JPS62166882A - セルロース分解性形質転換株 - Google Patents
セルロース分解性形質転換株Info
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- JPS62166882A JPS62166882A JP61010618A JP1061886A JPS62166882A JP S62166882 A JPS62166882 A JP S62166882A JP 61010618 A JP61010618 A JP 61010618A JP 1061886 A JP1061886 A JP 1061886A JP S62166882 A JPS62166882 A JP S62166882A
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- butanol
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/66—General methods for inserting a gene into a vector to form a recombinant vector using cleavage and ligation; Use of non-functional linkers or adaptors, e.g. linkers containing the sequence for a restriction endonuclease
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2405—Glucanases
- C12N9/2434—Glucanases acting on beta-1,4-glucosidic bonds
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明はセルロース分解性形質転換株およびこれを利用
するブタノールの製法に関し、詳しくはセルロースを直
接ブタノールに変換しうる新規微生物と該微生物を用い
てブタノールを製造する方法に関する。
するブタノールの製法に関し、詳しくはセルロースを直
接ブタノールに変換しうる新規微生物と該微生物を用い
てブタノールを製造する方法に関する。
従来、セルロースは発酵原料として全く利用されていな
かったが、資源の有効利用という立場から最近、ブタノ
ール等の製造にセルロースを用いることが種々提案され
ている。たとえば、セルロースに高温嫌気性菌を作用さ
せて１段でブタノールを製造する方法（特開昭５８−３
１９９３号）が知られているが、この方法ではブタノー
ル生産量が低く、実用性に劣っている。また、嫌気性セ
ルロース分解菌とブタノール生産菌を混合培養してブタ
ノール等を製造する方法も提案されている（特開昭５９
−８５２９５号）。しかし、この方法もブタノールの生
産量が低い上に、培養期間が長いという問題点がある。
かったが、資源の有効利用という立場から最近、ブタノ
ール等の製造にセルロースを用いることが種々提案され
ている。たとえば、セルロースに高温嫌気性菌を作用さ
せて１段でブタノールを製造する方法（特開昭５８−３
１９９３号）が知られているが、この方法ではブタノー
ル生産量が低く、実用性に劣っている。また、嫌気性セ
ルロース分解菌とブタノール生産菌を混合培養してブタ
ノール等を製造する方法も提案されている（特開昭５９
−８５２９５号）。しかし、この方法もブタノールの生
産量が低い上に、培養期間が長いという問題点がある。
さらに、本出願人はクロストリジウム・サーモセラムと
クロストリジウム・サーモサッカロリテイカムという特
定微生物の混合培養によるセルロースからのブタノール
の製造法について提案している（特願昭６０−１４６８
０６号）。しかし、この方法もブタノールの生産量や生
産速度等が十分に満足しうるちのではない。
クロストリジウム・サーモサッカロリテイカムという特
定微生物の混合培養によるセルロースからのブタノール
の製造法について提案している（特願昭６０−１４６８
０６号）。しかし、この方法もブタノールの生産量や生
産速度等が十分に満足しうるちのではない。
そこで本発明者らは、上記問題点を解消すべく検討を重
ね、単−菌によりセルロースから直接ブタノールを製造
する技術を開発した。すなわち、クロストリジウム・サ
ーモセラムより分離した染色体ＤＮＡを用い、形質転換
法によりクロストリジウム・サーモサッカロリテイカム
にセルロース利用性を付与し、セルロースを直接ブタノ
ールに変換する新規微生物を育種すると共に、該微生物
を利用してセルロースからブタノールを効率良く製造す
る方法を確立したのである。
ね、単−菌によりセルロースから直接ブタノールを製造
する技術を開発した。すなわち、クロストリジウム・サ
ーモセラムより分離した染色体ＤＮＡを用い、形質転換
法によりクロストリジウム・サーモサッカロリテイカム
にセルロース利用性を付与し、セルロースを直接ブタノ
ールに変換する新規微生物を育種すると共に、該微生物
を利用してセルロースからブタノールを効率良く製造す
る方法を確立したのである。
すなわち本発明は第１に、クロストリジウム・サーモセ
ラム由来の遺伝子が組込まれたクロストリジウム・サー
モサッカロリテイカムのセルロース分解性形質転換株を
提供するものであり、本発明の第２は、該形質転換株を
セルロースを含む培地に培養してブタノールを製造する
方法を提供するものである。
ラム由来の遺伝子が組込まれたクロストリジウム・サー
モサッカロリテイカムのセルロース分解性形質転換株を
提供するものであり、本発明の第２は、該形質転換株を
セルロースを含む培地に培養してブタノールを製造する
方法を提供するものである。
クロストリジウム・サーモセラムはセルロース分解菌と
して知られる嫌気性好熱菌であり、本発明には既知の菌
株を任意に使用できるが、特にセルロース利用性にすぐ
れた菌株が好ましく、たとえばクロストリジウム・サー
モ上ラムＣ−２フ株（ＦＥＲＭ Ｐ−７４５１） 、
同Ｃ−３１５株（ＦＥＲＭ Ｐ−７８７２）、同Ａ
Ｔ ＣＣ２７４０５株。
して知られる嫌気性好熱菌であり、本発明には既知の菌
株を任意に使用できるが、特にセルロース利用性にすぐ
れた菌株が好ましく、たとえばクロストリジウム・サー
モ上ラムＣ−２フ株（ＦＥＲＭ Ｐ−７４５１） 、
同Ｃ−３１５株（ＦＥＲＭ Ｐ−７８７２）、同Ａ
Ｔ ＣＣ２７４０５株。
同Ａ Ｔ ＣＣ３１９２４株、同Ｃ−２７１９株（ＦＥ
ＲＭＰ−８２７５）等がある。
ＲＭＰ−８２７５）等がある。
好熱菌であり、既知の菌株を使用することができる。具
体的には、クロストリジウム・サーモサッカロリテイカ
ムＢ−２５８株（ＦＥＲＭ Ｐ−８２７３）、同Ｂ−
６９５７株（ＦＥＲＭ Ｐ−８０７１）、同ＣＢ−１
６６６株（ＦＥＲＭ Ｐ−８２７４）、同ＡＴＣＣ７
９５６株等がある。
体的には、クロストリジウム・サーモサッカロリテイカ
ムＢ−２５８株（ＦＥＲＭ Ｐ−８２７３）、同Ｂ−
６９５７株（ＦＥＲＭ Ｐ−８０７１）、同ＣＢ−１
６６６株（ＦＥＲＭ Ｐ−８２７４）、同ＡＴＣＣ７
９５６株等がある。
クロストリジウム・サーモセラムからの染色体ＤＮＡの
分離は、たとえばＨ，５ａｉｔｏとに、Ｍｉｕｒａ。
分離は、たとえばＨ，５ａｉｔｏとに、Ｍｉｕｒａ。
Ｂｉｏｃｈｉｍ、 Ｂｉｏｐｈｙｓ、 Ａｃｔａ、 ７
２＋ ６１９（１９６３）により行なうことができる。
２＋ ６１９（１９６３）により行なうことができる。
染色体ＤＮＡを用いてクロストリジウム・サーモサッカ
ロリテイカムを形質転換する方法は、大腸菌、枯草菌等
において確立されているプロトプラスト法（たとえばＳ
、Ｃｈａｎｇ、 Ｓ、Ｎ、 Ｃｏｈｅｎ、 Ｍｏｌ。
ロリテイカムを形質転換する方法は、大腸菌、枯草菌等
において確立されているプロトプラスト法（たとえばＳ
、Ｃｈａｎｇ、 Ｓ、Ｎ、 Ｃｏｈｅｎ、 Ｍｏｌ。
Ｇｅｎ、、 １６８．１１Ｈ１９７９）） 、コンピテ
ント・セル法（たとえばＧ、０．Ｈｕｍｐｈｒｅｙｓら
、Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ。
ント・セル法（たとえばＧ、０．Ｈｕｍｐｈｒｅｙｓら
、Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ。
１９７Ｂ、 ＰＰ−２５４，Ｃｏｔｓｗｏｌｄ Ｐｒｅ
ｓｓ（１９７９））等を適用すればよい。
ｓｓ（１９７９））等を適用すればよい。
次に、形質転換株の中から目的とする性質を有する菌株
を選抜するにあたっても通常用いられる方法を適用すれ
ばよく、集積培養等を行ない形質発現、マーカー等によ
り選択する方法がある。
を選抜するにあたっても通常用いられる方法を適用すれ
ばよく、集積培養等を行ない形質発現、マーカー等によ
り選択する方法がある。
このようにして、クロストリジウム・サーモセラム由来
の遺伝子が組込まれたクロストリジウム・サーモサッカ
ロリテイカムのセルロース分解性形質転換株が得られる
。該形質転換株はセルロースを分解してブタノールを直
接生産することができる。
の遺伝子が組込まれたクロストリジウム・サーモサッカ
ロリテイカムのセルロース分解性形質転換株が得られる
。該形質転換株はセルロースを分解してブタノールを直
接生産することができる。
ブタノールは、セルロースを含む培地に上記形質転換株
を培養することによって得られる。
を培養することによって得られる。
本発明においてセルロースとは、セルロース自体のばか
セルロースを主要成分とする物質を意味する。具体的に
はマツ、スギ、ブナ、ポプラなどの木材；麻類、ミツマ
タ、稲ワラ、バガス、モミガラなどの茎葉・ジン皮類；
綿などの種子毛；新聞紙、雑誌、ダンボール廃紙などの
古紙類；その他繊維質廃棄物；パルプ、セルロースパウ
ダーなどがあり、これらは必要に応じて粉砕その他の前
処理を施してから炭素源として用いることが望ましい。
セルロースを主要成分とする物質を意味する。具体的に
はマツ、スギ、ブナ、ポプラなどの木材；麻類、ミツマ
タ、稲ワラ、バガス、モミガラなどの茎葉・ジン皮類；
綿などの種子毛；新聞紙、雑誌、ダンボール廃紙などの
古紙類；その他繊維質廃棄物；パルプ、セルロースパウ
ダーなどがあり、これらは必要に応じて粉砕その他の前
処理を施してから炭素源として用いることが望ましい。
本発明においてセルロースは培地中に１〜２０重量％程
度、好ましくは３〜１０重世％の割合で含まれるように
使用する。なお、培地の他の成分である窒素源、無機塩
その他発酵に必要な物質の種類、添加量などは常法によ
り適宜決定すればよい。また、培地は使用にあたり常法
にしたがって殺菌を行なう。
度、好ましくは３〜１０重世％の割合で含まれるように
使用する。なお、培地の他の成分である窒素源、無機塩
その他発酵に必要な物質の種類、添加量などは常法によ
り適宜決定すればよい。また、培地は使用にあたり常法
にしたがって殺菌を行なう。
培養に際しての温度、 ｐＨ等の条件は使用するグ微生
物がブタノールを生産、蓄積しうる範囲であればよく、
通常は４５〜６５℃の温度、６〜８のｐｌ＋の範囲が適
当である。培養は嫌気的条件下に目的とするブタノール
が十分に生成、蓄積するまで行なえばよく、通常は１〜
１５日間、好ましくは２〜１０日間である。培養終了後
、培養物からブタノールを採取するには既知の手法をそ
のまま適用すればよく、一般的には培養物を蒸留プロセ
スに導き、ブタノールを蒸留、分離する。
物がブタノールを生産、蓄積しうる範囲であればよく、
通常は４５〜６５℃の温度、６〜８のｐｌ＋の範囲が適
当である。培養は嫌気的条件下に目的とするブタノール
が十分に生成、蓄積するまで行なえばよく、通常は１〜
１５日間、好ましくは２〜１０日間である。培養終了後
、培養物からブタノールを採取するには既知の手法をそ
のまま適用すればよく、一般的には培養物を蒸留プロセ
スに導き、ブタノールを蒸留、分離する。
本発明によれば、セルロースを直接ブタノールに変換し
うる新規微生物が得られ、該微生物を用いることにより
セルロースから直接ブタノールを短期間で収率よく生産
することができる。しかも、高温下で培養を行なえるた
め、発酵槽の冷却コス仝。
うる新規微生物が得られ、該微生物を用いることにより
セルロースから直接ブタノールを短期間で収率よく生産
することができる。しかも、高温下で培養を行なえるた
め、発酵槽の冷却コス仝。
ト低減、雑菌汚染の防止等を図ることができる。
得られたブタノールは燃料、溶剤等の様々な用途に使用
される。
される。
次に、本発明を実施例により説明するが、本発明はこれ
により制限されるのもではない。
により制限されるのもではない。
実施例１
染色体ＤＮＡの分離
クロストリジウム・サーモ上ラムＣ−２フ株（ＦＥＲＭ
Ｐ−７４５１）を２１の０Ｍ３培地（セロビオース
５ｇ、酵母エキス２ ｇ 、 （ＮＩ１４）２ＳＯ４１
，３ｇ ／ １ 、 ＫＨ２ＰＯ４’ １．５ ｇ 、
Ｋ２ＨＰＯ４・３Ｈ！０２．９ｇ、 ＭｇＣＬｚ・６
）１２０ １ｇ、 ＣａＣ１ｚ １５０ｍｇ、 Ｆｅ
ＳＯ４・７Ｈｚ０ １．２５ｍｇ、システィン塩酸塩５
００ｍｇ、 レサズリンナトリウム２■を耽水１１に
含み、ｐＨ７，０に調整したもの）に接種し、嫌気的条
件下に６０℃で１２時間培養した。
Ｐ−７４５１）を２１の０Ｍ３培地（セロビオース
５ｇ、酵母エキス２ ｇ 、 （ＮＩ１４）２ＳＯ４１
，３ｇ ／ １ 、 ＫＨ２ＰＯ４’ １．５ ｇ 、
Ｋ２ＨＰＯ４・３Ｈ！０２．９ｇ、 ＭｇＣＬｚ・６
）１２０ １ｇ、 ＣａＣ１ｚ １５０ｍｇ、 Ｆｅ
ＳＯ４・７Ｈｚ０ １．２５ｍｇ、システィン塩酸塩５
００ｍｇ、 レサズリンナトリウム２■を耽水１１に
含み、ｐＨ７，０に調整したもの）に接種し、嫌気的条
件下に６０℃で１２時間培養した。
培養後、集菌して約３ｇの菌体を得た。これを３０ｍ２
のＴＥＮ （２０ｍＭ ）リス塩酸塩。
のＴＥＮ （２０ｍＭ ）リス塩酸塩。
２０ｍＭ ＮａＣ１，１ｍＭ ＥＤＴＡ、 ｐＨ７，５
）に懸濁し、１０ｍｇ／ ｍ ｌのリゾチームを２ｍ６
添加後、０℃で２０分間保持した。次いで、これに１０
％ＳＤＳを２ｍｌ加え、ゆるやかに混合したのちフェノ
ール３ Ｑ ｍ Ｉ！を加え、ゆるやかに混合し、０℃
で３０分間保持した。しかる後、遠心分離を行なって上
清を得た。この上清に９５％エタノール５ Ｑｍｊ！を
加えて染色体ＤＮＡを系状沈でんとして回収した。
）に懸濁し、１０ｍｇ／ ｍ ｌのリゾチームを２ｍ６
添加後、０℃で２０分間保持した。次いで、これに１０
％ＳＤＳを２ｍｌ加え、ゆるやかに混合したのちフェノ
ール３ Ｑ ｍ Ｉ！を加え、ゆるやかに混合し、０℃
で３０分間保持した。しかる後、遠心分離を行なって上
清を得た。この上清に９５％エタノール５ Ｑｍｊ！を
加えて染色体ＤＮＡを系状沈でんとして回収した。
得られた沈でんをＳ Ｓ Ｃ（０，１５Ｍ ＮａＣ１
，０，０１５Ｍクエン酸ナトリウム）の１０倍希釈液２
０ｍβに溶解し、１０倍濃度のＳＳＣを２ｍ１ｌ加えて
粗ＤＮＡ溶液を得た。この溶液にＲＮａｓｅＡ（シグマ
社製）を５０Ｍｇ ／ ｍ ｌとなるように加えて３７
℃で３０分間処理してＲＮＡを分解した後、上記フェノ
ール処理を３回繰返した。次いで、エタノール沈でん後
、５ＳＣＩＯ倍希釈液１０ｍ１に溶かし、１２時間同Ｓ
ＳＣ中で透析後、染色体ＤＮＡ溶液を得た。
，０，０１５Ｍクエン酸ナトリウム）の１０倍希釈液２
０ｍβに溶解し、１０倍濃度のＳＳＣを２ｍ１ｌ加えて
粗ＤＮＡ溶液を得た。この溶液にＲＮａｓｅＡ（シグマ
社製）を５０Ｍｇ ／ ｍ ｌとなるように加えて３７
℃で３０分間処理してＲＮＡを分解した後、上記フェノ
ール処理を３回繰返した。次いで、エタノール沈でん後
、５ＳＣＩＯ倍希釈液１０ｍ１に溶かし、１２時間同Ｓ
ＳＣ中で透析後、染色体ＤＮＡ溶液を得た。
形質転換
クロストリジウム・サーモサッカロリテイカムＢ−２５
８株（ＦＥＲＭ Ｐ−８２７３）を５ ｍ ｌの０Ｍ
３培地に接種し、６０°Ｃにて１日間培養した。培養液
１ｍ６をＣＭ３Ｓ培地（０Ｍ３培地にショ糖５０■／ｍ
７！を添加したもの）に移し、６０°Ｃで１２時間保持
した。次いで、遠心分離により集菌後、１ｍｊ？のＳＭ
ＭＣＭ３培地（０Ｍ３培地に０．５ Ｍ ショｔｅ、
２０ｍＭ ？レイン酸、２０ｍＭ ＭｇＣ１ｚ
を添加したもの）に懸濁し、２００μｇ ／ ｍ ｌの
リゾチームを５０μｌ加え、６０℃で３０分間処理して
プロトプラスト化を行った。
８株（ＦＥＲＭ Ｐ−８２７３）を５ ｍ ｌの０Ｍ
３培地に接種し、６０°Ｃにて１日間培養した。培養液
１ｍ６をＣＭ３Ｓ培地（０Ｍ３培地にショ糖５０■／ｍ
７！を添加したもの）に移し、６０°Ｃで１２時間保持
した。次いで、遠心分離により集菌後、１ｍｊ？のＳＭ
ＭＣＭ３培地（０Ｍ３培地に０．５ Ｍ ショｔｅ、
２０ｍＭ ？レイン酸、２０ｍＭ ＭｇＣ１ｚ
を添加したもの）に懸濁し、２００μｇ ／ ｍ ｌの
リゾチームを５０μｌ加え、６０℃で３０分間処理して
プロトプラスト化を行った。
次いで、遠心分離、洗菌を行ないプロトプラストのＳＭ
ＭＣＭ３′！Ｌｋ、濁液１ ｍ ／ｌを得た。
ＭＣＭ３′！Ｌｋ、濁液１ ｍ ／ｌを得た。
このプロトプラスト懸濁液０．５ｍｆｆに対して上記方
法で得たクロストリジウム・サーモセラムの染色体ＤＮ
Ａを１μｇ／ ｍ ｊ２となるように加え、さらに４０
％ポリエチレングリコール６０００（０，５Ｍショ糖、
２０ ｍＭ マレイン酸、 ２ Ｑ ｍ Ｍ Ｍ
ｇＣｈを溶かしたの）を０．５ｍ６加え、６０℃で２分
間放置して形質転換を行なわせた。 次いで、遠心分離
後、菌体をＳＭＭＣＭ３培地０．２ｍ ｌに懸濁し、こ
れをＣＭ３セルロース寒天平板（０Ｍ３培地のうちセロ
ビオースをセルロースパウダーを二変え、寒天３０ｇ／
βを加えた平板）上に塗布して６０°Ｃで４日間保持し
た。なお、上記形質転換操作はすべて嫌気条件下で行な
った。
法で得たクロストリジウム・サーモセラムの染色体ＤＮ
Ａを１μｇ／ ｍ ｊ２となるように加え、さらに４０
％ポリエチレングリコール６０００（０，５Ｍショ糖、
２０ ｍＭ マレイン酸、 ２ Ｑ ｍ Ｍ Ｍ
ｇＣｈを溶かしたの）を０．５ｍ６加え、６０℃で２分
間放置して形質転換を行なわせた。 次いで、遠心分離
後、菌体をＳＭＭＣＭ３培地０．２ｍ ｌに懸濁し、こ
れをＣＭ３セルロース寒天平板（０Ｍ３培地のうちセロ
ビオースをセルロースパウダーを二変え、寒天３０ｇ／
βを加えた平板）上に塗布して６０°Ｃで４日間保持し
た。なお、上記形質転換操作はすべて嫌気条件下で行な
った。
本操作によりセルロースを利用して主脅するコロニーが
ＣＭ３セルロース寒天寒天上板上平板あたり１〜５個生
じた。この形質転換操作時に染色体ＤＮＡを添加しなか
った場合および染色体ＤＮＡをＤＮ ａｓｅ処理（１０
μｇ／ｍｊ！のＤＮ ａｓｅ １（シグマ社製） 、
２０ ｍＭ ＭｇＣ１ｚで３７°Ｃ２３０分間処理
）したサンプルを添加した場合はいずれもＣＭ３セルロ
ース寒天寒天上板上ロニーを生じなかった。
ＣＭ３セルロース寒天寒天上板上平板あたり１〜５個生
じた。この形質転換操作時に染色体ＤＮＡを添加しなか
った場合および染色体ＤＮＡをＤＮ ａｓｅ処理（１０
μｇ／ｍｊ！のＤＮ ａｓｅ １（シグマ社製） 、
２０ ｍＭ ＭｇＣ１ｚで３７°Ｃ２３０分間処理
）したサンプルを添加した場合はいずれもＣＭ３セルロ
ース寒天寒天上板上ロニーを生じなかった。
集積培養
天子板上に塗布し、嫌気条件下６０℃にて３日間保持し
た。平板上に生じた形質転換株のコロニーを純粋分離し
た。これらの形質転換株を０Ｍ３セルロース培地（ＣＭ
３培地のうちセロ♂ｆ −Ｘ ｙｉウダーに変えたもの
）に接種し、嫌気条件下６０°Ｃで２日間培養した。
た。平板上に生じた形質転換株のコロニーを純粋分離し
た。これらの形質転換株を０Ｍ３セルロース培地（ＣＭ
３培地のうちセロ♂ｆ −Ｘ ｙｉウダーに変えたもの
）に接種し、嫌気条件下６０°Ｃで２日間培養した。
培養物を遠心分離して除菌後、リン酸酸性にし、ガスク
ロマトグラフ（を旦体：クロモソル）１０１゜ガラスカ
ラム：２ｍ温度：１９０°Ｃ）によりセルロースからの
生産物の分析を行ない、ブタノールの生産性が最も高い
菌株を選定した。
ロマトグラフ（を旦体：クロモソル）１０１゜ガラスカ
ラム：２ｍ温度：１９０°Ｃ）によりセルロースからの
生産物の分析を行ない、ブタノールの生産性が最も高い
菌株を選定した。
上記したＲＣ培地寒天平板による純粋分離、０Ｍ３セル
ロース培地での培養、ガスクロマトグラフによるブタノ
ール生産性の高い菌株の選定という一連の集積培養をさ
らに５回繰返してブタノール生産性の最も高いクロスト
リジウム・サーモサッカロリテイカムＴＲ−３株を得た
。本菌は工業技術院微生物工業技術研究所にＦＥＲＭ
ＢＰ−９５３として野託されている。
ロース培地での培養、ガスクロマトグラフによるブタノ
ール生産性の高い菌株の選定という一連の集積培養をさ
らに５回繰返してブタノール生産性の最も高いクロスト
リジウム・サーモサッカロリテイカムＴＲ−３株を得た
。本菌は工業技術院微生物工業技術研究所にＦＥＲＭ
ＢＰ−９５３として野託されている。
このようにして得たクロストリジウム・サーモサッカロ
リテイカムＴＲ−３株（ＦＥＲＭ ＢＰ−９５３）は
、第１表に示すように、セルロース利用性以外はクロス
トリジウム・サーモサッカロリテイカムＢ−２５８株（
ＦＥＲＭ Ｐ−８２７３）と全く同一の菌学的性質を
有している。
リテイカムＴＲ−３株（ＦＥＲＭ ＢＰ−９５３）は
、第１表に示すように、セルロース利用性以外はクロス
トリジウム・サーモサッカロリテイカムＢ−２５８株（
ＦＥＲＭ Ｐ−８２７３）と全く同一の菌学的性質を
有している。
実施例２
ＣＭ３培地にクロストリジウム・サーモサッカロリテイ
カムＴＲ−３株（ＦＥＲＭ ＢＰ−９５３）を接種し
、嫌気条件下に６０℃で１８時間保持した。この培養液
を２％の割合で、セロビオースの代りにセルロースパウ
ダー２％とＣａＣ０ｚ ５％を添加したＣＭ３培地培地
５妊ｌ菌し、ｌ Ｏｍ（！ネジロ試験管中で６０℃にて
５日間嫌気条件下に振とう培養を行なった。
カムＴＲ−３株（ＦＥＲＭ ＢＰ−９５３）を接種し
、嫌気条件下に６０℃で１８時間保持した。この培養液
を２％の割合で、セロビオースの代りにセルロースパウ
ダー２％とＣａＣ０ｚ ５％を添加したＣＭ３培地培地
５妊ｌ菌し、ｌ Ｏｍ（！ネジロ試験管中で６０℃にて
５日間嫌気条件下に振とう培養を行なった。
培養物を遠心分離して除菌後、上清についてガスクロマ
トグラフによる生産物の分析を行なった。
トグラフによる生産物の分析を行なった。
結果を第２表に示す。
比較例１
実施例２においてクロストリジウム・サーモサッカロリ
テイカムＴＲ−３株の代りにクロストリジウム・サーモ
上ラムＣ−２フ株（ＦＥＲＭ Ｐ−７４５１）を用い
、培養日数を１０日間としたこと以外は実施例２と同様
に行なった。結果を第２表に示す。
テイカムＴＲ−３株の代りにクロストリジウム・サーモ
上ラムＣ−２フ株（ＦＥＲＭ Ｐ−７４５１）を用い
、培養日数を１０日間としたこと以外は実施例２と同様
に行なった。結果を第２表に示す。
比較例２
実施例２においてクロストリジウム・サーモサッカロリ
テイカムＴＲ−３株の代りにクロストリジウム・サーモ
上ラムＣ−２フ株（ＦＥＲＭ Ｐ−７４５１）とクロ
ストリジウム・サーモサッカロリテイカムＢ−２５８株
（ＦＥＲＭ Ｐ−８２７３）を用いた混合培養であり
、かつ培地にメチグルビオロゲンを５μｇ ／ ｍ １
添加し、培養日数を１０日間としたこと以外は実施例２
と同様に行なった。
テイカムＴＲ−３株の代りにクロストリジウム・サーモ
上ラムＣ−２フ株（ＦＥＲＭ Ｐ−７４５１）とクロ
ストリジウム・サーモサッカロリテイカムＢ−２５８株
（ＦＥＲＭ Ｐ−８２７３）を用いた混合培養であり
、かつ培地にメチグルビオロゲンを５μｇ ／ ｍ １
添加し、培養日数を１０日間としたこと以外は実施例２
と同様に行なった。
結果を第２表に示す。
Claims (2)
- （１）クロストリジウム・サーモセラム由来の遺伝子が
組込まれたクロストリジウム・サーモサッカロリテイカ
ムのセルロース分解性形質転換株。 - （２）クロストリジウム・サーモセラム由来の遺伝子が
組込まれたクロストリジウム・サーモサッカロリテイカ
ムのセルロース分解性形質転換株をセルロースを含む培
地に培養することを特徴とするブタノールの製法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61010618A JPH062051B2 (ja) | 1986-01-21 | 1986-01-21 | セルロース分解性形質転換株 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61010618A JPH062051B2 (ja) | 1986-01-21 | 1986-01-21 | セルロース分解性形質転換株 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62166882A true JPS62166882A (ja) | 1987-07-23 |
| JPH062051B2 JPH062051B2 (ja) | 1994-01-12 |
Family
ID=11755213
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61010618A Expired - Lifetime JPH062051B2 (ja) | 1986-01-21 | 1986-01-21 | セルロース分解性形質転換株 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH062051B2 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2194120A1 (en) * | 2008-12-02 | 2010-06-09 | Total S.A. | Bioprocessing ligno-cellulose into ethanol with recombinant clostridium |
| JP2011529522A (ja) * | 2008-07-29 | 2011-12-08 | アルケマ フランス | 再生可能な材料からのグラフト化ポリエチレンの製造、得られるポリエチレン、およびその使用 |
| US9249431B2 (en) | 2008-02-28 | 2016-02-02 | Green Biologics Limited | Production process |
-
1986
- 1986-01-21 JP JP61010618A patent/JPH062051B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9249431B2 (en) | 2008-02-28 | 2016-02-02 | Green Biologics Limited | Production process |
| JP2011529522A (ja) * | 2008-07-29 | 2011-12-08 | アルケマ フランス | 再生可能な材料からのグラフト化ポリエチレンの製造、得られるポリエチレン、およびその使用 |
| EP2194120A1 (en) * | 2008-12-02 | 2010-06-09 | Total S.A. | Bioprocessing ligno-cellulose into ethanol with recombinant clostridium |
| WO2010063766A1 (en) * | 2008-12-02 | 2010-06-10 | Total S.A. | Bioprocessing ligno-cellulose into ethanol with recombinant clostridium |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH062051B2 (ja) | 1994-01-12 |
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