JPS6196983A - トルラスポラ属大型細胞酵母 - Google Patents
トルラスポラ属大型細胞酵母Info
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- JPS6196983A JPS6196983A JP59219049A JP21904984A JPS6196983A JP S6196983 A JPS6196983 A JP S6196983A JP 59219049 A JP59219049 A JP 59219049A JP 21904984 A JP21904984 A JP 21904984A JP S6196983 A JPS6196983 A JP S6196983A
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- torulospora
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は染色体が倍数性を有するトルラスポラ蔵（Ｔｏ
ｒｕｌａｓｐｏｒａ ）に属する大型冷凍耐性パン酵母
の製法に関する。
ｒｕｌａｓｐｏｒａ ）に属する大型冷凍耐性パン酵母
の製法に関する。
トルラスポラ属に属する酵母、例えばトルラスポラ・デ
ルブルツキ（Ｔｏｒｕｌａａｐｏｒａ ｄｅｌｂｒｕｅ
ｃｋｉｉ：旧名サツカロミセスψロゼイＳａｃｃｈａｒ
ｏｍｙｃｅｓ ｒｏｓｅｉは分類□学的に消滅し、新名
となった。「Ｊ、 Ａ。
ルブルツキ（Ｔｏｒｕｌａａｐｏｒａ ｄｅｌｂｒｕｅ
ｃｋｉｉ：旧名サツカロミセスψロゼイＳａｃｃｈａｒ
ｏｍｙｃｅｓ ｒｏｓｅｉは分類□学的に消滅し、新名
となった。「Ｊ、 Ａ。
Ｂａｒｎｅｔｔ等著、Ｙｅａｓｔｓ ： Ｃｈａｒａｃ
ｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ａｎｄＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉ
ｏｎ 、 ５０Ｂ頁、 Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖ
ｅｒｓｉｔｙＰｒｅｓｓ 、 Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ 、
１９８３年」及び「Ｎ、Ｊ、Ｗ。
ｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ａｎｄＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉ
ｏｎ 、 ５０Ｂ頁、 Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖ
ｅｒｓｉｔｙＰｒｅｓｓ 、 Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ 、
１９８３年」及び「Ｎ、Ｊ、Ｗ。
Ｋｒｅｇｅｒ−ｖａｎ Ｒｌｊ ｉＱ著、 Ｔｈｅ Ｙ
ｅａｓｔｓ 、第３改訂版。
ｅａｓｔｓ 、第３改訂版。
４３５頁、 ｇｌｓｅｖｉｅｒ ５ｃｉｅｎｃｅ Ｐｕ
ｂｌｉｓｈｐｒｓ 、Ａｍｓｔｅｒａａｍ 。
ｂｌｉｓｈｐｒｓ 、Ａｍｓｔｅｒａａｍ 。
１９８４年」参照）は糖濃度の高い菓子パン製造に優れ
（特公昭５４−１３４５Ｎ号）、又４、冷凍耐性のある
酵母（特開昭５６− Ｌ４４０３６号）として市販され
ている。冷凍耐性とは発酵用酵母菌体を含むパン生地を
あらかじめ混捏し若干時間発酵させるか又はそのまま−
２０°Ｃ以下に冷凍保存しておき、必要に応じ解凍し再
発酵させパン全焼成しうる性質である。冷凍保存できる
という特質は早朝からパン製造にとりかからねばならぬ
という過程を省略せしめ、又、需要全察知してパンを焼
成できるという利点をもたらす。しかし、トルラスポラ
・デルブルツキは一般に菌体細胞が小さ−ため培養後の
集菌、洗浄、脱水等の作条に時間がかかるという欠点が
ある。本発明者らはトルラスポラ属に属する酵母のブロ
トプラストヲ調製し、これを再生させる際、ジメチルス
ルホキシド、レチノイン酸全再生培地に添加したシ、再
生の際に０．５ ｍＭ以下のマグネシウムを含む培地を
用いたところ、染色体の倍数化した大型細胞株を得るこ
とができた。大型細胞株はパン酵母としての性質は変ら
ずに、しかも上記作条時間を大幅に短縮する事ができる
ことを見出して本発明を完成した。
（特公昭５４−１３４５Ｎ号）、又４、冷凍耐性のある
酵母（特開昭５６− Ｌ４４０３６号）として市販され
ている。冷凍耐性とは発酵用酵母菌体を含むパン生地を
あらかじめ混捏し若干時間発酵させるか又はそのまま−
２０°Ｃ以下に冷凍保存しておき、必要に応じ解凍し再
発酵させパン全焼成しうる性質である。冷凍保存できる
という特質は早朝からパン製造にとりかからねばならぬ
という過程を省略せしめ、又、需要全察知してパンを焼
成できるという利点をもたらす。しかし、トルラスポラ
・デルブルツキは一般に菌体細胞が小さ−ため培養後の
集菌、洗浄、脱水等の作条に時間がかかるという欠点が
ある。本発明者らはトルラスポラ属に属する酵母のブロ
トプラストヲ調製し、これを再生させる際、ジメチルス
ルホキシド、レチノイン酸全再生培地に添加したシ、再
生の際に０．５ ｍＭ以下のマグネシウムを含む培地を
用いたところ、染色体の倍数化した大型細胞株を得るこ
とができた。大型細胞株はパン酵母としての性質は変ら
ずに、しかも上記作条時間を大幅に短縮する事ができる
ことを見出して本発明を完成した。
トルラスポラ・デルブルツキは通常−缶体で増殖する酵
母である（前記のＮ、Ｊ、Ｗ、 Ｋｒｅｇｅｒ−ｖａｎ
Ｒｌｊ 、 Ｔｈｅ Ｙｅａｓｔｓ 、 ４３４頁参照
）。
母である（前記のＮ、Ｊ、Ｗ、 Ｋｒｅｇｅｒ−ｖａｎ
Ｒｌｊ 、 Ｔｈｅ Ｙｅａｓｔｓ 、 ４３４頁参照
）。
本発明においてはトルラスポラ属に属する酵母のプロト
プラスト全再生させる際、ジメチルスルホキシド、レチ
ノイン酸を作用させたシ、０．５ ｍＭ以下のマグネシ
ウムを含む培地で再生さぜる、又はこれらの組合せによ
シ、意外にも倍叡体株を造成樹立することができた。本
発明によシ得られた倍数体酵母株は倍数性を簀定に維持
し、冷凍耐性はそのままであった。又、倍数性の増加に
伴ないパン生地膨張力価も若干同上した。
プラスト全再生させる際、ジメチルスルホキシド、レチ
ノイン酸を作用させたシ、０．５ ｍＭ以下のマグネシ
ウムを含む培地で再生さぜる、又はこれらの組合せによ
シ、意外にも倍叡体株を造成樹立することができた。本
発明によシ得られた倍数体酵母株は倍数性を簀定に維持
し、冷凍耐性はそのままであった。又、倍数性の増加に
伴ないパン生地膨張力価も若干同上した。
本性にて得られる倍数性株は直接染色体倍数化（ｄｉｒ
ｅｃｔ ｄｉｐｌｏｉｄｉｚａｔｉｏｎ）であシ、 い
わゆるプロトプラスト融合とは異なる。
ｅｃｔ ｄｉｐｌｏｉｄｉｚａｔｉｏｎ）であシ、 い
わゆるプロトプラスト融合とは異なる。
なお、本発明に用いる親酵母株は野生型であυ、あらか
じめ栄養要求性または薬剤耐性マーカー付与等の変異処
理を必要としない。従って、得られた倍数性酵母株は栄
養要求性等の人為的突然変異遺伝形質を染色体上に付だ
ない。そのため、胞子を形成させる等の分離（セグリゲ
ーション）を人為的または自然におこして一倍体にもど
っても、栄養要求性等の変異遺伝形質を有する子孫法を
生じない。また、いわゆる変異処理の操作が必要でない
ため、対象とする酵母の良い遺伝形質に損傷を与えるお
それがなく、得られる倍数性酵母はパン生地試験でも良
好な結果金与える。
じめ栄養要求性または薬剤耐性マーカー付与等の変異処
理を必要としない。従って、得られた倍数性酵母株は栄
養要求性等の人為的突然変異遺伝形質を染色体上に付だ
ない。そのため、胞子を形成させる等の分離（セグリゲ
ーション）を人為的または自然におこして一倍体にもど
っても、栄養要求性等の変異遺伝形質を有する子孫法を
生じない。また、いわゆる変異処理の操作が必要でない
ため、対象とする酵母の良い遺伝形質に損傷を与えるお
それがなく、得られる倍数性酵母はパン生地試験でも良
好な結果金与える。
以下に、トルラスポラ・デルブルツキを用いた場合の倍
数体酵母株の実施例と得られた菌株の性質について述べ
る。
数体酵母株の実施例と得られた菌株の性質について述べ
る。
本発明に用いた親株トルラスポラ・デルブルツキＹ−１
３４−５の細胞体積は約１８１Ｉ′ｒｒＬ６であるが、
下記のようにして造成した菌株は５０〜６０μｍ６であ
シ約３倍太きい。
３４−５の細胞体積は約１８１Ｉ′ｒｒＬ６であるが、
下記のようにして造成した菌株は５０〜６０μｍ６であ
シ約３倍太きい。
実施例
（１） ジメチルスルホキシド処理による大型細胞体
の造成 トルラスポラ・チルプルツキｙ−１３４−５（微工研菌
薔第９０５号）をＹＰＤ （１チ酵母エキス、１チボリ
ペプトン、２％グルコース）培地に３０℃で好気的に培
養した。対数生育期菌体を遠心にて集め、高張液Ａ （
０，６ＭＫＣｌ 、 ２０ ｍＭ Ｔｒｉｓ 。
の造成 トルラスポラ・チルプルツキｙ−１３４−５（微工研菌
薔第９０５号）をＹＰＤ （１チ酵母エキス、１チボリ
ペプトン、２％グルコース）培地に３０℃で好気的に培
養した。対数生育期菌体を遠心にて集め、高張液Ａ （
０，６ＭＫＣｌ 、 ２０ ｍＭ Ｔｒｉｓ 。
ＨＣｔにてｐＨ７，５）にて洗浄後、５−の高張液Ａに
懸濁した。この際、菌数は約４ Ｘ １０８ｃｅｌｌｓ
／ｍ／！となるよう調節した。２−メルカプトエタノ
ールを菌懸濁液１−あたシ１５μを加え、３０℃にて３
０分間インキュベートした。処理菌体を遠心にて集め、
高張液Ａにて２回洗浄し、２−メルカプトエタノールを
完全に除去した。園体全５−の高張液に懸濁し、Ｚｙｍ
ｏｌｙａｓｅ ５ｏｏｏｏ （ＱＡｕ麦酒（掬社製）
’ｋ ３１１９加え、１時間インキュベートすると９９
％以上プロトプラスト化した。
懸濁した。この際、菌数は約４ Ｘ １０８ｃｅｌｌｓ
／ｍ／！となるよう調節した。２−メルカプトエタノ
ールを菌懸濁液１−あたシ１５μを加え、３０℃にて３
０分間インキュベートした。処理菌体を遠心にて集め、
高張液Ａにて２回洗浄し、２−メルカプトエタノールを
完全に除去した。園体全５−の高張液に懸濁し、Ｚｙｍ
ｏｌｙａｓｅ ５ｏｏｏｏ （ＱＡｕ麦酒（掬社製）
’ｋ ３１１９加え、１時間インキュベートすると９９
％以上プロトプラスト化した。
プロトプラスト形成率は懸濁液’ｅ １ ａずつスライ
ドグラス上に２個所のせ、片方に１０％Ｎ−ラウロイル
ザルコシン・ナトリウム溶液を１μを添加し、双方全検
鏡比較することによシ目算した。生成したプロトプラス
トは５００ＸＧ、１０分間の遠心によシ集めた。高張液
Ａにて２回同様な遠心条件にて洗浄後、プロトプラスト
ラ高張液Ａ５−に懸濁し、同人数にて１０倍ずつ何段階
かに希釈した。その０．２ ｍＡ ｉ採取し、４５℃の
溶融寒天（Ｙｅａｓｔ Ｎｉｔｒｏｇｅｎ Ｂａ５ｅ
Ｗｉｔｈｏｕｔ Ａｍ１ｎ。
ドグラス上に２個所のせ、片方に１０％Ｎ−ラウロイル
ザルコシン・ナトリウム溶液を１μを添加し、双方全検
鏡比較することによシ目算した。生成したプロトプラス
トは５００ＸＧ、１０分間の遠心によシ集めた。高張液
Ａにて２回同様な遠心条件にて洗浄後、プロトプラスト
ラ高張液Ａ５−に懸濁し、同人数にて１０倍ずつ何段階
かに希釈した。その０．２ ｍＡ ｉ採取し、４５℃の
溶融寒天（Ｙｅａｓｔ Ｎｉｔｒｏｇｅｎ Ｂａ５ｅ
Ｗｉｔｈｏｕｔ Ａｍ１ｎ。
Ａｃ１ｄｓ （Ｄｉｆｃ’ｏ社製品）に１多グルコース
、０．６Ｍ塩化カリウム、２％寒天を添加したもの）８
−に混入し、あらかじめ固めである同様の組成の寒天平
板培地（１５ｍ）上に重層した。このボ屑寒天平板上に
ジメチルスルホキシド処理みこｌせた抗生物知用ペーパ
ーディスクを置き、３０℃で３日間培養した。培養後、
ペーパーディスクの周辺に再生出現したコロニーを採取
・検鋭し、大型ａ胞化したものを、常法によｐ２回単−
コロニー分離全くシ返し、精製した。ペーパーティスフ
全蔭＜代シにジメチルスルホキシド金寒天再生培地にあ
らかじめ２．５％均一に含有させても１ｉ１７ｔじ結果
が得らｎた。
、０．６Ｍ塩化カリウム、２％寒天を添加したもの）８
−に混入し、あらかじめ固めである同様の組成の寒天平
板培地（１５ｍ）上に重層した。このボ屑寒天平板上に
ジメチルスルホキシド処理みこｌせた抗生物知用ペーパ
ーディスクを置き、３０℃で３日間培養した。培養後、
ペーパーディスクの周辺に再生出現したコロニーを採取
・検鋭し、大型ａ胞化したものを、常法によｐ２回単−
コロニー分離全くシ返し、精製した。ペーパーティスフ
全蔭＜代シにジメチルスルホキシド金寒天再生培地にあ
らかじめ２．５％均一に含有させても１ｉ１７ｔじ結果
が得らｎた。
（２） レチノイン赦処理による大型細胞（倍数体）
株の造成 実施例（１）と操作は全く同じだが、ジメチルスルホキ
シドの代勺にレチノイン酸を用いた。即ち、プロトプラ
ストラ再生させる寒天培地に２Ｘ１０−’〜２×１０“
５ モル濃度のレチノイン８を含有させておき、生じた
コロニーを採取・検鏡することによシ犬型細胞化した株
を造成・分離した。
株の造成 実施例（１）と操作は全く同じだが、ジメチルスルホキ
シドの代勺にレチノイン酸を用いた。即ち、プロトプラ
ストラ再生させる寒天培地に２Ｘ１０−’〜２×１０“
５ モル濃度のレチノイン８を含有させておき、生じた
コロニーを採取・検鏡することによシ犬型細胞化した株
を造成・分離した。
（３） ０．５ ｍＭ以下のマグネシウム金倉む培地
を用いる人捜細胞（倍数体）株の造成 実施例（１）と操作は全く同じであるが、プロトプラス
ト金再生させる寒天培地のマグネシウムｃ度を低くした
。即ち、実施例（１）で培ｉ４１！構成分として用いた
Ｙａａｓｔ Ｎｉｔｒｏｇｅｎ Ｂａ５ｅ Ｗｉｔｈｏ
ｕｔ Ａｍ１ａ。
を用いる人捜細胞（倍数体）株の造成 実施例（１）と操作は全く同じであるが、プロトプラス
ト金再生させる寒天培地のマグネシウムｃ度を低くした
。即ち、実施例（１）で培ｉ４１！構成分として用いた
Ｙａａｓｔ Ｎｉｔｒｏｇｅｎ Ｂａ５ｅ Ｗｉｔｈｏ
ｕｔ Ａｍ１ａ。
ＡＣｌｄｓのマグネシウム濃度は該製品製造元の記述（
Ｄｉｆｃｏ Ｍａｎｕａｌ 、第１０改訂版、 １１３
６頁、 Ｄｉｆｃ。
Ｄｉｆｃｏ Ｍａｎｕａｌ 、第１０改訂版、 １１３
６頁、 Ｄｉｆｃ。
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ、、 Ｍｉｃｈｉｇ
ａｎ 、 ＵＳＡ ）に従って溶品と全く同じ組成の培
地を自分で作９、これをプロトプラスト再生寒天培地の
構成分として用いた。換言すればマグネシウム濃度のみ
０．２ ｍＭとなっている。このような寒天培地でプロ
トプラストから再生させたコロニーには大型細胞化し−
たものがあった。こｆｌ−を前述と同様にして釣菌・検
鏡し、精製した。
ａｎ 、 ＵＳＡ ）に従って溶品と全く同じ組成の培
地を自分で作９、これをプロトプラスト再生寒天培地の
構成分として用いた。換言すればマグネシウム濃度のみ
０．２ ｍＭとなっている。このような寒天培地でプロ
トプラストから再生させたコロニーには大型細胞化し−
たものがあった。こｆｌ−を前述と同様にして釣菌・検
鏡し、精製した。
なお、低マグネシウム培地にてジメチルスルホキシドま
たはレチノイン酸を添加しておくと。
たはレチノイン酸を添加しておくと。
大型細胞株の出現頻度は上昇した。
（４）得られた大型細胞株の諸佐賀
（１）又は（２ンの方法によシプロトプラスｈｌ再生さ
せ得られた大型細胞株のうち、パン生地膨張試朕、冷凍
耐性に優れていた株の１株をトルラスポラ・チルプルツ
キ５ＡＮＫ ５１８８４ （微工研菌福）第’７ｇ’
？６号）と命名した。同様に０．５ ｒｎＭ以下のマグ
ネシウムを含む培地にてプロトプラスト金再生させるこ
とによシ得られた大型細胞株のうち、優れた性質の株を
トルラスポラ・デルブルツキ５ＡＮＫ ５１９８４ （
微工研菌寄１ｔ７ｙ’ｖｒ７号）ト命名した。
せ得られた大型細胞株のうち、パン生地膨張試朕、冷凍
耐性に優れていた株の１株をトルラスポラ・チルプルツ
キ５ＡＮＫ ５１８８４ （微工研菌福）第’７ｇ’
？６号）と命名した。同様に０．５ ｒｎＭ以下のマグ
ネシウムを含む培地にてプロトプラスト金再生させるこ
とによシ得られた大型細胞株のうち、優れた性質の株を
トルラスポラ・デルブルツキ５ＡＮＫ ５１９８４ （
微工研菌寄１ｔ７ｙ’ｖｒ７号）ト命名した。
これら菌株の細胞体積は親株Ｙ−１３４−５に較べ約３
倍太きく（ｆｉｔ）、細胞内ＤＮＡ含量も約２倍となっ
ている（表２）。大型化した株は胞子形成が良好であり
、胞子形成用寒天平板培地（１チ酢酸カリウム、０．１
％酵母エキス、Ｏ，ＯＳチグル；−ス、２％浬天）上、
２日間、３０°Ｃにて培養すると多数の細胞が１ないし
２ケ、稀に３ケないし４ケの胞子を保有するようになっ
た。これら子嚢を含む菌体を集め、前記とほぼＩａ：ｌ
４Ｇｉな操作によシプロトブラスト化し、これを低張
液に入れ破裂させることによシ胞子を得ることができる
。この胞子を培養するともはや細胞は親株Ｙ−１３４−
５とほぼ同じ大きさＫなっておシ、−缶体に戻ることが
確認された。しかし通附の培養を続ける限シ、大型細胞
株５ＡＮＫ５１８８４ 及ヒ５ＡＮＫ ５１９Ｂ４
はａｔ Ｈ’＆ （Ｄ大きさｋ 維持する安定な菌株で
あシ、大規模培養が５ｆ能である。５ＡＮＫ ５１Ｂ８
４及び５ＡＮＫ ５１９８４の生青速反（ｄｏｕｂｌｉ
ｎｇ ｔｉｍｅ）はＹＰＤ培地、３０℃好気的条件下で
８４分であシ、親株Ｙ−１３４−５に較べ遜色なく、最
終菌体収量も劣らない（辰３）。炭素化合物資化性５Ａ
ＮＫ ５１８８４及び５ＡＮＫ ５１９８４とＹ−１３
４−５は全く同じである（表４）。に１ｊｊ胞の大きさ
、細胞内ＤＮＡ含量から、得られた大型細胞株５ＡＮＫ
５１８８４及び８ＡＮＫ ５１９ＥＩＪは二倍体と結
論した。その他の菌学的性質は一缶体酵母のそれと一致
するが（前記のＮ、Ｊ、Ｗ、 Ｋｒｅｇｅｒ−ｖａｎ
Ｒｌｊ 。
倍太きく（ｆｉｔ）、細胞内ＤＮＡ含量も約２倍となっ
ている（表２）。大型化した株は胞子形成が良好であり
、胞子形成用寒天平板培地（１チ酢酸カリウム、０．１
％酵母エキス、Ｏ，ＯＳチグル；−ス、２％浬天）上、
２日間、３０°Ｃにて培養すると多数の細胞が１ないし
２ケ、稀に３ケないし４ケの胞子を保有するようになっ
た。これら子嚢を含む菌体を集め、前記とほぼＩａ：ｌ
４Ｇｉな操作によシプロトブラスト化し、これを低張
液に入れ破裂させることによシ胞子を得ることができる
。この胞子を培養するともはや細胞は親株Ｙ−１３４−
５とほぼ同じ大きさＫなっておシ、−缶体に戻ることが
確認された。しかし通附の培養を続ける限シ、大型細胞
株５ＡＮＫ５１８８４ 及ヒ５ＡＮＫ ５１９Ｂ４
はａｔ Ｈ’＆ （Ｄ大きさｋ 維持する安定な菌株で
あシ、大規模培養が５ｆ能である。５ＡＮＫ ５１Ｂ８
４及び５ＡＮＫ ５１９８４の生青速反（ｄｏｕｂｌｉ
ｎｇ ｔｉｍｅ）はＹＰＤ培地、３０℃好気的条件下で
８４分であシ、親株Ｙ−１３４−５に較べ遜色なく、最
終菌体収量も劣らない（辰３）。炭素化合物資化性５Ａ
ＮＫ ５１８８４及び５ＡＮＫ ５１９８４とＹ−１３
４−５は全く同じである（表４）。に１ｊｊ胞の大きさ
、細胞内ＤＮＡ含量から、得られた大型細胞株５ＡＮＫ
５１８８４及び８ＡＮＫ ５１９ＥＩＪは二倍体と結
論した。その他の菌学的性質は一缶体酵母のそれと一致
するが（前記のＮ、Ｊ、Ｗ、 Ｋｒｅｇｅｒ−ｖａｎ
Ｒｌｊ 。
Ｔｈｅ Ｙｅａｓｔｓ 、 ４３５頁参照）、胞子形成
に際し偽接合管を形成しないこと、および細胞がそのま
ま胞子者に変換する点において異なる。
に際し偽接合管を形成しないこと、および細胞がそのま
ま胞子者に変換する点において異なる。
（５）直接二倍体化の証明
ジメチルスルホキシド等の存在下又は０．５ ｍＭ以下
のマグネシウムを含む培地でのプロトプラスト再生によ
り生ずる大型細胞株が、いわゆるプロトプラスト融合で
なく、細胞分裂の撹乱により生じた直接二倍体化である
ことは以下のようにして証明した。
のマグネシウムを含む培地でのプロトプラスト再生によ
り生ずる大型細胞株が、いわゆるプロトプラスト融合で
なく、細胞分裂の撹乱により生じた直接二倍体化である
ことは以下のようにして証明した。
まずトルラスポラ・デルブルツキＹ−１３４−５をエチ
ルメタンスルホネート処理の常法（石川辰夫編、ａ生物
遺伝学実験法、１９５頁、共立出版、東京、 １９８２
年）により、栄養要求変異株全造成した。即ちトルラス
ポラ・デルブルツキ５ＡＮＫ ５Ｈ８４（ａｄｅ ｕｒ
ａ）と５ＡＮＫ ５２２８４ （ａｒｇ ｍｅｔ）の二
重要求株である。これら菌株から栄養要求解除（野生型
表現形質）株は検出されず、復帰変異率は１（１１０以
下と推定される。この２株を培養集菌後、１対１に混合
し、（１）と同様にしてプロトプラストとし、（３）の
如き０．５ ｍＭ以下のマグネシウムを含む寒天培地及
びこれに（１）の如＜２．５係ジメチルスルホキシドを
均一に添加した培地にて再生させた。この際、培地中に
は各踵栄養要求物をあらかじめ添加した。各要求物を加
えた寒天培地での再生コロニー数全表５Ａに示した。即
ち、５ＡＮＫ ５２ｔ８４及び５ＡＮＫ ５２２８４共
、再生する。大型細胞形成培地に再生したコロニーを拾
い検鏡すると、かな９の割合で大型細胞株の出現が認め
られる。この大型細胞株の要求性を調べると表５Ｂにみ
る如（ａｄｅ ｕｒａ又はａｒｇ ｍｅｔのどちらかで
あり、プロトプラストが融合した場合期待される栄養要
求解除様は全く出現しなかった。
ルメタンスルホネート処理の常法（石川辰夫編、ａ生物
遺伝学実験法、１９５頁、共立出版、東京、 １９８２
年）により、栄養要求変異株全造成した。即ちトルラス
ポラ・デルブルツキ５ＡＮＫ ５Ｈ８４（ａｄｅ ｕｒ
ａ）と５ＡＮＫ ５２２８４ （ａｒｇ ｍｅｔ）の二
重要求株である。これら菌株から栄養要求解除（野生型
表現形質）株は検出されず、復帰変異率は１（１１０以
下と推定される。この２株を培養集菌後、１対１に混合
し、（１）と同様にしてプロトプラストとし、（３）の
如き０．５ ｍＭ以下のマグネシウムを含む寒天培地及
びこれに（１）の如＜２．５係ジメチルスルホキシドを
均一に添加した培地にて再生させた。この際、培地中に
は各踵栄養要求物をあらかじめ添加した。各要求物を加
えた寒天培地での再生コロニー数全表５Ａに示した。即
ち、５ＡＮＫ ５２ｔ８４及び５ＡＮＫ ５２２８４共
、再生する。大型細胞形成培地に再生したコロニーを拾
い検鏡すると、かな９の割合で大型細胞株の出現が認め
られる。この大型細胞株の要求性を調べると表５Ｂにみ
る如（ａｄｅ ｕｒａ又はａｒｇ ｍｅｔのどちらかで
あり、プロトプラストが融合した場合期待される栄養要
求解除様は全く出現しなかった。
参考例
（１）大型細胞株５ＡＮＫ ５１８８４よシケーキ酵母
の調製 パン用酵母はケーキ状にして市販されている。
の調製 パン用酵母はケーキ状にして市販されている。
ケーキ調製に要する時間を大型細胞株５ＡＮＫ５１８８
４及び親株Ｙ−１３４−５について比較試験した。５Ａ
ＮＫ ５１Ｂ８４とＹ−１３４−５を同じ条件下で培養
した。即ち、種・生酵母３５に２全１０トン培養槽に入
れ、廃糖蜜、尿素、第ニリン酸ナトリウムを添加供給し
ながら温度３０°Ｃ，ｐＨ５，０〜５５通気１ ｖ、ｖ
、ｍ、にて１６時間通気攪拌培養した。
４及び親株Ｙ−１３４−５について比較試験した。５Ａ
ＮＫ ５１Ｂ８４とＹ−１３４−５を同じ条件下で培養
した。即ち、種・生酵母３５に２全１０トン培養槽に入
れ、廃糖蜜、尿素、第ニリン酸ナトリウムを添加供給し
ながら温度３０°Ｃ，ｐＨ５，０〜５５通気１ ｖ、ｖ
、ｍ、にて１６時間通気攪拌培養した。
酵母菌体を遠心集菌し、４回洗浄、濃縮して、酵母クリ
ームｔｏｏｏ ｔ Ｃ生酵母５２０に２含有）を得た。
ームｔｏｏｏ ｔ Ｃ生酵母５２０に２含有）を得た。
食塩浴液にて処理し回転真空脱水機（デバイトレーター
、 Ａｌｆａ−Ｌａｖａ１社製）にてケーキ酵母にした
。表６に示すように回転真空脱水機の処理面積８ｍ２あ
たシ、１時間に処理しうるクリーム酵母前はＹ−１３４
−５が１０００ｔであるに対し、５ＡＮＫ ５１８８４
は２６００ ｔであ多単位面積・時間あたシ得られるケ
ーキ酵母量は２．６倍となっている。即ち、脱水に要す
る作業時間は１／２．６と大幅に短縮された。
、 Ａｌｆａ−Ｌａｖａ１社製）にてケーキ酵母にした
。表６に示すように回転真空脱水機の処理面積８ｍ２あ
たシ、１時間に処理しうるクリーム酵母前はＹ−１３４
−５が１０００ｔであるに対し、５ＡＮＫ ５１８８４
は２６００ ｔであ多単位面積・時間あたシ得られるケ
ーキ酵母量は２．６倍となっている。即ち、脱水に要す
る作業時間は１／２．６と大幅に短縮された。
（２）大型細胞株５ＡＮＫ ５１８８４の冷凍耐性上記
の如く得られたケーキ酵母を用い、表ＴＫ示す配合と工
程でパン生地を作成し、−２０℃にて冷凍後８日目およ
び１９９日目とシ出して解凍し、パン焼成を行なった。
の如く得られたケーキ酵母を用い、表ＴＫ示す配合と工
程でパン生地を作成し、−２０℃にて冷凍後８日目およ
び１９９日目とシ出して解凍し、パン焼成を行なった。
５ＡＮＫ ５１８８４を用いた場合、焼成パン体積は冷
凍１９日後でも２１８７ ｒｎｌあｐ、親株Ｙ−１３４
−５による２０６５−に勝った（表１）。
凍１９日後でも２１８７ ｒｎｌあｐ、親株Ｙ−１３４
−５による２０６５−に勝った（表１）。
表１． 生育静止初期細胞の大きさ
細胞の長軸および短軸は長軸ｉ２ａ、短軸を２ｂとし、
５０ケの細胞につめて写真よシ計測し平均値及び標準偏
差を算出した。体積は細胞が完全な楕円球と仮定し、公
式Ｖ＝−πａｂ２ よシ計算した。
５０ケの細胞につめて写真よシ計測し平均値及び標準偏
差を算出した。体積は細胞が完全な楕円球と仮定し、公
式Ｖ＝−πａｂ２ よシ計算した。
表２ 細胞内ＤＮＡ含量
仔牛胸腺ＤＮＡ ｉ標準とし、ジフェニルアミン全角い
る比色定電にて測定した。Ｙ−１３４−５のＤＮＡ含量
は約２３ ｆ、９／ｃｅｌｌ ０（ｆｉ −１Ｏ−１５
Ｊｉ’ ）。
る比色定電にて測定した。Ｙ−１３４−５のＤＮＡ含量
は約２３ ｆ、９／ｃｅｌｌ ０（ｆｉ −１Ｏ−１５
Ｊｉ’ ）。
衣３． 生育速度と最終菌体収童
表４． 炭素化合物資化性
試験菌株： Ｙ−１３４−５、５ＡＮＫ ５１８８４及
び５ＡＮＫ資化性有：グルコ〜ス、イヌリン、乳酸、Ｄ
−マンニット、ラフィノース、Ｄ−ソ ルビット、Ｌ−ソルボース、シュク ロース、トレハロース 貧化性無二Ｄ−アラビノース、Ｌ−アラビノース、セロ
ビオース、クエン酸、エリ スリット、ガラクチット、ガラクト ース、ラクトース、マルトース、メ レジトース、メリビオース、α−メ チル−〇−ｆルコシド、ラムノース。
び５ＡＮＫ資化性有：グルコ〜ス、イヌリン、乳酸、Ｄ
−マンニット、ラフィノース、Ｄ−ソ ルビット、Ｌ−ソルボース、シュク ロース、トレハロース 貧化性無二Ｄ−アラビノース、Ｌ−アラビノース、セロ
ビオース、クエン酸、エリ スリット、ガラクチット、ガラクト ース、ラクトース、マルトース、メ レジトース、メリビオース、α−メ チル−〇−ｆルコシド、ラムノース。
アトニット、Ｄ−リボース、プリフ
ン。デンプン、コハク＆、Ｄ−中シ
ロース
表５． 直接二倍体化の証明
（Ａ）
（Ａ） プロトプラスト再生至適培地に要求物を加え
、プロトプラストよシの再生コロニー数を計数。５ＡＮ
Ｋ ５２１８４ （ａｄｓ ｕｒａ）及び５ＡＮＫ ５
２２８４ （ａｒｇｍｅり共、再生している。（Ｂ）
低マグネシウム濃度（０，２ｍ２Ｊ ）再生培地に要
求物等を加え、プロトプラストラ再生させた。そのコロ
ニーを釣菌・検鋭し、大型細胞化した株の栄養要求性を
調べた。
、プロトプラストよシの再生コロニー数を計数。５ＡＮ
Ｋ ５２１８４ （ａｄｓ ｕｒａ）及び５ＡＮＫ ５
２２８４ （ａｒｇｍｅり共、再生している。（Ｂ）
低マグネシウム濃度（０，２ｍ２Ｊ ）再生培地に要
求物等を加え、プロトプラストラ再生させた。そのコロ
ニーを釣菌・検鋭し、大型細胞化した株の栄養要求性を
調べた。
注ＩＡｄｅ：アデニン、 ｕｒａ ：ウラシル、 Ａｒ
ｇ：アルギニン、 Ｍｅｔ ：メチオニンの略。
ｇ：アルギニン、 Ｍｅｔ ：メチオニンの略。
注’ｌ ａｄｅ ｕｒａ ：アデニン及びウラシル要
求性。
求性。
ａｒｇ ｍｅｔ ：アルギニン及びメチオニン要求性、
ｎｏｎｅ ：要求性なし。
ｎｏｎｅ ：要求性なし。
表６． ケーキ酵母Ａ製に要する時間
表７． 冷凍貯蔵−解凍後パン焼成体積及びその工程
〔配合〕
小麦粉 １００
砂糖 ４
食塩 ２
生地改良剤 １．２シヨートニン
グ ４酵 母
６水 ６３
〔工程〕 低速２分、中速５分、高速３分 捏上温度：２８°Ｃ 前発酵：３０℃、３０分→ガス抜き、成型冷 凍ニー
３０℃、６０分急速冷凍→−２０’Ｃ貯蔵解 凍：２
６℃、９０分 ホイ ロ：３８℃、湿夏９０チ、９０分焼 成＝２２
０℃、２５分 結果 ＄１ ホイロは定溶積の金属箱に入れて行なう。
グ ４酵 母
６水 ６３
〔工程〕 低速２分、中速５分、高速３分 捏上温度：２８°Ｃ 前発酵：３０℃、３０分→ガス抜き、成型冷 凍ニー
３０℃、６０分急速冷凍→−２０’Ｃ貯蔵解 凍：２
６℃、９０分 ホイ ロ：３８℃、湿夏９０チ、９０分焼 成＝２２
０℃、２５分 結果 ＄１ ホイロは定溶積の金属箱に入れて行なう。
箱上面よシ突出するパン生地の高さを測シ、発酵能の指
標とする。
標とする。
中２ 比容積は焼成パン体積を重量にて餘した数値。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、トルラスポラ属に属する酵母のプロトプラストをジ
メチルスルホキシドレチノイン酸および／または０．５
ｍＭ以下のマグネシウムの存在下、再生させる事により
栄養要求性等の人為的突然変異形質を染色体上に持たず
に、染色体が倍数性を有する株を造成・分離してトルラ
スポラ属に属する大型細胞酵母株を取得することを特徴
とする酵母の製法。 ２、トルラスポラ属に属する酵母がトルラスポラ・デル
ブルツキである特許請求の範囲第１項記載の製法。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59219049A JPH0646940B2 (ja) | 1984-10-18 | 1984-10-18 | トルラスポラ属大型細胞酵母 |
| JP3102750A JPH0771473B2 (ja) | 1984-10-18 | 1991-05-08 | トルラスポラ属大型細胞酵母の育種造成方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59219049A JPH0646940B2 (ja) | 1984-10-18 | 1984-10-18 | トルラスポラ属大型細胞酵母 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3102750A Division JPH0771473B2 (ja) | 1984-10-18 | 1991-05-08 | トルラスポラ属大型細胞酵母の育種造成方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6196983A true JPS6196983A (ja) | 1986-05-15 |
| JPH0646940B2 JPH0646940B2 (ja) | 1994-06-22 |
Family
ID=16729457
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59219049A Expired - Lifetime JPH0646940B2 (ja) | 1984-10-18 | 1984-10-18 | トルラスポラ属大型細胞酵母 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0646940B2 (ja) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS58155083A (ja) * | 1982-03-09 | 1983-09-14 | Oriental Yeast Co Ltd | 酵母融合株 |
-
1984
- 1984-10-18 JP JP59219049A patent/JPH0646940B2/ja not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS58155083A (ja) * | 1982-03-09 | 1983-09-14 | Oriental Yeast Co Ltd | 酵母融合株 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0646940B2 (ja) | 1994-06-22 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |