθθ単位。

好ましくは夕θθ〜ｌＯθθＯＯ単位程度の使用量を例
示することができ１反応条件などによって左右されろこ
とを考慮して使用量を決めればよい。

担体に上記リパーゼを固定化して使用する場合には、そ
の比活性は高いものほど好ましく、担体／ｙ−当り／θ
θθ〜／θθ００θθ単位程度の上記リパーゼを担持し
た担体を例示することができるＯ また有機溶媒の使用量としては、用いる溶媒。

基質の種類や濃度によっても左右されるが、目安として
は基質な溶解した有機溶媒が自由に移動して上記リパー
ゼと接触し１反応が促進される程度に有機溶媒を添加す
るのが望ましく、特に制限はないが１例えば反応系のｌ
〜９９％ｒＷ／Ｗ）。

好ましくは７０〜９５％（Ｗ／Ｗ　１程度加えて反応す
ればよい。

本発明での１つの特徴は、実質的に水を加えることなど
、有機溶媒（但し、第１級アルコール溶媒を除く］の存
在下もしくは不存在下に、上記リパーゼにより行われる
ジグリセリド生成反応にあるが、このことは反応系の水
分が絶対的θを意味するものではない。そのような状態
を実際に作り出すことは不可能であり、また不必要であ
る。しかし１反応系の水は可及的に少ないほど高いジグ
リセリド生成率に達し、かつ再分解の恐れがなく、更に
上記リパーゼの活性を長（安定的に持続し。

上記リパーゼの再利用度を高めることができるので１本
発明では実質的に水を加えないだけでな（。

更に反応によって副生する水をも除きつつ固体の上記リ
パーゼを用いてジグリセリド生成反応を行なうのである
。

しかし、このことは反応系に水を僅かに共存させること
でエステルを生成しな（なることを意味するものではな
い。本発明で実質的に水を加えないと言う意味は、基質
や上記リパーゼを反応に用いるにあたって、いささかの
水も使用せず、そのままで、または有機溶媒に基質を溶
解または分散して反応を行うということである。即ち１
反応に脂肪酸で約Ｏ１θλ％、上記リパーゼで約グ〜／
Ｊ”係、有機溶媒でも約θ、θコ〜θ、／％であり、こ
れらをそのまま用いても１反応系全体としての初発含水
率は約０．２〜／、０％の範囲にあるが、このような場
合は実質的に水を加えないことになるのである。また１
反応中に空気中よりの吸湿やエステル合成に伴って副生
する水がある場合には更に含水率は上昇するが、この場
合も実質的に□水を加えないことになるのである。

そして反応系の含水率は１反応に用いる基質。

上記リパーゼ、有機溶媒などを可及的に乾燥して使用す
ることや、更に空気中より侵入する水や合成反応によっ
て副生する水がある場合には、脱水剤としては例えばゼ
オライト、シリカゲル、焼せつこう、芒硝などを用いて
除去する他、乾燥した空気や不活性ガスを反応槽中に通
気し攪拌して反応槽外に排気したり、あるいはその排気
ガスを冷却凝縮させて水分を除去し、有機溶媒を還流さ
せるなどの手段で反応系の水分を除くことができる。

このような手段により反応系の含水率なｏ、ｉ％以下に
低下することによって１例えばグリセリンとオレイン酸
のモル比がθ、２：／の場合、エステル合成率を約ｒθ
〜９Ｆ％にまで上げることができ、得られるグリセライ
ド中のジグリセライドの濃度を約≦θ〜９０％にまで高
めることができる。

本発明におけるジグリセリド生成反応は、室温程度でも
進行するので、特に加熱の必要はないが。

一般的には用いる有機溶媒の沸点や、上記リパーゼの作
用温度を考慮し、適当な温度を選んで行なうことが望ま
しく、その範囲としては１例えば０〜９０℃のごとき温
度を例示することができるが。

通常はコθ−＋≦θ℃の範囲で行なうことができる。

また１反応時間も、適宜選択することができ。

例えば７０分〜７０日を例示することができるが。

好ましくは／〜９乙時開時間とき反応時間を明示するこ
とができる。

また、必要に応じて１例えば反応系の脂肪酸の減少率を
測定したり、ＴＬＣ（薄層クロマトグラフィー）、イヤ
トロスキャン分析などの手法を利用してエステル生成過
程を追跡し、所望のジグリセリドの形成を確認すること
により反応時間な決めてもよい。

反応終了後、有機溶媒不存在下で生成したジグリセリド
は何機溶媒により分離することができる。

また、有機溶媒中で反応を行なって生成したジグリセリ
ドは、必要に応じてケイ酸アルミナ、分子ふるい用ゲル
を用いて反応系より分離したり。

〔発明の効果〕

本発明によれば、従来提案の酵素法では不可能であった
高いジグリセリド生成率で、添加した脂肪酸をほとんど
残さずに、ジグリセリドを得ることができる。また１本
発明では、脂肪酸に対して従来技術において示されるよ
うな大過剰のグリセリンを必要とせず、／対θ、７モル
比でも充分に高濃度のジグリセリドを得ることができ、
基質濃度も数％の低濃度から数／θ％の高濃度に到るま
で広い範囲で変えることができる。そしてまた。

本発明では、化学的方法では得に（いジグリセリド濃度
の高いグリセリドを得ることができる〇さらに１本発明
では、化学的方法で用いられるような有毒な反応触媒を
用いる必要がなく、極めて温和な反応条件下にグリセリ
ドが生成されるために、グリセリンやグリセリド自体の
構造に変化を起さず、優れた性質を持った安全性の高い
王にジグリセリドからなるグリセリドが得られろ。

また本発明によれば、任意の脂肪酸組成からなるジグリ
セリドを製造することが可能であるので、本発明により
得られるジグリセリドは、アシル結合のないｌケ所のヒ
ドロキシ基部分に、更に化学合成手法又は酵素的手法で
任意のアシル基を導入することによって、任意の脂肪酸
組成からなる新規なトリグリセリドをも製造するための
原料として利用することが出来る。

そしてまた１本発明により得られるジグリセリドはα型
やβ型リン脂質の合成原料としての用途も考えられる。

更に本発明で得られるジグリセリドは、ヒドロキシ基部
分にエーテル結合を導入することによってエーテル結合
を有する各種グリセリドの合成な行うための原料とする
ことも可能である。

更にまた１本発明で得られるジグリセリドは。

ジグリセリドに特異的に作用するリパーゼ活性測定用の
基質ともなり、臨床検査などに利用することも期待され
る。

〔実施例〕

以下１本発明の実施例を示すＯなお、実施例では反応系
の含水率が０．７％以下となるように脱水剤モレキュラ
ーシーブス〔和光紬薬１抹〕販売〕を用いた０ 実施例　１ オレイン酸／θ１−（３！、３ミリモル）、グリュラー
シーブス３に２０ｇ−を５００ｍ６容三角フラスコに取
り、４ｔθ℃にてグ♂時間振盪反応し、グリセリンオレ
ートを調製した０この反応液のエステル合成率は９７％
であった。なおエステル合成率は１反応系に添加した脂
肪酸のうちエステル合成に消費された量をアルカリ溶液
で滴定することにより求め１反応前の脂肪酸量に対する
脂肪酸の減少率の百分率をもって示した。

反応後、ｌθ、θθ０×ノで７θ分間遠心分離して不溶
物を除き、上清を得た。さらに不溶物にクロロホルムｉ
ｏθ耐を加え、不溶物を洗った後、遠心分離してよ清を
得た。これらの上清を合わせ。

エバポレーターにて濃縮し、溶媒を除去してグリセリン
オレートｌθ、Ｊ−９を得た。

得られたグリセリンオレートをＴ　Ｌ　Ｃにて分析した
。即ち、グリセリンオレートの／％クロロホルム浴液／
θμｋをシリカゲル薄層（メルク社製。

シリカゲル６θＴＬＣプレートＮｏ、Ｓ７．２／。

コθ×コθｃｒｎ］にスポットし１石油エーテルーエー
テルー酢酸〔７θ：ｊ　Ｏ：　／　Ｖ　／　Ｖ　）を展
開溶媒として展開した。スポットの検出にはｊθ係硫酸
またはヨウ素を用いた。５０％硫酸またはヨウ素により
スポットを検出すると、オレイン酸以外にグつのスポッ
トが検出された。これらのスポットのＲｆ値は市販のグ
リセリンモノオレート、グリセリン−７、−一ジオレー
ト、グリセリン−／、３−ジオレート、グリセリントリ
オレート【いずれもフナコシ薬品社製）に一致した〇 また、上記グリセリンオレートの成分組成比をイアトロ
スキャン（ヤトロン社製イアトロスキャンＴ　Ｉ−１／
θ）を用いて求めた。即ち、クロマロッドＳＩＴ　（ヤ
トロン社製シリカゲルロッド）に上記グリセリンオレー
トの／％クロロホルム浴液ｌμ！をスポットし、ベンゼ
ン−クロロホルム−酢酸〔オθ：、２θ：θ、ｔＶ／Ｖ
）を展開溶媒として約／θ鍋展開し、イアトロスキャン
にかけ、ピーク面積比から成分の重量比を求めた。上記
グリセリンオレートの成分組成比は、グリセリンモノオ
レート３％、グリセリンジオレート？６％（グリセリン
−７，３−ジオレート２ざ係、グリセリン−ムコ−ジオ
レート！％）、グリセリントリオレートワ％、オレイン
酸２％であった。なお、標準物質としては、グリセリン
モノオレート、グリセリン−／ｊ−ジオレート、グリセ
リン−／、３−ジオレート、グリセリントリオレート〔
いずれもフナコシ薬品社製）を用いた。

実施例　２ ステアリン酸／θ、／ｆ（３３，３ミリモル）、グリセ
リン、２．４ｔ３９（２ｔ、にミリモル）、ｎ−へキサ
ン／θθｍｌ、リパーゼーＯＦ粉末２ｆ、モレキュラー
シージス３Ａコθｔをｊθθｍｌｊ容三角フラスコに取
り、ｇ、ｔ’ににて４ｔＦ時間振盪反応し。

グリセリンステアレートを調製した。この反応液のエス
テル合成率は９ざ％であった。以後、実施例１と同様に
行い、グリセリンステ了し−ト／θ、６ノを得た。

イアトロスキャンで求めたこのグリセリンステアレート
の成分組成比は、グリセリンモノステアレートコ係、グ
リセリンジステアＶ−）？／％（グリセリン−／、３−
ジステアレート２θ％、グリセリン−／、２−ジステア
レしト１係］、グリセリントリステ了レートに係、ステ
アリン酸／％であった。

また、グリセリン２．４ｔ！ｆの代わりにグリセリン３
，１７７（３３，、ｔミリモル）を用いて上記と同様に
実施してグリセリンステアレートな調製した。この反応
液のエステル合成率は９２％であった。そして得られた
グリセリンステアレートの収量は／θ−ｓｙであった。

イアトロスキャンで求めたこのグリセリンステアレート
の成分組成比は、グリセリンモノステ了レート／／％、
グリセリンジステアレート♂乙％〔グリセリン−／、３
−ジステアレートＪ′２％、グリセリン−／、２−ジス
テアレート４ｔ％）、グリセリントリステ了レート／％
、ステアリン酸２％であった。

実施例　３ パルミチン酸９−／ｌ−（，３ｊ、ｊミリモル）。

グリセリンオレートｔ〔−ｇ、６ミリモル］、ｎ−ヘキ
サ７１００ｍｅ、リパーゼ−ＯＦ粉末２？、モレキュラ
ーシーブス３に２θｔをｊθＯｍｅ容三角フラスコに取
り、グθ℃にてグ？時間振盪反応し。

グリセリンパルミテートを調製した。この反応液のエス
テル合成率は９ｔ％であった。以後、実施例１と同様に
行い、グリセリンパルミテート２．！ｔを得た。

イアトロスキャンで求めたこのグリセリンパルミテート
の成分組成比は、グリセリンモノパルミテート２％、グ
リセリンジパルミテートｌ♂％（グリセリン−／、３−
ジパルミテート！７％、グリセリン−／、２−ジパルミ
テート／％）、グリセリントリパルミテート９％、パル
ミチン酸／％であった。

また、ｎ−ヘキサンｌθθｍｌの代わりに四塩化炭素／
θθｍｌを用いて上記と同様に実施し、グリセリンパル
ミテートを調製した０この反応液のエステル合成率は９
２係であった。そして得られたグリセリンパルミテート
の収量は／θ、／ｌであった。

イアトロスキャンで求めたこのグリセリンパルミテート
の成分組成比は、グリセリンモノパルミテート（Ｌグリ
セリンジパルミテート？θ％（グリセリン−／、３−ジ
パルミテート♂θ％、グリセリン−／、２−ジパルミテ
ート／θ％）、グリセリントリパルミテートθ、Ｓ％、
バルミチン酸θ、ｊ係であった。

実施例　４ ラウリン酸７．／１−Ｃ３ｊ、３ミリモル）、グリセリ
ン２．４ｔ３ノ（２６，６ミリモル）、ｎ−ヘキサ７７
００ｍ８．リパーゼ−ＯＦ粉末２ｇ−、モレキュラーシ
ーブスｊＡＪθｔを！θθｍｅ容三角フラスコに取り、
４ｔθ℃にてＱ／時時間振盪口し。

グリセリンラウレートを調製したＯこの反応液のエステ
ル合成率は９乙係であったＯ以後、実施例１と同様に行
いグリセリンラウレート７．９ｇ−を得た。

イアトロスキャンで求めたこのグリセリンラウレートの
成分組成比は、グリセリンジラウレート リン−／、３−ジラウレート！３％、グリセリン−／、
２−ジラウレート／乙％）、グリセリントリラウレート
／９％、ラウリン酸ｑ％であった。

また、ラウリン酸７．／ｆの代わりにカプロン酸４ｔ　
、　７　ｆ　（３ｊ　、　ｊミリモル）を用いて上記と
同様に実施し、グリセリンカプロネートを調製した。こ
の反応液のエステル合成率は７θ係であつた。そして得
られたグリセリンカプロネートの収量はｊ、３ｙであっ
た。

イアトロスキャンで求めたこのグリセリンカプロネート
の成分組成比は、グリセリンシカプロネートコθ％、グ
リセリンシカプロネート！／％（グリセリン−／、３−
シカプロネート３５％、グリセリン−／、２−シカプロ
ネート／乙％）、グリセリントリカプロネート／％、カ
プロン酸２ざ％であった。

実施例　５ オレイン酸／θｆｃ３！’、ｊミリモル）、グリセリン
オレー！１ｌ−（２ｔ、６ミリモル１．ｎ−へブタン／
θθｍｅ、リパーゼーＯＦ粉末λ）、モレキュラーシー
ブス３に２０ｊｉ！−をオθθｍｌ容三角フラスコに取
り、４ｔθ℃にて４ｔ、ｌｌ′時間振盪反応し。

グリセリンオレートを調製した。この反応液のエステル
合成率は９７％であった。以後、実施例１と同様に行い
グリセリンオレー）　／　０　、　？ｆを得たＯ イアトロスキャンで求めたこのグリセリンオレートの成
分組成比は、グリセリンモノオレーｉｔ係、グリセリン
ジオレート？／％（グリセリン−／、３−ジオレート♂
乙％、グリセリン−／、２−ジオレート２％）、グリセ
リントリオレート乙％。

オレイン酸／％であった。

また、ｎ−へブタン／θＯｍｌの代わりにシクロヘキサ
ン／θθ耐を用いて上記と同様に実施し。

グリセリンオレートを調製した０この反応液のエステル
合成率は９２％であった０そして得られたグリセリンオ
レートの収量は／θ、４ｔｉＦであった０イアトロスキ
ヤンで求めたこのグリセリンオレートの成分組成比は、
グリセリンモノオレートコ％、グリセリンジオレート！
９％（グリセリン−／、３−ジオレート２ク オレート２％）、グリセリントリオレート７％。

オレイン酸２％であった。

また、ｎ−ヘプタン／θＯｍｅの代わりに四塩化炭素１
００ｍｅを用いて上記と同様に実施し，グリセリンオレ
ートを調製した。この反応液のエステル合成率は９２％
であった。そして得られたグリセリンオレートの収量は
／　０　、　４１！９−であった。

イアトロスキャンで求めたこのグリセリンオレートの成
分組成比は、グリセリンモノオレート７％，グリセリン
ジオレート９／％（グリセリン−／，！ージオレート！
２％，グリセリン−／，２−ジオレート９係］，グリセ
リントリオレート／％。

オレイン酸７％であった。

実施例　６ ステアリン酸／θー／ＪｊＣ３ｊ，ｊミリモル）。

グリセリン２．４１３ｆＣ．２ｔ，１．ミリモル）、イ
ソオフタフ１００ｍｅ％リパーゼ−ＯＦ粉末２ｇ−。

モレキュラーシーブス３に２θノをｊθθｍｂ容三角フ
ラスコに取り，グ０℃にてグざ時間振盪反応し，グリセ
リンステアレートを調製した０この反応液のエステル合
成率は９ｚ％であった０以後。

実施例１と同様に行いグリセリンステアレート／θ，７
ｇ−を得た。

イアトロスキャンで求めたこのグリセリンステアレート
の成分組成比は，グリセリンモノステアレート３％，グ
リセリンジステアレート！乙％（グリセリン−／、３−
ジステアレート？３％、グリセリン−／、＋２−ジステ
アレート３係）、グリセリントリステアレート９％、ス
テアリン酸２係であった。

また、イソオクタンｌθθｍＢの代わりに石油エーテル
／θθ蛯を用いて上記と同様に実施し、グリセリンステ
アレートを調製した。この反応液のエステル合成率は９
２％であった。そして得られたグリセリンステアレート
の収量は／θ、乙ｔであった。

イアトロスキャンで求めたこのグリセリンステアレート
の成分組成比は、グリセリンモノステアレート／％、グ
リセリンジステアレート１９％（グリセリン−／、３−
ジステアレー）？７％、グリセリンー／、２−ジステア
レートλ係）、グリセリントリステアレート♂％、ステ
アリン酸、２％であった。

実施例　７ オレイン酸／θｆ（３，！ｆ　、Ｊ−ミリモル）、グリ
セリン２．４１３ｆ（２乙、６ミリモル）、リバーセー
ＯＦ粉末λノ、モレキュラーツーブス３Ａコθｔをｌθ
θｍｌ容三角フラスコに取り、グθ℃にて４ｔＦ時間振
盪反応し、グリセリンオレートを調製した。この反応液
のエステル合成率は９乙係であった。反応後、ｎ−ヘキ
サン／θθｍｌを加え、以後実施例１と同様に行いグリ
セリンオレート／θ、にノを得た。

イアトロスキャンで求めたこのグリセリンオレートの成
分組成比は、グリセリンモノオレート／す係、グリセリ
ンジオレート乙θ％〔グリセリン−／、３−ジオレート
４ｔり％、グリセリンー／、２−ジオレート／に係）、
グリセリントリオレート２０係、オレイン酸、２％であ
った。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）グリセリンと炭素数Ｃ＿４〜Ｃ＿２＿２の飽和も
   しくは不飽和脂肪酸に、実質的に水を加えることなく、
   有機溶媒（但し、第１級アルコール溶媒を除く）の存在
   下もしくは不存在下に、脱水して、キヤンデイダ・シリ
   ンドラセ（Ｃａｎｄｉｄａ　ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ）
   から変異誘導され、キシロースの資化性がなく、培地中
   に８００単位／ｍｌ以上のリパーゼを生産する能力を有
   するキヤンデイダ・シリンドラセの変異菌の生成するリ
   パーゼを作用させることを特徴とする酵素法によるジグ
   リセリドの製造法。
2. （２）反応系の含水率を０．１％以下に可及的に脱水し
   て、キヤンデイダ・シリンドラセ（Ｃａｎｄｉｄａ　ｃ
   ｙｌｉｎｄｒａｃｅａ）から変異誘導され、キシロース
   の資化性がなく、培地中に８００単位／ｍｌ以上のリパ
   ーゼを生産する能力を有するキヤンデイダ・シリンドラ
   セの変異菌の生成するリパーゼを作用させることを特徴
   とする特許請求の範囲第１項記載の方法。