JPS6210519B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は長時間持続LHRH主働質（agonist）
作用を有する新規なペプチド化合物に関するもの
である。 黄体形成ホルモン−放出ホルモン（LHRH）は
脳下垂体ホルモン、黄体形成ホルモン（LH）お
よび濾胞成熟ホルモン（FSH）の分泌を刺激
し、さらに排卵誘発が起る変化を生じる視床下部
で生産される神経ホルモンである。LHRHは次の
構成を有する。

【表】 LHRHの合成複製は最初の配列順序が1971年に
開示された後間もなく容易に利用され、その結果
この二、三年にわたつてかなりの数の構造上の類
似LHRHが作られ試験されてきている。これらの
いくつかはLHRH並びにそれに代わるものよりも
一層効力がある。ことが証明されている。リヴイ
エル（Rivier）等、ペプチド1976（第14回ヨーロ
ツパペプチドシンポジウムの発表論文、ベルギー
ウイピオン1976年４月11−17日）第427〜436頁参
照。従つて効力のある長時間作用するLHRH主働
質および拮抗質を得るためにＤ−アミノ酸が６−
位で使用された。および／またはＮ−メチル−
Leu⁷置換が行われた。またこれらの先行研究は
十分な効力を有する類似物に対して主要配置の重
要性を示してきた。 先行技術に対して本発明の新規なペプチドはペ
プチドの６−および７−位の間に５−または６−
員のラクタム橋を有する。この新規な構造はペプ
チドの生物学的に活性な（受容体範囲）配置を改
良するという学説を構成し、従つてさらに大なる
発生能を並びに酵素分解に対するペプチド耐性を
生じ、従つてペプチドの有効生命を延長するので
ある。 本発明の新規なペプチドは新規な方法によつて
製造される。先に報告されているメチオニンスル
ホニウム塩の環化はＮ−アルキル化よりもむしろ
Ｏ−アルキル化を生成する。ユング（Yeung）
等、生化学、第16巻、第1635頁（1977年）参照。 本発明は式： （式中ＡはＬ−またはＤ−ピロ Gluである； ＢはＬ−Hisである； ＣはＬ−またはＤ−Trpである； ＤはＬ−Serである； ＥはＬ−Tyrである； ＦはＬ−Argである； ＧはＬ−Proである； ＸはＬ−GlyNH₂である； Ｙはイソプロピルメチルである； および ｎは２である。） を有する新規なペプチドに関する。 主働質作用のため＜Glu置換基は内発性LHRH
のための置換基と同様である、即ちピロGlu（ピ
ログルタミン酸残基）である。 主働質作用のためのHis置換基は内発性LHRH
のための置換基と同様である。 Trp、Ser、Tyr、Arg、Pro、GlyNH₂は主働質
作用のために重要である。従つてCly置換基はア
ミノ酸であることができるアミド末端基である。
その場合新規なペプチドはデカペプチドである、
または断片である、その場合は新規なペプチドは
ノナペプチドである。 主働質および拮抗質作用として置換基Ｙはイソ
プロピルメチルである。 本発明の新規なペプチドは本質的な態様として
LHRHペプチドのGly⁶のα−炭素およびLeu⁷のア
ミノ基の間に橋を構成するラクタムジペプチド配
座を有する。このラクタム橋はさらにLHRHおよ
び本発明の新規なペプチドから次の部分式で具体
的に示される。 LHRH： 本発明のペプチド： 本発明に従つて式： （式中、ＡはピロGluである。 ＢはＬ−Hisである； ＣはＬ−またはＤ−Trpである； ＤはＬ−Serである； ＥはＬ−Tyrである； ＦはＬ−Argである； ＧはＬ−Proである； ＸはＬ−GlyNH₂である； Ｙはイソプロピルメチルである； および ｎは２である。 からなるペプチドの治療上の有効量を治療を必要
としている患者に投与することにより受精率を増
進することができる。 １日当り60μｇから35mgの用量レベルは上記に
示した症状の治療に有用である。具体的には受精
率は１日当り体重Kgにつきペプチド約１μｇから
0.5mgを投与することによつて増進される。有利
には日用量に対して体重Kg当り約１〜300μｇ、
特に約２〜100μｇ／Kgが極めて有効な結果をも
たらす。 しかしながら事実拮抗質ペプチドが受精率を減
少させるだけである一方、主働質ペプチドの受精
率制御作用は用量による。上記に示した通り、１
日当り60μｇから35mgの用量レベルが受精率を増
進するのに有用である。他方、１日当り0.5〜500
mgの用量レベルが受精率を減少させるのに有用で
ある。従つて受精率は１日当り体重Kgに対してペ
プチド約10μｇから約7.5mgを投与することによ
つて減弱させる。有利には日用量に対して体重Kg
当り約0.02〜２mg特に約0.03〜1.0mg／Kgが極めて
有効な結果をもたらす。 また本発明に従つて式： （式中ＡはＬ−またはＤ−ピロGluである； ＢはＬ−Hisである； ＣはＬ−またはＤ−Trpである； ＤはＬ−Serである； ＥはＬ−Tyrである； ＦはＬ−Argである； ＧはＬ−Proである； ＸはＬ−GlyNH₂である； Ｙはイソプロピルメチルである； および ｎは２である。 を有するペプチドの治療上の有効量を治療を必要
としている患者に投与することにより受精率を減
少させることができる。 １日当り0.5〜500mgの用量レベルが上記に示し
た症状の治療に有用である。具体的には１日当り
体重Kgに対してペプチド約10μｇから約7.5mgを
投与することによつて受精率を減少させる。有利
には日用量に対して体重Kg当り約0.02〜２mg、特
に約0.03〜１mg／Kgが極めて有効な結果をもたら
す。 単一用量形態を製造するために担体材料と混和
することができる。活性成分量は治療する宿主お
よび投与の個々の方法に依つて変化させる。具体
的にはヒトの経口投与のための処方は全組成物の
約５〜95％を変化させることができる担体材料の
適当なそして通常量と混和する活性薬剤５mgから
１ｇまで含有することができる。用量単位形態は
一般に活性成分約25〜500mgを含有する。 しかしながらあらゆる個々の患者に対する特定
服用量レベルは使用される特定化合物の活性、年
令、体重、全体の健康、性、食事、投与時間、投
与経路、排泄の割合および薬剤の組合わせを包含
する種々の要素に依存する。 本発明の化合物からさらに受精率の促進および
受精率の減少に使用する製薬組成物を得ることが
できる。本発明の新規なペプチドは高程度の
LHRH主働質を有しそして長時間持続する。 本発明の化合物は、インビボ、インビトロど
ちらの試験においてもLH−RHよりすぐれたLH
放出能力を有する。インビボにおける化合物の
LH放出能力は、エストラジオール及びプロゲス
テロンで前処理された成熟卵巣切除メスラツト
（ホルツマン）において評価された。上記化合物
は、採血前20分に静脈内に投与され、プラズマ中
のLHレベルがラジオイムノアツセイによつて決
定された。結果、本発明化合物は、LH−RHに
比して、同投与量において、2.4倍のLH放出能力
を有した（95％信頼限界（CL）；0.8、7.6）、イ
ンビトロについては下垂体細胞培養系において化
合物とLH−RHの能力が比較された。細胞は、
種々の濃度（10^-6−10^-10M）のLH−RH又は化合
物とともに１時間培養され、上清中のLH量が
ラジオイムノアツセイにより決定された。結果、
化合物は、LH−RHと比較して、8.9倍（95％
CL；2.0、38.6）のLH放出能力を有した。 次に本発明の化合物の分析データーを以下に
示す。 アミノ酸（％） グルタミン酸−1.07 ヒスチジン−1.01 セリン−0.94 チロシン−0.99 ２−（３−アミノ−２−オキソ−１−ピロリジ
ン）−４−メチルグタン酸−0.92 アルギニン−1.03 プロリン−1.04 グリシン−0.98 トリプトフアン−0.94（紫外線測定） 化合物の純度−96％（高速液体クロマトグラフ
イ−） 〔α〕^２４ _５８９、−59.2゜（C1.0、2N酢酸） これらの目的に対して本発明の新規なペプチド
は通常無毒性の製薬に使用し得る担体、左薬およ
び賦形剤を含有する用量単位処方で経口的に、局
所に、非経口的に吸入スプレーで、膣内にまたは
直腸に投与することができる。こゝで使用される
非経口なる語は皮下注射、静脈内、筋肉内、胸骨
内注射または注入技術を包含する。本発明のペプ
チドはハツカネズミ、ネズミ、馬、犬、ネコなど
のような温血動物の治療にさらにヒトの治療に有
効である。 活性成分を含有する製薬組成物は経口用途に適
した形態で具体的には錠剤、トローチ剤、ロゼン
ジ剤、水性または油性懸濁液剤、分散性粉末剤ま
たは顆粒剤、乳化剤、硬または軟カプセル剤、シ
ロツプ剤またはエリキシル剤としてあることがで
きる。経口用途のための組成物は製薬組成物の製
造として技術的に知られているあらゆる方法に従
つて製造することができるそしてかゝる組成物は
製薬上優雅なおよび味のよう製剤を提供するため
に甘味剤、香味剤、着色剤、防腐剤からなる群か
ら選択された１種またはそれ以上の薬剤を含有す
ることができる。錠剤は錠剤の製造に適している
無毒性の製薬上使用し得る賦形剤と混和した活性
成分を含有する。これらの賦形剤は具体的には炭
酸カルシウム、炭酸ナトリウム、乳糖、リン酸カ
ルシウムまたはリン酸ナトリウムのような不活性
希釈剤、玉蜀黍デンプンまたはアルギニン酸のよ
うな顆粒剤および崩壊剤、デンプン、ゼラチンま
たはアラビアゴムのような結合剤、ステアリン酸
マグネシウム、ステアリン酸またはタルクのよう
な潤滑剤である。錠剤は未被覆であることができ
るまたはそれらは公知の技術で被覆することがで
き胃腸管の中で崩壊および吸収を遅らせ、それに
よつてさらに長い期間にわたつて持続作用を提供
させる。具体的にはグリセリルモノステアレート
またはグリセリルジステアレートのような遅延物
質を単独でまたはワツクスとともに使用すること
ができる。 また経口用途のための処方は活性成分を例えば
炭酸カルシウム、リン酸カルシウムまたはカオリ
ンなどの不活性固体希釈剤と混合する硬ゼラチン
カプセル剤または活性成分を水または例えば落花
生油、ピーナツツ油、流動パラフインまたはオリ
ーブ油などの油媒質と混合する軟ゼラチンカプセ
ル剤としてあることができる。 水性懸濁液剤は水性懸濁液剤の製造に適した賦
形剤と混和した活性材料を含有する。かかる賦形
剤は例えばナトリウムカルボキシメチル−セルロ
ース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメ
チルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビ
ニルピロリドン、トラガントゴムおよびアラビア
ゴムなどの懸濁剤である、分散剤または湿潤剤は
例えば天然のリン脂質例えばレシチン、またはア
ルキレンオキサイドと脂肪族の縮合生成物例えば
ポリオキシエチレンステアレートまたはエチレン
オキサイドと長鎖脂肪族アルコールの縮合生成物
例えばペプタデカエチレンオキシセタノールまた
はエチレンオキサイドとポリオキシエチレンソル
ビトールモノーオレエートのような脂肪酸とヘキ
シトールから誘導された部分エステルまたはエチ
レンオキサイドと脂肪酸無水物とヘキシトールか
ら誘導された部分エステルまたはエチレンオキサ
イドと脂肪酸無水物とヘキシトールから誘導され
た部分エステル例えばポリオキシエチレンソルビ
タンモノオレエートであることができる。また該
水性懸濁液剤は１種またはそれ以上の防腐剤例え
ばエチルまたはｎ−プロピルｐ−ヒドロキシベン
ゾエート、１種またはそれ以上の着色剤、１種ま
たはそれ以上の香味剤およびシヨ糖またはサツカ
リンのような甘味剤を含有することができる。 油性懸濁液剤は植物油、例えば落花生油、オリ
ーブ油、胡麻油またはヤシ油中にまたは流動パラ
フインのような鉱油中に活性成分を懸濁すること
によつて処方することができる。油懸濁液剤は糊
稠剤例えばビーズワツクス、硬パラフインまたは
セチルアルコールを含有することができる。上記
に述べたような甘味剤および香味剤な美味な経口
製剤を供するために添加することができる。これ
らの組成物はアスマルビン酸のような抗酸化剤の
添加によつて保存することができる。 水を添加することによつて水性懸濁液剤を調製
するために適した分散性粉末剤および顆粒剤は分
散剤または湿潤剤、懸濁剤および１種またはそれ
以上の防腐剤と混和している活性剤を供する。適
当な分散剤または湿潤剤および懸濁剤は既に上述
したものによつて例示される。さらに賦形剤、例
えば甘味剤、香味剤および着色剤もまた存在させ
ることができる。 また製薬組成物は水中油型の乳剤の形態中にあ
ることができる。油相は植物油、例えばオリーブ
油または落花生油または鉱油例えば流動パラフイ
ンまたはそれらの混合物であることができる。適
当な乳化剤は天然ゴム、例えばアラビアゴムまた
はトラガントゴム、天然リン脂質、例えば大豆レ
シチンおよび脂肪酸無水物とヘキシトールから誘
導されたエステルまたは部分エステル、例えばソ
ルビタンモノオレエート、および該部分エステル
とエチレンオキサイドの縮合生成物、例えばポリ
オキシエチレンソルビタンモノオレエートである
ことができる。またエマルジヨンは甘味剤および
香味剤を含有する。 シロツプ剤およびエリキシル剤は甘味剤例えば
グリセロール、ソルビトールまたはシヨ糖で処方
することができる。またかゝる処方は粘滑剤、防
腐剤および香味剤および着色剤を含有することが
できる。製薬組成物は無菌注射剤の形態で、例え
ば無菌注射できる水性または油性懸濁液としてあ
ることができる。この懸濁液は上述した適当な分
散剤または湿潤剤および懸濁剤を使用する公知の
技術に従つて処方することができる。無菌注射剤
はまた無毒性の注射に使用し得る希釈剤または溶
媒中の無菌注射溶液または懸濁剤、例えば１・３
−ブタンジオール中に溶液であることができる。 使用できる賦形剤および溶媒の中では水、リン
ゲル液および等張塩化ナトリウム液である。さら
に無菌の不揮発油は通常溶媒または懸濁媒質とし
て使用できる。この目的に対して合成モノまたは
ジグリセリドを包含するあらゆる無刺激の不揮発
油を使用することができる。さらにオレイン酸の
ような脂肪酸が注射できる製剤中に使用でいる。 本発明のペプチドまたは薬剤の直腸投与のため
に坐薬の形態で投与することができる。これらの
組成物は薬剤を通常の温度では固体であるが直腸
温度では液体である適当な無刺激賦形剤と混合す
ることによつて製造することができるそしてその
ため直腸内で薬剤を放出するために融解するので
ある。かゝる物質はココア乳脂およびポリエチレ
ングリコールである。 ペプチドの種々のアミノ酸置換基に関して本発
明の新規なペプチドはペプチドの合成に対する技
術において公知の方法に従つて製造する。しかし
ながら本発明の新規なペプチド内の特有はラクタ
ムジペプチド橋は新規な方法に従つて製造され、
それ故本発明はまたそれに関するものである。本
発明の化合物の新規な製造方法は次の図式によつ
て具体的に説明することができる。 R₁はC_1-4アルキル基、好ましくはメチルであ
る。R₂は上記に定義したＹと同様である。そし
てR₃はC_1-12アルキル、例えばｔ−ブチル、C_1-4
アラルキル、例えばベンジルである。R₃−Ｏ−
Ｃ−基は保護基および例えばブチルオキシカルボ
ニル（BOC）であることができる。 本発明の化合物の新規な製造方法の特別な態様
および予期されない利点はあらゆる特別な処理段
階を必要とせずに反応の過程でほとんどのアルキ
ルエステル（COOR₁）のカルボン酸への転化であ
る。酸生成物の分離または選択的に少量のエステ
ル生成物の酸への加水分解を行なうことができ
る。 製造方法の第一段階では開始物質として、例え
ばBOC保護ジペプチドMet−Leu（メチオニン−
ロイシン）のメチルエステルとして使用すること
ができる。従つてこの開始物質はR₁がメチルで
ある。R₂がイソプロピルメチルであるそしてR₃
がｔ−ブチルである式の化合物である。 開始物質はアルキル化剤、例えばジメチルスル
フエート、ジエチルスルフエート、メチルフルオ
ロスルホネート、メチルトリフルオロメタンスル
ホネート、トリメチルオキソニウムフルオロボレ
ート、好ましくはヨウ化メチルで処理する、ヨウ
化メチルの場合には反応の溶媒媒質として役に立
つこともできる。しかしながらあらゆる適当な無
水中性溶媒を使用することができる。０〜40℃の
温度を使用することができる。好適には開始物質
をヨウ化メチルと約２日間室温で混和そして撹拌
して処理する。反応生成物は式に図示した保護
−Met−Leuのアルキルエステルのスルホニウム
塩である。 本発明の化合物の製造方法の第二段階では式
のスルホニウム塩の閉環を行なうために強塩基で
処理する。強塩基はアルカリ金属水素化物、好ま
しくは水素化ナトリウムであることができるしか
しまた例えばリチウムジイソプロピルアミドまた
はカリウムｔ−ブトキシドであることもできる。
反応は無水中性溶媒、例えばメチレンクロライド
およびジメチルホルムアミド（DMF）を別々に
または併用して、アルキルエーテル例えばジメト
キシエタンまたはテトラヒドロフラン中で行なわ
れる。反応温度は好ましくは約０℃であるが−50
〜50℃の温度が適当である。 反応生成物は２−アルキル置換されることがで
きる保護された２−（３−アミノ−２−オキソピ
ロリジン−１−イル）酢酸である。この生成物は
式に具体的に示されそして開裂、例えば強酸ま
たは接触水素添加で処理することによつて保護基
を除去して製造される相当する保護されない化合
物に対して新規な化合物である。従つて本発明は
また次の新規な化合物に関するものである。 式中R₂はC_1-4アルキルであるそしてR₃はC_1-12
アルキルまたはアラルキルである。 従つて本発明の新規な化合物製造方法は (1) 式： を有する

【式】 が保護されたMet−脂肪族アミノ酸エステルを
アルキル化剤で処理して、対応するスルホニウ
ム塩を製造しそして (2) 段階(1)で製造したスルホニウム塩を閉環させ
そしてＡが

【式】 である式の化合物を製造するために強塩基で
処理しそして (3) 式を有する化合物から

【式】 保護基を開裂してＡが水素である式の化合物
を製造する段階からなる式： （式中Ａは水素または

【式】である。） を有する化合物を製造する方法である。 次の実施例は本発明の新規なペプチドの製法を
具体的に示すものである。 実施例 ピロGlu−His−Trp−Ser−Tyr−６・７−〔２
−（Ｓ−３−アミノ−２−オキソ−ピロリジン
−１−イル）−Ｓ−２−イソプロピルメチル酢
酸〕−Arg−Pro−GlyNH₂ Ａ BOC−Ｌ−Met−Ｌ−Leu−OMe BOC−Ｌ−Me6.225ｇ（25モル）を脱ガスジ
メチルホルムアミド160mlに溶解し、０℃に窒
素下で冷却した。Ｌ−Leu−OMe4.55ｇ（25ミ
リモル）をジメチルホルムアミド80ml中に溶解
しわきに置いた。BOC−Ｌ−Metにジフエニル
フオスフオリルアジド5.38mlを10％過剰で添加
し、次にトリエチルアミン3.48mlを10％過剰
で、次にＬ−Leu−OMeを添加した。反応混合
液を０℃で３時間、次に室温で16時間撹拌し
た。溶液を濃縮し、３：１ジメチルホルムアミ
ド／水で処理し樹脂層を混合し、その結果樹脂
上に晶出させた。樹脂および結晶を過し、樹
脂をジメチルホルムアミドで洗浄して生成物を
分離した。次いで液を濃縮し、エチルアセテ
ート／ヘキサンで再結晶させた。生成物7.74ｇ
を得た。 Ｂ BOC−Ｌ−Met−Ｌ−Leu−OMeのスルホニ
ウム塩 上記Ａのエステル生成物７ｇ（0.019モル）
を混ぜ物のないヨウ化メチル40mlに溶解し、室
温で１時間撹拌した。反応混合液を水の吸引に
よつて濃縮し、真空内で乾燥し、そして残渣を
ジクロロメタンとメタノールで蒸発させて洗浄
し収率90％（9.13％）で発泡させた。 Ｃ BOC−〔２−（Ｓ−３−アミノ−２−オキソ
−ピロリジン−１−イル）−Ｓ−２−イソプロ
ピルメチル酢酸を生成するための環化 上記Ｂ（9.13ｇ）のスルホニウム塩生成物を
ジメチルホルムアミドとジクロロメタンの１：
１混合液300mlに溶解し、窒素下で０℃に冷却
した。鉱油中水素化ナトリウムの50％分散液の
２当量（1.5ｇ）を１度に添加した。２時間
後、酢酸メチル100mlを添加し、これを水２ml
で反応を急冷してその後反応混合液を１晩放置
した。反応混合液をジロロメタンと水に分配
し、水を濃クエン酸でPH４に酸性化しそしてジ
クロロメタンで３回抽出した。ジクロロメタン
部分を硫酸ナトリウムで乾燥し、結晶性のかた
まりに濃縮した。二つの結晶生成物は全部で
22.214ｇであつた。生成物はBOC−閉塞２−
（３−アミノ−２−オキソ−ピロリジン−１−
イル）−２−イソプロピルメチル酢酸である。 Ｄ BOC−〔２−（Ｓ−３−アミノ−２−オキソ
−ピロリジン−１−イル）−Ｓ−２−イソプロ
ピルメチル酢酸〕−Arg−Pro−GlyNH₂ 上記Ｃで製造した２−（３−アミノ−２−オ
キソ−ピロリジン−１−イル）−２−イソプロ
ピルメチル酢酸1.6ｇ（５ミリモル）を脱ガス
ジメチルホルムアミド35ml中に溶解し、窒素下
で０℃に冷却した。公知の方法で前に製造した
Ｈ−Arg−Pro−GlyNH₂のTFA（トリフルオ
ロ酢酸）塩9.5ミリモルを脱ガスジメチルホル
ムアミド15ml中に溶解し、冷却してそしてわき
に置いた。酸溶液にジフエニルフオスフオリル
アジド1.097ml（5.5ミリモル）およびトリエチ
ルアミン0.697ml（5.5ミリモル）を添加し、次
に前に冷却したペプチド溶液を添加した。反応
混合液を０℃で３時間撹拌し、次いで室温で一
晩撹拌した。生成物混合を70：30：３クロロホ
ルム／メタノール／水性アルモニアでシリカゲ
ル過を包含させた。発泡生成物（2.5ｇ）を
得た。 Ｅ BOC−〔２−（Ｓ−３−アミノ−２−オキソ
−ピロリジン−１−イル）−Ｓ−２−イソプロ
ピルメチル酢酸〕−Arg−Pro−GlyNH₂の脱閉
塞 上記Ｄのペプチド生成物を発泡として使用
し、１％エタンジチオール（EDT）を含有す
るトリフルオロ酢酸30ml中に０℃で溶解し、そ
の後、室温で15分間撹拌し、次いで溶媒を除去
した。ポンプでくみ、エーテルで洗浄し、
EDTのほとんどを除去した。発泡生成物
（2.77ｇ）を得た。 Ｆ ピロGlu−His−Trp−Ser−Tyr−６・７−
〔２−（Ｓ−３−アミノ−２−オキソ−ピロリジ
ン−１−イル）−Ｓ−２−イソプロピルメチル
酢酸〕−Arg−Pro−GlyNH₂ 公知の方法で前もつて製造したヒドラジドピ
ロGlu−His−Trp−Ser−Try−NHNH₂950mg
（1.3ミリモル）を脱ガスジメチルホルムアミド
13ml中に溶解し、１：１メタノール／水ドライ
アイス浴中で窒素下−10℃で冷却した。次いで
５当量（6.5ミリモル）の5.8M塩酸／テトラヒ
ドロフラン（1.2ml）を添加した。反応混合液
を−25℃に冷却しそして陽性デンプン／KI試
験反応が得られるまでイソアミルニトライト／
ジメチルホルムアミドの１：19溶液を添加し
た。約８mlの溶液を必要とした。薄層クロマト
グラフイはヒドラジドが残存しないことを示し
た。反応混合液を−40℃に冷却し、そして冷却
したジメチルホルムアミド２ml中に溶解した上
記のペプチド生成物Ｅを添加した。PHをトリエ
チルアミンで８に上げた。反応混合液を−20℃
で24時間貯蔵し、その後PHを再調節した。さら
にペプチドを添加したが、24時間後、生成物の
薄層クロマトグラフイに変化はなかつた。生成
物を真空内で濃縮し、ブタノール中に溶解しそ
して水で分配した。ブタノール層をシリカゲル
カラムに充填し、10：５：１：３のエチルアセ
テート／ピリジン／酢酸／水で溶離した。留分
を収集し濃縮し、次いでクロロホルム／ヘキサ
ンで沈澱させ、最終生成物150mgを得た。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 式： （式中ＡはＬ−またはＤ−ピロ Gluである； ＢはＬ−Hisである； ＣはＬ−またはＤ−Trpである； ＤはＬ−Serである； ＥはＬ−Tyrである； ＦはＬ−Argである； ＧはＬ−Proである； ＸはＬ−GlyNH₂である； Ｙはイソプロピルメチルである； および ｎは２である。） を有する新規なペプチド。