HU193806B - Process for the mechanical digestion of bacterial cells for the isolation of peptides prepared by recombinant technics - Google Patents
Process for the mechanical digestion of bacterial cells for the isolation of peptides prepared by recombinant technics Download PDFInfo
- Publication number
- HU193806B HU193806B HU853309A HU330985A HU193806B HU 193806 B HU193806 B HU 193806B HU 853309 A HU853309 A HU 853309A HU 330985 A HU330985 A HU 330985A HU 193806 B HU193806 B HU 193806B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- acid
- bacterial cells
- interferon
- recombinant
- biomass
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/555—Interferons [IFN]
- C07K14/56—IFN-alpha
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/06—Lysis of microorganisms
- C12N1/066—Lysis of microorganisms by physical methods
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
A találmány olyan rekombináns módszerrel előállított, savval szemben stabil polipeptidek izolálására való eljárásra vonatkozik, amelynek során a baktériumsejteket vizes savoldat, jelenlétében, 2,0—4,0 pH mellett, mechanikai úton tárjuk fel.
Az EP-A-0.052.861 számú európai szabadalmi bejelentés a baktériumsejtek kémiai úton történő feltárását írja le rekombináns technikával előállított interferon, kiváltképpen IFN-α, izolálására. A szabadalmi bejelentésben az eljárást a következő lépések jellemzik:
1) A baktérium szuszpenziót — különösen E. coli szuszpenziót — amelyben a baktériumok a géntechnológiai eljárással előállított IFN-t tartalmazzák, ásványi savval pH= =2,0—2,5 értékre állítják be a baktériumok elölése céljából.
2) Az elölt baktériumokat elválasztják.
3) A kapott savanyú biomasszát egy pufferben, például trisz-(2-amino-2-hidroximetil-1,3-propándiol) és nátrium-klorid keverékében reszuszpendálják és pH-ját nátrium-hidroxiddal 7,3-ra állítják be, s ekkor a baktériumok sejtfala elroncsolódik.
4) A baktérium sejtek elválasztása után már csak az oldatban lévő interferont kell ismert módszerekkel elválasztani és tovább tisztítani.
Ismeretes továbbá, hogy a polipeptidek — ilyenek az interferonok — mechanikai behatásokkal szemben [lásd: Proceedings of the Society fór Experimental Biology and Medicine, 146, 249—253 (1974)] kevéssé stabilak. Ilyenfajta mechanikai behatások lépnek fel, ha a baktérium sejteket mechanikai úton roncsoljuk, a fellépő nyíróerő következtében. Ez okból máig sem volt ismert egyetlen olyan mechanikai feltárási módszer — baktérium sejtekre vonatkozóan — géntechnológiával előállított polipeptid — például interferonok — izolálása céljára, amelynek segítségével nagy kitermeléssel lehetett volna e polipeptidet izolálni.
Jelen találmánynak tehát az az alapfeladata, hogy rekombináns úton előállított polipeptideknek baktérium sejtekből való izolálása céljára olyan javított extrakciós eljárást találjon, amellyel a baktérium sejtek mechanikai úton nyithatók fel.
A találmány szerint e feladatot azáltal oldjuk meg, hogy valamilyen ásványi savval, ismert módszerekkel [lásd például: „Sterilisation, Desinfektion, Konservierung, Chemotherapie-Verfahren, Wirkstoffe, Prüfungsverfahren, dr. K. H. Wallhausser, prof. dr. H. Schmidt, Georg Thieme Verlag, Stuttgart, 1967, 145—161. oldal] elöljük a rekombináns technológiával előállított polipeptidet — 'például egy savakkal szemben stabil interferont — tartalmazó baktériumokat, ezután a baktériumokat elválasztjuk, majd a kapott biomasszát vizes sav-oldatban, melynek pH-ja 2,0—4,0, például egy olyan 2 ásványi savban, mint a hígított sósav, vagy vizes alkánsavban, mint az ecetsav vagy propionsav, reszuszpendáljuk, s ezután homogenizátor segítségével, előnyösen egy Ultra-Turrax típusú homogenizátorral, a baktériumok sejtfalát az itt fellépő nyíróerővel mechanikailag elroncsoljuk, ezt követően a kapott szuszpenziót semlegesítjük, a baktérium törmelékeket elválasztjuk, s a most már oldatban lévő polipeptidet ismert módszerekkel izoláljuk és tovább tisztítjuk.
Egy rekombináns technológiával előállított, savra nem érzékeny interferon, például egy a-interferon — ilyen az IFN-a2(arg) — izolálására a találmány szerinti eljárás különösen előnyös, ha azt pH=2,5—3,5 mellett, előnyösen pH=2,5 értékű híg sósavban vagy 1%-os ecetsavban végezzük.
Ezenkívül bizonyos esetekben előnyös lehet, ha homogenizálás után és a semlegesítés előtt az oldathoz valamilyen kicsapószert, például polietilén-imint adunk, 0,1—0,5% koncentrációban.
A homogenizátor fordulatszáma és a baktérium sejtek feltárásához szükséges idő az adott biomassza sűrűségétől függ. Ha a biomassza sűrűsége 1,03—1,05, úgy a homogenizátor fordulatszáma célszerűen 5.000— 10.000 ford/perc. Például egy 1,04 sűrűségű biomasszánál a homogenizátor fordulatszáma célszerűen 7.000—8.000 ford/perc és a feltárás ideje 2 perc.
Ha a találmány szerinti eljárás laboratóriumi méretekben történik, a legalkalmasabb készülék az IKA-Ultra-Turrax T 45, nagyobb méretek esetén a Janke-Kunkel cég (D-7813 Staiiten, NSZK) Dispax-Reactor 3—3/6 készüléke ajánlható.
Az Ultra-Turrax T 45 diszpergáló készülék, amelyben a magasfordulatszámú kés egy rés-koszorúval szemben forog és így a baktérium sejteket az erősen turbulens közeg szétvágja. A baktérium sejtek feltárásánál a készüléket a homogenizálandó anyagot tartalmazó főzőpohárban tartjuk, ahol az anyagot a szivattyúhatás keringteti. Ez esetben a fordulatszám körülbelül 5.000—10.000 törd/ /perc és a feltárási idő 1 —10 perc között van.
Ezzel szemben a Dispax-Reactor 3—3/6 egy háromlépcsős kényszerpályás Ultra-Turrax, azaz itt minden baktérium sejtnek azonos átfolyási sebességgel kell a homogenizáló kamrán átvándorolnia. Ilyen módon egyenletesen feltáródott baktérium homogenizátumot kapunk. A Dispax Reactor-ban a fordulatszám 3.000—8.000 ford/perc és a kifolyásnál a folyadék nyomása maximum 200 kPa (2 bar). Ezzel a homogenizátorral 1 —10 perc alatt 50 liter biomassza homogenizálható.
Az 1. ábrán a Dispax-Reactor 3—3/6 típusú homogenizátor keresztmetszetét mutatjuk be. Az ábrán F-el jelöljük a homogenizálandó anyag beadagolására szolgáló kamrát, E-vel jelöljük, a H hajtóműben lévő csúszógyürűs tömítést, G-vel jelöljük
-2193806 a hajtótengely főcsapágyát. A H hajtótengelyen egymásután három hengeralakú (C) rotor helyezkedik el, amelyek a megfelelően kiképzett státorokba nyúlnak be. A státorok a homogenizátor-ház belső falához vannak erősítve, A H hajtótengely végére van erősítve a B szállítócsiga, amely az A kifolyónyílásba nyúlik be. A státorok hűtésére szolgál a státorokat körülvevő hűtőkamra. A kamra hűtővízzel való ellátását szolgálja az L bevezető és K kivezető nyílás. A főcsapágyon lévő csúszógyűrűs tömítés hűtővízzel való ellátása a J víz-bevezető nyíláson történik, előnyösen megemelt — például 150 kPa (1,5 bar) — nyomás alatt. A hengeralakú rotorok kiképzése lehet kettősdob alakú, vagy hármas-, illetve többszörösdob alakú, s a dobok fala benyúlik a státorokon lévő közti tereknek megfelelő dobfalak közé. A homogenizálandó folyadék, amelyet a B csiga hajt be, átmegy a rotorok és státorok közti téren, ahol a rotorok gyors forgása következtében fellépő nyíróerő a baktériumok falát elroncsolja, majd a homogenizált anyag az A kifolyón hagyja el a homogenizátort.
Elvileg ez az eljárás más ismert mechanikus sejt feltáró módszerekkel is keresztülvihető, ahogy ez például a Biochemical Engineering [Academic Press (1973); második kiadás] 358. oldalán megtalálható. Azonban a kitermelés ekkor alacsonyabb. Míg ha a találmány szerinti eljárásban az Ultra-Turrax T 45 vagy a Dispax-Reactor 3—3/6 készüléket használjuk, nagyobb kitermelést kapunk, például interferon esetében — a beadagolt biomasszára vonatkoztatva — mint az eddig ismert eljárásokkal, ami a technika fent ismertetett állása alapján nem volt előre látható.
A következő példákkal közelebbről világítjuk meg a találmányt, anélkül azonban, hogy a találmány oltalmi körét e példákra korlátoznánk.
1. példa
Egy E. coli HB 101/pER33 klón (lásd az EP-A-0.115.613 számú európai szabadalmi bejelentést) baktérium szuszpenziójának — amelyben a baktériumok humán alfa2-interferont tartalmaznak — pH-ját ásványi savakkal 2,0—2,5 közé állítjuk be a baktériumok elölése céljából. Az elölt baktérium sejteket a szuszpenzióból elválasztjuk és —20°C-ra lefagyasztjuk.
Az A gyártási tételből 20 kg mélyfagyasztott biomasszát 250 liter 1%-os ecetsavban, 8°C-on feliszapolunk. Amikor a biomassza teljesen felolvadt, háromlépcsős homogeriizátorban (Dispax-Reactor 3—3/6) diszpergáljuk. A finoman diszpergált lizátumhoz kicsapási segédanyagként 0,1 %-os polietilén-imint adunk, majd a pH-értékét 5 n nátrium-hidroxid-oldattal 7,5-re emeljük. Két órás extrahálási idő után a kilúgozott biomasszát szeparátorban (Westfália) választjuk el, 1,5 1/perc átfolyási sebesség mellett. A· tiszta folyadékból próbákat veszünk és meghatározzuk interferon és protein tartalmukat. Kitermelés: 46,9X10® NE/g biomassza (NE= =nemzetközi egység).
Hogy a homogenizátor befolyását az interferon kitermelésre meg tudjuk ítélni, a feliszapolt biomasszából 500 ml-t kiveszünk a diszpergálás előtt és a homogenizálási lépés nélkül, az EP-A-0.052.861 számú európai szabadalmi bejelentés szerinti eljárással extraháljuk. A pH értéket 3 n nátrium-hidroxid-oldattal emeljük 7,3-ra. Egy órás extrakciós idő után a kilúgozott biomassza lizátumát laborátóriumi centrifugában derítjük. A felülúszóból, mint fent, próbákat veszünk hogy interferon és protein tartalmukat meghatározzuk.
Az EP-A-0.052.861 számú európai szabadalmi bejelentés szerinti kitermelés: 25,3X XlO6 NE/g biomassza.
2. példa
A B gyártási tétel biomasszájából az 1. példában leírtakkal azonos módon állítunk elő anyagot.
Kitermelés: 21,3X10® NE/g biomassza.
Az EP-A-0.052.861 szerinti kitermelés: 9,7χ106 NE/g biomassza.
3. példa
A C gyártási tétel biomasszájából az 1. példában leírtakkal azonos módon állítunk elő anyagot.
Kitermelés: 13,8X10® NE/g biomassza.
Az EP-A-0.052—862 szerinti kitermelés 5,1 XlO® NE/g biomassza.
4. példa
1.000 g biomasszát — melyet az 1. példában leírtakkal azonos módon állítunk elő — úgy dolgozunk fel, hogy 10.000 ml hígított sósavban (pH=2,5; 4 ml 37%-os sósav 10.000 ml-re feltöltve vízzel) vesszük fel és IKA-Ultra-Turrax T 45-el diszpergáljuk.
Kitermelés: 50X10® NE/g biomassza.
Claims (9)
1. Eljárás baktérium sejtekből rekombináns módszerrel előállított, savval szemben stabil polipeptidek, előnyösen interferon izolálására , azzal jellemezve, hogy a baktérium sejteket, amelyek a géntechnológiával előállított, savval szemben stabil polipeptidet, előnyösen interferont tartalmazzák, valamely sav vizes oldatában — pH=2,0—4,0 közöti — mechanikai úton elroncsoljuk és ezután a már szuszpenzióban lévő polipeptidet, előnyösen interferont ismert módszerekkel elválasztjuk és tovább tisztítjuk.
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás,azzal jellemezve, hogy rekombináns módszerrel előállított, savakkal szemben stabil interferon tartalmú baktérium sejteket dolgozunk fel.
-3193806
3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy rekombináns módszerrel előállított α-interferon tartalmú baktérium sejteket dolgozunk íel.
4. Az 1. igénypont szerinti eljárás,azzal jellemezve, hogy rekombináns módszerrel előállított IFN-a2(arg) tartalmú baktérium sejteket dolgozunk fel.
5. A 2—4. igénypontok szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a roncsolást pH= =2,5—3,5 között hajtjuk végre.
6. Az 1 — 5. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a baktérium sejteket a fellépő nyíróerő roncsolja el.
7. Az 1—6. igénypontok bármelyike szerinti eljár ás, azzal jellemezve, hogy a baktérium sejteket egy homogenizátorban roncsoljuk el.
8. Az 1—7. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy savként ásványi savat vagy alkánsavat, előnyösen az ecetsavat vagy propionsavat használunk.
9. A 8. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy vizes savoldatként hígított sósavat (pH=2,5) vagy 1%-os ecetsavat használunk.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19843432196 DE3432196A1 (de) | 1984-09-01 | 1984-09-01 | Neues mechanisches aufschlussverfahren von bakterienzellen zur isolierung von rekombinant hergestellten peptiden |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUT39471A HUT39471A (en) | 1986-09-29 |
| HU193806B true HU193806B (en) | 1987-12-28 |
Family
ID=6244436
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU853309A HU193806B (en) | 1984-09-01 | 1985-08-30 | Process for the mechanical digestion of bacterial cells for the isolation of peptides prepared by recombinant technics |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0173924B1 (hu) |
| JP (1) | JPH078238B2 (hu) |
| KR (1) | KR930002886B1 (hu) |
| AT (1) | ATE49231T1 (hu) |
| DE (2) | DE3432196A1 (hu) |
| DK (1) | DK165748C (hu) |
| ES (1) | ES8608038A1 (hu) |
| FI (1) | FI85979C (hu) |
| HU (1) | HU193806B (hu) |
| IE (1) | IE58521B1 (hu) |
| IL (1) | IL76264A (hu) |
| ZA (1) | ZA856640B (hu) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5196323A (en) * | 1985-04-27 | 1993-03-23 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Process for preparing and purifying alpha-interferon |
| US4675387A (en) * | 1985-07-26 | 1987-06-23 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Method for extracting protein with organic acid |
| US4734362A (en) * | 1986-02-03 | 1988-03-29 | Cambridge Bioscience Corporation | Process for purifying recombinant proteins, and products thereof |
| US5831022A (en) * | 1986-02-18 | 1998-11-03 | Hoffmann-La Roche Inc. | Purification of recombinant human IL-1α |
| US4801686A (en) * | 1986-09-04 | 1989-01-31 | Immunex Corporation | Purification of recombinant interleukin-1 |
| US5179199A (en) * | 1986-10-20 | 1993-01-12 | Genzyme Corporation | Protein purification |
| US4912200A (en) * | 1987-05-11 | 1990-03-27 | Schering Corporation | Extraction of granulocyte macrophage colony stimulating factor from bacteria |
| US4958007A (en) * | 1988-05-17 | 1990-09-18 | Schering-Plough Corp. | Extraction of human interleukin-4- from bacteria |
| EP1539798B1 (en) | 2002-09-06 | 2010-11-24 | Genentech, Inc. | Process for protein extraction |
| JP4779537B2 (ja) * | 2005-09-28 | 2011-09-28 | パナソニック株式会社 | 電気掃除機 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1432039A (en) * | 1972-11-10 | 1976-04-14 | Dai Nippon Sugar Mfg Co Ltd | Method of treating microorganisms |
| JPS5530834A (en) * | 1978-08-25 | 1980-03-04 | Nec Corp | Method of forming ohmic contact in semiconductor pellet |
| US4315852A (en) * | 1980-11-26 | 1982-02-16 | Schering Corporation | Extraction of interferon from bacteria |
| JPS57118798A (en) * | 1980-11-26 | 1982-07-23 | Schering Plough Corp | Obtaining of interferon solution |
| IT1167610B (it) * | 1982-01-19 | 1987-05-13 | Cetus Corp | Interfreron ibrido multiclasse, composizione farmaceutica che lo contiene e procedimento di produzione |
| WO1984002129A1 (en) * | 1982-11-22 | 1984-06-07 | Takeda Chemical Industries Ltd | Human immune interferon protein and process for its preparation |
-
1984
- 1984-09-01 DE DE19843432196 patent/DE3432196A1/de not_active Withdrawn
-
1985
- 1985-08-23 EP EP85110599A patent/EP0173924B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1985-08-23 AT AT85110599T patent/ATE49231T1/de not_active IP Right Cessation
- 1985-08-23 DE DE8585110599T patent/DE3575162D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1985-08-29 ES ES546528A patent/ES8608038A1/es not_active Expired
- 1985-08-30 DK DK396685A patent/DK165748C/da not_active IP Right Cessation
- 1985-08-30 KR KR1019850006323A patent/KR930002886B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1985-08-30 IE IE214185A patent/IE58521B1/en not_active IP Right Cessation
- 1985-08-30 HU HU853309A patent/HU193806B/hu not_active IP Right Cessation
- 1985-08-30 JP JP60191818A patent/JPH078238B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1985-08-30 IL IL76264A patent/IL76264A/xx not_active IP Right Cessation
- 1985-08-30 FI FI853324A patent/FI85979C/fi not_active IP Right Cessation
- 1985-08-30 ZA ZA856640A patent/ZA856640B/xx unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0173924A3 (en) | 1988-02-03 |
| JPS6170984A (ja) | 1986-04-11 |
| KR930002886B1 (ko) | 1993-04-12 |
| HUT39471A (en) | 1986-09-29 |
| JPH078238B2 (ja) | 1995-02-01 |
| ES8608038A1 (es) | 1986-06-01 |
| DK165748B (da) | 1993-01-11 |
| IE852141L (en) | 1986-03-01 |
| FI853324A0 (fi) | 1985-08-30 |
| IE58521B1 (en) | 1993-10-06 |
| FI85979C (fi) | 1992-06-25 |
| FI85979B (fi) | 1992-03-13 |
| IL76264A (en) | 1990-02-09 |
| DK396685D0 (da) | 1985-08-30 |
| DK165748C (da) | 1993-06-14 |
| ZA856640B (en) | 1987-05-27 |
| ES546528A0 (es) | 1986-06-01 |
| DE3432196A1 (de) | 1986-03-06 |
| IL76264A0 (en) | 1986-01-31 |
| EP0173924A2 (de) | 1986-03-12 |
| FI853324L (fi) | 1986-03-02 |
| DK396685A (da) | 1986-03-02 |
| ATE49231T1 (de) | 1990-01-15 |
| KR860002571A (ko) | 1986-04-26 |
| EP0173924B1 (de) | 1990-01-03 |
| DE3575162D1 (de) | 1990-02-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0052861B1 (en) | Extraction of interferon from bacteria | |
| HU193806B (en) | Process for the mechanical digestion of bacterial cells for the isolation of peptides prepared by recombinant technics | |
| Blobel et al. | Relation of ribonuclease and ribonuclease inhibitor to the isolation of polysomes from rat liver. | |
| FI79346B (fi) | Framstaellning av hyaluronsyra medelst bakteriekultur. | |
| JP2011177189A (ja) | アミノペプチダーゼ | |
| KR940005589B1 (ko) | 핵산 또는 엔도톡신의 제거제 및 제거방법 | |
| AU2002326884A1 (en) | Aminopeptidase | |
| Taylor et al. | Purification, crystallization and preliminary crystallographic study of neuraminidase from Vibrio cholerae and Salmonella typhimurium LT2 | |
| EP0125818A1 (en) | Cloned ovine growth hormone gene | |
| CN106496321B (zh) | 一种重组人卵泡抑素蛋白的纯化方法 | |
| Utsunomiya et al. | STUDIES ON THE FUNCTION OF INTRACELLULAR RIBONUCLEASES: V. Ribonuclease Activity in Ribosomes and Polysomes Prepared from Rat Liver and Hepatomas | |
| EP0342892A1 (en) | Extraction of human interleukin-4 from bacteria | |
| Deibler et al. | Enzymatic and nonenzymatic degradation of myelin basic protein | |
| Fullmer | Metabolic hydrolysis of collagen | |
| CN110607304A (zh) | 肝细胞生长因子的重组表达方法 | |
| WO2002095047A1 (en) | Acetate-free purification of plasmid dna on hydroxyapatite | |
| US20020037535A1 (en) | Use of mCRP to slow cell growth and to promote maturation of cells | |
| KR960013392B1 (ko) | 대장균에서 발현된 단백질 봉입체의 회수 방법 | |
| RU1077089C (ru) | Способ получения средства, обладающего иммуностимулирующим действием | |
| Samson et al. | The kinetics of colicin E3 induced fragmentation of Escherichia coli 16S ribosomal RNA in vivo | |
| XU et al. | Prokaryotic expression of Gly-Gln dipeptide and its bioactive analysis: A novel method for short peptide production | |
| Müller et al. | In vitro analysis of the bacterial protein export | |
| EP0468393A1 (en) | Process for the extraction and purification of human recombinant gamma interferon | |
| Hays et al. | [74] Phosphotransferase system from Staphylococcus aureus | |
| Borowicz | Cloning of the DNA fragments reflecting the open reading frame I and II of the I-18 C gene of Chironomus tentans. V. Identification of the bacterial colonies, containing the recombinant bluescript plasmids |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HU90 | Patent valid on 900628 | ||
| HMM4 | Cancellation of final prot. due to non-payment of fee |