JPS62112064A - 結合性被分析物の測定法 - Google Patents
結合性被分析物の測定法Info
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は、不均一系２座イムノアツセイの原理により結
合性被分析物を測定する方法及び試薬に関する。
合性被分析物を測定する方法及び試薬に関する。
従来の技術
２座イムノアツセイ（＼ンＶインチ試験）は拮抗イムノ
アッセイに比較して正確さ、感度及び実施の迅速性に関
して明瞭な利点を呈する。
アッセイに比較して正確さ、感度及び実施の迅速性に関
して明瞭な利点を呈する。
試薬、使用物質又は試料の濃度が変動すると免疫化学的
測定法では測定値は最大値を通過してしまう。この効果
はフック効果（Ｈｏｏｋ−ｍｒｒｅｋｔ ）と表わされ
る。固相が関与するサンｒイツチイムノアツセイでは、
初めは被分析物の量が上昇すると測定シグナルも上昇す
るのが認められ、その後被分析物が更に増加すると測定
シグナルは再び低下し得る。この場合Ｋ、ある決まった
測定結果は被分析物の２つの別々の量により得られる（
第１図参照）、、被分析物の量に左右されるこの効果は
高量フック効果（’ Ｈｌｇｈ Ｄｏｓｅ ’１ｉｏｏ
ｋ−Ｋｆｆｅｋｔ ）と表わされ、前記の利点にもかか
ワラスサンｒイツチアツセイの使用は限定される。
測定法では測定値は最大値を通過してしまう。この効果
はフック効果（Ｈｏｏｋ−ｍｒｒｅｋｔ ）と表わされ
る。固相が関与するサンｒイツチイムノアツセイでは、
初めは被分析物の量が上昇すると測定シグナルも上昇す
るのが認められ、その後被分析物が更に増加すると測定
シグナルは再び低下し得る。この場合Ｋ、ある決まった
測定結果は被分析物の２つの別々の量により得られる（
第１図参照）、、被分析物の量に左右されるこの効果は
高量フック効果（’ Ｈｌｇｈ Ｄｏｓｅ ’１ｉｏｏ
ｋ−Ｋｆｆｅｋｔ ）と表わされ、前記の利点にもかか
ワラスサンｒイツチアツセイの使用は限定される。
フック効果に関しては、レセプター中に存在する抗体の
不均一性もしくは不完全な洗浄のような種々の理由が挙
げられるＣ Ｄ、ロッｒパー？ （ＲＯｄ’ｂａｒｄ
）及びその他共、著−１イムノケミストリー（工ｍｍｕ
ｎｏｃｈｅｍｉａｔｒｙ ） ’、第１５号、７７〜
８２頁（１９７８）参照〕。しかしながらそ゛れとは関
係なく理論的な考察からフッ、り効果はすべての１工程
サンＶインチ試験 （Ｊｌｉｎａｃｈｒｉｔｔ−８ａｎｄｗｉｃｈ−Ｔｅ８
ｔ ）で必然的に起るはすである。この場合、１工程試
験とは、被分析物を、それに対して特異的でその被分析
物と１サンｒイツチ″ヲ形成する２つのレセプターと、
同じ溶液中で反応させ、かつその際にもしくは引続いて
不溶性担持材料に固定させるすべての試験であり、これ
は被分析物を第１の特異的レセプターと反応させかつ形
成された複合体を固相に固定させた後で、結合しなかっ
た被分析物を、第２の特異的な機織したレセプターと反
応させる前に固相を洗浄することにより除去する連続反
応法とは異なる。１工程サンＶイツチ試験では、両方の
特異的なレセプターが被分析物に対して過少量で存在し
ている場合に、被分析物の一部だけが接合体と複合しか
つこの複合体からもその一部だけが固相に固定されて、
フック効果が必然的に生じる。
不均一性もしくは不完全な洗浄のような種々の理由が挙
げられるＣ Ｄ、ロッｒパー？ （ＲＯｄ’ｂａｒｄ
）及びその他共、著−１イムノケミストリー（工ｍｍｕ
ｎｏｃｈｅｍｉａｔｒｙ ） ’、第１５号、７７〜
８２頁（１９７８）参照〕。しかしながらそ゛れとは関
係なく理論的な考察からフッ、り効果はすべての１工程
サンＶインチ試験 （Ｊｌｉｎａｃｈｒｉｔｔ−８ａｎｄｗｉｃｈ−Ｔｅ８
ｔ ）で必然的に起るはすである。この場合、１工程試
験とは、被分析物を、それに対して特異的でその被分析
物と１サンｒイツチ″ヲ形成する２つのレセプターと、
同じ溶液中で反応させ、かつその際にもしくは引続いて
不溶性担持材料に固定させるすべての試験であり、これ
は被分析物を第１の特異的レセプターと反応させかつ形
成された複合体を固相に固定させた後で、結合しなかっ
た被分析物を、第２の特異的な機織したレセプターと反
応させる前に固相を洗浄することにより除去する連続反
応法とは異なる。１工程サンＶイツチ試験では、両方の
特異的なレセプターが被分析物に対して過少量で存在し
ている場合に、被分析物の一部だけが接合体と複合しか
つこの複合体からもその一部だけが固相に固定されて、
フック効果が必然的に生じる。
両方の特異的レセプターが可溶性でありかつ被分析物と
のそれらの複合体が他のレセプターを介して固相に固定
されるＤＡＳＦサンドインチ原理を適用するすべての蛋
白質測定も前記の意味で１工楊試鰻でありかつフック効
果を呈する。
のそれらの複合体が他のレセプターを介して固相に固定
されるＤＡＳＦサンドインチ原理を適用するすべての蛋
白質測定も前記の意味で１工楊試鰻でありかつフック効
果を呈する。
これは、とりわけ例えばＡＦＰ 、 ＯＥＡ 、
ｈＯＧ 。
ｈＯＧ 。
工ｇＢ等のような腫瘍遺伝ａｍの一合に、極めて病的な
試料でも正常な範囲の結果をもたらすことがある。それ
故、しばしば医学的な測定に当って１工穫サンドイツチ
法の適用は基本的に否定される。フック効果により偽値
で得られるそのような測定結果を検出することは着しい
進歩である。それというのも１工根サンｒイツチ法のす
べての利点（反応時間の短縮、感度、正確さ等）ｔ−利
用することができ、しかもフック効果による間違った結
果を甘受する必要もないからである。
試料でも正常な範囲の結果をもたらすことがある。それ
故、しばしば医学的な測定に当って１工穫サンドイツチ
法の適用は基本的に否定される。フック効果により偽値
で得られるそのような測定結果を検出することは着しい
進歩である。それというのも１工根サンｒイツチ法のす
べての利点（反応時間の短縮、感度、正確さ等）ｔ−利
用することができ、しかもフック効果による間違った結
果を甘受する必要もないからである。
Ｋ、 Ｌ、ホフマン（Ｈｏｆｆｍａｎｎ ）及びその他
〔１クリニカル・ケミストリー（Ｃ１ｉｎｉｃＣ１１ｎ
ｉｃａｌＣｈｅ ） ’、第６０巻、／１６９．１４
９９頁（１９８４年）〕は、フック効果の発注を阻止す
るために多くの実験を行なったことを報告している。例
えば、初めに被分析物を固相に結合しているレセプター
と反応させ、その後固相を粗く洗浄し、次に標識した可
溶性°レセプターと第２の恒温保持をし、最後に２回目
の洗浄を行なって、結合した標識したレセプターを結合
していないものから分離する工程的分析が提案されてい
る。その他に、試料の大きさを小さくしたり、試験を異
なる稀釈度の被分析物で実施したり又は小さな範囲の検
量線だけを使うことが提案されている。高濃度の標識し
たレセプターを使用できるよ５６Ｃ低活性の標識剤を使
用することも推奨され、その際に活性度（放射性、けい
光、酵素、呈色の活性度）は著しく大きくはならない。
〔１クリニカル・ケミストリー（Ｃ１ｉｎｉｃＣ１１ｎ
ｉｃａｌＣｈｅ ） ’、第６０巻、／１６９．１４
９９頁（１９８４年）〕は、フック効果の発注を阻止す
るために多くの実験を行なったことを報告している。例
えば、初めに被分析物を固相に結合しているレセプター
と反応させ、その後固相を粗く洗浄し、次に標識した可
溶性°レセプターと第２の恒温保持をし、最後に２回目
の洗浄を行なって、結合した標識したレセプターを結合
していないものから分離する工程的分析が提案されてい
る。その他に、試料の大きさを小さくしたり、試験を異
なる稀釈度の被分析物で実施したり又は小さな範囲の検
量線だけを使うことが提案されている。高濃度の標識し
たレセプターを使用できるよ５６Ｃ低活性の標識剤を使
用することも推奨され、その際に活性度（放射性、けい
光、酵素、呈色の活性度）は著しく大きくはならない。
更に、ホフマン及びその他（前記文献）は、固相に結合
する、標識化レセプター分の増加を動力学的に追跡し、
かつこの数値をコンピュータに蓄積する１工程サンドイ
ンチ試験測定法を記載している。その後、反応速＆’に
計算する。
する、標識化レセプター分の増加を動力学的に追跡し、
かつこの数値をコンピュータに蓄積する１工程サンドイ
ンチ試験測定法を記載している。その後、反応速＆’に
計算する。
その際に、フック効果により生じた測定結果は、それが
著しく低い複合体結合の増加を有するので、それにより
他の数値から区別することができる。この方法は、測定
の際にフック効果が存在するかどうかを知るために、非
常に経費のかかる、高価なコンピュータ法を適用しなけ
ればならないという欠点を有する。その上、この方法は
酵素免疫学的測定には不適当である。
著しく低い複合体結合の増加を有するので、それにより
他の数値から区別することができる。この方法は、測定
の際にフック効果が存在するかどうかを知るために、非
常に経費のかかる、高価なコンピュータ法を適用しなけ
ればならないという欠点を有する。その上、この方法は
酵素免疫学的測定には不適当である。
発明が解決しようとする問題点
それ故、本発明の目的は、フック効果が惹起する誤った
測定結果を簡単に知ることができて、しかもその際に公
知の方法に内在する欠点、例えば感度、正確さの低下も
しくは高められた作業、試薬及び装置の無駄を甘受する
必要のない方法を開示することである。
測定結果を簡単に知ることができて、しかもその際に公
知の方法に内在する欠点、例えば感度、正確さの低下も
しくは高められた作業、試薬及び装置の無駄を甘受する
必要のない方法を開示することである。
問題点全解決するための手段
本発明によれば、これは不均一系イムノアッセイの原理
により、被分析物を含有する試料溶？１ｌ−１被分析物
と結合性で特異的な、溶解相中に存在する標識した第ル
セプター及び第ルセプターとは交叉反応せずかつ被分析
物と第ルセデターを含有する複合体を固定し得る、固相
９忙存在する第２レセプターと共に恒温保持し、恒温保
持後に相分離し、かつ固相に結合した襟ａを定量測定す
ることによる結合性被分析物の測定法により解決され、
この方法は固相に結合した標識の溶解相中への逆解離速
度を測定し、かつ逆解離速度と測定値との商を第１測定
の試験結果の正確さの尺度として使うことを特徴とする
。
により、被分析物を含有する試料溶？１ｌ−１被分析物
と結合性で特異的な、溶解相中に存在する標識した第ル
セプター及び第ルセプターとは交叉反応せずかつ被分析
物と第ルセデターを含有する複合体を固定し得る、固相
９忙存在する第２レセプターと共に恒温保持し、恒温保
持後に相分離し、かつ固相に結合した襟ａを定量測定す
ることによる結合性被分析物の測定法により解決され、
この方法は固相に結合した標識の溶解相中への逆解離速
度を測定し、かつ逆解離速度と測定値との商を第１測定
の試験結果の正確さの尺度として使うことを特徴とする
。
常法のサンｒインチ試験では、試料−及び試薬数体の分
離後に固相に固定したサンドインチ複合体を、結合した
標識化レセプター（放射紘酵素、叶い光等により標識し
た）の童を介して測定する。この分離及び結合していな
い標識化レセプターの除去により、被分析物／レセプタ
ーの結合の平衡が妨害されて、サン間インチ成分の逆解
離が開始し、これは最終的には固相に固定されなかった
標識化レセプター分子が孜相中に存在する結果をもたら
す。逆解離度は固相又は分離されだ液相中の標識及び相
分離を測定することにより確定することができる。例え
は、液相としては清浄液及び酵素イムノアッセイでは酵
素測定のための基質溶液が該当する。本発明により、こ
の基質溶液中で初めに相分離の時点で発生した測定値（
呈色シグナル）全測定し、かつ引続いてそれ以上の色素
形成の動力学ｔｇ識の逆解離の尺度として測定する。
離後に固相に固定したサンドインチ複合体を、結合した
標識化レセプター（放射紘酵素、叶い光等により標識し
た）の童を介して測定する。この分離及び結合していな
い標識化レセプターの除去により、被分析物／レセプタ
ーの結合の平衡が妨害されて、サン間インチ成分の逆解
離が開始し、これは最終的には固相に固定されなかった
標識化レセプター分子が孜相中に存在する結果をもたら
す。逆解離度は固相又は分離されだ液相中の標識及び相
分離を測定することにより確定することができる。例え
は、液相としては清浄液及び酵素イムノアッセイでは酵
素測定のための基質溶液が該当する。本発明により、こ
の基質溶液中で初めに相分離の時点で発生した測定値（
呈色シグナル）全測定し、かつ引続いてそれ以上の色素
形成の動力学ｔｇ識の逆解離の尺度として測定する。
被分析物／レセプター複合体の逆解離により惹起される
標識の遊離は一次反応として進行するので、その遊離量
は被分析物量もしくはそＣ測定シグナルに比例する。従
って、遊離した襟Ｉ！＆蓋は商α（相分離後の単位時間
当りの測定値の変化を測定値により除する）により表わ
すことができる。フック効果が起こった場合には、商α
はフック効果が起こらなかった場合に比べて明瞭に変化
するのは驚異的、であった。 。
標識の遊離は一次反応として進行するので、その遊離量
は被分析物量もしくはそＣ測定シグナルに比例する。従
って、遊離した襟Ｉ！＆蓋は商α（相分離後の単位時間
当りの測定値の変化を測定値により除する）により表わ
すことができる。フック効果が起こった場合には、商α
はフック効果が起こらなかった場合に比べて明瞭に変化
するのは驚異的、であった。 。
従って、得られた測定値を検量線を用いて被分析物量に
換算することができるかどうか、あるいは測定値がフッ
ク効果により得られ、それ故最高標珈値を土建る被分析
物の量のせいかどうかを商αにより決定することができ
る。
換算することができるかどうか、あるいは測定値がフッ
ク効果により得られ、それ故最高標珈値を土建る被分析
物の量のせいかどうかを商αにより決定することができ
る。
本発明方法の範囲では被分析物及びレセプタとして原則
的に相互に結合性であるすべての物質の組み合せであっ
てよい。この定義において、免疫学的に結合性の物質の
組み合せ以外に、類似の挙動を示すような物質の組み合
せも本発明の範囲に包含される。まず第一に該当する優
れた物質の組み合せの抗原−抗体（抗体にはポリクロナ
ール並びにモノクロナールから由来する公知の免疫学的
に活性の７ラグメントも包含する）と共に、蛋白質Ａ−
免疫グロブリンＧ、アビジン−ビオチン、コンカナバリ
ンＡ−レクチン並びにＤＮＡ −ＤＮＡ （ハイブリッ
ド結合）の組み合せが包含される。すべてのこれらの組
み盆せは不均一系イムノアッセイ（サンドインチ試験）
の原理により本発明方法で１工程恒温保持下に測定する
ことができる。
的に相互に結合性であるすべての物質の組み合せであっ
てよい。この定義において、免疫学的に結合性の物質の
組み合せ以外に、類似の挙動を示すような物質の組み合
せも本発明の範囲に包含される。まず第一に該当する優
れた物質の組み合せの抗原−抗体（抗体にはポリクロナ
ール並びにモノクロナールから由来する公知の免疫学的
に活性の７ラグメントも包含する）と共に、蛋白質Ａ−
免疫グロブリンＧ、アビジン−ビオチン、コンカナバリ
ンＡ−レクチン並びにＤＮＡ −ＤＮＡ （ハイブリッ
ド結合）の組み合せが包含される。すべてのこれらの組
み盆せは不均一系イムノアッセイ（サンドインチ試験）
の原理により本発明方法で１工程恒温保持下に測定する
ことができる。
レセプターとして本発明範囲においては、前記の特異的
に結合性の物質組み曾せの成分がそのま声か又はその誘
導体、特にしばしば接合体と呼ばれる、標識分子への共
有結合により形成される結合性物質の誘導体が該当する
。本発明範囲で有利に使われる、接合体として存在する
ようなレセプターの例は、標識酵素と共有結合している
抗体又は抗体フラグメントである。標識酵素の代りに色
素分子、色素形成成分、特にけい元色素分子又は検出系
に好適な他の物質を使用することもできる。この種の接
合体は放射性標識されていてもよい。
に結合性の物質組み曾せの成分がそのま声か又はその誘
導体、特にしばしば接合体と呼ばれる、標識分子への共
有結合により形成される結合性物質の誘導体が該当する
。本発明範囲で有利に使われる、接合体として存在する
ようなレセプターの例は、標識酵素と共有結合している
抗体又は抗体フラグメントである。標識酵素の代りに色
素分子、色素形成成分、特にけい元色素分子又は検出系
に好適な他の物質を使用することもできる。この種の接
合体は放射性標識されていてもよい。
場合により、抗体自体がｍａ！とじて放射性原子を含有
していてもよい。この場合に、例えば標識された第ルセ
ゾターは放射性抗体から成る。 、 。
していてもよい。この場合に、例えば標識された第ルセ
ゾターは放射性抗体から成る。 、 。
同相に結合している第２レセツターも前記の結合性の物
質の組み合せの成分からそのままで又はその誘導体から
成っていてよい。固相に結合している第２レセプターは
サンドイッチアッセイにおいて、被分析物と第ルセゾタ
ーとからの複合体全固相に固定し、それ故献相から簡単
、に分離可能にするのに有用である。この際に、第２レ
セプターは直接測定すべき被分析物と結合してよく、こ
の際にこのレセプターは第１、レセプターとは別の被分
析物決定因子く対して、作用し、それ故モノクロナール
抗体又はその７ラグメントから成ると有利である。、し
かしま、た第２レセプターは、被分析物には存在してい
ない、被分析物と第ルセゾターとからの複合体の他の決
定因子に作用してよい。この実施嬢では、同様、に被分
析物に対して特異的でありか？第２レセプターとは別の
決定−子を識別する第３レセプターを使用すると有利で
ある。被分析物、第ルセデター及び第６レセプターは１
つの複合体を形成し、この場合には第２レセプターとし
て第３レセプターと結合する抗体上使用すると有利であ
る。％に優れた実施形において特異的なｘｉレセプター
は抗体フラグメント、特にＦ〒ｂ−フラグメント！含有
し、かつ第３ Ｌ／セプターは完全抗体より成り、その
際に第３レセプター及び第ルセゾターの抗体部分はモノ
クロナールである。この場合に第２レセノターは、第２
レセプターがＰａｂ −７ラグメントを含有する項一に
第３レセノターの一部、特に有利に第３レセプターのＦ
ｃ部分に対して作用すると有利である。第３レセプター
を誘導化しかつこの誘啼化装置に対して作用する第２″
シタ−を使用することも可能である。
質の組み合せの成分からそのままで又はその誘導体から
成っていてよい。固相に結合している第２レセプターは
サンドイッチアッセイにおいて、被分析物と第ルセゾタ
ーとからの複合体全固相に固定し、それ故献相から簡単
、に分離可能にするのに有用である。この際に、第２レ
セプターは直接測定すべき被分析物と結合してよく、こ
の際にこのレセプターは第１、レセプターとは別の被分
析物決定因子く対して、作用し、それ故モノクロナール
抗体又はその７ラグメントから成ると有利である。、し
かしま、た第２レセプターは、被分析物には存在してい
ない、被分析物と第ルセゾターとからの複合体の他の決
定因子に作用してよい。この実施嬢では、同様、に被分
析物に対して特異的でありか？第２レセプターとは別の
決定−子を識別する第３レセプターを使用すると有利で
ある。被分析物、第ルセデター及び第６レセプターは１
つの複合体を形成し、この場合には第２レセプターとし
て第３レセプターと結合する抗体上使用すると有利であ
る。％に優れた実施形において特異的なｘｉレセプター
は抗体フラグメント、特にＦ〒ｂ−フラグメント！含有
し、かつ第３ Ｌ／セプターは完全抗体より成り、その
際に第３レセプター及び第ルセゾターの抗体部分はモノ
クロナールである。この場合に第２レセノターは、第２
レセプターがＰａｂ −７ラグメントを含有する項一に
第３レセノターの一部、特に有利に第３レセプターのＦ
ｃ部分に対して作用すると有利である。第３レセプター
を誘導化しかつこの誘啼化装置に対して作用する第２″
シタ−を使用することも可能である。
＋発明方法に１要な、固相に結合した標識の逆解離速度
は、被分析物に対して作用するレセプターと被分析物と
の間の結合強度により測定する。本発明の優れ冬実施形
により、逆解離速度を少なくとも１つの被分析物濃度に
対して平均値５調節し、即ち非常に高い逆解離速度も、
非常に低い逆解離速度も望ましくない。速度が非常に高
い場合、測定開角は次第に短くなり、これは不正確さ金
もたらす。非常に低い解離速度は本方法を実施するのに
必要な時ｒｇＩｊ’？長くし、かつフック効果が存在す
る場合に起るように低い逆解離速度の認識を困難にする
。この方法全常用の自動分析器で実施すると有利である
ので、装置の能力をもはや完全には利用できない。
は、被分析物に対して作用するレセプターと被分析物と
の間の結合強度により測定する。本発明の優れ冬実施形
により、逆解離速度を少なくとも１つの被分析物濃度に
対して平均値５調節し、即ち非常に高い逆解離速度も、
非常に低い逆解離速度も望ましくない。速度が非常に高
い場合、測定開角は次第に短くなり、これは不正確さ金
もたらす。非常に低い解離速度は本方法を実施するのに
必要な時ｒｇＩｊ’？長くし、かつフック効果が存在す
る場合に起るように低い逆解離速度の認識を困難にする
。この方法全常用の自動分析器で実施すると有利である
ので、装置の能力をもはや完全には利用できない。
平均逆解離速度とは、約２０秒間乃至６０分間の測定間
隔全可能にするものである。この範囲の解離速度は、レ
セプターとその結合成分である被分析物との間の結合強
度の相応する選択、例えば抗体の結合強度の好適な選択
により及び／又は結合強度に作用を与える反応媒体中の
添加物、例えば界面活性物質及び塩により達成すること
ができる。そのために特に清浄剤及び／又はクイオドロ
ープ（ｃａｏｔｒｏｐ ）イオンを使用する。その際に
、種々の成分と所望の測定時間を、少なくとも１つの被
分析物濃度でこの時間（測定間隔）内に同相に結合して
いる標識の少なくとも１０壬が逆解離するように選択す
る。
隔全可能にするものである。この範囲の解離速度は、レ
セプターとその結合成分である被分析物との間の結合強
度の相応する選択、例えば抗体の結合強度の好適な選択
により及び／又は結合強度に作用を与える反応媒体中の
添加物、例えば界面活性物質及び塩により達成すること
ができる。そのために特に清浄剤及び／又はクイオドロ
ープ（ｃａｏｔｒｏｐ ）イオンを使用する。その際に
、種々の成分と所望の測定時間を、少なくとも１つの被
分析物濃度でこの時間（測定間隔）内に同相に結合して
いる標識の少なくとも１０壬が逆解離するように選択す
る。
＃素標識した第ルセプターを使用する本発明の優れた実
施形では、有利には全成分全恒温保持しかつ相分離した
後に、分離した固相を標識酵素を測定するための呈色試
薬の溶液と恒温保持し、引続いて呈色試薬溶液を再度固
相から分離し、かつ分離した溶液中の逆解離速度を一定
の時間間隔で少なくとも２回測定することにより確定す
ると有利である。この実施形は、呈色試薬溶液と固相と
の間の接触の間に固相に結合した標識酵素の全量及び場
合によりこの恒温保持の間に解離する標識酵素が色素形
成に関与することをベースとする。相分離後に解ｌ１ｉ
Ｉ１１〜た標識酵素に帰因する他の色素形成が行なわれ
る。
施形では、有利には全成分全恒温保持しかつ相分離した
後に、分離した固相を標識酵素を測定するための呈色試
薬の溶液と恒温保持し、引続いて呈色試薬溶液を再度固
相から分離し、かつ分離した溶液中の逆解離速度を一定
の時間間隔で少なくとも２回測定することにより確定す
ると有利である。この実施形は、呈色試薬溶液と固相と
の間の接触の間に固相に結合した標識酵素の全量及び場
合によりこの恒温保持の間に解離する標識酵素が色素形
成に関与することをベースとする。相分離後に解ｌ１ｉ
Ｉ１１〜た標識酵素に帰因する他の色素形成が行なわれ
る。
それ故、解離した標識酵素の倉（これは被分析物と第ル
セプターとからの複合体の解ｌ１１ｍに相当する）は２
回の測定により簡単に測定することができる。
セプターとからの複合体の解ｌ１１ｍに相当する）は２
回の測定により簡単に測定することができる。
本発明の他の実施形によれば、第１相分離後の固相全基
質溶成との代りに酵素標識したレセプターの一合には再
び液相と恒温保持しかつ再度相分離した後で固相に結合
していた標識の減少か又は液相中に移行した標識を測定
する。特に、この実施形は放射性標識又は色素標識もし
くはけい光標識に好適である。
質溶成との代りに酵素標識したレセプターの一合には再
び液相と恒温保持しかつ再度相分離した後で固相に結合
していた標識の減少か又は液相中に移行した標識を測定
する。特に、この実施形は放射性標識又は色素標識もし
くはけい光標識に好適である。
原則的に、本発明方法はすべてのサンｒイッチ試験系に
適用することができる。前提は、液相中に残留した結合
していない第ルセプターを分離した後の標識化第ルセグ
ターの測定可能な逆解離だけである。
適用することができる。前提は、液相中に残留した結合
していない第ルセプターを分離した後の標識化第ルセグ
ターの測定可能な逆解離だけである。
本発明方法の条件は、フック効果を伴なって及びそれな
しに良好に測定可能な逆解離が起るように選択する。
しに良好に測定可能な逆解離が起るように選択する。
実施例
次に本発明を添付図面に関連して実施例により詳説する
。
。
例 １
ＡＦＰの測定
Ａ）拭薬溶漱の製造
１）基質緩衝剤
ＨＥＰＥＳ／ＮａＯＨｐＪ（７，０７０ミ リ モル／
ｌ塩化ナトリウム １５４μモル／ｌ牛血清アルブ
ミン ３９／１クロルフエノールレツげ 一β−Ｄ−ガラクトシｒ （西げイツ国特許 第３３４５７４８号によ り製造） ５ミリモル／ｌツイーン２０
（非イオン 系清浄剤’） ２ｇ／１２）レセプ
ター１溶欣 レセプター１としてモノクロナールツマウス−抗−ＡＦ
Ｐ−抗体を使用し、これはレセプター６とは別個の抗原
決定因子ｔａ別する。この抗体を含有する腹水に硫酸ア
ンモニウム全量１．８モル／ｉｋ加える。沈殿を、塩化
ナトリウム５０ミリモル／ｌを含有するリン酸ナトリウ
ム（ｐＨ７，０）１５ ミＩ）モル／ｌ中に取る。この
ようにして得られた溶液をＤＥＡ、に−セルロースを介
して通過させる。完全抗体を公知方法でＦａｂ−７ラグ
メントに分解する。得られたＦａｂ−フラグメントｉＬ
イシカヮ（工ｓｈｉｋａｗａ ）著、１ジヤーナル・オ
シ−イムノアッセイ（Ｊ、 ｏｆＩｍｍｕｎｏａｓｓａ
ｙ ） ’、第４巻、２０９〜３２７頁（１９８３年）
の方法によりβ−ガラクトシダーゼと結合させる。
ｌ塩化ナトリウム １５４μモル／ｌ牛血清アルブ
ミン ３９／１クロルフエノールレツげ 一β−Ｄ−ガラクトシｒ （西げイツ国特許 第３３４５７４８号によ り製造） ５ミリモル／ｌツイーン２０
（非イオン 系清浄剤’） ２ｇ／１２）レセプ
ター１溶欣 レセプター１としてモノクロナールツマウス−抗−ＡＦ
Ｐ−抗体を使用し、これはレセプター６とは別個の抗原
決定因子ｔａ別する。この抗体を含有する腹水に硫酸ア
ンモニウム全量１．８モル／ｉｋ加える。沈殿を、塩化
ナトリウム５０ミリモル／ｌを含有するリン酸ナトリウ
ム（ｐＨ７，０）１５ ミＩ）モル／ｌ中に取る。この
ようにして得られた溶液をＤＥＡ、に−セルロースを介
して通過させる。完全抗体を公知方法でＦａｂ−７ラグ
メントに分解する。得られたＦａｂ−フラグメントｉＬ
イシカヮ（工ｓｈｉｋａｗａ ）著、１ジヤーナル・オ
シ−イムノアッセイ（Ｊ、 ｏｆＩｍｍｕｎｏａｓｓａ
ｙ ） ’、第４巻、２０９〜３２７頁（１９８３年）
の方法によりβ−ガラクトシダーゼと結合させる。
３）レセプター２溶販
羊−抗−マウス−Ｐｃｔ−抗血清を前記の２）Ｋ記載し
たよう忙精製し、同様にＤｎＥ−セルロースを介して通
過させる。
たよう忙精製し、同様にＤｎＥ−セルロースを介して通
過させる。
４）レセプター３溶液
レセプタ−３としては、レセプター１とは別個の決定因
子ｔ−識別するモノクロナールのマウス−抗−ＡＦＰ−
抗体を使用する。この抗体を含有する腹水に硫酸アンモ
ニウム全量１．８モルを加える。沈殿を塩化ナトリウム
５０ミリモル／ｌを含有するリン酸ナトリウム駿衝剤（
ｐＨ７，０）１５ミリモル／ｌ中［１ｊる。このように
して得られ九溶赦をＤｌｊｌＪ−セルロースを介して通
過させる。
子ｔ−識別するモノクロナールのマウス−抗−ＡＦＰ−
抗体を使用する。この抗体を含有する腹水に硫酸アンモ
ニウム全量１．８モルを加える。沈殿を塩化ナトリウム
５０ミリモル／ｌを含有するリン酸ナトリウム駿衝剤（
ｐＨ７，０）１５ミリモル／ｌ中［１ｊる。このように
して得られ九溶赦をＤｌｊｌＪ−セルロースを介して通
過させる。
Ｂ）試薬担体の製造
１）試薬担体１
溶液１１Ｉ尚り、
リン酸ナトリウムｐＨ７，３（７３℃）１００ミリモル
塩化マグネシウム ２ミリモル塩化ナトリウム
９Ｉ 牛血清アルブミン ５Ｉ マウスからの抗−ＡＦＰ−モノクロ ナール抗体（レセプター３溶ｗＩＬ）５ＩＩ９抗−ムＩ
）’Ｐ−抗体−（マウス）− Ｆａｂ−フラグメント−β−がラクト シダーゼー接合体（レセプター１溶 液）；活性はオルト−ニトロフェニ ル−β−Ｄ−ガラクトシドにより ３７℃で測定 ２０００Ｕを含有する溶Ｍ
、４０μ１ｔ−１市販のポリエステル紙より成るフリー
ス上に滴下する。室温で乾燥させる。このフリースは使
用するまで４℃及び相対湿度２０憾で貯蔵する。
９Ｉ 牛血清アルブミン ５Ｉ マウスからの抗−ＡＦＰ−モノクロ ナール抗体（レセプター３溶ｗＩＬ）５ＩＩ９抗−ムＩ
）’Ｐ−抗体−（マウス）− Ｆａｂ−フラグメント−β−がラクト シダーゼー接合体（レセプター１溶 液）；活性はオルト−ニトロフェニ ル−β−Ｄ−ガラクトシドにより ３７℃で測定 ２０００Ｕを含有する溶Ｍ
、４０μ１ｔ−１市販のポリエステル紙より成るフリー
ス上に滴下する。室温で乾燥させる。このフリースは使
用するまで４℃及び相対湿度２０憾で貯蔵する。
２）試薬担体２
セルロースフリース上にブロムシアン活性化法（西ドイ
ツ国特許公開第１７６８５１２号明細書）によりマウス
−抗体のＦＣγ部分に対する羊−抗体（レセプター２溶
液）管固定させる。
ツ国特許公開第１７６８５１２号明細書）によりマウス
−抗体のＦＣγ部分に対する羊−抗体（レセプター２溶
液）管固定させる。
その際に繊維材料１１当り抗体１０μｇが固定に使われ
る。洗浄により結合していない抗体を除去し、かつフリ
ースを注意深く室温で乾燥させる。このようにして得ら
れた７リースの貯蔵は試薬担体１と同じように行なう。
る。洗浄により結合していない抗体を除去し、かつフリ
ースを注意深く室温で乾燥させる。このようにして得ら
れた７リースの貯蔵は試薬担体１と同じように行なう。
この両方の試薬担体１及び２を用いる測定は、西ドイツ
国特許公開第３４２５００８号明細書に記載されている
分析測定を実施するための装置（第２図）により行なう
。該明細書は１つの構造部材より成る自動遠心分析器用
回転子挿入部材を開示しており、この部材は一定の試薬
で含浸された吸収性担持材料をそれぞれ包含する複数個
の試薬区分と連結している試料装入室、少なくとも１個
の混合弁室及び測定１１ｔ−有しており、同時にこれら
は、挿入部材が回転子上に固定されかつ溶ｆＬｆ：収容
する少なくとも１個の他の室、及びこの室から測定部に
通じていて、試料液体輸送路と少なくとも部分的に同一
である輸送路を有する際Ｋ、半径方向で内側から外側へ
案内する試料液体輸送路を構成する。その際に、試料液
体輸送路は試料装入室Ｐから、吸収性材料が充填され、
緩衝ａを含有する室ａ。
国特許公開第３４２５００８号明細書に記載されている
分析測定を実施するための装置（第２図）により行なう
。該明細書は１つの構造部材より成る自動遠心分析器用
回転子挿入部材を開示しており、この部材は一定の試薬
で含浸された吸収性担持材料をそれぞれ包含する複数個
の試薬区分と連結している試料装入室、少なくとも１個
の混合弁室及び測定１１ｔ−有しており、同時にこれら
は、挿入部材が回転子上に固定されかつ溶ｆＬｆ：収容
する少なくとも１個の他の室、及びこの室から測定部に
通じていて、試料液体輸送路と少なくとも部分的に同一
である輸送路を有する際Ｋ、半径方向で内側から外側へ
案内する試料液体輸送路を構成する。その際に、試料液
体輸送路は試料装入室Ｐから、吸収性材料が充填され、
緩衝ａを含有する室ａ。
室Ｃ及び室ａとＣとの間に配置した第１弁室ＶＫ１を介
して第２弁室ｌＭＣ２４Ｃ連結しかつ弁室ＶＫ２から室
ｄ及び捕集室ＡＩを介して測定室ＫＫ接続している。他
の液体を収容する九人ボンゾ室として構成した基質室Ｐ
Ｋが設けられており、この基質室ＰＫは配量室ＤＫ及び
毛管Ｈａｐより成る配量装置と溢流室υＫを介して第２
弁室ＶＫ２と連結している。第２図は使用される回転子
挿入部材を図示したものである。試薬担体１は回転子挿
入部材の区分Ｃに配置しかつ試薬担体２は区分ｄに配置
する。試料４０μｌは直接区分ａＫ上縁部の開口部を通
して一ペット装入する。試料は０．９４− ＭａＯＪ溶
液で１：５に稀釈し、基債溶液２７０μ２ｔ−室ＰＫ中
にピペット装入する。高い回転数と停止とを交互に組合
わせた好適な遠心プログラムにより試料と基質は分離マ
トリックスとキュベツトの方向に供給される。
して第２弁室ｌＭＣ２４Ｃ連結しかつ弁室ＶＫ２から室
ｄ及び捕集室ＡＩを介して測定室ＫＫ接続している。他
の液体を収容する九人ボンゾ室として構成した基質室Ｐ
Ｋが設けられており、この基質室ＰＫは配量室ＤＫ及び
毛管Ｈａｐより成る配量装置と溢流室υＫを介して第２
弁室ＶＫ２と連結している。第２図は使用される回転子
挿入部材を図示したものである。試薬担体１は回転子挿
入部材の区分Ｃに配置しかつ試薬担体２は区分ｄに配置
する。試料４０μｌは直接区分ａＫ上縁部の開口部を通
して一ペット装入する。試料は０．９４− ＭａＯＪ溶
液で１：５に稀釈し、基債溶液２７０μ２ｔ−室ＰＫ中
にピペット装入する。高い回転数と停止とを交互に組合
わせた好適な遠心プログラムにより試料と基質は分離マ
トリックスとキュベツトの方向に供給される。
プログラムの進行に伴なってレセプター１及び３は試料
液体により区分Ｃから溶離し、かつ引続いて均質な混合
物が反応する。区分ｄで、形成された複合体はレセプタ
ー２に結合する。
液体により区分Ｃから溶離し、かつ引続いて均質な混合
物が反応する。区分ｄで、形成された複合体はレセプタ
ー２に結合する。
試料の区分Ｃから区分ｄへの移行は非常に短時間で行な
われる。
われる。
基質溶液は配意室ＤＫｉ通して少量ずつに分けられ、そ
のうちの第１の少量分は複合しなかった過剰の接合体の
洗浄除去に使われる。複合体形成を介し、て区分ｄで結
合したβ−ガラクトシダーゼ活性は試料中に含有されＡ
ＦＰ ｉに比例する。この活性度は他の基質弁で測定し
、その際に基質は５分間の反応で着色生成物に変換され
る。形成された色素及び液相中の発色度７分全キュベツ
ト中、６００ ｎｍで測定する。
のうちの第１の少量分は複合しなかった過剰の接合体の
洗浄除去に使われる。複合体形成を介し、て区分ｄで結
合したβ−ガラクトシダーゼ活性は試料中に含有されＡ
ＦＰ ｉに比例する。この活性度は他の基質弁で測定し
、その際に基質は５分間の反応で着色生成物に変換され
る。形成された色素及び液相中の発色度７分全キュベツ
ト中、６００ ｎｍで測定する。
これらの条件下に次の結果が得られた：すべての測定は
６００ ｎｍ及び層厚０．３ ｃｍで実施しかり層厚ｄ
−１儂に換算した。
６００ ｎｍ及び層厚０．３ ｃｍで実施しかり層厚ｄ
−１儂に換算した。
例 ２
工ｇＥ測定
例１と同様に行なったが、次の点で異なっている：
ａ）レセプタ−６としてヒト１ｇＥに対して作用するモ
ノクロナールのマウス−抗−工ｇＥ−抗体を使用する。
ノクロナールのマウス−抗−工ｇＥ−抗体を使用する。
ｂ）レセプター１として、レセプター６とは別個の抗原
決定因子ｙｋ織別するモノクロナールのマウス−抗−工
ｇＥ−抗体を使用する。
決定因子ｙｋ織別するモノクロナールのマウス−抗−工
ｇＥ−抗体を使用する。
Ｃ）試薬担体１の製造ではレセプタ−１溶液１２ｍＵ／
試験を使用する。
試験を使用する。
ｄ）試料はＮａＣＪ溶液で１：３に稀釈する。
相応する条件下に次の結果が得られた：前記の表中の最
後の６つの欄は、フック効果により得られかつ被分析物
の定量測定に使用することのできない数値を示す。
後の６つの欄は、フック効果により得られかつ被分析物
の定量測定に使用することのできない数値を示す。
例 ６
ミクロ滴定プレー１− （ＭＴＰｓ）を、四部１個当り
、モノクロナールのマウス−抗ＡＦＰ−抗体の溶液のレ
セプター２溶欣それぞれ２００μｌで緩衝剤Ａ（２Ｄミ
’）モルの炭酸塩緩衝剤ｐ）１９．６）中の蛋白質１μ
ｇ／ｍｌの濃度で、室温（ＲＴ）で１時間塗布する。引
続いて、非特異的結合部位を、ＭＴＰｓを緩衝剤Ｂ （
５０ミ１，１モルのリン酸カリウム緩衝剤ｐＨ７，５、
Ｎａ０Ｊ１５４ミリモル、Ｒ８Ａ Ｉ係、ツイーン２０
１ｇ／ｌ！＞６００μｌと共にＲＴでｌ／／２時間後
恒温保持することにより飽和する。
、モノクロナールのマウス−抗ＡＦＰ−抗体の溶液のレ
セプター２溶欣それぞれ２００μｌで緩衝剤Ａ（２Ｄミ
’）モルの炭酸塩緩衝剤ｐ）１９．６）中の蛋白質１μ
ｇ／ｍｌの濃度で、室温（ＲＴ）で１時間塗布する。引
続いて、非特異的結合部位を、ＭＴＰｓを緩衝剤Ｂ （
５０ミ１，１モルのリン酸カリウム緩衝剤ｐＨ７，５、
Ｎａ０Ｊ１５４ミリモル、Ｒ８Ａ Ｉ係、ツイーン２０
１ｇ／ｌ！＞６００μｌと共にＲＴでｌ／／２時間後
恒温保持することにより飽和する。
緩衝剤Ｃ（ＨＥＰＥＳ／ＮａＯＨ（ｐＨ７，２５） １
００ミリモル、Ｎａ（Ｊ１５４ミリモル、羊正常工ｇＧ
２．５μｌ１％ Ｌ−アスパラギン酸Ｍｇ １Ｆ、５ミ
リモル、ツイーン２０ ２ ｆｊ／ｌ ） ３００μｌ
で洗浄後、凹部１個当り緩衝［０中の試料５０μｌ及び
酵素−抗体一接合溶ｍ２００μｌ（レセプター１溶欣；
レセプター２の抗体を阻害しない他のモノクロナールの
マウス−抗−ＡＦＰ−抗体の′Ｆａｂ−７ラグメントの
β−ガラクトシダーゼ接合体： ０．５ Ｕ ／ａ／
： ３７℃テＯ−ニドｃｘ ７ ｘ ニル−β−Ｄ−が
ラクトシトによる活性度の測定）を添加しかつＲＴで１
時間恒温保持する。引続いて、液体１＆：ＭＴＰ凹部か
ら廃業し、凹Ｓｔ−緩衝剤Ｂ６００μｌで洗浄し、かつ
その後基債溶液（クロルフェノールレッド−β−Ｄ−ガ
ラクトシｆ５ミリモル、ＨＢＰＥＳ、／ＮａＯＨ（ｐＨ
７，０） ７０ミ リ ％ｋ 、 Ｎａｐ／
１ ５ ４ ミ リ モル 、
Ｒ８Ａ ３ ９／ｌｌ。
００ミリモル、Ｎａ（Ｊ１５４ミリモル、羊正常工ｇＧ
２．５μｌ１％ Ｌ−アスパラギン酸Ｍｇ １Ｆ、５ミ
リモル、ツイーン２０ ２ ｆｊ／ｌ ） ３００μｌ
で洗浄後、凹部１個当り緩衝［０中の試料５０μｌ及び
酵素−抗体一接合溶ｍ２００μｌ（レセプター１溶欣；
レセプター２の抗体を阻害しない他のモノクロナールの
マウス−抗−ＡＦＰ−抗体の′Ｆａｂ−７ラグメントの
β−ガラクトシダーゼ接合体： ０．５ Ｕ ／ａ／
： ３７℃テＯ−ニドｃｘ ７ ｘ ニル−β−Ｄ−が
ラクトシトによる活性度の測定）を添加しかつＲＴで１
時間恒温保持する。引続いて、液体１＆：ＭＴＰ凹部か
ら廃業し、凹Ｓｔ−緩衝剤Ｂ６００μｌで洗浄し、かつ
その後基債溶液（クロルフェノールレッド−β−Ｄ−ガ
ラクトシｆ５ミリモル、ＨＢＰＥＳ、／ＮａＯＨ（ｐＨ
７，０） ７０ミ リ ％ｋ 、 Ｎａｐ／
１ ５ ４ ミ リ モル 、
Ｒ８Ａ ３ ９／ｌｌ。
ツイーン１９／／）２５０βｊと共にＲＴで２．５時間
恒温保持する。この後で、各々のＭＴＰの凹部からそれ
ぞれ１００μｌを取りかつ他のＭＴＰの凹部中に移す。
恒温保持する。この後で、各々のＭＴＰの凹部からそれ
ぞれ１００μｌを取りかつ他のＭＴＰの凹部中に移す。
これに引続いて直ちに市販のＭＴＰ ＃ｊ走器金用いて
吸収１１１足（測定１１）を行ない（５７０ｎｍ、１ク
ロム酸塩補正６３０ ｎｍで）、更にＲＴで１時間恒編
保持した後で第２の吸収測定（測定１＋ ）を測定ｔ１
と同じ条件下で行なう。測定ｔ２とｔｌとの間の差は基
質溶成で転移された酵素ｉＫ比例する。代表的な実験の
結果全次表に掲載する： 最後の２つの欄はフック効果の存在金示す。
吸収１１１足（測定１１）を行ない（５７０ｎｍ、１ク
ロム酸塩補正６３０ ｎｍで）、更にＲＴで１時間恒編
保持した後で第２の吸収測定（測定１＋ ）を測定ｔ１
と同じ条件下で行なう。測定ｔ２とｔｌとの間の差は基
質溶成で転移された酵素ｉＫ比例する。代表的な実験の
結果全次表に掲載する： 最後の２つの欄はフック効果の存在金示す。
Ｊ
２） 分光計の測定範囲（２０００ｍＥ）七土建る。
第１図は、吸光度（測定値）と被分析物のｕ度との相関
関係を示す線図であり、この触図の太線部分は被分析物
の濃度測定のだめの検量線である。 第２図は、本発明方法に好適な自動遠心分析器用挿入部
材の概略図である。 ＰＫ・・・基質室、ＤＫ・・・配量室、Ｋａｐ・・・毛
管、ＴｊＫ・・・溢流室、Ｐ・・−試料装入室、ａ、ｂ
、Ｑ。 ｄ・・・室、ＶＫｌ、ＶＫ２・・・弁室、ＡＫ・・・捕
集室、Ｋ・・・測定室。
関係を示す線図であり、この触図の太線部分は被分析物
の濃度測定のだめの検量線である。 第２図は、本発明方法に好適な自動遠心分析器用挿入部
材の概略図である。 ＰＫ・・・基質室、ＤＫ・・・配量室、Ｋａｐ・・・毛
管、ＴｊＫ・・・溢流室、Ｐ・・−試料装入室、ａ、ｂ
、Ｑ。 ｄ・・・室、ＶＫｌ、ＶＫ２・・・弁室、ＡＫ・・・捕
集室、Ｋ・・・測定室。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、不均一系イムノアツセイの原理により、被分析物を
含有する試料溶液を、被分析物と結合性で特異的な、溶
解相中に存在する標識した第１レセプター及び第１レセ
プターとは交叉反応せずかつ被分析物と第１レセプター
を含有する複合体を固定し得る、固相中に存在する第２
レセプターと共に恒温保持し、恒温保持後に相分離し、
かつ固相に結合した標識を定量測定することにより、結
合性被分析物を測定する方法において固相に結合した標
識の溶解相中への逆解離速度を測定し、かつ逆解離速度
と測定値との商を第１測定の試験結果の正確さの尺度と
して使うことを特徴とする結合性被分析物の測定法。 ２、逆解離速度は、固相に結合した標識の第１回目の測
定に対して一定の時間をおいて少なくとも１回第２回目
の測定を行なうことにより確定する特許請求の範囲第１
項記載の方法。 ３、酵素標識した第１レセプターを使用し、標識酵素を
測定するための呈色試薬の溶液と共に固相を恒温保持し
、その後試薬溶液を固相から分離し、かつ試薬溶液中で
一定の時間間隔で少なくとも２回測定することにより逆
解離速度を確定する特許請求の範囲第１項又は第２項記
載の方法。 ４、第１の測定後に、固相を再び液相と共に恒温保持し
、かつ逆解離速度を、固相に残留している標識又は液相
中に移行した標識を測定することにより確定する特許請
求の範囲第１項又は第２項記載の方法。 ５、第１レセプターとは別個の、被分析物の決定因子に
対して作用する、被分析物に特異的な第３レセプターを
添加し、かつ第２レセプターが第３レセプターと結合可
能である特許請求の範囲第１項から第４項までのいずれ
か１項記載の方法。 ６、第６レセプターとしてモノクロナール抗体を使用し
、第１レセプターはモノクロナール抗体のＦａｂ−フラ
グメントを含有し、かつ第２レセプターは第３レセプタ
ーのＦｃ一部分と結合可能である特許請求の範囲第５項
記載の方法。 ７、試薬中の少なくとも１種のレセプターの逆解離速度
は、抗体の結合定数による選択及び／又は清浄剤及び／
又はケイオトロープイオンの添加により調節する特許請
求の範囲第１項から第６項までのいずれか１項記載の方
法。 ８、少なくとも１種のレセプターの逆解離速度は、少な
くとも、測定時間中の被分析物の濃度では固相に結合し
た標識の少なくとも１０％が再び解離するように選択す
る特許請求の範囲第７項記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19853539215 DE3539215A1 (de) | 1985-11-05 | 1985-11-05 | Verfahren zur bestimmung eines immunologisch bindefaehigen analyten |
| DE3539215.0 | 1985-11-05 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62112064A true JPS62112064A (ja) | 1987-05-23 |
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