SU763463A1 - Способ получени дегидрогеназ - Google Patents
Способ получени дегидрогеназ Download PDFInfo
- Publication number
- SU763463A1 SU763463A1 SU782621686A SU2621686A SU763463A1 SU 763463 A1 SU763463 A1 SU 763463A1 SU 782621686 A SU782621686 A SU 782621686A SU 2621686 A SU2621686 A SU 2621686A SU 763463 A1 SU763463 A1 SU 763463A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- dehydrogenase
- deae
- agarose
- chromatography
- dehydrogenases
- Prior art date
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
1
Изобретение относитс к микробиологической промышленности, а именно, к способу получени дегидрогеназ микробиологическим путем,j
Известен способ получени дегидрогеназ , предусматривающий культивирование бактерий рода Pseudbmonas на питательной среде, содержащей источ- Q НИКИ углерода, азота, фосфора и минеральные соли, дезинтеграцию с последующей обработкой бесклеточного экстракта сульфатом стрептсмицина, сульфатом аммони и очистку фвр ент- ного препарата 1 ,
в качестве источника фермента используют бактерии Pseudoraonas multivoraus, выращенные на среде с глюкозой. Выход глюкозо-6-фосфат ди- 20 гидрогеназы 30%, активность 140 ед/мг белка.
Известный способ предполагает получение только одной, а именно, глюкозо-6-фосфат дегидрогеназы.25
Недостатками известного способа вл ютс невысокий выход фермента и использование г.Г1юкозы в. качестве рубстрата дл выращивани бактерий.30
Цель изобретени - повышение выхода целевого продукта и удешевление .его.
Указанна цель достигаетс тем, что в качестве продуцента используют штамм Pseudomonas oleovorans 52, выращенный на питательной среде, содержащей в качестве источника углерода метанол или метиламин, а очистку ферментных препаратов провод т фракционированием на сефадексе G-150 и хроматографированием на ДЭАЕ-агарозе с получением фракций,содержащих глюкозо-б.-фосфат дегидрогеназу и 6-фосфоглюконат дегидрог.еназу.
Посл.е хроматографии на ДЭАЭ-агарозе . фракцию, сод-ержащую 6-фрсфоглюкрнат дегидрогеназу, допйлнительно очищают , на колонке с фосфоцеллюлозой.
Способ осуществл ют следующим образом .
Штамм Pseudomonas oleovorans 52 выращивают в течение 24 ч на питательной среде, содержащей в качестве источника углерода 2-5% метанола или метиламина. Клетки отдел ют, разрушают с помощью ультразвукового дезинтегратора , белки экстрагируютбуферным раствором. Белковый экстракт обрабатывают последовательно сульфатом стрептомицина и сульфатом аммони .По лученный ферментный препара т фракционируют на колонке с сефадексом G-150, Фракцию, содержащую обе дегидрогеназы , хроматографируют на колонке с ДЭАЭ-агарозой дл их разделени . Выход глюкозо-6-фосфат дегидрогеназы 35-40%, удельна активность 160-170 ед/мг белка. Фракцию, содержащую 6-фосфоглюковат дегидрогеназу, полученную после хроматографировани на ДЭАЭ-агарозе далее хроматографируют на колонке с фосфоцеллюлозой, Выход 6-фосфоглюконат дегидрогеназы 15-20%, удельна активность 15-17 ед/мг белка. Характеристика штамма PseudomonaS oleovorans № 52. Штамм выделен из активного ила и хранитс в коллекции культур микроорганизмов кафедры микробиологии биологического факультета МГУ, Морфологи и культуральные свойства . Грс1мотрицательные подвижные палоч ки с одним пол рным жгутиком. Средний размер клеток 1,0-1,8 х «0,4-0,7 мкм. Колонии на МПА-округлые гладкие , выпуклые,непрозрачные,белые ари старении приобретают цвет кофе с молоком,до 1 мм в диаметре,кра ров ные, структура однородна , легко сни маютс с агара петлей. Культура обил но растет на МПА, на сусле-агаре и голодном агаре роста нет. Физиологи и биохимические свойства . Штамм 52 - облигатный аэроб, же латину не разжижает, молоко не пептонизирует; сероводород и ачмиак при росте на МПБ не образует; нитраты во станавливает до нитритов и далее до газообразных продуктов. Оптимальна температура дл роста 25-27°С, опти мальное значение рН 7,0-8,0.Штамм растет на средах с углеводородами (гексадекан) и спиртами (метанол, этанол, пропанол, н-бутанол, изобут нол и глицерин). Из органических кислот рост бактерий обеспечивают малат , сукцинат, пируват, цитрат, л тат, бензоат, бутират, фумарат, гли колат; из углеводов-глюкоза, сахаро за, фруктоза, мальтоза, рамноза, галактоза, ксилоза. Из одноуглеродных соединений Ps.oleovorans № 52 нар ду с метанолом использует метил амин, но не растет на средах с форм альдегидом, формиатом, диметиламином и триметиламинс. При росте на средах с метанолом,метиламином и др гими субстратами образует большое количество полисахаридной слизи. Ис пользование одноуглеродных соединений PS.oleovorans 52 осуществл е.тс поср)едством гексулоэофосфатного цикла (вариант Энтнера-Дудорона) . Пример 1.Pseudomonas oleovorans №52 выращивают в ферментере с рабочим объемом 70 л на среде следующего состава,-(г на 1 л среды) 2,0; NaCl 0,5; (NHj),,SO4 2,0; MgS04 0,025; FeSO. 0,01; метанол 5,0, рН среды довод т до 7,2 10%-ным раствором NaOH. Температура выращивани -30с, скорость перемешивани - 600 об/мин аэраци - 0,5 объема воздуха Ё минуту на 1 объем среды. После 24 ч куль тивировани клетки собирают на сепа-раторе АСГ-ЗМ. Все дальнейшие операции провод т при + 4°С. В качеству буферного раствора используют 20 мМ трис-НС1, рН 7,1 содержащий 2,5 мй MgCIjj и 10 М дитиоэритритола (буфер А). Клетки (100 г) разрушают на уль тразвуковом дезинтеграторе MSE (20 кГц 3x1 мин), белки экстрагируют буфером А и освобождают от клеточных обломков и неразрушенных клеток центрифугированием (20000д, 40 мин). К экстракту добавл ют сульфат стрептомицина до концентрации 1%, центрифугируют (lOOOOg, 20 мин) и осадок отбрасывают. К супернатанту добавл ют сульфат аммони до 50%-ного насыщени . Осадок отбрасывают.- Ферменты осаждают, довод концентрацию сульфата аммони до 60%-ного насыщени . Осадок раствор ют в минимальном объеме буфера А, Нерас творившийс осадок удал ют центрифугированием (20000д, 15 мин). Раствор нанос т на колонку с Сефадексом G-15О (250 мл) и элюиpyioT ферменты буфером А, Фракции элюата, содержащие обе дегидрогеназы, нанос т на колонку с ДЭАЭ-агарозой, Фракции элюата, содержащие 6-фосфоглюконат дегидрогенаэу, диализуют против 0,05 М ацетного буфера, рН 5, 6, содержащего дитиоэритритола и Нанос т на колонку (40 мл) с фосфоцеллюлозой . Фермент элюируют градиентом , концентрации NaCl в том же буфере (0-0,4 М). Далее препарат концентрируют переосаждением сульфатом аммони или на колонке с ДЭАЭ-агарозой. К полученным щзепаратам дл стабилизации ферментов прибавл ют глицв-) до концентрации 50%. Выход глюкозо-6-фосфат дегидрогенаэы 40%, удельна активность 170 ед/мг. Выход 6-фосфоглюконат дегидрогеназы 20%, удельна активность 17 ед/мг белка, iT р и М е р 2.Способ осуществл ют согласно примеру 1,но в качестве источника углерода используют 5 г/л метиламина . Выход ферментов и их удельна активность соответствуют полученным . в примере 1, Описанный способ позвол ет получить в одксал процессе глюкоэо-6-фосфат дегидрогеназу и 6-фосфоглюконат
дегидрогенаэу с хорошим выходе и 13ЫСОКОЙ удельной активностью, а также использовать в качестве субстратов дешевое непищевое сырье взамен глюкозы.
Claims (2)
1. Способ получени дегидрогеназ, предусматривающий культивирование бактерий рода Pseudomonas на питательной среде, содержащей источники углерода, азота.фосфора и минеральные соли, дезинтеграцию с последующей- обработкой бесклеточного экстракта сульфатом стрептомицина, сульфатом аммони и очистку ферментного препарата, отличающийс тем, что, с целью повыиени выхода . целевого продукта и удешевлени его, в качестве,продуцента используют
штамм Pseudomonas oleovorans 52, выращенный на питательной среде,содержащей в качестве ис-ГОчника углерода метанол или метиламин, а очистку ферментных препаратов провод т фракционированием на сефадекср G-150 и хроматографированием на ДЭАЕ-агарозе с получением фракций, содержащих глюкозо-б-фосфат дегидрогеназу и 6-фосфоглюконат дегидрогеназу ,
2. Способ поп,1, отличающийс тем, что после хроматографии на ДЭАЕ-агарозё фракцию, содержащую б-фосфоглюкЬнат дегидрогеназу , дополнительно очищают на колон5 ке с фосфоцеллюлозой,
Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе
il, Vander Wyk J.C., Lessie T.G. The Journal of Bacteriology 120.
0 1033, 1974.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU782621686A SU763463A1 (ru) | 1978-05-26 | 1978-05-26 | Способ получени дегидрогеназ |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU782621686A SU763463A1 (ru) | 1978-05-26 | 1978-05-26 | Способ получени дегидрогеназ |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU763463A1 true SU763463A1 (ru) | 1980-09-15 |
Family
ID=20767202
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU782621686A SU763463A1 (ru) | 1978-05-26 | 1978-05-26 | Способ получени дегидрогеназ |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
SU (1) | SU763463A1 (ru) |
-
1978
- 1978-05-26 SU SU782621686A patent/SU763463A1/ru active
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US4443542A (en) | Process for the production of butanol and novel microorganism composition used therein | |
Özbas et al. | Comparative study of riboflavin production from two microorganisms: Eremothecium ashbyii and Ashbya gossypii | |
Quesada-Chanto et al. | Effect of oxygen supply on biomass, organic acids and vitamin B12 production by Propionibacterium shermanii | |
JPS63254986A (ja) | アルコ−ルの製造法 | |
SU763463A1 (ru) | Способ получени дегидрогеназ | |
US4210720A (en) | Process for fermentatively producing vitamin B12 | |
JPH01277495A (ja) | L―チロシン及びl―フエニルアラニンの2,5―ジヒドロキシフエニル酢酸への生物学的変換法 | |
US3980520A (en) | Process for the production of l-malic acid by microbiological fermentation and means suitable for carrying out the same | |
US4010072A (en) | Process for preparing L-tartaric acid | |
US3767533A (en) | Process for producing uricase | |
JPH01187090A (ja) | ε−ポリリシンの製造方法およびε−ポリリシン生産菌 | |
US3905866A (en) | Process for production of L-lysine by fermentation | |
US5610045A (en) | Producing a high content of acetate kinase using bacillus stearothermophilus | |
US4317884A (en) | Method for the production of yeast on ethanol and means therefor | |
US2886490A (en) | Process of producing cobalamines by fermenting culture media with nocardia rugosa | |
GB1451020A (en) | Process for producing bacterial cells | |
US3720584A (en) | Process for the production of monohydroxy carboxylic acids | |
JP3030916B2 (ja) | βーグルコオリゴ糖の製造方法 | |
US3703439A (en) | Process for the preparation of l-beta-(3,4-dihydroxyphenyl)-alpha-alanine by fermentation | |
KR950009200B1 (ko) | D-알라닌의 제조방법 | |
JPS5829078B2 (ja) | 補酵素q↓1↓0の製造法 | |
JPH0378106B2 (ru) | ||
SU1056909A3 (ru) | Способ получени глицерин-дегидрогеназы | |
US4123329A (en) | Process for producing L-lysine by fermentation | |
JPH0568587A (ja) | 光学活性(s)−(+)−3−ハロ−1,2−プロパンジオールの製造法 |