JPS62132896A - 過塩素酸塩使用によるペプチドの製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、各断片カップリングにおいて少くとも１つの
アルギニン含有断片を過塩素酸塩として反応させること
よりなる断片カップリングによる保護されたアルギニン
含有ペプチドの製造方法に関する。

本発明に包含され得るアルギニン含有断片は次のものが
ある。すなわち １、ｃｏｏＨまたはα−ＮＨ２基が場合によりペプチド
化学において慣用の保護基によって保護されているアル
ギニン、あるいは ２、　アルギニンおよびその他のアミノ酸を含有し、そ
してその１つ（または複数）の官能基が場合により、ペ
プチド化学において慣用の保論基によって保護されてい
るセグメント、適当な保護基の例は５ｃｈｒ５ｄｅｒ　
、　Ｌｕｂｋｅ著「ＴｈｅＰｅｐｔｉｄｅｓｊ第１巻、
ＡＣａｄｅｍｉｃ　ＰｒｅＯｓ、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ１９
６５発行、３〜７５貞および１３７〜２７０頁に記載さ
れている。

断片カップリングは、例えば、Ｋｋ）８ｒｌ１３等編「
Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ　ｉｎ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｃ
ｈｅｍｉｅｔｒｙＪ　ｓＫａｒｇｅｒ。

Ｂａθθ１１９８１発行、１５〜１５５貞に記載されて
いるような標準的方法により行われる。カルボジイミド
例えばＮ、Ｎ’−ジシクロへキシルカルボジイミド、Ｎ
、Ｎ’−ジ第３ブチルカルボジイミド、Ｎ、Ｎ’−ジイ
ソブロビル力ルポジイきド、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−
ジメチルアばノブロビル）カルボジイミドまたはＮ、Ｎ
’−ビス（４−ニトロフェニル）カルボシイばドの存在
下にカップリングを行うのが好ましく、そしｔ適切な場
合にはＮ−ヒドロキシスクシンイばド、１−ヒドロキシ
ベンゾトリアゾール、３−ヒドロキシ−４−一オキンー
３．４−ジヒドロ−１，２，３−ベンゾトリアジンまた
はその他のラセミ化抑制化合物を添加する。カップリン
グは「古典的に」溶液中で行うことができるほか、合成
過程で梅脂に共有結合される断片を用いる固相法（Ｍｅ
ｒｒｉｆｉｅ：Ｌｄ）によっても行うことができる。

側鎖の保護されている高級ペプチドをはブチド合成の中
間体として用いることは、それらの溶解度が乏しいため
にしばしば妨げられる。これらのペプチドはそれ以上の
合成が全く不可能である程に不溶性であることもしばし
はである。

溶解度が低いと反応時間か長くなり、また収率が低下す
る。これらの問題は例えばセクレチンの合成の場合に生
じる。

十二指腸からのホルモンであるセクレチンは式 ％式％ で示されるヘプタコサペプチドである（Ｅｕｒ、Ｊ−Ｂ
ｌｏａｈｅｍ、１５，１９７０．５１３〜５１９頁参照
）。セクレチンは、膵臓による重炭酸塩の生産を刺激し
、またガストリンにより刺激された胃酸分泌を阻害する
。

セクレチンはすてにｐ−ニトロフェニルエステル法（Ｊ
、Ａｍ、Ｏｈｅｍ、Ｓｏｃ、８９ｓ　１９６７＊６７５
３〜６７５７頁）および反復過剰混合無水物（Ｒａｐｓ
ｔｉｔｉｖｅ　ｋｃｅｓｓＭｉｘｅｄ　Ａｎｈｙｄｒｉ
ｄｅ　；略してＲＥＭＡ）法（Ｈｅｌｖ、Ｏｈｉｍ。

Ａｃｔａ　５９．１９７６．１１１２〜１１２６負）？
：用いることにより段階的に合成されている。セクレチ
ン合成のためのセグメントの使用は、可及的にラセミ化
のないカップリング法を必要とする。従って、アジド法
（Ｊ、Ａｍ、Ｏｈｅｍ、Ｓｏｃ、９０．１９６８．４７
１１〜４７１５頁）およびジシクロへキシルカルボジイ
ミド／Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＤＣＣ／ＨＯＮ
Ｓｕ）法（Ｏｈｅｍ、Ｂｅｒ、　１０５．１９７２．２
５０８〜２５１４負）を用いることＫより、セクレチン
は丁でに合成されている。

ＤＯＣカップリングの他の変法には、１−ヒドロキシベ
ンゾトリアゾール（１１０Ｂｔ）および３−ヒドロキシ
−４−オキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，３−ベンゾ
トリアジン（ＨＯＯｂｔ）というラセミ化抑制と可溶化
のための添加剤を用いるものかあった（Ｃ！ｈｅｍ、Ｂ
ｅｒ、　１０７．１９７４．２１５〜２３１負；　Ｇｕ
ｔ　）！ｏｒｍｏｎｅａ。

Ｓ、Ｒ，Ｂ１００ｍ編、１９７８，１６５〜１６８頁）
。セクレチンの固相合成は工ｎｔ、Ｊ、Ｐｅｐｔｉｄｅ
　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｒｏｅ。

９．１９７７．６３〜７０頁に記載されている。

前述のセグメントカップリングにおける最大の難点は断
片か秦溶性でありそのために１反応酸分が大希釈される
ことから長い反応時間と過剰のＮ−末端断片を要するこ
とから生ずる。確かにＮ−末端断片をＤＯＯ／）１００
ｂｔで予備活性化することにより反応時１１」、そして
通常は反応′＃量もいくらかは減少させることは可能で
はある（Ｇｕｔ　Ｈｏｒｍｏｎｅｓ、Ｓ、Ｒ，Ｂｌｏｏ
ｍ＋　１９７８．１６５〜１６８負）。

しかしながら、中間的アミノ保護に用いられるベンジル
オキシカルボニル基（４か接触水素添加により静かれる
ことに伴って大きな問題も生じる。このことも主に難溶
性によって生じる。溶媒として酊＠を用いることはなる
べく避けた方がよいことから（酢酸を塩基性ペプチドか
ら除去することはできても困難であり、またそれは断片
カップリングの際にアば〕基のアセチル化を招く）、高
価な溶媒例えばトリフルオロエタノールなどに変えるこ
とか既に必要となっている（Ｇｕｔ　Ｈｏｒｍｏｎｅｓ
、Ｓ、Ｒ，Ｂｌｏｏｍ、１９７８．１６７頁）。

驚くべきことに１本発明方法によるカップリングにおい
て少くとも１つのペプチド成分を過塩素酸塩として用い
れば、断片（しばしば難溶性の）のカップリングによる
保護さｎたアルギニン含有ペプチドの合成がかなり容易
になる。

塩基性ペプチドの過塩素酸塩の極性溶媒例えはジメチル
ホルムアミドまたはジメチルアセトアミド中の溶解度は
優れており、このことは以後の反え、にとって極めて有
利であシ、また仝間数率を向上させる。過塩素酸塩７４
人するだめの試薬は過塩素酸だけでなく、適当なアずン
の過塩素酸塩も挙げられ、水を含有する過塩素酸とは対
照的に無水状態で秤量できる過塩素酸ピリジンが好筐し
い（Ｂａｒｓ　ｄｔｓｃｈ、　ｃｈｅｍ、　Ｇｅｓ　、
　５９　、４４８〜４５５負（１９２６）参照）。

過塩素酸イオンは強塩基性グアニジノ基に結合し、そし
て遊離されるピリジンは溶媒に行く。

従って、過塩素酸ピリジンの添加によシ、アルギニン含
有ペプチドの溶解度を大いに高めることができ、またそ
のために、アルギニン含有ペプチドの反応を誘起するこ
とができる。例えば、きわめて＃ｌ溶性のＺ−Ｔｈｒ　
（Ｂｕｔ）−８ｅｒ（Ｂｕｌｌ；）−Ｇｌｕ（ＯＢｕつ
−Ｌｓｕ−８ｅｒ（Ｂｕｔ）−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−ＯＨは
、過塩ａｔ酸ピリジンを添加すれば、ジメチルアセドア
ばド中でＤＣＣおよびＨＯＯｂｔによシ予備活性化する
ことができる。更に、有ｗＲ浴媒に実質的に不溶である
アルギニンは過塩素酸ピリジンを添加してアシル化する
ことができる。これは、塩酸アルギニンでは不可能であ
った。

過塩素酸イオンは、溶解度の増大に適しているばかシで
なく、グアニジ７基をアシル化から保護する。丁なわち
、過塩ｇ酸ピリジンはＦ’ｍｏｃ−アミノ敗を用いた固
相合成におけるグアニジノ基のプロトン化のためのきわ
めて良好な添加剤であることが判明した。これに対し塩
酸はこの目的に適していないことか知られている（Ｅ。

Ａｔｈｅｒｔｏｎ　、Ｒ，Ｏ，５ｈｅｐｐａｒａおよび
り、Ｗａｄｅ、Ｊ、Ｃｈｅｍ。

Ｓｏｃ、　、Ｏｈｅｍ、Ｃｏｍｍｕｎ、　１９８３．　
ｌ０６Ｃｈ−１０６２１１ｓ照）。

式Ｉ Ｒ−Ｈｌｓ（Ｒ１）−Ｓｅｒ（Ｂｕｔ）−Ａｓｐ（ＯＢ
ｕｔ）　−Ｇａｙ−Ｔｈｒ（Ｂｕ”）−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ
−Ｇｉｎ−Ｇａｙ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｎｌ２　　　　（
１）（式中、 ａ）　　ＲおよびＲ１はＳｏｃ基を表わすか、またはｂ
）　　ＲはＳｏｃ基を表わし、そしてＲ１は水素を表わ
すか、または ｃ）　　ＲおよびＲ１はアダマンチルオキシカルボニル
基？衣わ丁） で示される作詩さｎたセクレチン誘専体の好ましい製造
方法は、一般式Ｉ［ａ Ｈ−Ｘ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−（）ｌｎ−Ｇｌｙ−Ｌａｕ−
Ｖａｌ−Ｎｌ２　　（ｌｌａ）（式中又は −Ａｒｇ（ＨＣｌＯ４）−１ −Ａｒｇ　（ＨＣｌＯ４）−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ（
ＨＣｌＯ４）−１−Ａｒｇ（Ｈ（’１０４）−Ａｓｐ（
ＯＢｕｆ；）−８ｅｒ（Ｅｕｔ）−Ａｌａ−Ａｒｇ（Ｈ
ＣｌＯ４）−Ｌｅｕ−Ｇ：Ｌｎ−Ａｒｇ（ＨＣｌＯ４）
または を表わす）で示されるペプチドを、３−ヒドロキシ−４
−オキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，３−ベンゾトリ
アジン（Ｈｏｏｂｔ）　’ｘ　添加してワン・ポット法
（ｏｎθ−ｐｏｔ　ｐｒｏｃｅｓｓ）によ）、遊離カル
ボキシル基な有する適切なペプチドと１極性溶媒例えは
ジメチルアセトアミド中でジシクロへキシルカルボシイ
ばドおよび必要量の第６級塩基Ｎ、ｔＪ−ＩＪ−エチル
モルホリンと共に反応させ、そしてこのようにして合成
されたペプチドを、適当量の過塩素数および適切な場合
にはＮａ０ｔＯ４などの過塩素酸塩Ｖ添加した水から過
塩素酸塩として沈殿させることからなる。

過塩素酸中でフルギニンのＮクーニトロ保護基を水素添
加分解によ〕除去することはＪ−Ａｌｅｒ。

Ｏｈｅｍ、Ｓｏｃ、　１０１　、１９７９．１５６９〜
１５７６頁に知られている。

特に好ましい方法は、一般式■ Ｚ−Ｘ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｇａｙ−Ｌｅｕ−Ｖ
ａｎ−ＮＨ２（ＩＩ）（式中、Ｘは 一へｒｇ（Ｚ＋）−１ −Ａｒｇ（ｚ２）−Ｌｅｕ−Ｇ４ｎ−Ａｒｇ（Ｈ（’１
０４　）−１−Ａｒｇ（ｚ２）−Ａｓｐ（ＯＢｕｆ’）
−８ｅｒ（Ｂｕｔ）−Ａｌａ−Ａｒｇ（ＨＣ！１０４）
−Ｌａｕ−１０４）−Ｌａｕ−Ｇｌｎ−Ａｒまたは ｔ表わす）で示されるベンジルオキシカルボニル含有断
片を、ジメチルアセトアミド中パラジウム触媒を添加し
そして州を過塩葉酸含有溶液の添加によシ４〜６に維持
して水５１ｃ添加することにより前記の式１ａで示され
るペプチドを得、そしてそれを前述の方法で更に反応さ
せることよシ成る。自動滴定器を使用できない場合には
当量の過塩素酸ピリジンを添加することもできる。

Ｚ−Ａｒｇ（Ｚ２）−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｇ１７
−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−ＮＨ２（ｌ［）の水素添加に従来用
いられている俗媒は氷酢叡であった（Ｏｈｅｍ、Ｂｅｒ
、１０４．１９７１．２４４１頁）。この物′ｘ１０ミ
リモルに対し約３５０−の氷酢酸が用いられた。この酢
酸を完全に除去するために（このことは次のペプチド形
成工程でアセチル化を防止するために必要である）、少
くとも２当量のＨＢｒ　ｔたはＨＣｌを添加し、次いで
ピリジンを添加して、メタノールおよび酢酸エチルまた
はジインプロピルエーテルから数回再沈殿を行うことが
必要である。従って、ＨｏｌまたはＨＢｒを添加したメ
タノールまたはジメチルアセドアずドなどの溶媒中で接
触水素添加を行った方が有利といえよう。この徨の試み
は、前記溶媒への上記■の難溶性のために失敗に終って
いる。懸濁液が水素添加中に溶解するということもなか
った。従って、ジメチルアセドアばド中に実實的に不溶
であるｍが接触水素添加の際に過塩素酸を添加すると速
かに溶解して Ｈ−Ａｒｇ　（Ｈｅ１０４　）−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−ＧＩ
ｎ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−ＮＥ２　ＨＣｌ０４（Ｉ
Ｖ） を形成することを見出したことは意外であった。

１０ミリモルのＩＩＩＫ対してわずか１２０−のジメチ
ルアセトアミドしか、すなわち前述の酢酸の量の約見し
か必要としない。後処理がよシ簡便である上に、このよ
うにして得られたベブチドニ過塩素酸塩■は極性溶媒例
えはジメチルアセトアミドおよびジメチルアセドアきド
などＫよシ可溶であるという長所を有している。例えば
１ Ｚ−Ａｒｇ（Ｚ２）−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−ＯＨと相当する
ベブチドニ臭化水素酸塩との反応の場合（Ｏｈｅｍ、Ｂ
ｅｒ、　１０４．１９７１．２４４３〜２４４４頁）、
１０ミリモルに対する溶媒として約６５０−のジメチル
ホルムアミドが用いられるのに対し、ベブチドニ過塩素
酸塩■との反応の場合には、１０ミリモルバッチはわず
か７０ＷＬｔのジメチルアセトアミドしかすなわち前記
溶媒の釣部しか必要としない。これによって反応時間は
７日間から数時間に短縮され、そして空間収率は実質的
に増大する。

その他の断片に対しても同様の所艶か得られた。

Ｚ−Ａｒｇ（ｚ２）−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ（ＨＣｌ
Ｏ４）−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｖ
ａｎ−ＩｎＩ３　　（Ｖ）を接触水素添加して Ｈ−Ａｒｇ　（ＨＣ１０４）−Ｌｅｕ−０４ｎ−Ａｒｇ
（ＨＣｌ０４　）−Ｌｅｕ−Ｌｅ　ｕ−〇Ｉｎ−Ｇｌｙ
−Ｌｅｕ−Ｖａ１−ＮＨ２ＨＣｌ０４　　（Ｖｌ）を得
る方法は■と同様である。１０ミリモルに対して約２２
０−のジメチルアセドアはドが必要であるのに対し、相
当する臭化水素酸塩（Ｃｈｅｍ。

Ｂｅｒ、　１０４．１９７１，２４４４　負）は１０ミ
リモルに対し１５４０−の氷酢酸を必要とする。

１０　＜　リ％　ｙｖ　ｆ）　Ｖｉ　’ｊｋ　Ｚ−Ａｒ
ｇ（２２）−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）−８ｅｒ（Ｂｕｔ）−
Ａ’１ａ−ＯＨと縮合させる場合、不法では溶媒として
わずか４５−のジメチルアセトアミドしか用いないのに
対し、相当てるデカペプチド三塩酸塩を用いた場合のほ
ぼ同じバッチは依然として７０−の溶媒を必要とする（
　Ｇｕｔ　Ｈｏｒｍｏｎｅａ。

８、Ｒ，Ｂｌｏｏｍ編、１９７８．１６６頁）。このよ
うにして得られるテトラデカペプチドであるＶａｌ−Ｎ
１３　　　（■） の接触水素添加による Ｇ４７−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−ＮＨ２）Ｉ０１０４　　　（
１）の製造の方もジメチルアセドアばド中（２５０ｍ中
１０ミリモル）で難なく行われるのに対し、今までは１
０ばリモルの相当てる二臭化水素酸塩か２，０００−の
８０％酢酸中で水素添加され（Ｃｈｅｍ、Ｂｅｒ、１０
４，１９７１．２４５０員〕、また二塩酸塩が高価なト
リフルオロエタノール中で水素添加されてきた（Ｇｕｔ
　Ｈｏｒｍｏｎｅｓ、Ｅｌ、Ｒ，Ｂｌｏｏｍ　＠、１９
７８．１６７貢）。

難溶性の Ｚ−Ｔｈｒ（Ｂｕｔ）−８ｅｒ（Ｂｕｔ）−Ｇｌｕ（Ｏ
Ｂｕｔ；）−Ｌｅｕ−８ｅｒ（Ｂｕｆ；）−Ａｒｇ−Ｌ
ｅｕ−ＯＨ は１の存在下に容易に溶解し、従ってこの場合にも、小
容量の溶媒中で１“ワン−ボット法」によシ縮合させて を製造することができる。１０ばリモルのバッチに対し
ては２００−のジメチルホルムアミド／ジメチルアセト
アミド混合物中で容易に行うことかできるのに対し、相
当する四臭化水素酸塩を用いた同様のバッチの場合は５
０〇−以上のＲｉ　ｔｋを必要とした（Ｃｈｅｍ、Ｂｅ
ｒ、１０７．１９７４．２３０頁）。

既述したベンジルオキシカルボニルセグメントを用いた
場合と同様にして、 Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｎ
Ｈ２ａｃ１ｏ４（Ｘ）を製造するための■の接触水素添
加をジメチルアセドアずド中で行うことができる。１２
の物負■は１０−のジメチルアセトアミドに円滑に溶解
する。１？の相当する四臭化水素酸塩を溶触するには、
約１４０−のメタノールおよびジメチルアセトアミドの
４：１浪合物（Ｏｈｅｍ、Ｂｅｒ。

１０５．１９７２．２５１２頁）が必要であった。

ｌｔ＋を製造するためのＸと Ｂｏｃ−Ｈｌｓ−Ｓｅｒ（Ｂｕｉ）−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ
）−〇１ｙ−Ｔｈｒ（Ｂｕｔ）−ｈｅ−ＯＨ との反応は、各ミリモルに対し約４０−のジメチルホル
ムアぐド及びジメチルアセドアばドの混合物（１：１）
を必要とする。相当てる五臭化水嵩酸塩による場合には
その溶媒量の２倍以上が必要とな、り　（Ｃｈｅｍ、Ｂ
ｅｒ、１０７，１９７４，２３１頁）、まりＤＣＣ／Ｎ
−ヒドロキシスクシンイずドを縮合剤として用いるとき
は、その溶媒量の約５倍も必要となる（Ｏｈｅｍ、Ｂｅ
ｒ、１０５．１９７２．２５１５貞）。

ベンジルオキシカルボニル・セグメントの接触水素６５
加（これは自動滴定器を用いてｐ！４４〜６で行わする
〕に用いるのに好ましい溶媒はジメチルアセトアミドで
ある。何故ならは、過塩素酸溶液はジメチルホルムアば
ド中より４ジメチルアセトアミド中における方が安定だ
からである。ホルミル基は過塩素酸にょシ、ジメチルア
ずンの形成を伴って容易に除去される。ジメチルアセド
アばドも過塩素酸により徐々に分解を受ける。従って、
用時祠製したばカリの過塩素酸／ジメチルアセトアミド
溶液を用いた方がよい。とはいえ、水がその溶解度をそ
れ程低下させなけれは、水性過塩素酸（１〜２Ｎ）を用
いて遊離されるアずノ基を調定することも可能である。

水素添加が完了したら触媒（チャコールまたは硫酸バリ
ウムに担持したＰｄ触媒）を吸引ｅ去し、そしてＰ液を
縫動する。残留物は、次いで適当な溶媒例えば酢酸エチ
ルまたはジイソプロピ省エーテルで磨砕することができ
る。通常は無定形沈殿が形成されるが、これは吸引沢過
することができる。ペプチド■および確の段階で生成物
を精製することが好ましい。デカ堅プチドミ過塩素酸塩
■は）ｎ−ブタノールおよび水量での向流分配によシき
わめ【良好に精製できるのに対し、テトラデカペプチド
四過塩素酸塩■は水を溶出剤とするインプロピル化架橋
デキストランゲルでのゲル沢過によりｉ製される。

カラムおよび溶出液でのａ菌増殖を防ぐために、０ｈｌ
Ｏｒｅｔｏｎｅ　（Ｌｌ、１−　）ジクロロ−２−メチ
ル−２−プロパツール）か飽和するまで添加される。こ
のＣｈｌｏｒｅｔｏｎｅは精製性酢酸エチルで抽出する
ことＫよシ除去することかできる。

ＤＣＣおよびＨＯＯｂｔでセグメント・カップリングを
行った後の後処理は簡単である。可能な場合には、反応
が完了したら沈殿したジシクロヘキシル尿素を吸引Ｐ去
し、そして２−ペプチド過塩素酸塩を計算された童の過
塩素ｒＭを添加した水で沈殿させる。沈殿ｖｌＪ實か１
過しＫくいときは、ＮａＣｌＯ４を添加して乳状乳濁液
を１１国液に変えれば容易にｅ過できる。

本発明はまた、式Ｉ（式中ＲおよびＲ１は前述の意味を
有する）で示さ九るペプチドに関する。

笑施例　１ Ｈ−Ａｒｇ（Ｈ（ｄ０４）−Ｌａｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−
Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｎａ３　ＨＯ１０４２２ｔＣ
１８，２ａリモル）のＺ−Ａｒｇ（Ｚ２）−Ｌｅｕ−Ｌ
ａｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｖ’ａ１−Ｎａ３を２
２ｏＷＩｔのジメチルアセトアミドに懸濁する。Ｐｄ／
ＣＭ媒を添加後、自ＶＪ　＠定器中ｐＨ４，５でジメチ
ルアセトアミド中Ｉ　Ｎ　　Ｈｃ１ｏ４を添加して接触
水素添加を行う（このジメチルアセトアミド中Ｉ　Ｎ　
ＨＣｌ０ａはその都度用時制製すべきである。何故なら
ば、過塩素酸は徐々にジメチルアセトアミドを加水分解
してジメチルアミンと酢酸を生成するからである）。

ジメチルアセトアミド巾約１Ｎ　ＨＯ’１０４の―製：
１１０−の６０％Ｈｃ１ｏ４を８００−の攪Ｉ半され効
率的に冷却されたジメチルアセトアミドにゆつくりと滴
加しくきわめて発熱性の反応である）、次いでその溶液
全量をジメチルアセトアミドで１，０００ｍ１とする。

水素際加が完了したら、触媒を吸引Ｐ去し、そしてＣ液
を約１００−にき縮する。ペプチドを６００−の酢酸エ
チルで沈殿させ、そして吸引濾過する。そのペプチド（
これはきわめて吸湿性である）を次に再度６００ｍ７！
の酢酸エチルと共に攪拌し、吸引濾過し、そして高度の
真空下Ｋｐ２０５で乾燥する。収［１８，２Ｆ（９２％
）、融点：１１２〜１２４°で泡沫化、ＣａＪＤ＝　−
３０，７°（ｃ＝１．８０％酢酸） ＩＨ−ＮＭＲス堅クトりτδ；２．７〜２．９に２つの
ジメチルアミドのバンドが見られる。ジメチルアセドア
ばドと酢酸エチルのアセチル基はδ＝１９および２．０
の闇に見られる。

元素分析： ０３６Ｈ６ｓＮ１２０ｅ−２ＨＣｌ０ａ、０．８ジメチ
ルアセドアずド、１Ｈ２０（分子量１０Ｂ５．６８） ＯＨＣ！１　　　　Ｎ　　　　Ｈ２０ 計算値　４３．３７７．３５６．５３　１（５，５１１
，６６実邸ｊ値　４３．３　７．１　６．５　１６．１
　１．７実施例　２ Ｚ−Ａｒｇ（Ｚ２　）−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ（ＨＣ
ｌＯ４）−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−
Ｖａｌ−ＮＨ２ １２，２４ｔ（１５ｔリモル）のＺ−Ａｒｇ　（Ｚ２　
）−Ｌｓｕ−Ｇｌｎ−ＯＨ（微粉砕物）を４０℃で２．
４４５Ｆ（１５−ｆ”リモル）の３−ヒドロキシ−４−
オキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，３−ベンゾトリア
ジン（＝ａｏｏｂｔ）のジメチルアセトアミド１０５−
中の攪拌溶液に添加する。すべてが溶解した後に、溶液
を室温にまで到らしめ、そして１６．９３Ｆ（１５ミリ
モル）の）Ｉ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｌ１３ｕ−Ｇｌｎ−Ｇ
１７−Ｌ１８ｕ−ＶｆＬｌ−ＮＨ２ｍ２ＨＣ１０４，ｌ
Ｈ２Ｏ，１，３ＤＭＡを攪拌しながら徐々に絵加する。

その混合物を丁べてが溶解するまで室温で攪拌する。溶
液を今度は１０℃まで冷却しく粘稠化し始める）、そし
て攪拌しながら１９５ｍ（１５ミリモル）のＮ−二チル
モルホリンと３．９ＰＣ１８，９ミリモル）のジシクロ
へキシルカルボシイεドを順次添加する。その混合物を
攪拌しながら室温に到らしめる。通常、その混合物は約
４時間後に固化する。混合物が翌日まで攪拌可能状態を
維持する場合も多少はある。その混合物を室温に一夜放
置し、次いで６００−の氷水と１５ｆｆｉ／の２Ｎ水性
過塩素酸の混合物と共に攪拌する。その混合物を冷所で
１５分間攪拌しそして吸引濾過する。洗浄には水を用い
る。

次に沈殿を再度３００ｒＲｔの水と共に室温で１〜２時
間攪拌する。沈殿を吸引ト取しそして水洗する。それを
Ｐ２Ｏ５で一定重曾になるまで乾燥する。収量：　２Ｂ
？＜９２％）、融点２２２℃（他のバッチでは２４０℃
または２５６〜２５５℃の融点も妃められた）。（ロ）
且０士−２７，１°（Ｃ＝１．８０％酢＃）（他のバッ
チノ旋光角ニー　２７．８°、−２８，９゜および−２
″１４°）。

この後処理によれば、この物質は１モル娼量のジシクロ
ヘキシル尿素を含有する。

ＮＭＲＫよｎは、この物質は０．５モル当量のジメチル
アセトアミドを含有し、またフィッシャー法による水の
定量によればそれは３モル当量の水を含有する。

分子量計算値 ペプチド過塩素酸塩　　　１６９７．４０ジシクロヘキ
シル尿素　　　２２４．３４３　　水　　　　　　　　
　　　　　　　　　５４．０４８０．５ジメチルアセト
アミド　　　４３．５６２総分子量　　　　　　　　２
０１９．３５実施例　３ Ｈ−Ａｒｇ（ＨＣｌＯ４）−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ（
ＨＣｌＯ４）−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｌｓ
ｕ−Ｖａｌ−ＮＨ２−ＨＣ１０４２７ｔ（１３，３７ず
リモル）の アミド を３００−のジメチルアセドアばドに懸濁する。

Ｐｄ／ｌ：！触媒を添加後、自動滴定器中−１４，５で
用時調製したジメチルアセドアばド中ＩＮ　Ｈｃｌｏ４
ヲ添加して接触水素添加を行う。水素添加完了後、触媒
を吸引Ｐ去し、そしてＰ液を高真空下に！Ｉ縮乾固する
。残留物をｎ−ブタノール飽和水性０．０２ＷＨＯ’１
１５ＯＮｔに溶解する。不溶性成分（主にＤ〇−尿素）
をＰ別し、次いで０．０２１ＪＨＯ１とｎ−ブタノール
間の向流分配を７段階で行、う。そのｎ−ブタノール相
は０．０２ＮＨＯ１で飽和しておくのがよく、また０、
０２ＮＨＯ１はｎ−ブタノールで飽和しておくのがよい
。個々の段階Ｖ　ＴＬＯ（ＴＬＯ：　ｎ−ブタノール／
ピリジン／水／氷酢１１１！（６０：２０：２４：６）
）Ｋよシチェックした。

満足すべき画分（水５〜７およびブタノール４〜７〕を
合体しそして高真空下に濃縮する。残留物をジインプロ
ピルエーテルで磨砕しそして吸引濾過する。そのｉ質は
当初きわめて吸湿性がある。この性質はＰ２Ｏ５で真空
乾燥後火われる。

収量１５．１！ＭＣ主画分〕。不純物の１１かに相当量
の目的ペプチドを含む副画分（水３〜４およびｎ−ブタ
ノール２〜３）を別個ｔｌ縮し、そして再度、１００−
の相盆として前述の如く向流分配Ｋかける。利用可能な
画分（水３〜７およびｎ−ブタノール７〕を濃縮し、ジ
イソプロピルエーテルで磨砕し、そして同形物を吸引濾
過し、そして高真空下ＫＰ２０５で乾燥する。障害とな
る水分を除去丁φために、ジイソプロピルエーテルで磨
砕する前にトルエンと共に蒸留を行うのも好ましい。収
量５．４５Ｆ（第２画分）。

総数率２α６ｔ（７２％）。回ｊ’＝−２７，６°（ｃ
＝１．８０％酢酸） ＮＭＲによれば、この物質は６モル尚量のジメチルアセ
トアミド、０．７５モル当量のジイソプロピルエーテル
を含有し、またフィッシャー法による水の定量によれば
それは１５モル当量のＨ２Ｏを含有する。

分子量計算値 デカにブチド、５）［１０４１４９５，９６ジメチルア
セトアミド　　　５２２．７０．７５ジイソプロピルエ
ーテル　　　　　　７６．６１５水　　　　　　　　　
　　２７．６総分子３１　　　　　　　　　２１２２．
８実施例　４ Ｖａ？−−ＮＨ２ ８，７３ＰＣ９ミリモル）のＺ−Ａｒｇ（Ｚ２）−Ａ８
ｐ（ＯＢｕｔ）−Ｅｌｅｒ（Ｂｕｌｌ；）−Ａ：Ｌａ−
ＯＨ，０，５Ｈ２０および１．４７１（９ミリモル）の
３−ヒドロキシ−４−オキソ−３，４−ジヒドＯ−１，
２，３−ペンシトリアジｙ　（＝ＨＯＯｂｔ）を４５−
のジメチルアセトアミドに溶解する。

攪拌しながら、１９．１ＰＣ９ミリモル）の（ＮＭＲに
よれば０．７５モル当量のジインプロピルエーテルおよ
び６モル当量のジメチルアセドアばドを、１５モル当量
のＨ２Ｏと共に含有する）を添加し、そして４０℃に加
熱すると丁べ″′Ｃ溶解する。その溶液を次ＫＯ℃に冷
却し、そして２．３４ｍ１（１８ミリモル）のＮ−二チ
ルモルホリンを添加する。反応溶液は、この間黄色を呈
する筈である（　ａｏｏｂｔが指示薬として働く）。変
色か生じないときは、そのデカペプチドに含まれる向流
分配に起端する塩酸か多過ぎるので、更なるＮ−エチル
モルホリンを黄色に変色するまで注意深く添加する（Ｎ
−エチルモルホリンを過剰に用いるのはラセミ化の危険
があるため避けなければならない）。次に２．５４ｆＣ
１１，２６ばリモル）のＤＣＣＩ添加し、そしてその混
合物を０℃で１時間、そして室温で３時間攪拌する。

それを室温で一夜放置する。反応完了度は氷酢酸／ｎ−
ブタノ−／Ｌ−／水（１：３：１）中でＴＬＣＫよシチ
ェックする。

その混合物はゲル状塊に固化し、これを４．５−の２Ｎ
水性過塩酸を添加した水ｔ０００−で磨砕する。沈殿を
吸引Ｐ取し、十分水洗しそしてＰ２Ｏ５で真全乾燥する
。収ｔ２２．９Ｐ（９９％）、、この物質は１モル当量
のＶａ−尿素を含有する。融点１９４°〜２００℃。（
１）２０−−２２．６°（Ｃ；１．８０係酢酸）。

実施例　５ Ｈ−Ａｒｇ（ＨＣ！’１０４　）−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）
−Ｂａｒ（Ｂｕｔ）−Ａｌａ−ＡｒｇＧ１７−Ｌｅｕ−
Ｍａｌ−ＮＨ２，ＨＯ１０４５７ｒ（１４，４ミリモル
）のＺ−Ａｒｇ（Ｚ２）−Ａｒｇ（ＯＢｕリ−Ｂｏｒ（
Ｂｕｔ；）　−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｒ
ｇ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−＋１ｎ−Ｇ１７−Ｌｅｕ−ｖａ　
１−ＮＨ２，２Ｈｅ１０４（＋ＤＯ−尿索　）’Ｊｋ３
７０−のジメチルアセドアばドに溶解する。その溶液は
曇った状態′Ｉｋ維持する。濾過しないでｐａ触媒を添
加し、そして自動滴定器中−４，５で、用時調製された
ジメチルアセドアばドまたは水中ＩＮ　Ｈｏｌｏａを添
加して水ｇｔＡ加を行う。水素添加完了後、触媒を吸引
ｅ去し、そしてＰ液を濃縮する。ｔＡ留物を６０−の水
に溶解し、そして不溶ｖｌＪ（王にＤＯ−尿素）をｒ別
する。Ｐ液を５ｅｐｈａｄｅｘ　Ｌ）１２０でのクロマ
トグラフィにかｆｆル。

ｃｈ１ｏｒｅｔｏｎｅ飽和水を溶朧剤として用いる（Ｃ
ｈｌｏｒｅ−ｔｏｎｅは殺菌剤として働きまた後で容易
に除去できる）。

カラム寸法：長さ約４ｍおよび直径８ｃＩＩＬ。

ニンヒドリン陽性不純物を除去することが重要である（
主な不純物はＨ−Ａｒｇ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）−８ｅｒ
（Ｂｕｔ）−Ａ’１ａ−ＯＨであることが判明した）。

溶出液はｎ−ブメノール／ピリジン／水／氷酢敵（６０
：２０：２４：６ン中でＴＬＣによシチェックする。ペ
プチド含有溶出液はＨト酸エチルで３回抽出して前記０
ｈｌＯｒ＋５ｔｏｎｅを除去し）そして水に溶解した酢
酸エチルを留去した後、凍結乾燥する。

収量１７．７３　ｒ　（５５％）。＠Ｊｊ０＝−２１１
°（ｃ＝１．８０悌酢ｒＲ）。分析によれは、この物員
は六水和物である。

元素分析”　０７７Ｈ１４６０１４ｋＪ２６０Ｓ５−６
　Ｈ２Ｏ（２２４６，２）（１！　　　ＨＣ１Ｎ　　　
Ｈ２０ 計算値　４１．１７７．０９６．３１　１６．２１４．
８２実測値　４１．３　７．１　６．４　１６．０　５
．１実施例　６ Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｉｎ−Ｇ１７−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｅ
Ｂ２ａ）　　１．２！ｉ（１ミリモル）のＺ−Ｔｈｒ（
Ｂｕｔ）−８ｅｒ（Ｂｕｔ）−（）ｌｕ（ＯＢｕｔ）−
Ｌｅｕ−８ｅｔ（Ｂｕｔ）−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−ＯＲ，２
Ｈ２Ｏおよび１５８，９（１ミリモル）の３−ヒドロキ
シ−４−オキソ−５，４−’）ヒドロ−１，２，５−ベ
ンゾトリアジン（＝ｎｏｏｂｔ）を１０−のジメチルア
セトアミドおよび１０５ｇのジメチルホルムアミドの混
合物に懸濁する。これに室温で２．２４１ｉ（１ミリモ
ｈ−）のＨ−Ａｒｇ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）−８ｅｒ　（
Ｂｕｉ）−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−
Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｉｎ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｍａｌ−Ｎ
Ｈ２，４ＨＣ１０４，６Ｈ２０を添加する。この間に溶
解が生じる。ここで０．２６ｄ（２ミリモル）のＮ−エ
チルモルホリンと、４４０１１９（２，１５ミリモル〕
のジシクロへキシルカルボジイミド（＝ＤＣＣ）のジメ
チルアセトアミド５ｍ中の溶液とを室温で添加する。そ
の混合物を室温で約４時間攪拌放置し、そして−夜室温
に放置する。可能ならは（溶液がゲル状になっていない
場合）、翌日Ｋ　ＤＣ−尿素を吸引ｆ去し、そしてＰ液
を１−の２Ｎ　ＨＣｌＯ４（２ｆ　’）モル）を予め添
加した２００−の水と共に撹拌する。ペプチドは乳濁液
の形で分離する。４−の５０％水性Ｎａ○１０４溶液を
添加するとペプチドの満足のいく綿状沈殿が生じる。そ
れを吸引ｒ去しそして少量の水で洗浄する。Ｐ２Ｏ５で
乾燥後の収量：３．１７Ｆ（９６，５％）。（ロ）孟’
＝−１７，８°（６ｇｘ１．８０％酢酸） １：＋）９０Ｑ（０，５ミリモル）の過塩素酸ピリジン
と８１．５１９（０，４ミリモル）のＨ００ｂｔン６０
０１５’（０，５くリモルのＺ−Ｔｈｒ（Ｂｕｔ）−８
ａｒ（Ｂｕリ−Ｇｌｕ（ＯＢｕｌ：）−Ｌｅｕ−８ａｒ
　（Ｂｕｔ）−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−ＯＨ，２Ｈ２０のジメ
チルアセトアミド０．５−中の懸濁液に添加する。丁べ
てが溶解したら４１２Ｑ（２１モル）のＤｏｃを添加し
、そしてその混合物を室温で２時間攪拌放置する。その
間に、１０７ｆ（０５ミリモル）のＨ−Ａｒｇ−Ａｓｐ
（ＯＢｕｌ）−８ｅｒ（Ｂｕｔ）−Ａｌａ−ムｒｇ−Ｌ
ｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌ
ｙ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｎｌ２．４１１０１０４　、６Ｈ
２０を５−のジメチルアセトアミドに溶解する。

前述の混合物を小フィルタを通して吸引しズ後者の溶液
に入れ、少量のジメチルアセトアミドで洗浄し、０１３
ｓｔｊ（１ミリモル）のＮ−エチ。

ルモルホリンを添加し、そしてその混合物を室温で２時
間攪拌放置する。次に、１００−の水を添加することに
よジペプチドを沈殿させる。

そのペプチドを遠心分離によシ除去し、そして乾燥する
。収Ｊｔ：ｔ２１ｆ。

実施例　７ （ｂｕリームｌａ−Ａｒｇ（Ｈ（’１０４ノーＬ４ｓｕ
−Ｇｌｎ−ムｒｇ（ＨＯ’１Ｏ４）−Ｌｌ！１ｕ−Ｌｅ
ｕ−Ｇｌｎ−Ｇ１７−Ｌａｕ−Ｖａｌ−）ＪＨ２、１０
１０４３，３ｔｃ約１ミリモル〕の保姦された２−セク
レチン（７〜２７）−ヘンアイコサ堅ブチド四過塩素酸
塩（式については上記参照）を５５ｒｄのジメチルアセ
ドアばドに溶解し、Ｐｃｔ１０触媒を添加し、そし【自
動滴定器中、ｐＨ４，５で用時調製したジメチルアセト
アミドまたは水中１ＮＨＯ’１０４を添加して接触水素
添加を行う。反応光・・　７後、触媒を吸引Ｐ去し、そ
してＰ液を高真空下にと縮する。残留物を酢酸エチルで
磨砕しそして吸引濾過する。収量５．１７　ｔ　（９７
％）。＠。

＝−２２，０°（Ｃ＝＋＝１．８０％ｌ！ｒ１ｆｆ）実
施例　８ −Ａｒｇ　（ＨＣｌＯ４）−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−
Ｇａｙ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−ＮＨ２２７，２ｆ（８，３ミ
リモル）のＨ−Ｔｈｒ（Ｂｕリ−８ｅｒ（Ｂｕｌ；）−
Ｇｌｕ（ＯＢｕｌ：）−Ｌａｕ−８ａｒ（Ｂｕｔ）−Ａ
ｒｇ（ＨＣ！１０４　）−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（１０１０４
）−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）−Ｂａｒ（Ｂｕ”）−ム１ａ−
ムｒｇ（ＨＯ１０４）　−Ｌｅ　ｕ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ（
ＨＯｌｏ　４　）　−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇ：１ｎ−Ｇｌ
ｙ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｎｌ２　、　ＨＣ！１０４を９５
１ｆのＢｏａ−Ｈｌｓ−Ｂｏｒ（Ｂｕｔ：）−Ａｓｐ（
ＯＢｕ”）−Ｇ：Ｌｙ−Ｔｈｒ（！３ｕｔ）−Ｐｈｅ−
ＯＨおよび１３６ｖのａｏｏｂｔのジメチルアセトアミ
ド１６６−およびジメチルホルムアミド１６６−中の攪
拌溶液に添加する。

すべてが溶解した後、０℃で２．２−のＮ−エチルモル
ホリンと３，７ｆのジシクロへキシルカルボジイミドを
添加し、そしてその混合物を０゜で１時間、そして室温
で一夜振拌する。翌日、その溶液を、ｔ３４の水、８．
３ＷＩｔの２Ｎ　Ｈａｘｏ４および４２．５−の５０％
Ｎａ０１０４溶液の混合物中に吸出させる。沈ｂＲＹ吸
引ｅ過し、水洗し、そしてＰ２Ｏ５で真室乾燥する。収
ｉ　３２．９　？。

アミノ酸分析によれば、ペプチドｔｔは約釦％（＝８６
％収４Ｉ−）である。（ロ）ｊ’＝−１１，８°（Ｃ＝
１、８０％酢酸） 実施例　９ ａ）　　Ｆｍｏａ−Ｌｅｕ−００ｂｔ ２．０６ｆのＤＯＯを０℃で３．５５ｆのＦ’ｍｏｃ−
Ｌｅｕ　−ＯＨおよび１６３２のＨｏｏｂｔのメチレン
クロリド４〇−中の溶液に添加する。その混合物′１ｋ
Ｏ℃で１時間攪拌し、そして室温で一夜放置する。沈殿
を吸引沢去し、そしてＰ液を濃縮する。残留物を石油エ
ーテルで２回磨砕し、吸引濾過しそして真空乾燥する。

収量５．２ｔ、無定形。

ｂ）　　Ｆｍｏｏ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ　−０Ｈ５ｆのＦｍ
ｏａ−Ｌｅｕ−００ｂｔを、ｔ７４ｆのＬ−アルギニン
、１．６３　ｆ　ｆ）　Ｈｏｏｂｔおよび１．８ｔの過
塩素酸ピリジンのジメチルアセドアばド２０ｗｔ中の懸
濁液に添加し、そしてその混合物を室温で攪拌する。１
時間後すべてが溶解する。その溶液な室温に一夜放置し
、そして翅目それ″Ｉｋ娘稲する。残留物を１８０−の
ペンタノールおよび１６０−の水（＋２０ｍの飽和水性
Ｎａｌ’Ｉ（０３溶液）の間に分配する。この分配の後
、その都度、１８０ｍｊのペンタノールと１８０−の水
の間の５段階向流分配を行う。純粋なＦｍＯＣ−Ｌｅｕ
−ａｒｇ−ＯＨを含む画分を濃縮し、そして残留物をエ
ーテルで磨砕する。収量：　４．１　ｆ　ｓ融点１４５
〜１５５℃（分解）、ｒａＪＤ＝−１８，５°（Ｃ＝１
、）ｐ／−ｋ）。

実施例　１０ Ｈ−Ａａｎ−８−ｏｒ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＯＨ
Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍａ　４３０　Ａ型
ペプチド合成装置を用いて合成を行った。

ペプチドの合成は、ｐ−ベンジルオキシベンジルアルコ
ール樹脂（ｒＷａｎｇ　ｒｅｓｉｎＪ：Ｓ、Ｗａｎｇ、
Ｊ。

Ａｍ、（！ｈｅｍ、８ｏｃ、９５．１３２８（１９７３
））であって既知の方法　（１ｆｌＡｔｈｅｒｔｏｎ　
　８ｔ　　ａ１拳＠　Ｊａ　Ｏｈｅｍ＊　８０Ｃ＊　Ｏ
ｈｅｍｌｌ　００ｍｍｍ１９８１．３３６）によｉ）　
Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（Ｂｕｔ）−ＯＨでエステル化（置換
度＝０．４ミリ当量／ｆ）したものを用いて行った。樹
脂１ｇをこの合成に用いた。

Ｆｍｏａ−Ａｓｎ−ＯＨ１ｔｍｏａ−８ｅｒ（Ｂｕｔ）
−ＯＨ１ｔｍｏａ−Ｐｈｅ−ＯＨおよびＦｍｏｃ　−Ａ
ｒｇ−ＯＨの各々について１ずリモルを、１５〜２．５
当量のＨＯＢｔと共に秤量して前記装置の製造元から供
給されたカー）　ＩＪッジ内に入れた。アルギニン誘導
体の場合には１当量の過塩素酸ピリジンを添加した。ア
ミノ酸誘導体のｉ！ＯＢｔエステルとしての活性化はカ
ートリッジ内で、４１１１ｔのジメチルホルムアミドに
溶解し次いでジイソブロビルカルボジイずドのジメチル
ホルムアミド中の０．５５　Ｍ溶液２−を添加すること
Ｋよシ行った。

典型的な合成サイクルを以下に列挙する。

１．２Ｘ８Ｍｔのビスリジンのジメチルホルムアミド中
の２０％溶液を１１！２１あた９１０分間用いて保護基
を除去する。

２、　ジメチルアセドアばド（６Ｘ８ｍ）で洗浄する。

！ｈ、ＨＯＢｔのジメチルホルムアミド中の０．５Ｍ溶
液で１０分間処理することによシ樹脂をＨＯＢｔで予備
負荷させ、次いで前記溶／＆？ポンプで除去する。

４、　カートリッジ中で３０〜４５分間予め活性化した
Ｆ’ｍｏ　Ｏ−アばノ酸ＯＢｔエステルを２５〜４５　
　＃分間カップリングする。

５、　ジメチルホルムアミド（６Ｘ８ｍ）で洗？Ｉする
。

合成完了後、まずＦｍｏａ基を、ジメチルホルムアミド
中の２０％ピペリジンを用いてペプチド−樹Ｂｂから除
去し、次いでトリフルオロ酢酸／メチレンクロリド／フ
ェノール（７０：５０：５）で２時間処理することＫよ
ジペプチドをサンプル（１００！９３から分裂させる。

樹脂を濾過し、分裂溶液で洗浄し、そしてｊＰ熊を真空
濃縮する。

フェノールは酢酸と共に数回攪拌することによシ除去す
る。残留粗製ペプチドを１０％酢酸に浴解しそしてその
溶液をｅ過しそして凍結乾燥する。収ｊｌ：２３．８Ｑ
の粗製ペプチド；ｓｓｍ中１２０℃で２４時間加水分糎
した後の７ミノ酸分析：　Ａｓｐ（１０３）、５ｅｒ（
０，８１）、Ｔｙｒ　（０，８９）、Ｐｈｅ　ｔ　１．
００）、ａｒｇ（０，８８）、オルニチンはなしくオル
ニチンはグアニジノ基がアシル化されたアルギニンの酸
加水分解によって生じる）。ＦＡＢマススペクトル：６
８６Ｃ＝分子１＆童十針〕。

特許出願人　　ヘキスト・アクチエンゲゼルシャフト外
２名

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）各断片カツプリングにおいて少くとも１つのアルギ
   ニン含有断片を過塩素酸塩として反応させることよりな
   る断片カツプリングによる保護されたアルギニン含有ペ
   プチドの製造方法。 ２）場合により保護されたアルギニンを過塩素酸塩とし
   て反応させる特許請求の範囲第１項記載の方法。 ３）アルギニン含有セグメントを過塩素酸塩として反応
   させる特許請求の範囲第１項または第２項記載の方法。 ４）１つの断片を合成過程で固相に共有結合させる特許
   請求の範囲第１〜３項のいずれかに記載の方法。 ５）カツプリングをカルボジイミドの存在下に行う特許
   請求の範囲第１〜４項のいずれかに記載の方法。 ６）カツプリングをＮ，Ｎ′−ジイソプロピルカルボジ
   イミドまたはＮ，Ｎ′−ジシクロヘキシルカルボジイミ
   ドの存在下に、そして適切な場合にはＮ−ヒドロキシス
   クシンイミド、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール、３
   −ヒドロキシ−４−オキソ−３，４−ジヒドロ−１，２
   ，３−ベンゾトリアジンまたはその他のラセミ化抑制化
   合物を添加して行う特許請求の範囲第１〜５項のいずれ
   かに記載の方法。 ７）一般式IIａ Ｈ−Ｘ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｖ
   ａｌ−ＮＨ＿２（IIａ）〔式中、Ｘは −Ａｒｇ（ＨＣｌＯ＿４）−、 −Ａｒｇ（ＨＣｌＯ＿４）−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ（
   ＨＣｌＯ＿４）−、−Ａｒｇ（ＨＣｌＯ＿４）−Ａｓｐ
   （ＯＢｕ＾ｔ）−Ｓｅｒ（Ｂｕ＾ｔ）−Ａｌａ−Ａｒｇ
   （ＨＣｌＯ＿４）−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ（ＨＣｌＯ
   ＿４）−、または −Ｔｈｒ（Ｂｕ＾ｔ）−Ｓｅｒ（Ｂｕ＾ｔ）−Ｇｌｕ（
   ＯＢｕ＾ｔ）−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ（Ｂｕ＾ｔ）−Ａｒｇ（
   ＨＣｌＯ＿４）−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（ＨＣｌＯ＿４）−Ａ
   ｓｐ（ＯＢＵ＾ｔ）−Ｓｅｒ（Ｂｕ＾ｔ）−Ａｌａ−Ａ
   ｒｇ（ＨＣｌＯ＿４）−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ（ＨＣ
   ｌＯ＿４）− を表わす〕で示されるペプチドを、３−ヒドロキシ−４
   −オキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，３−ベンゾトリ
   アジンを添加して、遊離カルボキシル基を有する適切な
   ペプチドと極性溶媒中ジシクロヘキシルカルボジイミド
   および必要量の第５塩基と共に反応させ、そしてこのよ
   うにして合成されたペプチドを適当量の過塩素酸および
   適切な場合には過塩素酸塩を添加した水から過塩素酸塩
   として沈殿させることよりなる、式 I Ｒ−Ｈｌｓ（Ｒ＾１）−Ｓｅｒ（Ｂｕ＾ｔ）−Ａｓｐ（
   ＯＢｕ＾ｔ）−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ（Ｂｕ＾ｔ）−Ｐｈｅ−
   Ｔｈｒ（Ｂｕ＾ｔ）−Ｓｅｒ（Ｂｕ＾ｔ）−Ｇｌｕ（Ｏ
   Ｂｕ＾ｔ）−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ（Ｂｕ＾ｔ）−Ａｒｇ（Ｈ
   ＣｌＯ＿４）Ｌｅｕ−Ａｒｇ（ＨＣｌＯ＿４）−Ａｓｐ
   （ＯＢｕ＾ｔ）−Ｓｅｒ（Ｂｕ＾ｔ）−Ａｌａ−Ａｒｇ
   （ＨＣｌＯ＿４）−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ（ＨＣｌＯ
   ＿４）Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｖａ
   ｌ−ＮＨ＿２（ I ） （式中、 ａ）ＲおよびＲ＾１はＢｏｃ基を表わすか、またはｂ）
   ＲはＢｏｃ基を表わしそしてＲ＾１は水素を表わすか、
   または ｃ）ＲおよびＲ＾１はアダマンチルオキシカルボニル基
   を表わす） で示される保護されたセクレチン誘導体を製造するため
   の特許請求の範囲第１〜３項のいずれかに記載の方法。 ８）一般式II Ｚ−Ｘ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｖ
   ａｌ−ＮＨ＿２（II）（式中Ｘは −Ａｒｇ（Ｚ＿２）−、 −Ａｒｇ（Ｚ＿２）−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ（ＨＣｌ
   Ｏ＿４）−、−Ａｒｇ（Ｚ＿２）−Ａｓｐ（ＯＢｕ＾ｔ
   ）−Ｓｅｒ（Ｂｕ＾ｔ）−Ａｌａ−Ａｒｇ（ＨＣｌＯ＿
   ４）−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ（ＨＣｌＯ＿４）−、ま
   たは −Ｔｈｒ（Ｂｕ＾ｔ）−Ｓｅｒ（Ｂｕ＾ｔ）−Ｇｌｕ（
   ＯＢｕ＾ｔ）−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ（Ｂｕ＾ｔ）−Ｌｅｕ−
   Ｓｅｒ（Ｂｕ＾ｔ）−Ａｒｇ（ＨＣｌＯ＿４）Ｌｅｕ−
   Ａｒｇ（ＨＣｌＯ＿４）−Ａｓｐ（ＯＢｕ＾ｔ）−Ｓｅ
   ｒ（Ｂｕ＾ｔ）−Ａｌａ−Ａｒｇ（ＨＣｌＯ＿４）Ｌｅ
   ｕ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ（ＨＣｌＯ＿４）−、 を表わす）で示されるベンジルオキシカルボニル含有断
   片を、ジメチルアセトアミド中パラジウム触媒を添加し
   、そしてｐＨを過塩素酸含有溶液の添加により４〜６に
   維持して水素添加することにより一般式IIａで示される
   ペプチドを得、そしてそれを特許請求の範囲第７項記載
   の方法により更に反応させることよりなる特許請求の範
   囲第７項に記載の方法。 ９）アルギニン含有断片の過塩素酸塩の調製に過塩素酸
   ピリジンを用いる特許請求の範囲第１〜８項のいずれか
   に記載の方法。 １０）ＲおよびＲ＾１が特許請求の範囲第７項に定義さ
   れた意味を有する式 I で示されるペプチド。