JPH062051B2 - セルロース分解性形質転換株 - Google Patents
セルロース分解性形質転換株Info
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- JPH062051B2 JPH062051B2 JP61010618A JP1061886A JPH062051B2 JP H062051 B2 JPH062051 B2 JP H062051B2 JP 61010618 A JP61010618 A JP 61010618A JP 1061886 A JP1061886 A JP 1061886A JP H062051 B2 JPH062051 B2 JP H062051B2
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- clostridium
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/66—General methods for inserting a gene into a vector to form a recombinant vector using cleavage and ligation; Use of non-functional linkers or adaptors, e.g. linkers containing the sequence for a restriction endonuclease
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2405—Glucanases
- C12N9/2434—Glucanases acting on beta-1,4-glucosidic bonds
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Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明はセルロース分解性形質転換株に関し、詳しくは
セルロースを直接ブタノールに変換しうる新規微生物に
関する。
セルロースを直接ブタノールに変換しうる新規微生物に
関する。
従来、セルロースは発酵原料として全く利用されていな
かったが、資源の有効利用という立場から最近、ブタノ
ール等の製造にセルロースを用いることが種々提案され
ている。たとえば、セルロースに高温嫌気性菌を作用さ
せて１段でブタノールを製造する方法（特開昭５８−３
１９９３号）が知られているが、この方法ではブタノー
ル生産量が低く、実用性に劣っている。また、嫌気性セ
ルロース分解菌とブタノール生産菌を混合培養してブタ
ノール等を製造する方法も提案されている（特開昭５９
−８５２９５号）。しかし、この方法もブタノールの生
産量が低い上に、培養期間が長いという問題点がある。
かったが、資源の有効利用という立場から最近、ブタノ
ール等の製造にセルロースを用いることが種々提案され
ている。たとえば、セルロースに高温嫌気性菌を作用さ
せて１段でブタノールを製造する方法（特開昭５８−３
１９９３号）が知られているが、この方法ではブタノー
ル生産量が低く、実用性に劣っている。また、嫌気性セ
ルロース分解菌とブタノール生産菌を混合培養してブタ
ノール等を製造する方法も提案されている（特開昭５９
−８５２９５号）。しかし、この方法もブタノールの生
産量が低い上に、培養期間が長いという問題点がある。
さらに、本出願人はクロストリジウム・サーモセラムと
クロストリジウム・サーモサッカロリテイカムという特
定微生物の混合培養によるセルロースからのブタノール
の製造法について提案している（特願昭６０−１４６８
０６号）。しかし、この方法もブタノールの生産量や生
産速度等が十分に満足しうるものではない。
クロストリジウム・サーモサッカロリテイカムという特
定微生物の混合培養によるセルロースからのブタノール
の製造法について提案している（特願昭６０−１４６８
０６号）。しかし、この方法もブタノールの生産量や生
産速度等が十分に満足しうるものではない。
そこで本発明者らは、上記問題点を解消すべく検討を重
ね、単一菌によりセルロースから直接ブタノールを製造
する技術を開発した。すなわち、クロストリジウム・サ
ーモセラムより分離した染色体ＤＮＡを用い、形質転換
法によりクロストリジウム・サーモサッカロリテイカム
にセルロース利用性を付与し、セルロースを直接ブタノ
ールに変換する新規微生物を育種すると共に、該微生物
を利用してセルロースからブタノールを効率良く製造す
る方法を確立したのである。
ね、単一菌によりセルロースから直接ブタノールを製造
する技術を開発した。すなわち、クロストリジウム・サ
ーモセラムより分離した染色体ＤＮＡを用い、形質転換
法によりクロストリジウム・サーモサッカロリテイカム
にセルロース利用性を付与し、セルロースを直接ブタノ
ールに変換する新規微生物を育種すると共に、該微生物
を利用してセルロースからブタノールを効率良く製造す
る方法を確立したのである。
すなわち本発明は、クロストリジウム・サーモセラム由
来のセルロース分解性に関与する遺伝子が組込まれたク
ロストリジウム・サーモサッカロリティカムのセルロー
ス分解性形質転換株を提供するものである。
来のセルロース分解性に関与する遺伝子が組込まれたク
ロストリジウム・サーモサッカロリティカムのセルロー
ス分解性形質転換株を提供するものである。
クロストリジウム・サーモセラムはセルロース分解菌と
して知られる嫌気性好熱菌であり、本発明には既知の菌
株を任意に使用できるが、特にセルロース利用性にすぐ
れた菌株が好ましく、たとえばクロストリジウム・サー
モセラムＣ−２７株（ＦＥＲＭ Ｐ−７４５１），同Ｃ
−３１５株 （ＦＥＲＭ Ｐ−７８７２），同ＡＴＣＣ
27405株，同ＡＴＣＣ 31924株、同Ｃ−２７１９株（Ｆ
ＥＲＭ Ｐ−８２７５）等がある。
して知られる嫌気性好熱菌であり、本発明には既知の菌
株を任意に使用できるが、特にセルロース利用性にすぐ
れた菌株が好ましく、たとえばクロストリジウム・サー
モセラムＣ−２７株（ＦＥＲＭ Ｐ−７４５１），同Ｃ
−３１５株 （ＦＥＲＭ Ｐ−７８７２），同ＡＴＣＣ
27405株，同ＡＴＣＣ 31924株、同Ｃ−２７１９株（Ｆ
ＥＲＭ Ｐ−８２７５）等がある。
次に、クロストリジウム・サーモサッカロリテイカムは
ブタノールや酪酸の生産能を有する嫌気性好熱菌であ
り、既知の菌株を使用することができる。具体的には、
クロストリジウム・サーモサッカロリテイカムＢ−２５
８株（ＦＥＲＭ Ｐ−８２７３），同Ｂ−６９５７株
（ＦＥＲＭ Ｐ−８０７１），同ＣＢ−１６６６株（Ｆ
ＥＲＭ Ｐ−８２７４），同ＡＴＣＣ ７９５６株等が
ある。
ブタノールや酪酸の生産能を有する嫌気性好熱菌であ
り、既知の菌株を使用することができる。具体的には、
クロストリジウム・サーモサッカロリテイカムＢ−２５
８株（ＦＥＲＭ Ｐ−８２７３），同Ｂ−６９５７株
（ＦＥＲＭ Ｐ−８０７１），同ＣＢ−１６６６株（Ｆ
ＥＲＭ Ｐ−８２７４），同ＡＴＣＣ ７９５６株等が
ある。
クロストリジウム・サーモセラムからの染色体ＤＮＡの
分離は、たとえばH.SaitoとK.Miura，Biochim.Biophys.
Acta,72,619(1963)により行なうことができる。
分離は、たとえばH.SaitoとK.Miura，Biochim.Biophys.
Acta,72,619(1963)により行なうことができる。
染色体ＤＮＡを用いてクロストリジウム・サーモサッカ
ロリテイカムを形質転換する方法は、大腸菌，枯草菌等
において確立されているプロトプラスト法（たとえばS.
Chang,S.N.Cohen,Mol.Gen.,168,111(1979))，コンピテ
ント・セル法（たとえばG.O.Humphreysら、Transformat
ion,1978,PP-254,Cotswold Press(1979))等を適用すれ
ばよい。
ロリテイカムを形質転換する方法は、大腸菌，枯草菌等
において確立されているプロトプラスト法（たとえばS.
Chang,S.N.Cohen,Mol.Gen.,168,111(1979))，コンピテ
ント・セル法（たとえばG.O.Humphreysら、Transformat
ion,1978,PP-254,Cotswold Press(1979))等を適用すれ
ばよい。
次に、形質転換株の中から目的とする性質を有する菌株
を選抜するにあたっても通常用いられる方法を適用すれ
ばよく、集積培養等を行ない形質発現，マーカー等によ
り選択する方法がある。
を選抜するにあたっても通常用いられる方法を適用すれ
ばよく、集積培養等を行ない形質発現，マーカー等によ
り選択する方法がある。
このようにして、クロストリジウム・サーモセラム由来
のセルロース分解性に関与する遺伝子が組込まれたクロ
ストリジウム・サーモサッカロリテイカムのセルロース
分解性形質転換株が得られる。該形質転換株はセルロー
スを分解してブタノールを直接生産することができる。
のセルロース分解性に関与する遺伝子が組込まれたクロ
ストリジウム・サーモサッカロリテイカムのセルロース
分解性形質転換株が得られる。該形質転換株はセルロー
スを分解してブタノールを直接生産することができる。
ブタノールは、セルロースを含む培地に上記形質転換株
を培養することによって得られる。
を培養することによって得られる。
本発明においてセルロースとは、セルロース自体のほか
セルロースを主要成分とする物質を意味する。具体的に
はマツ，スギ，ブナ，ポプラなどの木材；麻類，ミツマ
タ，稲ワラ，バガス，モミガラなどの茎葉・ジン皮類；
綿などの種子毛；新聞紙，雑誌，ダンボール廃紙などの
古紙類；その他繊維質廃棄物；パルプ，セルロースパウ
ダーなどがあり、これらは必要に応じて粉砕その他の前
処理を施してから炭素源として用いることが望ましい。
本発明においてセルロースは培地中に１〜２０重量％程
度、好ましくは３〜１０重量％の割合で含まれるように
使用する。なお、培地の他の成分である窒素源，無機塩
その他発酵に必要な物質の種類，添加量などは常法によ
り適宜決定すればよい。また、培地は使用にあたり常法
にしたがって殺菌を行なう。
セルロースを主要成分とする物質を意味する。具体的に
はマツ，スギ，ブナ，ポプラなどの木材；麻類，ミツマ
タ，稲ワラ，バガス，モミガラなどの茎葉・ジン皮類；
綿などの種子毛；新聞紙，雑誌，ダンボール廃紙などの
古紙類；その他繊維質廃棄物；パルプ，セルロースパウ
ダーなどがあり、これらは必要に応じて粉砕その他の前
処理を施してから炭素源として用いることが望ましい。
本発明においてセルロースは培地中に１〜２０重量％程
度、好ましくは３〜１０重量％の割合で含まれるように
使用する。なお、培地の他の成分である窒素源，無機塩
その他発酵に必要な物質の種類，添加量などは常法によ
り適宜決定すればよい。また、培地は使用にあたり常法
にしたがって殺菌を行なう。
培養に際しての温度，pH等の条件は使用する微生物がブ
タノールを生産、蓄積しうる範囲であればよく、通常は
４５〜６５℃の温度、６〜８のpHの範囲が適当である。
培養は嫌気的条件下に目的とするブタノールが十分に生
成、蓄積するまで行なえばよく、通常は１〜１５日間、
好ましくは２〜１０日間である。培養終了後、培養物か
らブタノールを採取するには既知の手法をそのまま適用
すればよく、一般的には培養物を蒸留プロセスに導き、
ブタノールを蒸溜、分離する。
タノールを生産、蓄積しうる範囲であればよく、通常は
４５〜６５℃の温度、６〜８のpHの範囲が適当である。
培養は嫌気的条件下に目的とするブタノールが十分に生
成、蓄積するまで行なえばよく、通常は１〜１５日間、
好ましくは２〜１０日間である。培養終了後、培養物か
らブタノールを採取するには既知の手法をそのまま適用
すればよく、一般的には培養物を蒸留プロセスに導き、
ブタノールを蒸溜、分離する。
本発明によれば、セルロースを直接ブタノールに変換し
うる新規微生物が得られ、該微生物を用いることにより
セルロースから直接ブタノールを短期間で収率よく生産
することができる。しかも、高温下で培養を行なえるた
め、発酵槽の冷却コストの低減，雑菌汚染の防止等を図
ることができる。得られたブタノールは燃料，溶剤等の
様々な用途に使用される。
うる新規微生物が得られ、該微生物を用いることにより
セルロースから直接ブタノールを短期間で収率よく生産
することができる。しかも、高温下で培養を行なえるた
め、発酵槽の冷却コストの低減，雑菌汚染の防止等を図
ることができる。得られたブタノールは燃料，溶剤等の
様々な用途に使用される。
次に、本発明を実施例により説明するが、本発明はこれ
により制限されるのもではない。
により制限されるのもではない。
実施例１ 染色体ＤＮＡの分離 クロストリジウム・サーモセラムＣ−２７株（ＦＥＲＭ
Ｐ−７４５１）を２のＣＭ３培地（セロビオース５
ｇ，酵母エキス２ｇ，(NH4)2SO4 1.38g/，KH2PO4 1.5
g，K2HPO4・3H2O 2.9g，MgCl2・6H2O 1g，CaCl2 150mg，F
eSO4・7H2O 1.25mg，システイン塩酸塩500mg，レサズリ
ンナトリウム２mgを純水１に含み、pH７．０に調整し
たもの）に接種し、嫌気的条件下に６０℃で１２時間培
養した。
Ｐ−７４５１）を２のＣＭ３培地（セロビオース５
ｇ，酵母エキス２ｇ，(NH4)2SO4 1.38g/，KH2PO4 1.5
g，K2HPO4・3H2O 2.9g，MgCl2・6H2O 1g，CaCl2 150mg，F
eSO4・7H2O 1.25mg，システイン塩酸塩500mg，レサズリ
ンナトリウム２mgを純水１に含み、pH７．０に調整し
たもの）に接種し、嫌気的条件下に６０℃で１２時間培
養した。
培養後、集菌して約３ｇの菌体を得た。これを３０ｍ
のＴＥＮ（２０ｍＭ トリス塩酸塩，２０ｍＭ NaCl，
１ｍＭ ＥＤＴＡ，pH7.5）に懸濁し、１０mg／ｍの
リゾチームを２ｍ添加後、０℃で２０分間保持した。
次いで、これに１０％ＳＤＳを２ｍ加え、ゆるやかに
混合したのちフェノール３０ｍを加え、ゆるやかに混
合し、０℃で３０分間保持した。しかる後、遠心分離を
行なって上清を得た。この上清に９５％エタノール６０
ｍを加えて染色体ＤＮＡを糸状沈でんとして回収し
た。
のＴＥＮ（２０ｍＭ トリス塩酸塩，２０ｍＭ NaCl，
１ｍＭ ＥＤＴＡ，pH7.5）に懸濁し、１０mg／ｍの
リゾチームを２ｍ添加後、０℃で２０分間保持した。
次いで、これに１０％ＳＤＳを２ｍ加え、ゆるやかに
混合したのちフェノール３０ｍを加え、ゆるやかに混
合し、０℃で３０分間保持した。しかる後、遠心分離を
行なって上清を得た。この上清に９５％エタノール６０
ｍを加えて染色体ＤＮＡを糸状沈でんとして回収し
た。
得られた沈でんをＳＳＣ（0.15Ｍ NaCl、0.015 Ｍク
エン酸ナトリウム）の１０倍希釈液２０ｍに溶解し、
１０倍濃度のＳＳＣを２ｍ加えて粗ＤＮＡ溶液を得
た。この溶液にＲＮase Ａ（シグマ社製）を５０μｇ
／ｍとなるように加えて３７℃で３０分間処理してＲ
ＮＡを分解した後、上記フェノール処理を３回繰返し
た。次いで、エタノール沈でん後、ＳＳＣ１０倍希釈液
１０ｍに溶かし、１２時間同ＳＳＣ中で透析後、染色
体ＤＮＡ溶液を得た。
エン酸ナトリウム）の１０倍希釈液２０ｍに溶解し、
１０倍濃度のＳＳＣを２ｍ加えて粗ＤＮＡ溶液を得
た。この溶液にＲＮase Ａ（シグマ社製）を５０μｇ
／ｍとなるように加えて３７℃で３０分間処理してＲ
ＮＡを分解した後、上記フェノール処理を３回繰返し
た。次いで、エタノール沈でん後、ＳＳＣ１０倍希釈液
１０ｍに溶かし、１２時間同ＳＳＣ中で透析後、染色
体ＤＮＡ溶液を得た。
形質転換 クロストリジウム・サーモサッカロリテイカムＢ−２５
８株（ＦＥＲＭ Ｐ−８２７３）を５ｍのＣＭ３培地
に接種し、６０℃にて１日間培養した。培養液１ｍを
ＣＭ３Ｓ培地（ＣＭ３培地にショ糖５０mg／ｍを添加
したもの）に移し、６０℃で１２時間保持した。次い
で、遠心分離により集菌後、１ｍのＳＭＭＣＭ３培地
（ＣＭ３培地に０．５Ｍ ショ糖，２０ｍＭ マレイン
酸，２０ｍＭ MgCl2を添加したもの）に懸濁し、２０
０μｇ／ｍのリゾチームを５０μ加え、６０℃で３
０分間処理してプロトプラスト化を行った。次いで、遠
心分離、洗菌を行ないプロトプラストのＳＭＭＣＭ３懸
濁液１ｍを得た。
８株（ＦＥＲＭ Ｐ−８２７３）を５ｍのＣＭ３培地
に接種し、６０℃にて１日間培養した。培養液１ｍを
ＣＭ３Ｓ培地（ＣＭ３培地にショ糖５０mg／ｍを添加
したもの）に移し、６０℃で１２時間保持した。次い
で、遠心分離により集菌後、１ｍのＳＭＭＣＭ３培地
（ＣＭ３培地に０．５Ｍ ショ糖，２０ｍＭ マレイン
酸，２０ｍＭ MgCl2を添加したもの）に懸濁し、２０
０μｇ／ｍのリゾチームを５０μ加え、６０℃で３
０分間処理してプロトプラスト化を行った。次いで、遠
心分離、洗菌を行ないプロトプラストのＳＭＭＣＭ３懸
濁液１ｍを得た。
このプロトプラスト懸濁液０．５ｍに対して上記方法
で得たクロストリジウム・サーモセラムの染色体ＤＮＡ
を１μｇ／ｍとなるように加え、さらに４０％ポリエ
チレングリコール6000(0.5Ｍショ糖，２０ｍＭ マレイ
ン酸，２０ｍＭMgCl2を溶かしたの）を0.5ｍ加え、６
０℃で２分間放置して形質転換を行なわせた。次いで、
遠心分離後、菌体をＳＭＭＣＭ３培地0.2ｍに懸濁
し、これをＣＭ３セルロース寒天平板（ＣＭ３培地のう
ちセロビオースをセルロースパウダーに変え、寒天３０
ｇ／を加えた平板）上に塗布して６０℃で４日間保持
した。なお、上記形質転換操作はすべて嫌気条件下で行
なった。
で得たクロストリジウム・サーモセラムの染色体ＤＮＡ
を１μｇ／ｍとなるように加え、さらに４０％ポリエ
チレングリコール6000(0.5Ｍショ糖，２０ｍＭ マレイ
ン酸，２０ｍＭMgCl2を溶かしたの）を0.5ｍ加え、６
０℃で２分間放置して形質転換を行なわせた。次いで、
遠心分離後、菌体をＳＭＭＣＭ３培地0.2ｍに懸濁
し、これをＣＭ３セルロース寒天平板（ＣＭ３培地のう
ちセロビオースをセルロースパウダーに変え、寒天３０
ｇ／を加えた平板）上に塗布して６０℃で４日間保持
した。なお、上記形質転換操作はすべて嫌気条件下で行
なった。
本操作によりセルロースを利用して生育するコロニーが
ＣＭ３セルロース寒天平板上に１平板あたり１〜５個生
じた。この形質転換操作時に染色体ＤＮＡを添加しなか
った場合および染色体ＤＮＡをDNase処理（１０μｇ／
ｍのＤＮase１（シグマ社製），２０ｍＭ MgCl2えで
３７℃，３０分間処理）したサンプルを添加した場合は
いずれもＣＭ３セルロース寒天平板上にコロニーを生じ
なかった。
ＣＭ３セルロース寒天平板上に１平板あたり１〜５個生
じた。この形質転換操作時に染色体ＤＮＡを添加しなか
った場合および染色体ＤＮＡをDNase処理（１０μｇ／
ｍのＤＮase１（シグマ社製），２０ｍＭ MgCl2えで
３７℃，３０分間処理）したサンプルを添加した場合は
いずれもＣＭ３セルロース寒天平板上にコロニーを生じ
なかった。
集積培養 上記形質転換操作で得たＣＭ３セルロース寒天平板上の
コロニーをＲＣ培地（オキソイド社製）寒天平板上に塗
布し、嫌気条件下６０℃にて３日間保持した。平板上に
生じた形質変換株のコロニーを純粋分離した。これらの
形質転換株をＣＭ３セルロース培地（ＣＭ３培地のうち
セロビオースをセルロースパウダーに変えたもの）に接
種し、嫌気条件下６０℃で２日間培養した。
コロニーをＲＣ培地（オキソイド社製）寒天平板上に塗
布し、嫌気条件下６０℃にて３日間保持した。平板上に
生じた形質変換株のコロニーを純粋分離した。これらの
形質転換株をＣＭ３セルロース培地（ＣＭ３培地のうち
セロビオースをセルロースパウダーに変えたもの）に接
種し、嫌気条件下６０℃で２日間培養した。
培養物を遠心分離して除菌後、リン酸酸性にし、ガスク
ロマトグラフ（担体：クロモソルブ１０１，ガラスカラ
ム：２ｍ，温度：１９０℃）によりセルロースからの生
産物の分析を行ない、ブタノールの生産性が最も高い菌
株を選定した。
ロマトグラフ（担体：クロモソルブ１０１，ガラスカラ
ム：２ｍ，温度：１９０℃）によりセルロースからの生
産物の分析を行ない、ブタノールの生産性が最も高い菌
株を選定した。
上記したＲＣ培地寒天平板による純粋分離，ＣＭ３セル
ロース培地での培養，ガスクロマトグラフによるブタノ
ール生産性の高い菌株の選定という一連の集積培養をさ
らに５回繰返してブタノール生産性の最も高いクロスト
リジウム・サーモサッカロリテイカムＴＲ−３株を得
た。本菌は工業技術院微生物工業技術研究所にＦＥＲＭ
ＢＰ−９５３として寄託されている。
ロース培地での培養，ガスクロマトグラフによるブタノ
ール生産性の高い菌株の選定という一連の集積培養をさ
らに５回繰返してブタノール生産性の最も高いクロスト
リジウム・サーモサッカロリテイカムＴＲ−３株を得
た。本菌は工業技術院微生物工業技術研究所にＦＥＲＭ
ＢＰ−９５３として寄託されている。
このようにして得たクロストリジウム・サーモサッカロ
リテイカムＴＲ−３株（ＦＥＲＭ ＢＰ−９５３）は、
第１表に示すように、セルロース利用性以外はクロスト
リジウム・サーモサッカロリテイカムＢ−２５８株（Ｆ
ＥＲＭ Ｐ−８２７３）と全く同一の菌学的性質を有し
ている。
リテイカムＴＲ−３株（ＦＥＲＭ ＢＰ−９５３）は、
第１表に示すように、セルロース利用性以外はクロスト
リジウム・サーモサッカロリテイカムＢ−２５８株（Ｆ
ＥＲＭ Ｐ−８２７３）と全く同一の菌学的性質を有し
ている。
応用例１ ＣＭ３培地にクロストリジウム・サーモサッカロリテイ
カムＴＲ−３株（ＦＥＲＭ ＢＰ−９５３）を接種し、
嫌気条件下に６０℃で１８時間保持した。この培養液を
２％の割合で、セロビオースの代りにセルロースパウダ
ー２％とCaCo3 ５％を添加したＣＭ３培地５ｍに植
菌し、１０ｍネジロ試験管中で６０℃にて５日間嫌気
条件下に振とう培養を行なった。
カムＴＲ−３株（ＦＥＲＭ ＢＰ−９５３）を接種し、
嫌気条件下に６０℃で１８時間保持した。この培養液を
２％の割合で、セロビオースの代りにセルロースパウダ
ー２％とCaCo3 ５％を添加したＣＭ３培地５ｍに植
菌し、１０ｍネジロ試験管中で６０℃にて５日間嫌気
条件下に振とう培養を行なった。
培養物を遠心分離して除菌後、上清についてガスクロマ
トグラフによる生産物の分析を行なった。結果を第２表
に示す。
トグラフによる生産物の分析を行なった。結果を第２表
に示す。
比較例１ 応用例１においてクロストリジウム・サーモサッカロリ
テイカムＴＲ−３株の代りにクロストリジウム・サーモ
セラムＣ−２７株（ＦＥＲＭ Ｐ−７４５１）を用い、
培養日数を１０日間としたこと以外は応用例１と同様に
行なった。結果を第２表に示す。
テイカムＴＲ−３株の代りにクロストリジウム・サーモ
セラムＣ−２７株（ＦＥＲＭ Ｐ−７４５１）を用い、
培養日数を１０日間としたこと以外は応用例１と同様に
行なった。結果を第２表に示す。
比較例２ 応用例１においてクロストリジウム・サーモサッカロリ
テイカムＴＲ−３株の代りにクロストリジウム・サーモ
セラムＣ−２７株（ＦＥＲＭ Ｐ−７４５１）とクロス
トリジウム・サーモサッカロリテイカムＢ−２５８株
（ＦＥＲＭ Ｐ−８２７３）を用いた混合培養であり、
かつ培地にメチルビオロゲンを５μｇ／ｍ添加し、培
養日数を１０日間としたこと以外は応用例１と同様に行
なった。結果を第２表に示す。
テイカムＴＲ−３株の代りにクロストリジウム・サーモ
セラムＣ−２７株（ＦＥＲＭ Ｐ−７４５１）とクロス
トリジウム・サーモサッカロリテイカムＢ−２５８株
（ＦＥＲＭ Ｐ−８２７３）を用いた混合培養であり、
かつ培地にメチルビオロゲンを５μｇ／ｍ添加し、培
養日数を１０日間としたこと以外は応用例１と同様に行
なった。結果を第２表に示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:145） (Ｃ１２Ｐ 7/16 Ｃ１２Ｒ 1:145）
Claims (1)
- 【請求項１】クロストリジウム・サーモセラム由来のセ
ルロース分解性に関与する遺伝子が組込まれたクロスト
リジウム・サーモサッカロリティカムのセルロース分解
性形質転換株。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61010618A JPH062051B2 (ja) | 1986-01-21 | 1986-01-21 | セルロース分解性形質転換株 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61010618A JPH062051B2 (ja) | 1986-01-21 | 1986-01-21 | セルロース分解性形質転換株 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62166882A JPS62166882A (ja) | 1987-07-23 |
| JPH062051B2 true JPH062051B2 (ja) | 1994-01-12 |
Family
ID=11755213
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61010618A Expired - Lifetime JPH062051B2 (ja) | 1986-01-21 | 1986-01-21 | セルロース分解性形質転換株 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH062051B2 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009106835A2 (en) | 2008-02-28 | 2009-09-03 | Green Biologics Limited | Production process |
| FR2934599B1 (fr) * | 2008-07-29 | 2012-12-21 | Arkema France | Fabrication de polyethylene a partir de matieres renouvelables, polyethylene obtenu et utilisations |
| EP2194120A1 (en) * | 2008-12-02 | 2010-06-09 | Total S.A. | Bioprocessing ligno-cellulose into ethanol with recombinant clostridium |
-
1986
- 1986-01-21 JP JP61010618A patent/JPH062051B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS62166882A (ja) | 1987-07-23 |
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