JPS6170984A - 組換え操作によつて製造されたペプチドを単離するための細菌細胞の機械的破壊方法 - Google Patents
組換え操作によつて製造されたペプチドを単離するための細菌細胞の機械的破壊方法Info
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- JPS6170984A JPS6170984A JP60191818A JP19181885A JPS6170984A JP S6170984 A JPS6170984 A JP S6170984A JP 60191818 A JP60191818 A JP 60191818A JP 19181885 A JP19181885 A JP 19181885A JP S6170984 A JPS6170984 A JP S6170984A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
ヨーロッパ特許第Ａ−０．０５２．８６１号には、粗換
え操作によって製造されたインターフェロン、とくにＩ
ＦＮ−αを単離するために細菌細胞を化学的に破壊する
方法が記載されている。その方法は以下の工程を特徴と
するものである。
え操作によって製造されたインターフェロン、とくにＩ
ＦＮ−αを単離するために細菌細胞を化学的に破壊する
方法が記載されている。その方法は以下の工程を特徴と
するものである。
（１） 遺伝子工学によって製造されたＩＦＮを含有
する細菌の懸濁液、とくに大腸菌懸濁液を、無機酸によ
ってＤＨ２，０〜２．５に調整し、ｌｌ１ｌ菌を死滅さ
せる。
する細菌の懸濁液、とくに大腸菌懸濁液を、無機酸によ
ってＤＨ２，０〜２．５に調整し、ｌｌ１ｌ菌を死滅さ
せる。
（２） 死滅した細菌の細胞を除去する。
（３） 得られたバイオマスを緩衝液、たとえばトリ
ス（２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−１゜３−プロ
パンジオール）十食塩中に再ｍ濁し、水酸化ナトリウム
溶液でＥＩＨ７，３に調整して細菌の細胞壁を破壊する
。
ス（２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−１゜３−プロ
パンジオール）十食塩中に再ｍ濁し、水酸化ナトリウム
溶液でＥＩＨ７，３に調整して細菌の細胞壁を破壊する
。
（４） 細菌細胞を除去したのち、溶液中に含まれて
いるインターフェロンを分離し、公知方法でさらに精製
する。
いるインターフェロンを分離し、公知方法でさらに精製
する。
インターフェロンのようなポリペプチドが機械的影響下
に置いたとき、不安定であることも知られている（プロ
シーデイングズ・オブ・ザ・ソサイアテイ・フォア・エ
クスベリメンタル・バイオロジー・アンド・メデイシン
（Ｐｒｏｃ、 ＳＯＣ，Ｅｘｐ。
に置いたとき、不安定であることも知られている（プロ
シーデイングズ・オブ・ザ・ソサイアテイ・フォア・エ
クスベリメンタル・バイオロジー・アンド・メデイシン
（Ｐｒｏｃ、 ＳＯＣ，Ｅｘｐ。
Ｂｉｏｌ、 Ｈｅｄ、） 、第１４６巻、２４９〜２５
３頁参照〕。しかも、このような機械的影響が、細菌細
胞め機械的破壊時に発生するｆＪＪ断力の結果として生
じる。このような理由から、遺伝子工学によって形成さ
れたポリペプチド、たとえばインターフェロンを単離す
る方法として、このポリペプチドを高収率に単離できる
細菌１１１胞壁の機械的破壊はこれまで知られていなか
った。
３頁参照〕。しかも、このような機械的影響が、細菌細
胞め機械的破壊時に発生するｆＪＪ断力の結果として生
じる。このような理由から、遺伝子工学によって形成さ
れたポリペプチド、たとえばインターフェロンを単離す
る方法として、このポリペプチドを高収率に単離できる
細菌１１１胞壁の機械的破壊はこれまで知られていなか
った。
したがって、本発明の目的は、組換え操作によって製造
されたポリペプチドを細菌細胞の機械的破壊によってａ
菌ｌｌｌ胞から抽出する改良方法の探究にあった。
されたポリペプチドを細菌細胞の機械的破壊によってａ
菌ｌｌｌ胞から抽出する改良方法の探究にあった。
本発明は、この目的が、組換え操作によって得られたポ
リペプチド、たとえば酸安定性インターフェロンを含有
する細菌を無機酸を用い公知方法で死滅させ〔たとえば
、ワルロイサーほか（に。
リペプチド、たとえば酸安定性インターフェロンを含有
する細菌を無機酸を用い公知方法で死滅させ〔たとえば
、ワルロイサーほか（に。
Ｈ，Ｗａｌｌａｕｓｓｅｒ ＆ Ｈ，５ｃｈａ＋ｉｄｔ
） ：殺菌、湯舟、貯蔵、化学療法一方法、活性物質
、試験方法（５ｔｅｒｉ Ｉ １ｓａｔｉｏｎ、 ０ｅ
ｓｉｎｒｅｋｔｉｏｎ、にｏｎｓｃｒｖ；ｅｒｕｎａ。
） ：殺菌、湯舟、貯蔵、化学療法一方法、活性物質
、試験方法（５ｔｅｒｉ Ｉ １ｓａｔｉｏｎ、 ０ｅ
ｓｉｎｒｅｋｔｉｏｎ、にｏｎｓｃｒｖ；ｅｒｕｎａ。
Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｉｅ−Ｖｅｒｆａｈｒｅｎ、
ＷｉｒｋｓｔｏＨｅ。
ＷｉｒｋｓｔｏＨｅ。
Ｐｒｕｆｕｎｇｓｖｅｒｆａｈｒｅｎ ） 、ゲオルり
・テイーメ争フエルラーク（Ｇｅｏｒａ Ｔｈ１ｅａ＋
ｅ Ｖｅｒｌａｇ） 、シュトウトガルト（Ｓｔｕｔｔ
ｌｌｌａｒｔ ） 、１９６７年、１４５〜１６１頁参
照〕、これを分離したのち、得られたバイオマスをρ８
２．０〜４．０の酸の水溶液、たとえば希ｊＪＡ酸のよ
うな無機酸または酢酸もしくはプロピオン酸のようなア
ルカン酸の水溶液に再懸濁し、細菌の細胞壁を発生させ
た剪断力により、たとえばホモゲナイザー好ましくはウ
ルトラータラツクス（Ｌｌｌｔｒａ−Ｔｕｒｒａｘ）型
ホモゲナイザーを用いて機械的に破壊し、ついで得られ
た懸濁液を中和したのち、細胞層を除去し、溶液中に存
在するポリペプチドを分離し、公知方法でさらに精製す
ることにより達成されることを発見し、完成されたもの
である。
・テイーメ争フエルラーク（Ｇｅｏｒａ Ｔｈ１ｅａ＋
ｅ Ｖｅｒｌａｇ） 、シュトウトガルト（Ｓｔｕｔｔ
ｌｌｌａｒｔ ） 、１９６７年、１４５〜１６１頁参
照〕、これを分離したのち、得られたバイオマスをρ８
２．０〜４．０の酸の水溶液、たとえば希ｊＪＡ酸のよ
うな無機酸または酢酸もしくはプロピオン酸のようなア
ルカン酸の水溶液に再懸濁し、細菌の細胞壁を発生させ
た剪断力により、たとえばホモゲナイザー好ましくはウ
ルトラータラツクス（Ｌｌｌｔｒａ−Ｔｕｒｒａｘ）型
ホモゲナイザーを用いて機械的に破壊し、ついで得られ
た懸濁液を中和したのち、細胞層を除去し、溶液中に存
在するポリペプチドを分離し、公知方法でさらに精製す
ることにより達成されることを発見し、完成されたもの
である。
組換え操作によって製造された酸安定性インターフェロ
ン、たとえばＩＦＮ−α（ａｒｔＪ）のようなα−イン
ターフエロンを単離するためには、本発明の方法をＤＨ
２，５〜３．５、好ましくはｐＨ２，５の希塩酸中また
は１％酢酸中で行うのがとくに有利である。
ン、たとえばＩＦＮ−α（ａｒｔＪ）のようなα−イン
ターフエロンを単離するためには、本発明の方法をＤＨ
２，５〜３．５、好ましくはｐＨ２，５の希塩酸中また
は１％酢酸中で行うのがとくに有利である。
細菌細胞壁を溶解するのに十分なホモゲナイザーの速度
および時間の長さはバイオマスの密度による。代表的な
バイオマス密度は約１．０３〜約１．０５である。細菌
細胞壁を溶解するには代表的にはホモゲイザーの速度は
約５０００〜約１００００ ｒ、ｐｉで、かつ時間は約
１分〜約１０分間である。而して、たとえば、バイオマ
ス密度１．０４の場合、ホモゲイザーの速度は望ましく
は約７０００〜８０００ｒｐＩｌｌで、時間は約２分間
である。
および時間の長さはバイオマスの密度による。代表的な
バイオマス密度は約１．０３〜約１．０５である。細菌
細胞壁を溶解するには代表的にはホモゲイザーの速度は
約５０００〜約１００００ ｒ、ｐｉで、かつ時間は約
１分〜約１０分間である。而して、たとえば、バイオマ
ス密度１．０４の場合、ホモゲイザーの速度は望ましく
は約７０００〜８０００ｒｐＩｌｌで、時間は約２分間
である。
また、場合によっては、沈殿剤たとえばポリエチレンイ
ミンを０．１〜０．５％の濃度で、ホモゲネーション侵
、中和前に添加するのが有利である。
ミンを０．１〜０．５％の濃度で、ホモゲネーション侵
、中和前に添加するのが有利である。
本発明の方法は、何よりも、実験室的規模の場合はＩＫ
Ａ−ウルトラータラツクス（Ｕ−１ｔｒａ−Ｔｕｒｒａ
ｘ） Ｔ ４５を用いて、大規模の場合にはディスパッ
クス・リアクター（口１ｓｐａｘ Ｒｅａｃｔｏｒ）
３−６／６を用いて実施するのが好ましい〔いずれもヤ
ング・ラント・クンケル・ケージ−（Ｊａｎｋｅ ＆に
ｕｎｋｅｌにＧ 、Ｄ−７８３１スタウフエン（Ｓｔａ
ｕｆｅｎ ）製）。
Ａ−ウルトラータラツクス（Ｕ−１ｔｒａ−Ｔｕｒｒａ
ｘ） Ｔ ４５を用いて、大規模の場合にはディスパッ
クス・リアクター（口１ｓｐａｘ Ｒｅａｃｔｏｒ）
３−６／６を用いて実施するのが好ましい〔いずれもヤ
ング・ラント・クンケル・ケージ−（Ｊａｎｋｅ ＆に
ｕｎｋｅｌにＧ 、Ｄ−７８３１スタウフエン（Ｓｔａ
ｕｆｅｎ ）製）。
ウルトラ・タラツクスＴ４５は分散装置で、羽根が環状
に配置されたスロットに対して高速で回転し、この著し
い乱流領域でバクテリアの細胞が押しつぶされる。バク
テリアの細胞を破壊するためには、ホモジナイズするメ
ジウムをとったビーカー内にこの装置を保持し、ポンプ
作用でメジウムを循環させる。
に配置されたスロットに対して高速で回転し、この著し
い乱流領域でバクテリアの細胞が押しつぶされる。バク
テリアの細胞を破壊するためには、ホモジナイズするメ
ジウムをとったビーカー内にこの装置を保持し、ポンプ
作用でメジウムを循環させる。
この装置の速度は約５０００〜約ｉ ｏｏｏ。
ｒｐｍであり、約１〜１０分後に溶解が完了する。
これに対し、ディスパックス・リアクター３−６／６ホ
モジナイザーは、自動誘導式の三段ウルトラ・タラツク
スであり、バクテリア細胞はすべて、一定の流速でホモ
ジナイズ空を通過させられる。その結果、均一に粉砕、
ホモジナイズされたバクテリアのプレバレージョンが得
られる。このディスパックス・リアクターの回転速度は
３．０００〜８．ＯＯＯｒｐｍ Ｆ、供給圧カバ排出口
部で大きくて約２バールである。
モジナイザーは、自動誘導式の三段ウルトラ・タラツク
スであり、バクテリア細胞はすべて、一定の流速でホモ
ジナイズ空を通過させられる。その結果、均一に粉砕、
ホモジナイズされたバクテリアのプレバレージョンが得
られる。このディスパックス・リアクターの回転速度は
３．０００〜８．ＯＯＯｒｐｍ Ｆ、供給圧カバ排出口
部で大きくて約２バールである。
約５０１の使用バイオマスを完全に溶解する時間は約１
〜１０分間である。
〜１０分間である。
第１図にディスパックス・リアクター３−６／６型ホモ
ジナイザ一全体の横断面を示す。図中、Ｆはホモジナイ
ズする材料供給室であり、Ｅは駆動シャフトＨ上スライ
ディング環状シールであり、Ｇはこの駆動シャフトの主
要ベアリングである。
ジナイザ一全体の横断面を示す。図中、Ｆはホモジナイ
ズする材料供給室であり、Ｅは駆動シャフトＨ上スライ
ディング環状シールであり、Ｇはこの駆動シャフトの主
要ベアリングである。
駆動シャフト上には３個の円筒状ローターＣが一列に配
置され−１これは、ホモジプイず−の外被壁内側に固定
され、相当する形状に作られた静止翼りとたがいにかみ
合っている。駆動シャフトの末端にはらせん状コンベヤ
ーＢが固定され、これは排出口部Ａに突出している。静
止翼を冷却するためには、冷却水の通路として導入口り
と排出口Ｋをもら、静止翼の周囲に拡がる冷却空が設け
られている。主要ベアリング上のスライディング環状シ
ールには、水導入口Ｊから冷却水が、好ましくは加圧下
たとえば１．５バールで供給される。円筒状のローター
は、二重ドラムもしくは三重ドラムまたは多重ドラムと
して構築され、ドラムの壁部は相当する静止翼の相対す
るドラム壁内の隙間に突出している。らせん状コンベヤ
ー８が駆動されると、ホモジナイズされる液体がロータ
ーと静止翼の間の隙間を通って流れ、ローターの高速回
転の結果、生じた剪断力によってバクテリアの細胞壁が
破壊され、ホモジナイズされた物質は排出口部Ａを通っ
てホモジナイザー外に出る。
置され−１これは、ホモジプイず−の外被壁内側に固定
され、相当する形状に作られた静止翼りとたがいにかみ
合っている。駆動シャフトの末端にはらせん状コンベヤ
ーＢが固定され、これは排出口部Ａに突出している。静
止翼を冷却するためには、冷却水の通路として導入口り
と排出口Ｋをもら、静止翼の周囲に拡がる冷却空が設け
られている。主要ベアリング上のスライディング環状シ
ールには、水導入口Ｊから冷却水が、好ましくは加圧下
たとえば１．５バールで供給される。円筒状のローター
は、二重ドラムもしくは三重ドラムまたは多重ドラムと
して構築され、ドラムの壁部は相当する静止翼の相対す
るドラム壁内の隙間に突出している。らせん状コンベヤ
ー８が駆動されると、ホモジナイズされる液体がロータ
ーと静止翼の間の隙間を通って流れ、ローターの高速回
転の結果、生じた剪断力によってバクテリアの細胞壁が
破壊され、ホモジナイズされた物質は排出口部Ａを通っ
てホモジナイザー外に出る。
原理的には、この方法は、細胞崩壊用の他の公知の機械
的方法、たとえば、生化学技術（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ
ｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ） ３５８ ｆ ｆ頁（
第２版、アカデミツクプレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒ
ｅｓｓ）１９７３）に記載された方法でも実施できる。
的方法、たとえば、生化学技術（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ
ｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ） ３５８ ｆ ｆ頁（
第２版、アカデミツクプレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒ
ｅｓｓ）１９７３）に記載された方法でも実施できる。
しかしながら、収率は低く、本発明の方法により、ウル
トラ・タラツクスＴ４５またはディスパックス・リアク
ター３−６／６を使用ずれば、供給したバイオマスに対
して、これまで知られた方法によるよりも高い収率で、
たとえばインターフェロンが得られる。これは、これま
で報告されている従来技術からは、全く予期できないも
のであった。
トラ・タラツクスＴ４５またはディスパックス・リアク
ター３−６／６を使用ずれば、供給したバイオマスに対
して、これまで知られた方法によるよりも高い収率で、
たとえばインターフェロンが得られる。これは、これま
で報告されている従来技術からは、全く予期できないも
のであった。
次に、本発明を実施例によってさらに詳細に説明するが
、これはいかなる意味でも、本発明を限定するものでは
ない。
、これはいかなる意味でも、本発明を限定するものでは
ない。
し
ヒトインターフェロンα−２を含有する大腸菌クローン
ＨＢ１０１／ｐＥＲ３３（ヨーロッパ特許出願箱Ａ−０
，１１５，６１３号参照）のバクテリア懸濁液のｐＨを
無機酸で２．０〜２．５に調整し、バクテリアを死滅さ
せる。バクテリアの死滅細胞を懸濁液から分離し、−２
０℃で低温凍結する。
ＨＢ１０１／ｐＥＲ３３（ヨーロッパ特許出願箱Ａ−０
，１１５，６１３号参照）のバクテリア懸濁液のｐＨを
無機酸で２．０〜２．５に調整し、バクテリアを死滅さ
せる。バクテリアの死滅細胞を懸濁液から分離し、−２
０℃で低温凍結する。
低温凍結したバイオマス２０Ｋｇ、バッチＡを８℃で１
％酢ｆｌｉ２５０１に懸濁した。バイオマスが完全に融
解したのち、三段ホモジナイズ−（ディスパックス３−
６／６）で分散させた。完全に分散された分解液に０．
１％ポリエチレンイミンを沈殿補助剤として加えた。つ
いで、５Ｎ水酸化ナトリウム溶液を用いてｐＨを７．５
に調整した。２時間抽出したのち、浸出されたバイオマ
スを、プレートセパレーター〔ウエストファリア（Ｗｅ
ｓｔｆａｌｉａ ） ）を用い通過速度１．５１／分で
分離した。澄明な液体からサンプルを採取し、インター
フェロンおよび蛋白質の含量の定量試験を行った。収ｆ
ｆｉ：４６．９ｘ１０６１．Ｕ、／バイオマス１ｇ。
％酢ｆｌｉ２５０１に懸濁した。バイオマスが完全に融
解したのち、三段ホモジナイズ−（ディスパックス３−
６／６）で分散させた。完全に分散された分解液に０．
１％ポリエチレンイミンを沈殿補助剤として加えた。つ
いで、５Ｎ水酸化ナトリウム溶液を用いてｐＨを７．５
に調整した。２時間抽出したのち、浸出されたバイオマ
スを、プレートセパレーター〔ウエストファリア（Ｗｅ
ｓｔｆａｌｉａ ） ）を用い通過速度１．５１／分で
分離した。澄明な液体からサンプルを採取し、インター
フェロンおよび蛋白質の含量の定量試験を行った。収ｆ
ｆｉ：４６．９ｘ１０６１．Ｕ、／バイオマス１ｇ。
ホモジナイザーのインターフェロ収量に対する影響を評
価するため、懸濁したバイオマスを分散前に採取し、ヨ
ーロッパ特許出願用Ａ−０，０５２，８６１号に従って
、ホモジネーション工程を行わずに抽出した。３Ｎ水酸
化ナトリウム溶液でｌ）Ｈを７．３に調整した。１時間
抽出したのち、実験室的遠心分離によって浸出バイオマ
スから分解液を分離した。上述したと同様にして、上澄
液からサンプルを採取し、インターフェロンおよび蛋白
質含量の定量試験を行った。
価するため、懸濁したバイオマスを分散前に採取し、ヨ
ーロッパ特許出願用Ａ−０，０５２，８６１号に従って
、ホモジネーション工程を行わずに抽出した。３Ｎ水酸
化ナトリウム溶液でｌ）Ｈを７．３に調整した。１時間
抽出したのち、実験室的遠心分離によって浸出バイオマ
スから分解液を分離した。上述したと同様にして、上澄
液からサンプルを採取し、インターフェロンおよび蛋白
質含量の定量試験を行った。
ヨーロッパ特許出願用Ａ−０，０５２，８６１号に従っ
た場合の収量：２５．３ｘ１０６１．Ｕ。
た場合の収量：２５．３ｘ１０６１．Ｕ。
／バイオマス１ｇ。
例２
バッチＢのバイオマスを用い、例１と同様に処理した。
［ｆｆｉ：２１．３Ｘ１０６１．ＬＪ、／バイオマスｇ
ヨーロッパ特許出願用Ａ−０，０５２，８６１号に従っ
た場合の収量：９．７ｘ１０６１．Ｕ。
た場合の収量：９．７ｘ１０６１．Ｕ。
／バイオマス１ｇ。
例３
バッチＣのバイオマスを用い、例１と同様に処理した。
収Ｅ： １３．８Ｘ１０６１ 、Ｕ、／バイオマス１ｇ
ヨーロッパ特許出願用Ａ−０，０５２，８６１号に従っ
た場合の収量：５．１ｘ１０６１．Ｕ。
た場合の収量：５．１ｘ１０６１．Ｕ。
／バイオマス１ｇ。
バッチＢＧ２４のバイオマス１．０００ｇを用い、これ
を希塩酸（ｐＨ２，５： ３７％塩酸４ｍを水で１０，
０ＯＯｄとした）１０．０００ｄ中にとり、ＩＫＡウル
トラ・タラツクスＴ４５を用いて分散させ、例１と同様
に処理した。
を希塩酸（ｐＨ２，５： ３７％塩酸４ｍを水で１０，
０ＯＯｄとした）１０．０００ｄ中にとり、ＩＫＡウル
トラ・タラツクスＴ４５を用いて分散させ、例１と同様
に処理した。
収ｆｆｉ：５０Ｘ１０６１．Ｕ、／バイオ？ス１９
第１図は、本発明によるバクテリア細胞の機械的破壊に
使用できる装置の一例、ディスパックス・リアクター（
Ｄｉｓｐａｘ−Ｒｅａｃｔｏｒ） ３−６ ／ ６型の
ホモジナイザーの断面図を示し、Ａ：供給液体の排出口
部、Ｂ：らせん状コンベヤー、Ｃ：円筒状ローター、Ｄ
＝静止翼、Ｅニスライディング環状シール、Ｆ：供給液
体導入部、Ｇ：主要ベアリング、Ｈ：駆動シャフト、Ｊ
：冷却用水導入口、ＫおよびＬ：静止翼用冷却水のそれ
ぞれ導入口、排出口である。
使用できる装置の一例、ディスパックス・リアクター（
Ｄｉｓｐａｘ−Ｒｅａｃｔｏｒ） ３−６ ／ ６型の
ホモジナイザーの断面図を示し、Ａ：供給液体の排出口
部、Ｂ：らせん状コンベヤー、Ｃ：円筒状ローター、Ｄ
＝静止翼、Ｅニスライディング環状シール、Ｆ：供給液
体導入部、Ｇ：主要ベアリング、Ｈ：駆動シャフト、Ｊ
：冷却用水導入口、ＫおよびＬ：静止翼用冷却水のそれ
ぞれ導入口、排出口である。
Claims (10)
- （１）遺伝子工学によつて製造されたポリペプチドを含
有する細菌細胞をｐＨ２．０〜４．０の酸の水溶液に懸
濁して機械的に破壊し、ついで得られた懸濁液中に存在
するポリペプチドを分離し、公知方法でさらに精製する
ことを特徴とする、組換え操作によつて製造されたポリ
ペプチドの単離方法 - （２）組換え操作によつて製造された酸安定性インター
フエロンを含有する細菌細胞を使用する特許請求の範囲
第１項記載の方法 - （３）組換え操作によつて製造されたα−インターフエ
ロンを含有する細菌細胞を使用する特許請求の範囲第１
項記載の方法 - （４）組換え操作によつて製造されたＩＦＮ−α２（ａ
ｒｇ）を含有する細菌細胞を使用する特許請求の範囲第
１項記載の方法 - （５）ｐＨ２．５〜３．５において実施する特許請求の
範囲第２項から第４項までのいずれかに記載の方法 - （６）細菌細胞は発生させた剪断力によつて破壊する特
許請求の範囲第１項から第５項までのいずれかに記載の
方法 - （７）細菌細胞はホモゲナイザーを用いて破壊する特許
請求の範囲第１項から第６項までのいずれかに記載の方
法 - （８）使用するホモゲナイザーは、ウルトラ−タラツク
ス（Ｕｌｔｒａ−Ｔｕｒｒａｘ）型のホモゲナイザー、
好ましくはデイスパツクス−リアクター（Ｄｉｓｐａｘ
−Ｒｅａｃｔｏｒ）３−６／６である特許請求の範囲第
７項記載の方法 - （９）使用する酸は、無機酸、または酢酸もしくはプロ
ピオン酸のようなアルカン酸である特許請求の範囲第１
項から第８項までのいずれかに記載の方法 - （１０）使用する酸の水溶液は、希塩酸（ｐＨ２．５）
または１％酢酸である特許請求の範囲第１項から第９項
までのいずれかに記載の方法
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3432196.9 | 1984-09-01 | ||
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