JPH0771473B2 - トルラスポラ属大型細胞酵母の育種造成方法 - Google Patents
トルラスポラ属大型細胞酵母の育種造成方法Info
- Publication number
- JPH0771473B2 JPH0771473B2 JP3102750A JP10275091A JPH0771473B2 JP H0771473 B2 JPH0771473 B2 JP H0771473B2 JP 3102750 A JP3102750 A JP 3102750A JP 10275091 A JP10275091 A JP 10275091A JP H0771473 B2 JPH0771473 B2 JP H0771473B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- yeast
- torluspora
- large cell
- strain
- medium
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Landscapes
- Bakery Products And Manufacturing Methods Therefor (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は染色体が二倍体性を有す
るトルラスポラ属（Torulaspora)に属する大型冷凍耐性
パン酵母の製法に関する。
るトルラスポラ属（Torulaspora)に属する大型冷凍耐性
パン酵母の製法に関する。
【０００２】
【従来の技術】トルラスポラ属に属する酵母、例えばト
ルラスポラ・デルブルッキ（Torulaspora delbrueckii
: 旧名サッカロミセス・ロゼイ Saccharomyces rosei
は分類学的に消滅し、新名となった。 「J.A. Barnett等
著、Yeasts : Characteristicsand Identification ,５
０８頁，Cambridge University Press, Cambridge,１９
８３年」及び「N.J.W. Kreger-van Rij 編著，The Yeas
ts, 第３改訂版，４３５頁，Elsevier Science Publish
ers, Amsterdam, １９８４年」参照）は糖濃度の高い菓
子パン製造に優れ（特公昭５４−１３４９１号）、又、
冷凍耐性のある酵母（特開昭５６−１４４０３６号）と
して市販されている。冷凍耐性とは発酵用酵母菌体を含
むパン生地をあらかじめ混捏し若干時間発酵させるか又
はそのまま−２０℃以下に冷凍保存しておき、必要に応
じ解凍し再発酵させパンを焼成しうる性質である。冷凍
保存できるという性質は早朝からパン製造にとりかから
ねばならぬという過程を省略せしめ、又、需要を察知し
てパンを焼成できるという利点をもたらす。しかし、ト
ルラスポラ・デルブルッキは一般に菌体細胞が小さいた
め培養後の集菌、洗浄、脱水等の作業に時間がかかると
いう欠点がある。従来、トルラスポラ・デルブルッキの
二倍体酵母としては、染色体上に栄養要求性等の人為的
突然変異遺伝形質を有する酵母がプロトプラスト融合法
によって得られている（特開昭５８−１５５０８３
号）。
ルラスポラ・デルブルッキ（Torulaspora delbrueckii
: 旧名サッカロミセス・ロゼイ Saccharomyces rosei
は分類学的に消滅し、新名となった。 「J.A. Barnett等
著、Yeasts : Characteristicsand Identification ,５
０８頁，Cambridge University Press, Cambridge,１９
８３年」及び「N.J.W. Kreger-van Rij 編著，The Yeas
ts, 第３改訂版，４３５頁，Elsevier Science Publish
ers, Amsterdam, １９８４年」参照）は糖濃度の高い菓
子パン製造に優れ（特公昭５４−１３４９１号）、又、
冷凍耐性のある酵母（特開昭５６−１４４０３６号）と
して市販されている。冷凍耐性とは発酵用酵母菌体を含
むパン生地をあらかじめ混捏し若干時間発酵させるか又
はそのまま−２０℃以下に冷凍保存しておき、必要に応
じ解凍し再発酵させパンを焼成しうる性質である。冷凍
保存できるという性質は早朝からパン製造にとりかから
ねばならぬという過程を省略せしめ、又、需要を察知し
てパンを焼成できるという利点をもたらす。しかし、ト
ルラスポラ・デルブルッキは一般に菌体細胞が小さいた
め培養後の集菌、洗浄、脱水等の作業に時間がかかると
いう欠点がある。従来、トルラスポラ・デルブルッキの
二倍体酵母としては、染色体上に栄養要求性等の人為的
突然変異遺伝形質を有する酵母がプロトプラスト融合法
によって得られている（特開昭５８−１５５０８３
号）。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、プロト
プラスト融合法による二倍体酵母は、パン酵母としての
性質が劣ると言う欠点を有する。
プラスト融合法による二倍体酵母は、パン酵母としての
性質が劣ると言う欠点を有する。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らはトルラスポ
ラ属に属する酵母のプロトプラストを調製し、これを再
生させる際、ジメチルスルホキシドを再生培地に添加し
たり、再生の際に０．５ mM 以下のマグネシウムを含む
培地を用いたところ、染色体の二倍体化しているが、染
色体上に栄養要求性の人為的突然変異遺伝形質を有しな
い大型細胞株を得ることができた。トルラスポラ・デル
ブルッキは通常一倍体で増殖する酵母である（前記のN.
J.W. Kreger-van Rij, The Yeasts,４３４頁参照）。
ラ属に属する酵母のプロトプラストを調製し、これを再
生させる際、ジメチルスルホキシドを再生培地に添加し
たり、再生の際に０．５ mM 以下のマグネシウムを含む
培地を用いたところ、染色体の二倍体化しているが、染
色体上に栄養要求性の人為的突然変異遺伝形質を有しな
い大型細胞株を得ることができた。トルラスポラ・デル
ブルッキは通常一倍体で増殖する酵母である（前記のN.
J.W. Kreger-van Rij, The Yeasts,４３４頁参照）。
【０００５】
【作用】本発明により得られた二倍体大型細胞株はパン
酵母としての性質は変わらずに、その倍数性を安定に維
持し、冷凍耐性はそのままであった。又、倍数性の増加
に伴ないパン生地膨張力価も若干向上した。しかも上記
作業時間を大幅に短縮する事ができた。本法にて得られ
る二倍体株は直接染色体倍数化（direct diploidizatio
n)であり、いわゆるブロトプラスト融合とは異なる。
酵母としての性質は変わらずに、その倍数性を安定に維
持し、冷凍耐性はそのままであった。又、倍数性の増加
に伴ないパン生地膨張力価も若干向上した。しかも上記
作業時間を大幅に短縮する事ができた。本法にて得られ
る二倍体株は直接染色体倍数化（direct diploidizatio
n)であり、いわゆるブロトプラスト融合とは異なる。
【０００６】なお、本発明に用いる親酵母株は野生型で
あり、あらかじめ栄養要求性または薬剤耐性マーカー付
与等の変異処理を必要としない。従って、得られた二倍
体酵母株は栄養要求性等の人為的突然変異遺伝形質を染
色体上に持たない。そのため、胞子を形成させる等の分
離（セグリゲーション）を人為的または自然におこして
一倍体にもどっても、栄養要求性等の変異遺伝形質を有
する子孫株を生じない。また、いわゆる変異処理の操作
が必要でないため、対象とする酵母の良い遺伝形質に損
傷を与えるおそれがなく、得られる二倍体酵母はパン生
地試験でも良好な結果を与える。
あり、あらかじめ栄養要求性または薬剤耐性マーカー付
与等の変異処理を必要としない。従って、得られた二倍
体酵母株は栄養要求性等の人為的突然変異遺伝形質を染
色体上に持たない。そのため、胞子を形成させる等の分
離（セグリゲーション）を人為的または自然におこして
一倍体にもどっても、栄養要求性等の変異遺伝形質を有
する子孫株を生じない。また、いわゆる変異処理の操作
が必要でないため、対象とする酵母の良い遺伝形質に損
傷を与えるおそれがなく、得られる二倍体酵母はパン生
地試験でも良好な結果を与える。
【０００７】
【実施例】以下に、トルラスポラ・デルブルッキを用い
た場合の二倍体株造成の実施例と得られた菌株の性質に
ついて述べる。本発明に用いた親株トルラスポラ・デル
ブルッキＹ−１３４−５の細胞体積は約１８μm3である
が、下記のようにして造成した菌株は５０〜６０μm3で
あり約３倍大きい。
た場合の二倍体株造成の実施例と得られた菌株の性質に
ついて述べる。本発明に用いた親株トルラスポラ・デル
ブルッキＹ−１３４−５の細胞体積は約１８μm3である
が、下記のようにして造成した菌株は５０〜６０μm3で
あり約３倍大きい。
【０００８】実施例 (1) ジメチルスルホキシド処理による大型細胞株の造成 トルラスポラ・デルブルッキＹ−１３４−５（微工研菌
寄第９０５号）をＹＰＤ（１％酵母エキス、１％ポリペ
プトン、２％グルコース）培地に３０℃で好気的に培養
した。対数生育期菌体を遠心にて集め、高張液Ａ（０.
６ M KCl ,２０ mM Tris , HClにて pH ７. ５）にて洗
浄後、５ ml の高張液Ａに懸濁した。この際、菌数は約
４×108 cells ／mlとなるように調節した。２−メル
カプトエタノールを菌懸濁液１ ml あたり１５μl 加
え、３０℃にて３０分間インキュベートした。処理菌体
を遠心にて集め、高張液Ａにて２回洗浄し、２−メルカ
プトエタノールを完全に除去した。菌体を５ ml の高張
液に懸濁し、Zymolyase60000 （麒麟麦酒（株）社製）
を３ mg 加え、１時間インキュベートすると９９％以上
プロトプラスト化した。プロトプラスト形成率は懸濁液
を１滴ずつスライドグラス上に２個所のせ、片方に１０
％Ｎ−ラウロイルザルコシン・ナトリウム溶液を１μl
添加し、双方を検鏡比較することにより目算した。生成
したプロトプラストは５００×Ｇ、１０分間の遠心によ
り集めた。高張液Ａにて２回同様な遠心条件にて洗浄
後、プロトプラストを高張液Ａ５mlに懸濁し、同Ａ液に
て１０倍ずつ何段階かに希釈した。その ０．２ ml を
採取し、４５℃の溶融寒天（Yeast Nitrogen Base With
out Amino Acids (Difco社製品）に１％グルコース，
０．６Ｍ塩化カリウム，２％寒天を添加したもの）８ml
に混入し、あらかじめ固めてある同様の組成の寒天平板
培地（１５ml）上に重層した。この重層寒天平板上にジ
メチルスルホキシドをしみこませた抗生物質用ペーパー
ディスクを置き、３０℃で３日間培養した。培養後、ペ
ーパーディスクの周辺に再生出現したコロニーを採取・
検鏡し、大型細胞化したものを、常法により２回単一コ
ロニー分離をくり返し、精製した。ペーパーディスクを
置く代わりにジメチルスルホキシドを寒天再生培地にあ
らかじめ２．５％均一に含有させても同じ結果が得られ
た。
寄第９０５号）をＹＰＤ（１％酵母エキス、１％ポリペ
プトン、２％グルコース）培地に３０℃で好気的に培養
した。対数生育期菌体を遠心にて集め、高張液Ａ（０.
６ M KCl ,２０ mM Tris , HClにて pH ７. ５）にて洗
浄後、５ ml の高張液Ａに懸濁した。この際、菌数は約
４×108 cells ／mlとなるように調節した。２−メル
カプトエタノールを菌懸濁液１ ml あたり１５μl 加
え、３０℃にて３０分間インキュベートした。処理菌体
を遠心にて集め、高張液Ａにて２回洗浄し、２−メルカ
プトエタノールを完全に除去した。菌体を５ ml の高張
液に懸濁し、Zymolyase60000 （麒麟麦酒（株）社製）
を３ mg 加え、１時間インキュベートすると９９％以上
プロトプラスト化した。プロトプラスト形成率は懸濁液
を１滴ずつスライドグラス上に２個所のせ、片方に１０
％Ｎ−ラウロイルザルコシン・ナトリウム溶液を１μl
添加し、双方を検鏡比較することにより目算した。生成
したプロトプラストは５００×Ｇ、１０分間の遠心によ
り集めた。高張液Ａにて２回同様な遠心条件にて洗浄
後、プロトプラストを高張液Ａ５mlに懸濁し、同Ａ液に
て１０倍ずつ何段階かに希釈した。その ０．２ ml を
採取し、４５℃の溶融寒天（Yeast Nitrogen Base With
out Amino Acids (Difco社製品）に１％グルコース，
０．６Ｍ塩化カリウム，２％寒天を添加したもの）８ml
に混入し、あらかじめ固めてある同様の組成の寒天平板
培地（１５ml）上に重層した。この重層寒天平板上にジ
メチルスルホキシドをしみこませた抗生物質用ペーパー
ディスクを置き、３０℃で３日間培養した。培養後、ペ
ーパーディスクの周辺に再生出現したコロニーを採取・
検鏡し、大型細胞化したものを、常法により２回単一コ
ロニー分離をくり返し、精製した。ペーパーディスクを
置く代わりにジメチルスルホキシドを寒天再生培地にあ
らかじめ２．５％均一に含有させても同じ結果が得られ
た。
【０００９】(2) ０．５ mM 以下のマグネシウムを含む
培地を用いる大型細胞（倍数体）株の造成 実施例(1) と操作は全く同じで有るが、プロトプラスト
を再生させる寒天培地のマグネシウム濃度を低くした。
即ち、実施例(1) で培地構成分として用いたYeast Nitr
ogen Base Without Amino Acids のマグネシウム濃度は
該製品製造元の記述（Difco Manual, 第１０改訂版，１
１３６頁，Difco Laboratories Inc., Michigan, USA)
に従って溶解すると２．０３mMとなる。硫酸マグネシウ
ム(MgSO4 ・７H2O)を1/10量とした以外はDifco 社製品と
全く同じ組成の培地を自分で作り、これをプロトプラス
ト再生寒天培地の構成分として用いた。換言すればマグ
ネシウム濃度のみ０．２mMとなっている。このような寒
天培地でプロトプラストから再生させたコロニーには大
型細胞化したものがあった。これを前述と同様にして釣
菌・検鏡し、精製した。なお、低マグネシウム培地にて
ジメチルスルホキシドを添加しておくと、大型細胞株の
出現頻度は上昇した。
培地を用いる大型細胞（倍数体）株の造成 実施例(1) と操作は全く同じで有るが、プロトプラスト
を再生させる寒天培地のマグネシウム濃度を低くした。
即ち、実施例(1) で培地構成分として用いたYeast Nitr
ogen Base Without Amino Acids のマグネシウム濃度は
該製品製造元の記述（Difco Manual, 第１０改訂版，１
１３６頁，Difco Laboratories Inc., Michigan, USA)
に従って溶解すると２．０３mMとなる。硫酸マグネシウ
ム(MgSO4 ・７H2O)を1/10量とした以外はDifco 社製品と
全く同じ組成の培地を自分で作り、これをプロトプラス
ト再生寒天培地の構成分として用いた。換言すればマグ
ネシウム濃度のみ０．２mMとなっている。このような寒
天培地でプロトプラストから再生させたコロニーには大
型細胞化したものがあった。これを前述と同様にして釣
菌・検鏡し、精製した。なお、低マグネシウム培地にて
ジメチルスルホキシドを添加しておくと、大型細胞株の
出現頻度は上昇した。
【００１０】(3) 得られた大型細胞株の諸性質 (1) の方法によりプロトプラストを再生させて得られた
大型細胞株のうち、パン生地膨張試験、冷凍耐性に優れ
ていた株の１株をトルラスポラ・デルブルッキＳＡＮＫ
５１８８４（微工研菌寄第７８９６号）と命名した。同
様に０．５mM以下のマグネシウムを含む培地にてプロト
プラストを再生させることにより得られた大型細胞株の
うち、優れた性質の株をトルラスポラ・デルブルッキＳ
ＡＮＫ５１９８４（微工研菌寄第７８９７号）と命名し
た。これら菌株の細胞体積は表１および表２から明かの
如く、親株Ｙ−１３４−５に較べ約３倍大きく、細胞内
ＤＮＡ含量も約２倍となっている。
大型細胞株のうち、パン生地膨張試験、冷凍耐性に優れ
ていた株の１株をトルラスポラ・デルブルッキＳＡＮＫ
５１８８４（微工研菌寄第７８９６号）と命名した。同
様に０．５mM以下のマグネシウムを含む培地にてプロト
プラストを再生させることにより得られた大型細胞株の
うち、優れた性質の株をトルラスポラ・デルブルッキＳ
ＡＮＫ５１９８４（微工研菌寄第７８９７号）と命名し
た。これら菌株の細胞体積は表１および表２から明かの
如く、親株Ｙ−１３４−５に較べ約３倍大きく、細胞内
ＤＮＡ含量も約２倍となっている。
【００１１】
【表１】
【００１２】細胞の長軸および短軸は長軸を２ａ，短軸
を２ｂとし、５０ケの細胞について写真より計測し平均
値及び標準偏差を算出した。体積は細胞が完全な楕円球
と仮定し、公式Ｖ＝4/3 πab2 より計算した。
を２ｂとし、５０ケの細胞について写真より計測し平均
値及び標準偏差を算出した。体積は細胞が完全な楕円球
と仮定し、公式Ｖ＝4/3 πab2 より計算した。
【００１３】
【表２】
【００１４】仔牛胸腺ＤＮＡを標準とし、ジフェニルア
ミンを用いる比色定量にて測定した。 Ｙ−１３４−５
のＤＮＡ含量は約２３fg/cell （fg＝１０-15 g)。
ミンを用いる比色定量にて測定した。 Ｙ−１３４−５
のＤＮＡ含量は約２３fg/cell （fg＝１０-15 g)。
【００１５】大型化した株は胞子形成が良好であり、胞
子形成用寒天平板培地（１％酢酸カリウム，０．１％酵
母エキス，０．０５％グルコース，２％寒天）上、２日
間、３０℃にて培養すると多数の細胞が１ないし２ケ、
稀に３ケないし４ケの胞子を保有するようになった。こ
れら子嚢を含む菌体を集め、前記とほぼ同様な操作によ
りプロトプラスト化し、これを低張液に入れ破裂させる
ことにより胞子を得ることができる。この胞子を培養す
るともはや細胞は親株Ｙ−１３４−５とほぼ同じ大きさ
になっており、一倍体に戻ることが確認された。しかし
通常の培養を続ける限り、大型細胞株ＳＡＮＫ５１８８
４及びＳＡＮＫ５１９８４は細胞の大きさを維持する安
定な菌株であり、大規模培養が可能である。表３から明
かの如く、ＳＡＮＫ５１８８４及びＳＡＮＫ５１９８４
の生育速度（doubling time)はＹＰＤ培地、３０℃好気
的条件下で８４分であり、親株Ｙ−１３４−５に較べ遜
色なく、最終菌体収量も劣らない。
子形成用寒天平板培地（１％酢酸カリウム，０．１％酵
母エキス，０．０５％グルコース，２％寒天）上、２日
間、３０℃にて培養すると多数の細胞が１ないし２ケ、
稀に３ケないし４ケの胞子を保有するようになった。こ
れら子嚢を含む菌体を集め、前記とほぼ同様な操作によ
りプロトプラスト化し、これを低張液に入れ破裂させる
ことにより胞子を得ることができる。この胞子を培養す
るともはや細胞は親株Ｙ−１３４−５とほぼ同じ大きさ
になっており、一倍体に戻ることが確認された。しかし
通常の培養を続ける限り、大型細胞株ＳＡＮＫ５１８８
４及びＳＡＮＫ５１９８４は細胞の大きさを維持する安
定な菌株であり、大規模培養が可能である。表３から明
かの如く、ＳＡＮＫ５１８８４及びＳＡＮＫ５１９８４
の生育速度（doubling time)はＹＰＤ培地、３０℃好気
的条件下で８４分であり、親株Ｙ−１３４−５に較べ遜
色なく、最終菌体収量も劣らない。
【００１６】
【表３】
【００１７】更に、表４から明らかのごとく、炭素化合
物資化性はＳＡＮＫ５１８８４及びＳＡＮＫ５１９８４
とＹ−１３４−５は全く同じであった。 表４ 炭素化合物資化性 試験菌株：Ｙ−１３４−５，ＳＡＮＫ５１８８４および
ＳＡＮＫ５１９８４ 資化性有：グルコース，イヌリン，乳酸，Ｄ−マンニッ
ト，ラフィノース，Ｄ−ソルビット，Ｌ−ソルボース，
シュクロース，トレハロース 資化性無：Ｄ−アラビノース，Ｌ−アラビノース，セロ
ビオース，クエン酸，エリスリット，ガラクチット，ガ
ラクトース，ラクトース，マルトース，メレジトース，
メリビオース，α−メチル−Ｄ−グルコシド，ラムノー
ス，アドニット，Ｄ−リボース，サリシン，デンプン，
コハク酸，Ｄ−キシロース 。
物資化性はＳＡＮＫ５１８８４及びＳＡＮＫ５１９８４
とＹ−１３４−５は全く同じであった。 表４ 炭素化合物資化性 試験菌株：Ｙ−１３４−５，ＳＡＮＫ５１８８４および
ＳＡＮＫ５１９８４ 資化性有：グルコース，イヌリン，乳酸，Ｄ−マンニッ
ト，ラフィノース，Ｄ−ソルビット，Ｌ−ソルボース，
シュクロース，トレハロース 資化性無：Ｄ−アラビノース，Ｌ−アラビノース，セロ
ビオース，クエン酸，エリスリット，ガラクチット，ガ
ラクトース，ラクトース，マルトース，メレジトース，
メリビオース，α−メチル−Ｄ−グルコシド，ラムノー
ス，アドニット，Ｄ−リボース，サリシン，デンプン，
コハク酸，Ｄ−キシロース 。
【００１８】細胞の大きさ、細胞内ＤＮＡ含量から、得
られた大型細胞株ＳＡＮＫ５１８８４及びＳＡＮＫ５１
９８４は二倍体と結論した。その他の菌学的性質は一倍
体酵母のそれと一致するが（前記の N.J.W. Kreger-van
Rij, The Yeasts, ４３５頁参照）、胞子形成に際し偽
接合管を形成しないこと、および細胞がそのまま胞子嚢
に変換する点において異なる。
られた大型細胞株ＳＡＮＫ５１８８４及びＳＡＮＫ５１
９８４は二倍体と結論した。その他の菌学的性質は一倍
体酵母のそれと一致するが（前記の N.J.W. Kreger-van
Rij, The Yeasts, ４３５頁参照）、胞子形成に際し偽
接合管を形成しないこと、および細胞がそのまま胞子嚢
に変換する点において異なる。
【００１９】なお、一般に親株は培養の際、条件が悪い
と凝集し、集菌・脱水が不可能となることがある。一
方、大型化した細胞株ＳＡＮＫ５１８８４及びＳＡＮＫ
５１９８４には凝集性はほとんどなかった。
と凝集し、集菌・脱水が不可能となることがある。一
方、大型化した細胞株ＳＡＮＫ５１８８４及びＳＡＮＫ
５１９８４には凝集性はほとんどなかった。
【００２０】(4) 直接二倍体化の証明 ジメチルスルホキシドの存在下又は０．５ mM 以下のマ
グネシウムを含む培地でのプロトプラスト再生により生
ずる大型細胞株が、いわゆるプロトプラスト融合でな
く、細胞分裂の攪乱により生じた直接二倍体化であるこ
とは以下のようにして証明した。まずトルラスポラ・デ
ルブルッキＹ−１３４−５をエチルメタンスルホネート
処理の常法（石川辰夫編，微生物遺伝学実験法，195
頁，共立出版，東京，１９８２年）により、栄養要求変
異株を造成した。即ちトルラスポラ・デルブルッキＳＡ
ＮＫ５２１８４（Ade-Ura-) とＳＡＮＫ５２２８４ (Ar
g-Met-) の二重要求株である。これら菌株から栄養要求
解除（野生型表現形質）株は検出されず、復帰変異率は
１０-10 以下と推定される。この２株を培養集菌後、１
対１に混合し、(1) と同様にしてプロトプラストとし、
(2) の如き０．５mM以下のマグネシウムを含む寒天培地
及びこれに(1) の如く２．５％ジメチルスルホキシドを
均一に添加した培地にて再生させた。この際、培地中に
は各種栄養要求物をあらかじめ添加した。各要求物を加
えた寒天培地での再生コロニー数を表５Ａに示した。
グネシウムを含む培地でのプロトプラスト再生により生
ずる大型細胞株が、いわゆるプロトプラスト融合でな
く、細胞分裂の攪乱により生じた直接二倍体化であるこ
とは以下のようにして証明した。まずトルラスポラ・デ
ルブルッキＹ−１３４−５をエチルメタンスルホネート
処理の常法（石川辰夫編，微生物遺伝学実験法，195
頁，共立出版，東京，１９８２年）により、栄養要求変
異株を造成した。即ちトルラスポラ・デルブルッキＳＡ
ＮＫ５２１８４（Ade-Ura-) とＳＡＮＫ５２２８４ (Ar
g-Met-) の二重要求株である。これら菌株から栄養要求
解除（野生型表現形質）株は検出されず、復帰変異率は
１０-10 以下と推定される。この２株を培養集菌後、１
対１に混合し、(1) と同様にしてプロトプラストとし、
(2) の如き０．５mM以下のマグネシウムを含む寒天培地
及びこれに(1) の如く２．５％ジメチルスルホキシドを
均一に添加した培地にて再生させた。この際、培地中に
は各種栄養要求物をあらかじめ添加した。各要求物を加
えた寒天培地での再生コロニー数を表５Ａに示した。
【００２１】即ち、ＳＡＮＫ５２１８４及びＳＡＮＫ５
２２８４共、再生する。大型細胞形成培地に再生したコ
ロニーを拾い検鏡すると、かなりの割合で大型細胞株の
出現が認められる。この大型細胞株の要求性を調べると
表５Ｂにみる如くAde-Ura-又はArg-Met-のどちらかであ
り、プロトプラストが融合した場合期待される栄養要求
解除株は全く出現しなかった。
２２８４共、再生する。大型細胞形成培地に再生したコ
ロニーを拾い検鏡すると、かなりの割合で大型細胞株の
出現が認められる。この大型細胞株の要求性を調べると
表５Ｂにみる如くAde-Ura-又はArg-Met-のどちらかであ
り、プロトプラストが融合した場合期待される栄養要求
解除株は全く出現しなかった。
【００２２】
【表５】
【００２３】(A) プロトプラスト再生至適培地に要求
物を加え、プロトプラストよりの再生コロニー数を計
数。ＳＡＮＫ５２１８４（Ade-Ura-) 及びＳＡＮＫ５２
２８４（Arg-Met-) 共、再生している。 (B) 低マグネシウム濃度（０．２mM) 再生培地に要求
物等を加え、プロトプラストを再生させた。そのコロニ
ーを釣菌・検鏡し、大型細胞化した株の栄養要求性を調
べた。 注１ Ade ：アデニン，Ura ; ウラシル，Arg ：アルギ
ニン，Met ：メチオニンの略。 注２ Ade-Ura- :アデニン及びウラシル要求性，Arg-Me
t-：アルギニン及びメチオニン要求性，none：要求性無
し。
物を加え、プロトプラストよりの再生コロニー数を計
数。ＳＡＮＫ５２１８４（Ade-Ura-) 及びＳＡＮＫ５２
２８４（Arg-Met-) 共、再生している。 (B) 低マグネシウム濃度（０．２mM) 再生培地に要求
物等を加え、プロトプラストを再生させた。そのコロニ
ーを釣菌・検鏡し、大型細胞化した株の栄養要求性を調
べた。 注１ Ade ：アデニン，Ura ; ウラシル，Arg ：アルギ
ニン，Met ：メチオニンの略。 注２ Ade-Ura- :アデニン及びウラシル要求性，Arg-Me
t-：アルギニン及びメチオニン要求性，none：要求性無
し。
【００２４】
【発明の効果】参考例 (1) 大型細胞株ＳＡＮＫ５１８８４よりケーキ酵母の調
製 パン用酵母はケーキ状にして市販されている。ケーキ調
製に要する時間を大型細胞株ＳＡＮＫ５１８８４及び親
株Ｙ−１３４−５について比較試験した。ＳＡＮＫ５１
８８４とＹ−１３４−５を同じ条件下で培養した。即
ち、種・生酵母３５kgを１０トン培養槽に入れ、廃糖
蜜、尿素、第二リン酸ナトリウムを添加供給しながら温
度３０℃、 pH ５．０〜５．５、通気１v.v.m.にて１６
時間通気攪拌培養した。酵母菌体を遠心集菌し、４回洗
浄、濃縮して、酵母クリーム１０００リットル（生酵母
５２０kg含有）を得た。食塩溶液にて処理し回転真空脱
水機（デハイドレーター，Alfa-Laval社製）にてケーキ
酵母にした。表６に示すように回転真空脱水機の処理面
積８m2あたり、１時間に処理しうるクリーム酵母量はＹ
−１３４−５が１０００リットルであるに対し、ＳＡＮ
Ｋ５１８８４は２６００リットルであり単位面積・時間
あたり得られるケーキ酵母量は２．６倍となっている。
即ち、脱水に要する作業時間は1/2.6 と大幅に短縮され
た。
製 パン用酵母はケーキ状にして市販されている。ケーキ調
製に要する時間を大型細胞株ＳＡＮＫ５１８８４及び親
株Ｙ−１３４−５について比較試験した。ＳＡＮＫ５１
８８４とＹ−１３４−５を同じ条件下で培養した。即
ち、種・生酵母３５kgを１０トン培養槽に入れ、廃糖
蜜、尿素、第二リン酸ナトリウムを添加供給しながら温
度３０℃、 pH ５．０〜５．５、通気１v.v.m.にて１６
時間通気攪拌培養した。酵母菌体を遠心集菌し、４回洗
浄、濃縮して、酵母クリーム１０００リットル（生酵母
５２０kg含有）を得た。食塩溶液にて処理し回転真空脱
水機（デハイドレーター，Alfa-Laval社製）にてケーキ
酵母にした。表６に示すように回転真空脱水機の処理面
積８m2あたり、１時間に処理しうるクリーム酵母量はＹ
−１３４−５が１０００リットルであるに対し、ＳＡＮ
Ｋ５１８８４は２６００リットルであり単位面積・時間
あたり得られるケーキ酵母量は２．６倍となっている。
即ち、脱水に要する作業時間は1/2.6 と大幅に短縮され
た。
【００２５】
【表６】
【００２６】(2) 大型細胞株ＳＡＮＫ５１８８４の冷凍
耐性 上記の如く得られたケーキ酵母を用い、表７に示す配合
と工程でパン生地を作成し、−２０℃にて冷凍後８日目
および１９日目にとり出して解凍し、パン焼成を行なっ
た。 表７． 冷凍貯蔵−解凍後パン焼成体積及びその工程 ［配合］ 小 麦 粉 １００ 砂 糖 ４ 食 塩 ２ 生地改良剤 １．２ ショートニング ４ 酵 母 ６ 水 ６３ ［工程］ 混 捏 時 間：低速３分，中速３分，ショートニング 低速２分，中速５分，高速３分 捏 上 温 度：２８℃ 前 発 酵 ：３０℃，３０分→ガス抜き，成型 冷 凍：−３０℃，６０分急速冷凍，→−２０℃貯蔵 解 凍：２６℃，９０分 ホ イ ロ ：３８℃，湿度９０％，９０分 焼 成：２２０℃，２５分 結果を表８に示す。
耐性 上記の如く得られたケーキ酵母を用い、表７に示す配合
と工程でパン生地を作成し、−２０℃にて冷凍後８日目
および１９日目にとり出して解凍し、パン焼成を行なっ
た。 表７． 冷凍貯蔵−解凍後パン焼成体積及びその工程 ［配合］ 小 麦 粉 １００ 砂 糖 ４ 食 塩 ２ 生地改良剤 １．２ ショートニング ４ 酵 母 ６ 水 ６３ ［工程］ 混 捏 時 間：低速３分，中速３分，ショートニング 低速２分，中速５分，高速３分 捏 上 温 度：２８℃ 前 発 酵 ：３０℃，３０分→ガス抜き，成型 冷 凍：−３０℃，６０分急速冷凍，→−２０℃貯蔵 解 凍：２６℃，９０分 ホ イ ロ ：３８℃，湿度９０％，９０分 焼 成：２２０℃，２５分 結果を表８に示す。
【００２７】
【表８】
【００２８】＊１ ホイロは定容積の金属箱に入れて行
なう。箱上面より突出するパン生地の高さを測り、発酵
能の指標とする。 ＊２ 比容積は焼成パン体積を重量にて除した数値。表
８から明かの如く、ＳＡＮＫ５１８８４を用いた場合、
焼成パン体積は冷凍１９日後でも２１８７mlあり、親株
Ｙ−１３４−５による２０６５mlに勝った。
なう。箱上面より突出するパン生地の高さを測り、発酵
能の指標とする。 ＊２ 比容積は焼成パン体積を重量にて除した数値。表
８から明かの如く、ＳＡＮＫ５１８８４を用いた場合、
焼成パン体積は冷凍１９日後でも２１８７mlあり、親株
Ｙ−１３４−５による２０６５mlに勝った。
Claims (3)
- 【請求項１】トルラスポラ属に属する酵母のプロトプラ
ストをジメチルスルホキシドおよび／または０．５mM以
下のマグネシウムの存在下、再生させる事により栄養要
求性の人為的突然変異形質を染色体上に持たずに、染色
体が二倍体性を有する株を造成・分離してトルラスポラ
属に属する大型細胞酵母株を取得することを特徴とする
酵母の製法。 - 【請求項２】トルラスポラ属に属する酵母がトルラスポ
ラ・デルブルッキＹ−１３４−５（徴工研菌寄第９０５
号）である特許請求の範囲第１項記載の製法。 - 【請求項３】トルラスポラ属に属する大型細胞酵母がト
ルラスポラ・デルブルッキＳＡＮＫ５１８８４（微工研
菌寄第７８９６号）またはトルラスポラ・デルブルッキ
ＳＡＮＫ５１９８４（微工研菌寄第７８９７号）である
特許請求の範囲第１項または第２項記載の製法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3102750A JPH0771473B2 (ja) | 1984-10-18 | 1991-05-08 | トルラスポラ属大型細胞酵母の育種造成方法 |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59219049A JPH0646940B2 (ja) | 1984-10-18 | 1984-10-18 | トルラスポラ属大型細胞酵母 |
| JP3102750A JPH0771473B2 (ja) | 1984-10-18 | 1991-05-08 | トルラスポラ属大型細胞酵母の育種造成方法 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59219049A Division JPH0646940B2 (ja) | 1984-10-18 | 1984-10-18 | トルラスポラ属大型細胞酵母 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0523172A JPH0523172A (ja) | 1993-02-02 |
| JPH0771473B2 true JPH0771473B2 (ja) | 1995-08-02 |
Family
ID=26443430
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3102750A Expired - Lifetime JPH0771473B2 (ja) | 1984-10-18 | 1991-05-08 | トルラスポラ属大型細胞酵母の育種造成方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0771473B2 (ja) |
-
1991
- 1991-05-08 JP JP3102750A patent/JPH0771473B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0523172A (ja) | 1993-02-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Nagodawithana et al. | Yeast selection for baking | |
| US4318929A (en) | Process for obtaining new strains of yeast for bread-making and novel strains of yeast thus prepared | |
| EP1541671B1 (en) | Novel baker's yeast strains and bread using the same | |
| Trivedi et al. | Bakers' yeast | |
| US4547374A (en) | Saccharomyces species FD 612 and the utilization thereof in bread production | |
| US3394008A (en) | Process for the manufacture of bread with the aid of yeast | |
| US4643901A (en) | Yeast strains, method of production and use in baking | |
| JP5579209B2 (ja) | 改良型パン酵母及び該酵母を用いたパン類の製造方法 | |
| EP0878996B2 (fr) | Nouvelles levures de panification sensibles au froid | |
| EP3083956B1 (fr) | Nouvelles souches de levure de panification performantes sur pates non sucrees ou legerement sucrees | |
| EP0229976B1 (en) | Improved yeast strains, method of production and use in baking | |
| JPH0771473B2 (ja) | トルラスポラ属大型細胞酵母の育種造成方法 | |
| JPH11169180A (ja) | 冷凍生地耐性および高糖生地耐性実用パン酵母 | |
| US9872504B2 (en) | Bread yeast strains | |
| JPH09234058A (ja) | 新規酵母および該酵母を含有するパンの製造方法 | |
| JPH0646940B2 (ja) | トルラスポラ属大型細胞酵母 | |
| JP3821507B2 (ja) | パン酵母 | |
| JP2002541789A (ja) | 機能的に欠失されたｈｘｋ２遺伝子を含む酵母バイオマスの生産方法 | |
| JPH11243944A (ja) | 製パン用乾燥耐性実用パン酵母 | |
| JPH09511406A (ja) | 異化代謝産物非抑制性の基質限定性酵母菌株 | |
| JPH0116154B2 (ja) | ||
| US5543161A (en) | Yeast strain | |
| JPS58155039A (ja) | パン製造法 | |
| JP3055850B2 (ja) | パン酵母 | |
| Champagne et al. | Fermentative activity of baker's yeast cultivated on cheese whey permeate |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |