JPS62169813A - 分散重合体およびそれらの製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は分散重合体、それらの製法、並びにそれらの用
途に関するものであり、この分散重合体はラテックス粒
子よりなり、その外層はビニル単量体の共電合体を形成
し、単量体のうち１種はヒドロキシル基含有Ｎ−アルキ
ルアクリルアミド化合物又は対応するメタクリレートで
ある。生物活性分散重合体は本発明による分敞蔦合体粒
子の表面に、アルデヒド官能から誘導される反応性基に
、遊離アミノ基を有する生物活性物質を結合させること
により、上記の分散Ｉ合体から得られる。これらの生物
活性ラテンクスコンジュゲートは血清学的及び免疫学的
測定法に適当である。

血清学的及び免疫学的測定法の感度は、適当な兇疫字的
試奈が負荷されている指示体又は担体粒子を使用するこ
とによって増大させることが知られている。例えば、細
胞培養の赤血球または細胞を担体材料として使用するこ
とができる。０．０２〜５μｍの直径を有するラテック
ス粒子もこの場合に用いることができる。

その外、砂楯又はデキストランのようなポリヒドロキシ
化合物をラテックスを液種するのに使用することができ
ることが知られている（ヨーロッパ特許０．ＯＯｌ、２
２３号明細書参照）。吸着的に結合されているポリヒド
ロキシ化合物は洗剤含有緩衝液から分離することがある
ので、前記のラテックスは前記の緩＃液に対して安定で
はない。

ヨーロッパ特許出願ＫＰ−Ａｓ’２，１１０．２７５．
８号明細書は酸アミド基によって結合されているアセタ
ール官能を含有するラテックス粒子を開示している。ラ
テックス核は水性媒質中あらかじめ形成され、酸アミド
基によって結合されているアセタール官能基を有するビ
ニル単量体を使用するとわずかに膨潤し、これらのビニ
ル単量体は水中で十分な不溶性を有していなけｎばなら
ず。

仄に親水性又はイオン性を有してもよい別の単を体と一
緒に共重合される。前記の試薬はａ−反応性蛋白の比濁
法決定に用いることができる。

この目的のためには、血清試薬は普通１：１００に希釈
され、それによって干渉する血清蛋白（このように希釈
しない場合には、虚偽の旧又は虚偽の負を生じる）をＳ
視することができる。

一般に５診断の目的には５ｍ９／２を超えるＣ−反応性
蛋白の濃度でなければならないので、この操作は可能性
がある。しかし％　１μノ／ぶ〜５躯９／βの範囲の根
跡の蛋白の濃度を測定したい場合には、希釈すると検出
されるべき蛋白の濃度が非常に低くなるので、検出感度
は十分でなくなり。

従って試料をこのように犬きく希釈してはならない。

しかし、現在の技術によるラテックス製品の検出感度は
容易には増大させることができず。

例えば、イムノグロブリンＥの測定の場合、満足に機能
する試験が得られない。感度を増大させる試みは比較的
短時間後に、標準カーブの測定のだめの信号が非特異的
に増大して評価ができなくなるような結果しか与えない
。急勾配の標準カーブはなくなる。その理由はこのよう
な不安定な試薬の個々の粒子が抗原が存在しなくとも凝
集するからである。

嶌くべきことに、現在の技術について説明されている欠
点は、１つ又はそれ以上のヒドロキシル基を有するアク
リル又はメタクリル単量体と、酸アミド基によって結合
されているアセタール官能基を有するアクリル又はメタ
クリル単量体と、水性媒質中あらかじめ形成されたラテ
ックス核を共重合させることによって製造される担体粒
子を使用することによって克服することができることが
本発明者らによって見出された。

従って本発明はラテックスよりなり、その表面に式！ 〔式中。

ｎは１〜６を表わし； Ｒ１は■又はＣＨ５を表わし、そして Ｒ２及びＲ３は同一又は異なっており、　−（ｃａ２）
ｍ−ａＨ。

（ただしｍは０〜７を表わす）、或いは（ただし。

Ｘ、Ｙ及び２は（ＣＨ２）ＰＣＨ５（ただし、Ｐは１〜
３を表わす〕を表わし、 Ｘ、Ｙ及び２は同一又は異なっている）を表わす〕 を有する末端アセタールを有する単量体、並びに式■ （式中。

Ｒは０又はＮＨを表わし； ｎは１〜５１ｒ、表わし： ｍは１〜４を表わし； λは０〜４を表わし：そして Ｒ１はＨ又はｃａ５を表わす） を有する単量体から水性媒質中で製造される共重合体が
存在する担体粒子を含有する分散液に関する。

本発明による分散液（又はラテックス）は種分散液とし
て製造することができ、それは既知の方法を用い１通常
の慣用のラテックス粒子上に共重合させることによって
単量体から単独又は共重合体として得ることができる。

本発明による分数液の拙分散液として用いられるラテッ
クス粒子はフィルム形成性重合体であるべきではない。

「非フイルム形成性」とは本発明において適当なある適
用条件下でフィルムを形成せず、又凝集しない重合体ラ
テックス粒子を意味する。スチレン、ビニルトルエン及
びビニルナフタレンのような、炭素環状芳香ｉモノビ＝
　＋７デンｉｐｔ体、又これらの単一体の相互及び（又
は）メタクリル酸メチル及びアクリロニトリルとの混合
物も好適である。特に好適な種分散液はポリスチレンラ
テックスである。

本発明による変団種ラテックスを製造するためには、原
則的には、０．０２〜２μｍ、　好適には０．０５〜０
．５μｍの粒径を有するあらかじめ形成されたラテック
スに、ラテックス表面を単分子で最大限に被覆するのに
必要な乳化剤の量の約２０〜８０％を添加する。ラテッ
クス表面を最大限に被覆するだめの乳化剤の量を決定す
るための測定は　４１１１力計を使用して実施される。

それは例えば、　　「Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｏｌ’
１ｏｉｄ　ａｎｄ　Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ　５ｃｉｅｎｃ
ｅ’。

第７４巻（１９７９）、９０〜１０２頁に２いて工、フ
アーマ及びＥｌ、Ｒ，ジエンにより、また、ｌ’−Ｊｏ
ｕｒｎａｌｏｆ　０ｏｌｌｏｉ４　Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ
　５ｃｉｅｎｃｅｓ、　果９巻（１９５４）。

８９〜１０４貞においてＳ、Ｈ，マロン、Ｍ、Ｌエルダ
ー及び工ＪＪ、ウレビツチによって発表されている。

適当な乳化剤は例えば、長鎖を有するポリグリコールエ
ーテル類、好適には１０〜２０個の炭素原子を有する脂
肪族アルコール類、或いはそのアルキル基が好適には６
〜１２個の炭素原子を有スルアルキルフェノール類、或
いはそのアルキル基が各々の場合５〜１２個の炭素原子
を有する分枝アルキル基を表わすジアルキルフェノール
類又はトリアルキルフェノール類である。これらの例と
しては酸化エチレンと、ラウリルアルコール、ステアリ
ルアルコール、オレイルアルコール、ココナツ脂アルコ
ール、　オクｆルフェノール、ノニルフェノール、ジイ
ソフロビルフェノール、トリイノプロピルフェノール、
ジ−をブチルフェノール及びトリーをブチルフェノール
との間の反応生成物である。酸化エチレンとポリプロピ
レングリコール又はポリブチレングリコールとの間の反
応生成物も適当である。

イオン系乳化剤のうち、なかんずくアニオン系乳化＃Ｌ
特にスルホン酸アル午ル、スルホン酸アリール又はスル
ホン酸アルキルアリールのアルカリ又はアンモニウム塩
、又場合によりそれぞれの炭化水素基とアニオン基との
間にオキシエチレン単位を有する。対応するサルフェー
ト、ホスフェート又はホスホネートのアルカリ又はアン
モニウム塩である。これらの例としてはドデシ／Ｌ／＠
酸ナトリウム、ラウリル＠改ナトリウム、オクチルフェ
ノールグリコールエーテル硫酸ナトリウム、ドデシルベ
ンゼンスルホン酸ナトリウム、ラウリルジグリコール硫
酸ナトリウム、トリーをブチルフェノールはメタグリコ
ール髄酸アンモニウム及びトリーをブチルフェノールオ
クタグリコール硫酸アンモニウムである。ドデシル硫酸
ナトリウムが好適に用いられる。

重合はラジカル発生開始剤１例えば、過酸化物化合物又
は脂肪族アゾ化合物の存在下にそれ自体既知の方法によ
って笑施される。用いられる開始剤は好適には水溶性で
ある；それは０．０５〜１０貞虐チ、好適には０．１〜
３重量係量部量体の全ｉ基準による）の量で用いられる
。既知のラジカル発生開始剤は例えば、過酸化水素、パ
ーオキソジ＠酸又はパーオキソシリン酸のアルカリ又は
アンモニウム塩１例えばパーオキノ硫酸ナトリウム、パ
ーオキソジ硫酸カリウム及びパーオキソジ硫酸アンモニ
ウム、更にヒドロ過酸化をブチルのようなヒドロ過酸化
アルキル。

過酸化ジ−をブチルのような過酸化ジアルキル、過酸化
ジアセチル、過酸化ジラウロイル及び過酸化ジベンゾイ
ルのような過酸化ジアシル。

並びに又アゾジインブチロニトリル、アゾジカルボキシ
アミド及びアゾ−γ、γ″　−ビス（４−シアノバレリ
ン酸）である。パーオキソジスルホン酸ナトリウム、カ
リウム及びアンモニウムのようなパーオキンジスルホン
酸のアルカリ金層又はアンモニウム塩が好適に用いられ
る。

開始剤は適当である場合には、還元剤、特に還元性硫黄
含有酸のアルカリ塩又はアルカリ土類金属塩と共に用い
られる二％に適当なのはサルファイド、ダブルファイト
　、ピロサルファイド、ジチオナイト、チオサルフェー
ト及びホルムアルデヒドスルホキシレートである。グル
コース及びアスコルビン酸も１史用することができる。

式ＩＩを有するヒドロキシル基官有単量体と式■を有す
るアセタール基含有単量体との単量体混合物は、乳化剤
及びフリーラジカル開始剤を官有する種分子ｌＬｍに、
撹拌下に請訓される。

分散ｅ　（Ｄ　温度は＋１０°〜＋１２０°Ｃ１好適に
は＋５０”＋９０°Ｃである。

式ＩＩを有するポリヒドロキシ化合物はヒドロキシル含
有単量体として適当である。モノ−及びジヒドロキシア
ルキルアクリル又はメタクリル化合物が好適に用いられ
る。特に好適なのはＮ　−２，３−ジヒドロキシプロピ
ルメタクリルアミド、Ｎ−２−ヒドロキシプロピルメタ
クリルアミド、２−ヒドロキシプロピルメタクリレート
及び対応するアクリル化合物である。

式１ｅ有する化合物はアセタール基含有単量体として用
いられ、アルキルが０２〜Ｃ８を表わすアクリルアミド
アルキル又はメタクリルアミドアルキルアルデヒドジア
ルキルアセタールが好適に使用される。特に好適なもの
はアクリルアミド又はメタクリルアミドアセトアルデヒ
ドジ−ｎ−ペンチルアセタールである。

式ｌ及びＩＩを有する単量体は種分散液に混合物として
添加され、単量体混合物は１０〜９ｏ重量％、好適には
６０〜７０重量％の量の式ＩＩを有するポリヒドロキシ
化合物、並びに９０〜１０重量係、好量部は７０〜６０
ム量チの量の式Ｉを有するアセタール化合物よりなる。

全混合物基準で、３０重ｆｉ％までのスチレン。

ビニルナフタレン又はビニルトルエンをこの単量体の混
合物に添加することができる。その外。

適当な場合には、単量体の混合物は全混合物基準で、３
０重量俤までのメタクリル酸、アクリル酸又はクロトン
酸も含有することができる。

単量体の混合物基準で２０’Ｊｉｉｔ％までのジメチル
ホルムアミド又は粘度を減少させる他の物質を単量体よ
りなる混合物に添加することが有利である。

単量体の混合物は種分散液及び単量体の混合物の全量基
準で、９０〜ｓｉ雪チ、好適には４０〜１０１Ｋ量係の
址で種分散液に添加される。

播種重合自体は既知の方法によって実施することができ
る。しかし１本発明による方法の好適な実施態様は分散
法であり、単量体の混合物が重合栄件下、即ち＋１０℃
〜＋１２０℃、好適には＋５０℃〜＋９０℃の温度にお
いてラテックス核の懸濁液に、一定の撹拌下で請訓され
る。次にこの重合体は耽知の方法によって過剰の単量体
、残留する開始剤、並びに乳化剤が実質的に除かれる。

この重合体は有利には、例えばＮａＨ（：ｊ０５緩ｌ′
ｋＪ液（００１〜０．０５釦ｉｔ％）を用いて透析に付
される。

本発明による生物活性分散液（以下ラテンクスコンジュ
ゲートとも記載される）の製造のためには、上述した播
種凰合ラテックス粒子の懸濁液の−を５未ｆ４．好適に
は６未満に調節し、例えば、抗体又は抗原のような、結
合されるべき免疫学的活性材料と共にインキュベートす
る。

蛋白のアミノ基と本発明によるラテックス粒子上の遊離
型のアルデヒドとの間の易動性の結合は、既知の方法に
よって低減される。中性緩衝液のシアノホウ化水素ナト
リウムの溶液をこの目的のために使用することが好適で
ある。必要に応じて、未結合の免疫学的活性材料又は他
の汚染物質を反応バッチから分離する。このことは適当
な膜上遠心分離又は洗浄によって実施することが好都合
である。

本発明による播種蔦合ラテックスは特に安定であること
がｔｒｆ徴である。それらは１％に鋭敏な試薬の製造に
適しているが、既知の分散に！Ｌ。

特に高い検出感度を有するものは、比較的短時間後に非
％異的に凝集する傾向がある。比濁又は？Ｊｉ１度滴定
測定の場合には、このことは散乱光又は吸光度信号の工
■犬を生じる。試薬が故時間貯蔵された後標準カーブの
測だのための信号が非常に大きくなるので、評価が不可
能になる。

異なったイムノグロブリンＥ濃度における現在の技術に
よる試薬を使用して記録された標準曲線のこのような変
化は、第１図によって示される。第６図は対応する測定
を示すが１例３に従って製造された本発明による試薬を
使用して実施されたものである。本発明による試薬はは
るかに低い固有の凝集を有し、それを使用することによ
り広い、動的な測定範囲が得られることが明らかに示さ
れる。

本発明によるラテックス試薬の安定性は現在の技術によ
って製造された試薬よりかなり低い試薬のブランク値を
有する（第３図及び第１図参照ンことによっても東証さ
れる。＋４℃〜＋８℃において叙か月（少なくとも６か
月まで）試薬を貯蔵した後、及び３７°Ｃにおいて数日
（少なくとも１４日まで）凍結乾燥した試薬を熱処理す
る際の両方で異なった濃度のイムノグロブリンコを使用
して測定された標準曲線について。

実質的に変化のない結果が得られる。

慣用の試薬の欠点はそれらを用いて実施された比濁又は
濁度滴定測定が、酵素イムノアッセイの結果とかなり一
致しない結果を与えるという事実によっても示される。

第２図は酵素イムノアッセイの結果と比較した。イムノ
グロブリンＥ試薬を用いる血清試料について、現在の技
術によって例５に従った比濁測定の結果を示す。

例１及び５に従って本発明によるラテックスを使用して
イムノグロブリンＥ試栗を用いて実施された、同一の比
濁測定が第４図及び第５図によって示される。見て分る
ように、酵素イムノアッセイの結果とのすぐれた一致が
達成される。

血清マトリックスによって、自身のイムノグロブリンＥ
は含有しないが、同じ墓の精製イムノグロブリンＥが強
化されている異なった患者の血清について、現在の技術
による試薬を使用して異なった値も得られる。本発明の
試薬を用いて得た結果は又１表２による測定値と表１中
照合されている測定値を比較することによって示される
ように、この点において著しい改善をもたらすものであ
る。

本発明によるラテックス製品は製造するのに簡単であり
、敏感な免疫学的活性材料に温和に結合させることがで
き診断試薬を生成する。本発明による分散重合体及びそ
れから製造されるそれらの生物活性ラテックス、ラテッ
クスコンジュケ゛−ト及び試薬は現在の技術のものに比
して安定である。それらはマトリックス効果によって生
じる干渉に対して感受性を有せず、それらを用いて実施
される比濁又は濁度滴定決定は酵素イムノアッセイを使
用しても達成することができる。現在の技術に比較して
、虚偽の正又は虚偽の負が表われるのがかなり少なくな
る。

イムノグロブリンＥを含まない血清を精製イムノグロブ
リンＥを用いて強化することによって。

本発明による試薬を使用して理論的に近い値が得られる
。干渉効果を受けにくいことは変動係数の低い値によっ
ても示される（表１及び表２参照）。

このラテックスコンジュゲートは例えば可視ラテックス
凝集試験を使用する物質の定性的又は半定量的決定にお
いて、並びに又直後又は競合凝集試験における。又ラテ
ックスーハプテン阻害試験における根跡量の蛋白の比濁
又は濁度滴定決定のために、粒径の変化を測定するすべ
ての診断法において用いることができる。

実施例 Ｉａ）　　Ｎ、−（２，３−ジヒドロキシプロピル）−
メタクリルアミドの合成 ６−アミノ−１，２−プロパンジオール４．５６９（［
］、００５モルをジメチルホルムアミド（無水）５０峨
に溶解した。この溶液並びに又ｘ２ｃｏ５１３．８２を
滴下ｐ斗及びガス入口及び出口バイブを備えた１００ｍ
１＋の３頚フラスコに移した。この混合物を水浴中０℃
に冷却した。塩化メタクリル６．１８ｒｎＱ（０，０６
モル）をジメチルホルムアミド３０ｍ１に溶解し、中程
度の攪拌及びゆるやかな窒素気流下に３０分間にわたっ
て滴加した。水冷下更に１時間攪拌後、この混合物を室
温にし、更に３０分間撹拌した。−この反応バッチをひ
だ付Ｆ紙を通して濾過し、残渣を棄てた。粘稠な油状物
が得られるまでロータリーエバポレーターで戸板を濃縮
した。この油状物をメタノール３０峨に溶解し、２回目
の濾過を行ない、ｐ液を再びロータリーエバポレーター
で再び濃縮した。溶媒の残留量を高真空で除去した。収
量は８．５２．ｓ＋であった。

’ｂ）　　ポリスチレン核へのＮ　−（２，３−ジヒド
ロキシプロピルンメタクリルアミド（ＮＤＰＭ）の重合 固形分１７．９重＊係を有するポリスチレンラテックス
分散液２２．３１１１１．蒸留水５７ｍ１及びドデシル
硫酸ナトリウム５０ｇ９を、ガス入口及びガス出口バイ
ブ及び磁気撹拌棒を備えた円筒形ガラス容器に入れ、攪
拌によって溶解した。くり返して排気し、窒素を光填す
ることによってこの１合容器から酸素を除いた。このラ
テックス／洗剤混合物を水浴中で一足の撹拌下に＋７０
℃に加熱した。パーオキソジ硫酸カリウム溶液（蒸留水
緘あたり１３■）１峨を添加した。

スチレン０．２１ｄ、メタクリルアミドアセトアルデヒ
ドジ−ｎ−ペンチルアセタール０．４　ｍｌ　。

メタクリル酸０．Ｑ２５ｍｌ及び例１ａ）で得られ九Ｎ
−（２，５−ジヒドロキシプロピル）メタクリルアミド
（ＮＤＰＭ）　０．４　峨並びに又これらの単量体の溶
解度を改善するため、ジメチルホルムアミド０、２　ｍ
ｆｆ１から単量体の混合物を製造した。

ポリスチレンラテックス懸濁液をはげしく攪拌しながら
、単量体の混合物を６０分間にわたって前者にゆっくり
滴加した。重合パッチの温度は７０℃に保たれた。単量
体の混合物の請訓恢、この混合物を上記温度において更
に４時間攪拌した。重合が終了し、分散液を室温に冷却
し、ひだ付Ｐ紙を用いて濾過してラテックス懸濁液７３
ｆｆ１１が得られた。次にこれをＮａＨＣＯ５緩僑液（
Ｑ、２５ｊ’／リツトル、−８〜８．２ンを用いて１７
時間ｆ！透析した・固形分４．７］［＠チを有するラテ
ックス分ｄｇ８Ｑ峨が得られた。

２ａ）　Ｎ　−（２−ヒドロキシプロピルンメタクリル
アミドの合成 １−アミノ−２−プロパツール３．７５ｊｌ　（０，０
５モルフを、アセトニトリル（無水）３〇−及びに２Ｃ
Ｏ５１！１．７９９　（０，１モル）と共に１滴下戸斗
及びガス入口及びガス出口バイブを備えた３頚フラスコ
に入れ、水浴中で０℃に冷却した。塩化メタクリル６．
１８５１（０，０６モル）をアセトニトリル３０ｍｊｌ
に溶解し、一定の攪拌及びゆるやかな窒素気流下に６０
分間にわたって滴加した。水冷下更に６０分間撹拌後、
この混仕物を室温にし、更に６０分間攪拌した。このバ
ッチをガラスフリットを通して濾過し、沈殿物を果てた
。

粘稠な油状物が得られるまで戸板をロータリーエバポレ
ーターで濃縮した。これをメタノール３０ｍｅに溶解し
、現わｎる沈殿があれば分離した。Ｐｇを再びロータリ
ーエバポレーターで濃縮し、残留量の溶媒を高真空で除
去した。収量は６６６９であった。

ｂ）ポリスチレン核へのＮ−（２−ヒドロキシプロビル
ノメタクリルアミドの重合 例１ｔ））に記載したのと同様に重合を実施した。

固形分１３．５重″ｌｌｔ俤を有するポリスチレンラテ
ックス２４．２ｆｌＬ！、蒸留水５４．８ｍｌ及びドデ
シル硫酸ナトリウム５０■の混合物を調製した。これを
重合容器に入れ、酸素を除去した。パーオキシジ硫酸カ
リウム各液（１３１１９／蒸留水ｒｄ）ｊｍｉを添刀口
し、このバッチを＋７０°Ｃに加熱した。スチレン０．
４　ｍｌ！　、メタクリルアミドアセトアルデヒドジ−
ｎ−ペンチルアセタール０．４　Ｈｉｔ　、メタクリル
ｅＲＯ，０２５−及びＮ−（２−ヒドロキシプロピル）
メタクリルアミド０．４　ａＮの混合物を調製した。

はげしく攪拌されたポリスチレンラテックス懸濁液に＋
７０℃で６０分間にわたって単量体の混合物を滴加した
。次にこの混合物を更に４時間同じ温度において攪拌し
た。室温に冷却し。

ひだ付戸紙を通して戸遇した後１重合体７４ｍ１が得ら
れた。次にこれをＮａＨＯＯ５緩衝液（０，２５Ｆ／リ
ツトル、ｐＨ８〜８．２ンを用いて約２０時間透析し九
。固形分５．４重量％を有するラテックス懸濁液７９峨
が得られた。

６）ポリスチレン核への２−ヒドロキシプロピルメタク
リレ−）　（ＨＰＭンの重合 例１１））中記載されたのと同様に重合を実施した。固
形分１７．９重量部を有するポリスチレンラテックス２
２．４ｍｌ、蒸留水５６．７１１１１及びドデシル硫酸
す）　ＩＪウム５０■の混合物を調製した。これを重合
容器に入れ、＃ｌ素を除去した。次にパーオキソジ硫酸
カリウム溶液（、＠留水中１３１９／峨）を添加し、こ
のパッチを＋７０℃に加熱した。

スチレン０．４　ｍｌ　、メタクリルアミドアセトアル
デヒドジ−ｎ−ペンチルアセタール０．４ｍ、メタクリ
ル酸０．０２５ｍｊｌ及び２−ヒドロキシプロピルメタ
クリレート（ＨＰＭ）α２ｒｎｔの混合物を調製した。

はげしく攪拌したポリスチレンラテックス懸濁液に＋７
０℃において６０分間にわたって単量体の混合物をゆっ
くり滴加した。矢にこの混合物を同じ温度において更に
４時間攪拌した。

室温に冷却し、ひだ付戸紙を通して濾過した後、Ｎ合体
７５−が得られた。次にこれをＮａＨＯＯ５緩衝液（０
，２５Ｆ／リツトル、−８〜８．２）を用いて約２０時
間透析した。固形分５．１俤を有するラテックス分散ａ
８７ｍが得られた。

４）本発明による重合体への抗イムノグロブリンＥ抗体
の結合 例１によりＮ　−（２，３−ジヒドロキシプロピル）メ
タクリルアミドを使用して製造するか。

又は例２によりＮ−（２９３−ヒドロキシプロピル）メ
タクリルアミドを使用して製造するか。

又は例３により２−ヒドロキシプロピルメタクリレート
を使用して製造された重合体に、抗イムノグロブリンＥ
抗体を結合させた。

各々の場合に用いられる重合体を蒸留水を使用して固形
分４重量部に希釈した。精製イムノグロブリンＥを使用
してウサギを免疫石室することによって得られた抗血清
を、アフィニティクロマトグラフィーを使用して既知の
方法によって精製した。次にタンパク含ｔ１０η／−に
達するまでそれを濃縮した。

前述した重合体３．４１ｎ１を抗イムノグロプリンＥ抗
体浴ｉ０．３４ｍ１と温合した。仄にエイコサーオキシ
エチレンンルビタンラクレー）（ｒＴｗｅｅｔＪＪ２０
）の２０係力価水溶液ｌ：Ｌ１７−を添加し、次ＫＭ体
を再び混合した。これに１Ｎ　Ｈｄ　０．０５ｍ１を添
カロし、〆１約２が得られた。室温において６０分間イ
ンキュベートした後、リン酸水素ナトリウム飽和水心液
（ｐｉ１３．５　）　０．８５ｍ！！及びシアノホウ水
木化ナトリクム水溶液（２５■／峨）　　０．８５ｍｆ
ｆ１を添加し、十分混合した。次にこの混合物を室温に
おいて１時間イン中ユベートした。

次にこのｖＩ４製品を約ｓｏ、ｏｏｏｐにおいて（ベッ
クマン遠心機、　２０．０００ｒｐｍ　）　　５０分間
遠心分離した上澄みを棄てた。このベレットをグリシン
／　Ｎａ（Ｖｌ緩衝液（グリシン０．１モル、　Ｎａ０
Ａ　０．１７モル、エイコサーオキシエチレンソルビタ
ンラクレー）　（ｒＴｗθｅｎＱｓ）Ｊ　２０　）　　
０．５　係、　ｐＨ８，２）　５　ｍｌｔ中再−濁させ
た。

次にこの混合物を超音波（ブロンマン・ンニフイアＢ１
５）で２秒間処理した。かくして再分散嘔れた試系を上
述したグリシン／　Ｎａ０ＪＩＩ緩傭液で容量比１：８
０に希釈した。

５）血清試料中のイムノグロブリンＥ濃度の測定 本発明によるラテックス調製品に抗イムノグロブリンＥ
抗体を結合させることによって、例４に従って製造され
た試薬を用いて恵者の血清中のイムノグロブリンＥを測
定した。標準としてエンジグノスト・テスト（ベーリン
ググエルケ社、）の最高イムノグロブリン’ｚ＠度を有
する最高の標準試料を使用する。バッキング・インサー
トによれば、このイムノグロブリンＥ標準は１，０００
工Ｕ／ｄを含有する。この標準をイムノグロブリンＥを
含まない血清プールを使用して更に２倍段階で希釈した
。このようにして減強化されている血清試料について例
５による比濁法試験における測定値。測定は現在の技術
に従って製造された試薬を使用して実施された。

表　　２ 比濁法試験における測定値（本発明による試薬）血清随
　　　　　　　イムノグロブリンＫｆａ度（工Ｕ／ｗ）
平均値＝５４１工Ｕ／′ｒｎＱ＝　１０４％再現公称値
＝５２０工ＵＡｎＱ 変動係数＝１０チ 各々の場合イムノグロブリンＫ　５２０　ＩＵ／′ｒｎ
ｉ　力強化されている血清試料について例５による比濁
法試験における測定値。測定は例３に従って製造され九
本発明による試薬を使用して実施された。

【図面の簡単な説明】

第１図は現在の技術によるイムノグロブリンＫｍ度につ
いての標準曲線を示す。 第２図は現在の技術による例５に従った比濁測定と酸素
イムノアッセイとの比較である。 第５図は本発明により製造された試薬を用いるイムノグ
ロブリンＥ濃度についての標準曲線を示す。 第４図及び第５図は本発明による例１及び例３に従って
製造されたラテックスを使用した比濁測定と酵素イムノ
アッセイとの比較である。 第１図 ＬｇＥ　Ｍ　Ｗ　（工Ｕ／ｍＡ） 第３図 ＩｇＥ：震度（ＩＵ／ｍｆｌ） 兜４図 酵素イムノアッセイ　Ｉｇ　Ｅ　（ＩＵ／＋ｌ１ｌ）第
５図

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）ラテックス粒子よりなり、その表面に式 I ▲数式
   、化学式、表等があります▼ I 〔式中、 ｎは１〜６を表わし； Ｒ＿１はＨ又はＣＨ＿３を表わし、そして Ｒ＿２及びＲ＿３は同一又は異なっており、−（ＣＨ＿
   ２）＿ｍ−ＣＨ＿３（ただしｍは０〜７を表わす）、或
   いは ▲数式、化学式、表等があります▼ （ただし、 Ｘ、Ｙ及びＺは（ＯＨ＿２）＿Ｐ−ＣＨ＿３〔ただし、
   Ｐは１〜３を表わす〕を表わし、Ｘ、Ｙ及びＺは同一又
   は異なっている）を表わす〕 を有する単量体、並びに式II ▲数式、化学式、表等があります▼II （式中、 ＲはＯ又はＮＨを表わし； ｎは１〜３を表わし； ｍは１〜４を表わし； ｌは０〜４を表わし；そして Ｒ＿１はＨ又はＣＨ＿３を表わす） を有する単量体から形成される共重合体が存在する分散
   重合体。 ２）水性媒質中種分散液の存在下に式 I を有する化合
   物及び式IIを有する化合物の単量体の混合物を重合する
   ことによって得られる分散重合体。 ３）式IIを有する単量体としてモノ−又はジ−ヒドロキ
   シアルキルアクリル又はメタクリル化合物が用いられる
   特許請求の範囲第１項記載の分散重合体。 ４）式IIを有する単量体として化合物Ｎ−２，３−ジヒ
   ドロキシプロピルメタクリルアミド、Ｎ−２−ヒドロキ
   シプロピルメタクリルアミド、２−ヒドロキシプロピル
   メタクリレート又はＮ−２，３−ジヒドロキシプロピル
   アクリルアミド、Ｎ−２−ヒドロキシプロピルアクリル
   アミド又はエチル２−ヒドロキシプロピルアクリレート
   のうちの少なくとも１種が用いられる特許請求の範囲第
   １項記載の分散重合体。 ５）式 I を有する単量体としてアクリルアミドアルキ
   ル又はメタクリルアミドアルキルアルデヒドジ−アルキ
   ルアセタール（ただしアルキルはＣ＿２〜Ｃ＿８を表わ
   す）が用いられる特許請求の範囲第１項記載の分散重合
   体。 ６）式 I を有する単量体としてメタクリルアミドアセ
   トアルデヒドジ−ｎ−ペンチルアセタールが使用される
   特許請求の範囲第１項記載の分散重合体。 ７）０．０２〜２μｍの粒径を有するラテックスよりな
   る種分散液に、乳化剤及びフリーラジカル開始剤を添加
   し、次に式IIを有する化合物及び式 I を有する化合物
   よりなる単量体混合物を撹拌下、＋１０℃〜＋１２０℃
   の温度で滴加する、特許請求の範囲第１項記載の分散重
   合体の製法。 ８）単量体混合物が、式IIを有する化合物としてモノ−
   又はジヒドロキシアルキルアクリル酸又はメタクリル酸
   化合物を含有し、式 I を有する化合物としてアクリル
   アミドアルキル又はメタクリルアミドアルキルアルデヒ
   ドジアルキルアセタール（ただしアルキルはＣ＿２〜Ｃ
   ＿８を表わす）が用いられる、特許請求の範囲第７項記
   載の方法。 ９）単量体混合物が式IIを有する化合物としてＮ−２，
   ３−ジヒドロキシプロピルメタクリルアミド、Ｎ−２−
   ヒドロキシプロピルメタクリルアミド、２−ヒドロキシ
   プロピルメタクリレート又は対応するアクリル酸化合物
   を含有し、式 I を有する化合物としてアクリルアミド
   アルキル又はメタクリルアミドアルキルアセトアルデヒ
   ドジ−ｎ−ペンチルアセタールが用いられる、特許請求
   の範囲第７項記載の方法。 １０）単量体混合物が更に全混合物基準で３０重量％ま
   でのスチレン、ビニルナフタレン又はビニルトルエンを
   含有する特許請求の範囲第７項記載の方法。 １１）単量体混合物が更に全混合物基準で３０重量％ま
   でのメタクリル酸、アクリル酸又はクロトン酸を含有す
   る特許請求の範囲第７項記載の方法。 １２）単量体混合物が式 I 及びIIを有する単量体の外
   に、スチレン、ビニルナフタレン又はビニルトルエンよ
   りなる群から化合物、並びに化合物メタクリル酸、アク
   リル酸又はクロトン酸のうち１種、並びにその外全混合
   物基準で２０重量％までのジメチルホルムアミドを含有
   する、特許請求の範囲第７項記載の方法。 １３）特許請求の範囲第１項記載の分散重合体及びその
   中に結合されている抗体、抗原又はハプテンよりなる生
   物活性分散重合体。 １４）抗原、抗体又はハプテンの診断上検出するための
   、特許請求の範囲第１３項記載の生物活性分散重合体の
   用途。 １５）比濁又は濁度検定法における、又粒子計数法のた
   めの、特許請求の範囲第１３項記載の生物活性分散重合
   体の用途。