KR20230061788A - 폴리뉴클레오티드 혼합물 및 이를 함유하는 봉합사의 제조 방법 - Google Patents
폴리뉴클레오티드 혼합물 및 이를 함유하는 봉합사의 제조 방법 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20230061788A KR20230061788A KR1020210146376A KR20210146376A KR20230061788A KR 20230061788 A KR20230061788 A KR 20230061788A KR 1020210146376 A KR1020210146376 A KR 1020210146376A KR 20210146376 A KR20210146376 A KR 20210146376A KR 20230061788 A KR20230061788 A KR 20230061788A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- polynucleotide
- suture
- solution
- mixture
- suture containing
- Prior art date
Links
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 title claims abstract description 107
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 title claims abstract description 107
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 title claims abstract description 107
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 56
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 47
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 claims abstract description 37
- 239000008188 pellet Substances 0.000 claims abstract description 32
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 23
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 claims abstract description 19
- 235000019688 fish Nutrition 0.000 claims abstract description 19
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims abstract description 15
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 12
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims abstract description 9
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims abstract description 9
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 claims abstract description 7
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000000227 grinding Methods 0.000 claims abstract 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 26
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 12
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 7
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 claims description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 4
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 claims description 4
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 claims description 4
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims description 3
- 241000277331 Salmonidae Species 0.000 claims description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 36
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 24
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 abstract description 12
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 11
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 abstract description 7
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 abstract description 7
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 abstract description 7
- 238000000926 separation method Methods 0.000 abstract description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 6
- 230000011218 segmentation Effects 0.000 abstract description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 4
- 239000002994 raw material Substances 0.000 abstract description 3
- 241001391944 Commicarpus scandens Species 0.000 abstract description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 abstract description 2
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 abstract description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 abstract description 2
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 abstract description 2
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 abstract 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 17
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 10
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 8
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 7
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 7
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 6
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 6
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 6
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 5
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 4
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 239000008004 cell lysis buffer Substances 0.000 description 3
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 3
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 3
- 238000000635 electron micrograph Methods 0.000 description 3
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 3
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 description 3
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 2
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 2
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 2
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 2
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 2
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 2
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 210000005132 reproductive cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 1
- 241000252203 Clupea harengus Species 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100037601 P2X purinoceptor 4 Human genes 0.000 description 1
- 108010080192 Purinergic Receptors Proteins 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 238000001994 activation Methods 0.000 description 1
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 210000001612 chondrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000001700 effect on tissue Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 235000019514 herring Nutrition 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 210000004681 ovum Anatomy 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 230000008635 plant growth Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 1
- 230000037303 wrinkles Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/1003—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
- A61B17/00—Surgical instruments, devices or methods, e.g. tourniquets
- A61B17/04—Surgical instruments, devices or methods, e.g. tourniquets for suturing wounds; Holders or packages for needles or suture materials
- A61B17/06—Needles ; Sutures; Needle-suture combinations; Holders or packages for needles or suture materials
- A61B17/06166—Sutures
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L17/00—Materials for surgical sutures or for ligaturing blood vessels ; Materials for prostheses or catheters
- A61L17/06—At least partially resorbable materials
- A61L17/08—At least partially resorbable materials of animal origin, e.g. catgut, collagen
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
- A61B17/00—Surgical instruments, devices or methods, e.g. tourniquets
- A61B2017/00526—Methods of manufacturing
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Surgery (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
폴리뉴클레오티드(polyneucleotide) 혼합물 및 이를 함유하는 봉합사와 그 제조 방법이 개시된다. 어류의 알을 분쇄하여 분쇄액을 생성하는 단계; 상기 생성된 분쇄액에서 원심 분리를 이용하여 침전물을 생성하고 건조하여 펠렛(pellet)을 얻는 단계; 상기 얻어진 펠렛을 소정 용매에 녹여 용액을 생성하고, 생성된 용액의 펠렛을 분절하여 폴리뉴클레오티드를 제조하는 단계; 상기 제조된 폴리뉴클레오티드를 함유하는 봉합사를 제조하는 단계를 구성한다. 상술한 폴리뉴클레오티드 혼합물 및 이를 함유하는 봉합사의 제조 방법에 의하면, 초음파를 이용하여 폴리뉴클레오티드를 분절하도록 구성됨으로써, 기존의 분절 공정에서 첨가되던 초산/알코올이나 핵산 절단 효소를 첨가할 필요가 없으므로 핵산 절단 효소의 제거 공정이나 초산/알코올 등의 분리 공정 등과 같은 후속 공정이 필요치 않게 되는 효과가 있다. 이는 폴리뉴클레오티드의 생산 단가를 낮추고 이물질 추가 공정이 없어서 수율도 높아지는 효과가 있다. 아울러 높은 수율의 폴리뉴클레오티드를 이용하여 제작한 봉합사의 경우 피부 조직에 염증 반응을 유발하는 부작용을 제거할 수 있는 효과가 있다. 그리고 연어류의 알을 원료로 사용함으로써, 다량 수득이 가능하며, 핵산 함유량이 높고 결합 조직이 부드러워 조직 파쇄가 용이하다는 효과가 있다.
Description
본 발명은 폴리뉴클레오티드 혼합물(polynucleotide mixture) 및 이를 함유하는 봉합사의 제조 방법에 관한 것으로서, 구체적으로는 어류의 알에서 폴리뉴클레오티드를 분리하여 폴리뉴클레오티드 혼합물을 제조하는 방법 및 그 폴리뉴클레오티드 혼합물을 함유하는 봉합사를 제조하는 방법에 관한 것이다.
폴리뉴클레오티드(polyneucleotid)는 세포 표면의 아데노신 A2 수용체(A2 purinergic receptor)를 통해 세포를 자극하여 세포 내 다양한 신호 전달 경로를 활성화시킨다. 이러한 활성화 과정에 의해 섬유아세포, 연골세포 등 여러 유형의 세포 성장을 촉진시킬 수 있으며 VEGF(혈관내피세포 성장인자)의 분비를 촉진하여 주변 혈관의 생성을 자극할 수 있다.
이러한 자극은 다양한 조직 재생 효과를 유도할 수 있어서 폴리뉴클레오티드는 주사제 형태의 관절염 치료제나 상처 치료제와 같은 의약품이나 주름 개선 목적의 화장품 조성물 등의 제품으로 활용될 수 있다.
폴리뉴클레오티드는 DNA나 RNS 구성물로서 동물의 정소나 난소와 같은 생식 조직이나 정자(정액)이나 난자(알)와 같은 생식세포에 함량이 높다. 이에, 폴리뉴클레오티드 원료를 치료제나 화장품 등의 제품으로 사용하기 위해서 주로 연어, 참치, 청어 등의 어류의 생식 세포와 조직 그리고 식물의 생장 조직 등에서 폴리뉴클레오티드를 분리하고 있다.
그런데, 이러한 생식/생장 세포나 조직에서는 폴리뉴클레오티드 외에도 다양한 물질이 높은 비율로 혼재되어 있고, 이러한 생식/생장 세포나 조직을 수급하는 데에도 한계가 있다. 또한, 폴리뉴클레오티드를 분리하는 과정에서 높은 설비비가 뒤따르고 수율도 낮아 산업상으로서의 활용에는 상당한 난점이 있다.
특히나 피부 화장품의 용도로 사용할 경우에는 폴리뉴클레오티드의 분자량이 많아 피부 침투율이 낮다는 문제점도 있다. 그 특성을 유지하면서 그 물리적인 크기만을 줄여야 한다. 이를 위해 기존에는 초산이나 알코올을 첨가하거나 핵산분해효소를 이용하여 폴리뉴클레오티드를 추출해 내고 있지만, 다양한 공정이 뒤따르거나 핵산 절단 후 효소 제거 등의 많은 후속 공정이 이어져야만 하는 문제점이 있다.
기존의 폴리뉴클레오티드 추출 방식은 생산 단가와 수율의 면에서 적합하지 않다.
본 발명의 목적은 폴리뉴클레오티드 혼합물의 제조 방법을 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적은 폴리뉴클레오티드 혼합물을 함유하는 봉합사의 제조 방법을 제공하는 데 있다.
상술한 본 발명의 목적에 따른 폴리뉴클레오티드 혼합물의 제조 방법은, 알의 해동 과정(S101), 세포 분쇄 과정(S102), 세포의 화학적 용해 및 단백질 분해 과정(S103), 멸균 과정(S104), 폴리뉴클레오티드(polyneucleotid) 분리 과정(S105), 폴리뉴클레오티드 분절화 과정(S106), 폴리뉴클레오티드 혼합물을 함유하는 봉합사 제조 과정(S107)를 포함하도록 구성될 수 있다.
여기서, 상기 어류의 알은, 연어과 어류의 알이 될 수 있다.
그리고 알의 해동 과정(S101)은 - 20
의 온도에서 냉동 보관한 어류의 알을 냉장 상태에서 해동하도록 구성될 수 있다.
세포 분쇄 과정(S102)은 해동된 알 10g을 증류수 300 ml와 함께 분쇄기로 분쇄하여 알 분쇄액을 생성하도록 구성될 수 있다.
세포의 화학적 용해 및 단백질 분해 과정(S103)은 생성된 알 분쇄액을 셀 용해 완충액(cell lysis buffer)(2mM EDTA, 10mM Tris, 200mM NaCl, 0.2% Triton X-100, 100g/ml proteinase K)과 혼합하고, 해당 혼합 용액을 37
에서 1시간 동안 교반하고, 교반된 혼합 용액을 원심 분리하여 단백질 및 지방을 제거하고 상등액을 취하도록 구성될 수 있다.
멸균 과정(S104)은 상등액에 아세트산을 가하여 100
에서 20분간 반응시키고, 반응 후의 상등액을 원심 분리하여 침전물을 생성하고, 생성된 침전물을 건조하고, 건조 후 얻어지는 펠렛(pellet)을 멸균 증류수에 녹여 용해시키도록 구성될 수 있다.
폴리뉴클레오티드(polyneucleotid) 분리 과정(S105)은 용해에 의해 얻어지는 용액에 상기 용액의 양과 동량의 아이소프로판올(isopropanol) 및 NaCl 100 mM을 첨가하고 -20
에서 1시간동안 냉동고, 냉동된 용액을 원심 분리하여 침전물을 생성하고, 생성된 침전물을 상온에서 건조하여 펠렛을 얻고, 얻어진 펠렛을 멸균된 용출 완충액(elution buffer)에 녹이도록 구성될 수 있다.
폴리뉴클레오티드 분절화 과정(S106)은 펠렛이 녹은 용액을 4
로 유지하며 5초 간격으로 초음파 온/오프(on/off) 처리를 15 분 내지 1시간 동안 반복 분절하여 폴리뉴클레오티드를 얻고, 폴리뉴클레오티드 분절 후의 용액을 원심 분리하여 침전물을 생성하고, 생성된 침전물을 상온에서 건조하여 분절된 폴리뉴클레오티드로 구성되는 펠렛을 얻고, 분절된 폴리뉴클레오티드로 구성되는 펠렛을 멸균된 용매에 녹이도록 구성될 수 있다.
여기서, 100 bp 내지 200 bp의 염기 길이를 가지도록 폴리뉴클레오티드 를 분절하도록 구성될 수 있다.
폴리뉴클레오티드 혼합물을 함유하는 봉합사 제조 과정(S107)은 앞서 얻어진 폴리뉴클레오티드를 히알루론산염(hyaluronic acid)과 혼합하여 혼합 용액을 생성하고, 생성된 혼합 용액을 멸균 트레이(tray)에 담고 봉합사를 침습시켜 1-60분간 흔들어 혼합하여 반응시키고, 반응 후 24
내지 37
에서 1-4시간동안 건조하고, 건조된 봉합사를 EO가스를 이용하여 멸균한 뒤 봉합하여 보관하도록 구성될 수 있다.
한편, 위 제조 방법에 의해 제조되는 폴리뉴클레오티드 혼합물이 제공될 수 있다.
상술한 본 발명의 다른 목적에 따른 폴리뉴클레오티드 혼합물을 함유하는 봉합사의 제조 방법은, 어류의 알을 분쇄하여 분쇄액을 생성하는 단계;
상기 생성된 분쇄액에서 원심 분리를 이용하여 침전물을 생성하고 건조하여 펠렛(pellet)을 얻는 단계; 상기 얻어진 펠렛을 소정 용매에 녹여 용액을 생성하고, 생성된 용액의 펠렛을 분절하여 폴리뉴클레오티드를 제조하는 단계; 상기 제조된 폴리뉴클레오티드를 함유하는 봉합사를 제조하는 단계를 포함하도록 구성될 수 있다.
여기서, 상기 어류의 알은, 연어과 어류의 알이 될 수 있다.
그리고 상기 얻어진 펠렛을 소정 용매에 녹여 용액을 생성하고, 생성된 용액의 펠렛을 분절하여 폴리뉴클레오티드를 제조하는 단계는, 100 bp 내지 200 bp의 염기 길이를 가지도록 분절된 폴리뉴클레오티드 절편을 제조하도록 구성될 수 있다.
그리고 상기 제조된 폴리뉴클레오티드를 함유하는 봉합사를 제조하는 단계는, 상기 폴리뉴클레오티드가 제조된 용액을 히알루론산염(hyaluronic acid)과 혼합하여 혼합 용액을 생성하고, 상기 생성된 혼합 용액에 봉합사를 침습시켜 반응시키고, 반응 후 봉합사를 건조시켜 폴리뉴클레오티드를 함유하는 봉합사를 제조하도록 구성될 수 있다.
한편, 위 제조 방법에 의해 제조되는 뉴클레오티드 혼합물을 함유하는 봉합사가 제공될 수 있다.
상술한 폴리뉴클레오티드 혼합물 및 이를 함유하는 봉합사의 제조 방법에 의하면, 초음파를 이용하여 폴리뉴클레오티드를 분절하도록 구성됨으로써, 기존의 분절 공정에서 첨가되던 초산/알코올이나 핵산 절단 효소를 첨가할 필요가 없으므로 핵산 절단 효소의 제거 공정이나 초산/알코올 등의 분리 공정 등과 같은 후속 공정이 필요치 않게 되는 효과가 있다.
이는 폴리뉴클레오티드의 생산 단가를 낮추고 이물질 추가 공정이 없어서 수율도 높아지는 효과가 있다.
아울러 높은 수율의 폴리뉴클레오티드를 이용하여 제작한 봉합사의 경우 피부 조직에 염증 반응을 유발하는 부작용을 제거할 수 있는 효과가 있다.
그리고 연어류의 알을 원료로 사용함으로써, 다량 수득이 가능하며, 핵산 함유량이 높고 결합 조직이 부드러워 조직 파쇄가 용이하다는 효과가 있다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 폴리뉴클레오티드 혼합물 및 이를 함유하는 봉합사의 제조 방법의 흐름도이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 폴리뉴클레오티드 혼합물의 전기 영동 사진의 예시도이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 폴리뉴클레오티드 혼합물을 함유하는 봉합사의 전자현미경 사진의 예시도이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 폴리뉴클레오티드 혼합물을 함유하는 봉합사가 주입된 랫드 피부 조직의 H&E 염색 사진의 예시도이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 폴리뉴클레오티드 혼합물의 전기 영동 사진의 예시도이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 폴리뉴클레오티드 혼합물을 함유하는 봉합사의 전자현미경 사진의 예시도이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 폴리뉴클레오티드 혼합물을 함유하는 봉합사가 주입된 랫드 피부 조직의 H&E 염색 사진의 예시도이다.
본 발명은 다양한 변경을 가할 수 있고 여러 가지 실시예를 가질 수 있는 바, 특정 실시 예들을 도면에 예시하고 발명을 실시하기 위한 구체적인 내용에 상세하게 설명하고자 한다. 그러나, 이는 본 발명을 특정한 실시 형태에 대해 한정하려는 것이 아니며, 본 발명의 사상 및 기술 범위에 포함되는 모든 변경, 균등물 내지 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 각 도면을 설명하면서 유사한 참조부호를 유사한 구성요소에 대해 사용하였다.
제1, 제2, A, B 등의 용어는 다양한 구성요소들을 설명하는데 사용될 수 있지만, 상기 구성요소들은 상기 용어들에 의해 한정되어서는 안 된다. 상기 용어들은 하나의 구성요소를 다른 구성요소로부터 구별하는 목적으로만 사용된다. 예를 들어, 본 발명의 권리 범위를 벗어나지 않으면서 제1 구성요소는 제2 구성요소로 명명될 수 있고, 유사하게 제2 구성요소도 제1 구성요소로 명명될 수 있다. 및/또는 이라는 용어는 복수의 관련된 기재된 항목들의 조합 또는 복수의 관련된 기재된 항목들 중의 어느 항목을 포함한다.
어떤 구성요소가 다른 구성요소에 "연결되어" 있다거나 "접속되어" 있다고 언급된 때에는, 그 다른 구성요소에 직접적으로 연결되어 있거나 또는 접속되어 있을 수도 있지만, 중간에 다른 구성요소가 존재할 수도 있다고 이해되어야 할 것이다. 반면에, 어떤 구성요소가 다른 구성요소에 "직접 연결되어" 있다거나 "직접 접속되어" 있다고 언급된 때에는, 중간에 다른 구성요소가 존재하지 않는 것으로 이해되어야 할 것이다.
본 출원에서 사용한 용어는 단지 특정한 실시예를 설명하기 위해 사용된 것으로, 본 발명을 한정하려는 의도가 아니다. 단수의 표현은 문맥상 명백하게 다르게 뜻하지 않는 한, 복수의 표현을 포함한다. 본 출원에서, "포함하다" 또는 "가지다" 등의 용어는 명세서상에 기재된 특징, 숫자, 단계, 동작, 구성요소, 부품 또는 이들을 조합한 것이 존재함을 지정하려는 것이지, 하나 또는 그 이상의 다른 특징들이나 숫자, 단계, 동작, 구성요소, 부품 또는 이들을 조합한 것들의 존재 또는 부가 가능성을 미리 배제하지 않는 것으로 이해되어야 한다.
다르게 정의되지 않는 한, 기술적이거나 과학적인 용어를 포함해서 여기서 사용되는 모든 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가지고 있다. 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 것과 같은 용어들은 관련 기술의 문맥 상 가지는 의미와 일치하는 의미를 가지는 것으로 해석되어야 하며, 본 출원에서 명백하게 정의하지 않는 한, 이상적이거나 과도하게 형식적인 의미로 해석되지 않는다.
이하, 본 발명에 따른 바람직한 실시예를 첨부된 도면을 참조하여 상세하게 설명한다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 폴리뉴클레오티드 혼합물 및 이를 함유하는 봉합사의 제조 방법의 흐름도이다. 그리고 도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 폴리뉴클레오티드 혼합물의 전기 영동 사진의 예시도이고, 도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 폴리뉴클레오티드 혼합물을 함유하는 봉합사의 전자현미경 사진의 예시도이고, 도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 폴리뉴클레오티드 혼합물을 함유하는 봉합사가 주입된 랫드 피부 조직의 H&E 염색 사진의 예시도이다.
먼저 도 1을 참조하면, 본 발명의 일 실시예에 따른 폴리뉴클레오티드 혼합물 및 이를 함유하는 봉합사의 제조 방법은 알의 해동 과정(S101), 세포 분쇄 과정(S102), 세포의 화학적 용해 및 단백질 분해 과정(S103), 멸균 과정(S104), 폴리뉴클레오티드(polyneucleotid) 분리 과정(S105), 폴리뉴클레오티드 분절화 과정(S106), 폴리뉴클레오티드 혼합물을 함유하는 봉합사 제조 과정(S107)을 포함하도록 구성될 수 있다.
이하, 세부적인 구성에 대하여 설명한다.
알의 해동 과정(S101)은 냉동 보관 상태의 동물 알을 먼저 해동하는 과정이다. 여기서, 냉동 보관 상태는 약 - 20
의 온도로 냉동 보관될 수 있다.
알의 해동 과정(S101)은 약 - 20
의 온도에서 냉동 보관한 어류의 알을 1-3
정도의 냉장 상태에서 천천히 해동하도록 구성될 수 있다.
한편, 알은 연어과 어류의 알이 이용될 수 있다. 연어과의 알은 뉴클레오티드가 풍부하고 조직이 부드러워 분쇄가 용이한 장점이 있다. 또한 다량의 알을 얻는 것이 가능하므로 생산 단가의 절감에도 유리하다.
세포 분쇄 과정(S102)은 해동된 알을 물리적으로 분쇄하는 과정이다.
세포 분쇄 과정(S102)은 앞서 해동된 알 10g 당 증류수 300 ml와 함께 분쇄기로 고르게 분쇄하여 알 분쇄액을 생성하도록 구성될 수 있다.
세포의 화학적 용해 및 단백질 분해 과정(S103)은 세포 분쇄 과정(S102)을 거친 알 분쇄액을 화학적으로 용해시켜 단백질이나 지방과 같은 이물질을 제거하는 과정이다.
세포의 화학적 용해 및 단백질 분해 과정(S103)은 알 분쇄액을 셀 용해 완충액(cell lysis buffer)과 혼합하고, 해당 혼합 용액을 약 37
에서 약 1시간 동안 교반하도록 구성될 수 있다.
여기서, 화합적 용해를 위해 사용되는 셀 용해 완충액은 2mM EDTA, 10mM Tris, 200mM NaCl, 0.2% Triton X-100, 100g/ml proteinase K로 구성될 수 있다.
그리고 위 교반된 혼합 용액을 원심 분리하여 단백질 및 지방을 제거하고 폴리뉴클레오티드가 존재하는 상등액만 취하도록 구성될 수 있다.
멸균 과정(S104)은 화학적 용해 및 단백질/제거를 거친 상등액을 멸균하는 과정이다.
멸균 과정(S104)은 상등액에 아세트산을 가하여 약 100
에서 대략 20분간 반응시키도록 구성될 수 있다. 그리고 반응 후의 상등액을 원심 분리하여 침전물을 생성하고 건조하도록 구성될 수 있다. 그리고 나서, 건조 후 얻어지는 펠렛(pellet)을 멸균 증류수에 녹여 용해시키도록 구성될 수 있다.
폴리뉴클레오티드 분리 과정(S105)은 멸균 과정(S104)을 거친 후 폴리뉴클레오티드를 분리/추출하는 과정이다.
폴리뉴클레오티드 분리 과정(S105)은 앞서 멸균 증류수를 이용한 용해에 의해 얻어지는 용액에 이 용액의 양과 동량의 아이소프로판올(isopropanol) 및 NaCl 100 mM을 첨가하고 약 -20
에서 약 1시간동안 냉동하도록 구성될 수 있다.
그리고 그 냉동된 용액을 원심 분리하여 침전물을 생성하고, 그 침전물을 상온에서 건조하여 펠렛을 얻도록 구성될 수 있다.
이러한 펠렛은 뉴클레오티드만이 추출된 고순도의 펠렛으로서, 건조 상태의 뉴클레오티드이다.
이러한 건조 상태의 펠렛을 멸균된 용출 완충액(elution buffer)에 녹여 수화된 상태의 뉴클레오티드 복합체를 생성할 수 있다. 도 2는 폴리뉴클레오티드 분절화 과정(S105)을 통해 얻어진 폴리뉴클레오티드의 아가로오스 젤(agarose gel) 전기영동 사진을 나타낸다.
폴리뉴클레오티드 분절화 과정(S106)은 폴리뉴클레오티드 분리 과정(S105)에서 얻어진 수화된 상태의 뉴클레이드 복합체를 피부 내 흡수가 가능한 정도의 크기로 분절하는 과정이다.
폴리뉴클레오티드 분절화 과정(S106)은 펠렛 즉, 뉴클레오티드 복합체가 녹은 용액을 약 4
로 유지하며 약 5초 간격으로 15 분 내지 1시간 동안 초음파 온/오프(on/off) 처리를 하여 폴리뉴클레오티드를 분절하도록 구성될 수 있다.
이러한 과정을 통해 100 bp 내지 200 bp의 염기 길이를 가지도록 분절된 폴리뉴클레오티드 절편을 얻을 수 있다.
그리고 분절 후의 용액을 원심 분리하여 침전물을 생성하고, 그 침전물을 상온에서 건조하여 분절된 폴리뉴클레오티드로 구성되는 펠렛을 얻도록 구성될 수 있다.
그리고 그 분절된 폴리뉴클레오티드로 구성되는 펠렛을 멸균된 용매에 녹이도록 구성될 수 있다.
이처럼 초음파를 이용한 분절 방식을 이용하기 때문에 기존과 같이 초산, 핵산 분해 효소 등을 첨가한 후 이를 다시 분리하여 제거하는 일련의 후속 공정이 필요하지 않고, 수율도 더 높아지고 단가도 더 낮아지게 된다.
폴리뉴클레오티드 혼합물을 함유하는 봉합사 제조 과정(S107)은 앞서 생성된 분절 상태의 폴리뉴클레오티드 혼합물을 이용하여 봉합사를 제조하는 과정이다. 봉합사에 분절 상태의 폴리뉴클레오티드 혼합물을 함유시키면 피부 봉합 후 염증 반응이 줄어드고 조직 재생에도 탁월한 효과가 있다.
폴리뉴클레오티드 혼합물을 함유하는 봉합사 제조 과정(S107)은 폴리뉴클레오티드를 히알루론산염(hyaluronic acid)과 혼합하여 혼합 용액을 생성하도록 구성될 수 있다.
그리고 그 혼합 용액을 멸균 트레이(tray)에 담고 봉합사를 침습시켜 1-60분간 흔들어 혼합하여 반응시키도록 구성될 수 있다.
그리고 반응 후 24
내지 37
에서 1-4시간동안 건조하고, 건조 상태의 봉합사를 EO가스를 이용하여 멸균한 뒤 봉합하여 보관하도록 구성될 수 있다. 도 3은 본 발명에 의해 얻어진 폴리뉴클레오티드를 포함하는 봉합사의 전자현미경 사진을 나타낸다. 그리고 도 4는 폴리뉴클레오티드가 함유된 봉합사가 주입된 랫드(rat) 피부조직의 H&E 염색 사진을 나타낸다.
이상 실시예를 참조하여 설명하였지만, 해당 기술 분야의 숙련된 당업자는 하기의 특허청구범위에 기재된 본 발명의 사상 및 영역으로부터 벗어나지 않는 범위 내에서 본 발명을 다양하게 수정 및 변경시킬 수 있음을 이해할 수 있을 것이다.
Claims (10)
- 어류의 알을 분쇄하여 분쇄액을 생성하는 단계;
상기 생성된 분쇄액에서 원심 분리를 이용하여 침전물을 생성하고 건조하여 펠렛(pellet)을 얻는 단계;
상기 얻어진 펠렛을 소정 용매에 녹여 용액을 생성하고, 생성된 용액의 펠렛을 분절하여 폴리뉴클레오티드를 제조하는 단계를 포함하는 폴리뉴클레오티드 혼합물의 제조 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 어류의 알은,
연어과 어류의 알인 것을 특징으로 하는 폴리뉴클레오티드 혼합물의 제조 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 어류의 알을 분쇄하여 분쇄액을 생성하는 단계는,
상기 냉동 보관 상태의 어류의 알을 분쇄하여 분쇄액을 생성하도록 구성되는 것을 특징으로 하는 폴리뉴클레오티드 혼합물의 제조 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 얻어진 펠렛을 소정 용매에 녹여 용액을 생성하고, 생성된 용액의 펠렛을 분절하여 폴리뉴클레오티드를 제조하는 단계는,
100 bp 내지 200 bp의 염기 길이를 가지도록 분절된 폴리뉴클레오티드 절편을 제조하도록 구성되는 것을 특징으로 하는 폴리뉴클레오티드 혼합물의 제조 방법.
- 제1항의 제조 방법에 의해 제조되는 폴리뉴클레오티드 혼합물.
- 어류의 알을 분쇄하여 분쇄액을 생성하는 단계;
상기 생성된 분쇄액에서 원심 분리를 이용하여 침전물을 생성하고 건조하여 펠렛(pellet)을 얻는 단계;
상기 얻어진 펠렛을 소정 용매에 녹여 용액을 생성하고, 생성된 용액의 펠렛을 분절하여 폴리뉴클레오티드를 제조하는 단계;
상기 제조된 폴리뉴클레오티드를 함유하는 봉합사를 제조하는 단계를 포함하는 폴리뉴클레오티드 혼합물을 함유하는 봉합사의 제조 방법.
- 제6항에 있어서, 상기 어류의 알은,
연어과 어류의 알인 것을 특징으로 하는 폴리뉴클레오티드 혼합물을 함유하는 봉합사의 제조 방법.
- 제6항에 있어서, 상기 얻어진 펠렛을 소정 용매에 녹여 용액을 생성하고, 생성된 용액의 펠렛을 분절하여 폴리뉴클레오티드를 제조하는 단계는,
100 bp 내지 200 bp의 염기 길이를 가지도록 분절된 폴리뉴클레오티드 절편을 제조하도록 구성되는 것을 특징으로 하는 폴리뉴클레오티드 혼합물을 함유하는 봉합사의 제조 방법.
- 제6항에 있어서, 상기 제조된 폴리뉴클레오티드를 함유하는 봉합사를 제조하는 단계는,
상기 폴리뉴클레오티드가 제조된 용액을 히알루론산염(hyaluronic acid)과 혼합하여 혼합 용액을 생성하고, 상기 생성된 혼합 용액에 봉합사를 침습시켜 반응시키고, 반응 후 봉합사를 건조시켜 폴리뉴클레오티드를 함유하는 봉합사를 제조하도록 구성되는 것을 특징으로 하는 폴리뉴클레오티드 혼합물을 함유하는 봉합사의 제조 방법.
- 제6항의 제조 방법에 의해 제조되는 폴리뉴클레오티드 혼합물을 함유하는 봉합사.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020210146376A KR20230061788A (ko) | 2021-10-29 | 2021-10-29 | 폴리뉴클레오티드 혼합물 및 이를 함유하는 봉합사의 제조 방법 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020210146376A KR20230061788A (ko) | 2021-10-29 | 2021-10-29 | 폴리뉴클레오티드 혼합물 및 이를 함유하는 봉합사의 제조 방법 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20230061788A true KR20230061788A (ko) | 2023-05-09 |
Family
ID=86409210
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020210146376A KR20230061788A (ko) | 2021-10-29 | 2021-10-29 | 폴리뉴클레오티드 혼합물 및 이를 함유하는 봉합사의 제조 방법 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR20230061788A (ko) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100390529B1 (ko) | 2000-04-25 | 2003-07-04 | 동원산업 주식회사 | 참치정소로부터 핵산복합물질을 추출하는 방법 및 이방법에 의해 얻어진 핵산복합물질 |
| KR100986603B1 (ko) | 2008-01-17 | 2010-10-08 | 정래준 | 어류 정액 또는 알로부터 분리된 ｄｎａ 중합체 단편복합체 및 그의 제조방법 |
-
2021
- 2021-10-29 KR KR1020210146376A patent/KR20230061788A/ko not_active Application Discontinuation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100390529B1 (ko) | 2000-04-25 | 2003-07-04 | 동원산업 주식회사 | 참치정소로부터 핵산복합물질을 추출하는 방법 및 이방법에 의해 얻어진 핵산복합물질 |
| KR100986603B1 (ko) | 2008-01-17 | 2010-10-08 | 정래준 | 어류 정액 또는 알로부터 분리된 ｄｎａ 중합체 단편복합체 및 그의 제조방법 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3935938B2 (ja) | ▲ｉｉ▼型コラーゲンの調製法 | |
| Ohashi et al. | Molecular Cloning of cDNA and Analysis of Expression of the Gene for α-Glucosidase from the Hypopharyngeal Gland of the HoneybeeApis melliferaL. | |
| CN101607993B (zh) | 一种斑点叉尾鮰鱼皮胶原蛋白的提取工艺 | |
| US8337868B2 (en) | Stinging cells expressing an exogenous polynucleotide encoding a therapeutic, diagnostic or a cosmetic agent and methods compositions and devices utilizing such stinging cells or capsules derived therefrom for delivering the therapeutic, diagnostic or cosmetic agent into a tissue | |
| TW200403252A (en) | Improved method for the extraction and purification of collagen | |
| CN105263511A (zh) | 用于组织再生的包含胶原和prp的组合物 | |
| CN1202084A (zh) | 用于细胞核转移的静止细胞群体 | |
| JP2018523467A (ja) | 高純度コラーゲン粒子の製造及びその使用 | |
| CN103468771B (zh) | 一种从牛跟腱中提取胶原的方法 | |
| WO1997025435A9 (en) | Method for preparation of type ii collagen | |
| WO2006004173A1 (ja) | 生理的条件下でのウイルス粒子様構造体及びその形成方法 | |
| KR20130044195A (ko) | 어류 정소로부터 분리된 디엔에이 단편 혼합물을 포함하는 연골 재생용 조성물 | |
| EP2581446B1 (en) | Method for producing pentameric crp, pentameric crp-producing transgenic silkworm and method for constructing same, dna encoding canine monomeric crp and expression vector containing the dna | |
| KR20230061788A (ko) | 폴리뉴클레오티드 혼합물 및 이를 함유하는 봉합사의 제조 방법 | |
| CN103468663A (zh) | 一种蜗牛蛋白酶的提取方法 | |
| Mansour et al. | Physiological and biochemical investigations on egg stickiness in common carp | |
| CN115820552A (zh) | 细胞三维培养支架及其制备方法与应用 | |
| CN112391382B (zh) | 一种快速提取囊泡dna的方法 | |
| JP2024513901A (ja) | 培養した細胞からのタンパク質加水分解組成物及びその用途 | |
| JP6448294B2 (ja) | 形質転換ミミズの作成方法及び組み換えタンパク質の生産方法及び組み換えタンパク質の回収方法 | |
| RU2663132C1 (ru) | Способ получения низкомолекулярной днк высокой степени чистоты | |
| JPWO2002102845A1 (ja) | 絹フィブロイン由来機能性ポリペプチドの製造法及びその利用 | |
| CN113365672A (zh) | 使用超临界流体提取细胞外基质的方法及由此产生的用于组织再生的细胞外基质生物材料 | |
| CN105647911B (zh) | 一种快速高效提取哺乳动物耳组织基因组dna的方法 | |
| EP3852822B1 (en) | Process for the treatment of connective tissues of a mammal |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| E601 | Decision to refuse application |