JPS6170972A - 細胞培養法及び装置 - Google Patents

細胞培養法及び装置

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JPS6170972A
JPS6170972A JP60134451A JP13445185A JPS6170972A JP S6170972 A JPS6170972 A JP S6170972A JP 60134451 A JP60134451 A JP 60134451A JP 13445185 A JP13445185 A JP 13445185A JP S6170972 A JPS6170972 A JP S6170972A
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の背景 産業上の利用分野 本発明の技術分野は細胞培養することであり、特に被生
検（ｂ１ｏｐｓｉ＠ｄ　）　　細胞について細胞毒性の
検定を行う方法及び装置である。
従来の技術 同一の組織病理学（ｈｉｓｔｏｐｍｔｈｅｌｏｇｌｃａ
ｌ　）タイプのがん或はその他の異常細胞が、個々の患
者の間で特有の薬剤治療に対し広範囲の応答性を示すこ
とは知られている。微生物感染を管理するのに用いられ
る培養及び感度検定に類似した予測技術は、個々の場合
について有効な化学療法を選ぶ際に大きな助けとなる。
個々に取り扱われる抗がん薬剤養生法がなければ、一般
医は過去の経験又は類似の細胞病に関する報告によるか
或は試行錯課の方法によらざるを得ない。入手し得る抗
がん剤の数が増大しかつ投与量又は薬剤を変えるのに利
用できる時間がしばしば制限されることから、最適な養
生法を選ぶ仕−事は、予測検定の助けが無ければ極めて
困難になるＯ 数多くの予測系が提案された。例えば、エユーイングラ
ンドジャーナルオプメディスン（Ｎ＠ｙＥｎｇｌａｎｄ
　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｍｅｄｉａｉｎ＋ｅ　）　Ｓ
２９８巻１１３２１−１３２７頁（１９７８年）、サー
モン（Ｓａｌｍｏｎ　）　　等の「ヒト幹細胞の抗がん
薬剤に対する異る感度の定量」を参照のこと。代表的に
は、従来技術は生検標本からの単一細胞懸濁液を特有の
抗がん薬剤に暫時露呈させた後に軟質寒天中でクローニ
ングすることを含む。寒天培養技術に関するそれ以上の
詳細については、キャンサーリサーチ（Ｃａｎｃｅｒ　
Ｒｅｓ＠ａｒｃｈ　）　ｐ　９巻、５０５．１−５０５
６頁（１９７９年）、ビック（Ｂｕｉｃｌｃ　）等の「
ヒトの胆嚢の移行性細胞がんにおける細胞の寒天−メチ
ル七ル党−−クローン原生（Ｃ１，ｏｎｏｇ＠ｎｉｅ　
）検定の発達」及びキャンサー、５０巻、６９５−７０
１頁（１９８２年）、ホンホフ（Ｖａｎ　Ｈｏｆｆ　）
等の「軟質寒天培養におけるヒトの悪性−門直接りワー
ニング」をも参照のこと。
種々の困難が細胞毒性剤の異常細胞に対する効能を予測
する寒天培養研究の有用性を制約する。
被生検がん細胞の内、軟質寒天中で成長するのは小部分
だけである。例えば、骨髄腫標本からの細の平板培養効
率は異常ではない。これより、種々の薬剤を異る投与量
において比べる結果が満足すべき意味を有するためには
、数多くの細胞を必要　　　、とする。実際上、検定す
る程に大きな腫蕩を有するのは患者の内の６０％だけで
ある。また、寒天中で形成されるコロニーが最も悪性の
腫瘍細胞から誘導されないことも確かである。その°上
、寒天技法は、細胞を生理的溶液中に懸濁させる間に平
板培養する前の薬剤露呈を比較的・に短時間（すなわち
１時間）に典型的に制限す゛る。よって露呈技術もその
後の寒天中での成長も正確にｉま生体内の状態に似てい
ない。加えて、評価に要する時間は、治療調書を確立す
る必要がしばしば緊急であるのに比べて長い（すな”わ
ち１４〜３０日）。最後に、細胞フロニーを数えて薬剤
感度を測定することは、主観的になり、満足すべき程に
正確でなくかつ時間を消費することになり一得る。
化学治療の研究用に提案された別の予測系は、合成毛管
のマ）　ＩＪラックス作った人工器官で成長させた細胞
培養を使用することを包含する。インビトロ（Ｉｎ　Ｖ
ｉｔｒｏ、）、１６巻、２４６頁（１９８０年）、フォ
ートレス（Ｑｓａｒｔｌｅｓ　）　　等の「血液透析−
マトリックス潅流培Ｍ系：化学治療用活性腫瘍細胞を研
究する新しい技術」は、１つの抗がん剤の人工毛管系で
成長させたｍ癌細胞に対する効果について報告している
。薬剤に露呈させた後に培養細胞を毛管マトリックスか
ら取り出し、全細胞及び生存細胞、並びに軟質寒天にお
けるコロニー形成能及び成長について検定した。毛管培
養の。
レビューについては、全般的にはメソツヅインセルバイ
オロジー（Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｃａ１ｌ　Ｂｉｏｌ
ｏｇｙ　）、ＸＩＶ巻、９５ｉ０３頁（１９７６年）、
シュラツタ−（９ｅｈｒａｔｔ＠ｒ　）等の「′合成毛
管に関する細胞培養」を参照のこと。
上記のフォードレスが報告した化学治療活性を研究する
毛管技術は、寒天研究の有用性を制限する同じ問題の多
くをこうむりやすい◇フォートレス及び彼の共働者達は
、全細胞及び生存細胞を数えるために毛管系から細胞を
取り出さねばならなかった。実際上、細胞を毛管マトリ
ックスから損傷させないで取り出すことは困難な仕事で
ある。
典型的には、酵素処理によって細胞を毛管マトリックス
から取り出すが、この処理は生細胞よりも死細胞に有効
であり１定量的結果を得るのは困難であ゛る。その上、
酵素処理した後に培養が失われて再び使用することがで
きない。
加えて、毛管系は、また、多量め腫瘍細胞を必要とする
ことにも苦労する。代表的には、毛管を用いる検定は、
容器当り５００万□程度の細胞を必要とした。同時に一
組の細胞毒性の検定を実施するには、牛ダース又はそれ
以上の毛管容器（すな°　　わち、！、　ＯＯＯ万の細
胞）を使用しなければならない。これらの目的のために
生検資料から門接十分な腫瘍細胞を得ることは不可能で
あり、ゆえに広い範囲の毒性研究を試みることを望む分
析家は、初めに検定資料を成長させて−Ｎ尖きなコロニ
ーにしなければならない。かかるコロニーを成痰させる
ことは実行できないかもしれず、或は何カ月もかかり−
ｉ′、検定の予測的使用をひどく妨げる。
発明゛が解決しようとする問題点 従って、細ｌ！！毒性検定を行う二層良好な装置及び方
法の必要性が存在する。一層小型の資料、例えば、１０
０，０００又はそれ以下の程度の細胞で作動し、かつ正
確に細胞毒性を予測する検定装脱を見出し、かつがん治
療の分野で長く感じられてきた必要を満足させるものと
考える。
その上、千−培養系は容易に接種されるべきであり、か
つ細胞成長並びに薬剤露呈はヒトの環境によく似るべき
である。また薬剤感度は比較的短時間で簡単がつ正確な
方法により１かつ好ましくは、臨床医が特有の薬剤の効
能についての続みを培養をそこなうことなく得ることが
でき、イれによって多工程調書（すなわち、薬剤又は投
与量を変える）の効果を引き続いて測定することかもき
る方法で量化し得るべきことが重要である。　　゛米国
特許出願第４６へ６６９号において、本出願は広範囲め
臨床に適用できる簡単で感度のよい細胞毒性検定を開示
した。同出願で特許諸求した方法では、培養容器中の生
細胞の数はフルオレ七インの残率又は細胞膜による類似
の標識を測定して評価する０１つの好適な実施態様では
、培養細胞はフルオ四クロマシア（ｆｌｕｏｒｏｃｈｒ
ｏｍａｓｌｍ　）を通るフルオレ七インを蓄積させる。
これは発けいＨｐ　　（ヂ１ｎ、１ｍ’、１ｅ＊＊ｌｐ
　　）　ｊｔ　’ｒｌ　−Ｒ害＃　Ｌ−１寸　７　ル　
す゛じ　セインと脂肪族酸とのエステル等の非極性の発
けい光基質を細胞培養中に導入する際に起き°る。発け
い光基質は細胞膜の内部に入り込み、そこで酵素加水分
解され、フルオレセインを遊離して細胞に青色光下で明
るいけい光を放たせる。負の荷電分子である７／Ｓ／オ
レ七インは容易に正常Ｍ胞の細胞質膜を横切って拡散し
ないので、プ賞七スはフルオレセインの細胞内蓄積を引
き起こす。しかし、死細胞を発けい光基質で処理する場
合には、フルオレセインの細胞内蓄積は観測されない。
従って、容器内の細胞をけい光基質の導入に先立って薬
剤で殺したならば、基質の加水分解は細胞内のフルオレ
セイン蓄積を生じない。
本出願は、米国特許出願第４６へ６６９号の方法を用い
る培養装置についての好適な設計並びにそれを使用する
改良された調書（ｐｒｏｔｏｃｏｌ　）　　を開示する
。発明は、−面において少くとも１つの細胞成長面を包
含する容器から成り、かつ、好ましくけ容器に被生検組
織の未解離断片を接種することができ、これより腫３ｓ
（多くの腫瘍は細胞の不均一性を示すことがわかった）
の基本細胞組成を保つように構成される。酸素及び栄養
素の潅流（拡散及び／又は浸透）が細胞廃棄物の除去並
びに容器の三次元構造と組みあわされて、寒天中で成長
することができない腫瘍細胞でさえも装口内で生存し続
けることができるものとするようである。その上、フル
オレセイン検出技法の感度が容器を少い数の細胞で使用
できるものとし、これより結腸又は肺がん生検等の限定
された大きさの生検標本さえから同時の研究を可能にす
る。
好適な一実施態様において、容器は上部及び下部の本体
要素を一緒にクランプして細胞接種及び栄養素循環用の
キャビティを定めるシェルを形成することによって形成
する。ａｍ自体は上方及び下方層が境界をなす円筒形室
によってキャビティ内に固定する。該層は、好ましくは
、繊維状編成セルリース又は高分子メツシュ等の多孔質
材料である。細胞室と、膜と、シェルとをＯ−リングガ
スフットにより合わせてシールすることができる。
細胞接種及び流体通率用の口を容器内に配置する。
発明は、別の面において、被牢検細胞を培養し・酸素化
栄養素を供給し、発けい光基質を導入し、抗がん剤を導
入し、２かつ放出されるけい光を測定する装置及び方法
を包含する細胞毒性の研究を行う系及び調書を包含する
。細胞毒性は、抗がん剤←露呈させる前及び後に容器の
流出物中のけい光を測定することにより、かつまた容器
中の・細胞の直接光度比較を行うことによっても求める
ことができる。
好適な一方法では、生検試料を機械的に裂いて一層小さ
な断片とし、かつ媒質中に懸濁させて悪性細Ｂ８から正
常細胞のほとんどを分離する。腫瘍細胞は密度勾配遠心
分離すること←よって更に精製することができる。
次いで、腫瘍の集合体を容器中に接種し、かつ容器内で
栄養培地により培養した後に、発けい光基質を導入し、
生成するけい光を蓄積させる。−＋１’Ｚ　ｔａｍ　轡
ｓ＞　ｔＡ’ｉ　Ｌ−３！１　４ｂ　　ｒ−ＪＬ　ヒｔ
ｒｓ　　ｊｅ　ｌｅｔ　　を陰さ−ｈｓ　１）ｊＦ通常
の栄養素潅流が続いている。次いで、試験されるべき治
療剤を（直接に或は潅流により）細胞室に導入し、かつ
流出物の放出するけい光量の変化をしばらく９間（すな
わち、約１５分〜２時間）舞視することができる。遅延
（すなわち、放射）効果を示す薬剤の場合、細胞培養又
はその流出物の速度論及びけい光の一層詳細な記録を、
発けい光基質による一連の潅流の各々の後で得ることが
できる。種々の発けい光基質及び温度変化を採用して一
層速い又は遅い結果を得ることができる。
代りに、容器に透明な視界口を設け、けい光の変化を光
度分析によって直接測定することができる。１つの実例
を挙げる実施態様では、細胞室を単色光で照らし、次い
で整合（ｍａｔｃｈｉｎｇ　）　　光フィルターを通し
て写真を取って生細胞のけい光のみを捕える。写真のネ
ガの光学濃度が細胞内のフルオレセインの簡単で正確な
Ｒ度を与え、よって、薬剤の細胞毒性効果についてのパ
ラメーターが試験される。
本明細書に開示する方法は、臨床医が薬剤の長期の露呈
、種々の組合せ及びプラグラムによるスケジュールの効
果について試験することを可能にする。加えて、薬剤が
否定の細胞毒性結果を与える場合には、次の薬剤試験の
ために容器及び培養を再循環させることができる。
発明に従って個々の細胞培養に対する効能について試験
をすることができる種々の治療又は化学薬剤は次を含む
ニアドリアマイシン、マイトマイシン、アクチノマイシ
ン、ネオマイシン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、
クロラムプシル、シスープラチナム、６−メルカプトプ
リン、メトトレキセイト、シフ田ホスファミド翫メルフ
アレン１カルムスチン、メチルエステルＤＯＰ人、ＢＣ
ＮＵ。
ＤＴｒＣｓ　５−ｙｈ：ｔｕｆｙラシ１％ｐ、ｍ　−Ａ
ＭＳＡ％　Ｙイトキサントａン、メチ／Ｓ／ＧＡＧ％ア
シビシン、チミジン、ホルモン、抗体、プ党スタグラン
ジン、リン７オカイン並びにＸ＠或は入手し得るように
なるその他の薬剤。
次に、発明をいくつかの好適な実施態様に関連して説明
する。しかし、特許請求の範囲及び精神から逸脱するこ
となく種々の変更及び変更態様を行い得ることは明らか
であると思う。例えば、ギプコ（Ｇｉｂｅｓ　）社、そ
の他等の会社から市販される多種類の成長培地を栄養素
として用いることができる。これらの培地はダルベッコ
ズモディ７アイドイーグルメデエーム（Ｄｕｌｂ＠ｃｃ
ｏ’ｓ　ＭｏｄｉｆｉｅｄＥａｌ（１＠Ｍ＠ｄｉｕｍ）
　（ＤＭＩＭ　）　、ａ　ｘ　ｆ）　Ｗ　＃パークメデ
ューム（１Ｌｏｓｖｅｌｌ　Ｐａｒｋ　Ｍ＠ｄｉｕｍ　
）　（ＲＰＭＩ　）、ミニマルイーグルメデエーム（Ｍ
ｉｎｉｍｍｌ　Ｋｍｇｌ・Ｍ・ｄｉｕｍ　）（ＭＥＭ）
等の名称で販売されており、典型的にはアミノ酸、塩、
ビタミン、血清、その他の栄養素から成る。代りに、臨
床用途においては、更に試験を受ける薬剤への生体内ｍ
呈に似るために被生検患者からの血清を成長培地の全部
又は一部に用いることが好ましい。その他の付加物は、
同種（ａｔｌｔｏｌｅｇｏｍｓ　）　　又は異種（ｈ＠
ｔｅｒｏｌｏｇ…）器官、軟質寒天、血漿凝塊からのＸ
ｌｓ照射した供給細胞を包含することができる。
その上、本発明の主要な目的は、がん細胞の化学治療剤
に対する応答性を予測する方法及び装置を提供すること
であるが、その他の用□途もまた有益であることがわか
るであろう。例え□ば、その他のｍ胞異常に対して薬剤
を試験することができ、かつ方法及び装置を、また、薬
剤の非がん細胞に対する作用を化学治療の特有の過程が
患者の内″に！１き起こす副作用の尺度として評価す□
′るのに使用することもできる。
第１図に本発明による培養容器１ｏを示す。該容器１０
は上部シェル要素１２と下部シェル要素１４とを有し、
これらは合わされてナツト１６とボルト１８とで一緒に
して締めつけられる。シェル要素１２．１４のキャビテ
ィ内に細胞室２ｏを中空の円筒形要素１８と、それぞれ
上部及び下部膜２２．２４とによって形成する。膜２２
．２４及び中空円筒形要素１８の縁を、それぞれ上部及
び下部エラストマー〇−リングガスケット′２６．２８
によってシェルにシールする。
第１図に及び第２図の断面図により詳細に示すように、
下部シェル要素１４における入口３ｏ及・び出口３２は
栄養素運搬流体のキャビティへの及びからの通過を可能
にする。上部シェル要素における出口３４はキャビティ
からの空気抜きを可能にし、かつまた栄養培地の代りの
出口としても働く。中空円筒形要素１８における口３６
及び５８をそれぞれチューブ４０及び４２に接続させる
。
該チューブは、容器１０を一緒にして締め付ける際に下
部シェル要素１４のスロット４４を通り抜ける。口３６
．３８は細゛胞室２０に直接−立入る点として働き、か
つ典型的には用いられていない場合には隔壁プラグ（図
示せず）によっておおわれる。キャビティ４８の上部面
４６は、好ましくは、凹面形成は円錐形でガス抜きを助
ける。
容器１０の平断面図を第３図に示す。第５図は細胞室２
０の頂部を定める上部膜２２を示す。好適な一実施態様
では多孔質膜２２はティーバッグが作られる材・料等の
マット、状（ｍａｔｔ＠ｄ　）又は織繊維状セルロース
にすることができる。代りに、ろ紙又ハ合成メツシュ、
例えばナイ四ン、セルａ　−スアセテート又はシリコン
ポリカーボネート織物を使用してもよい。非解離の生検
断片を接種に使しかし、単一細胞の懸濁液を用いる場合
、より小さい孔径、例えば５ミク冑ン又はそれ以下の程
度が好ましい。合成メツシュを容５１０の膜２２．２４
として用いる場合には、組立てる前に膜に寒天、コラー
ゲン、フィブロネクチン又はゼラチン等の物質を塗被し
、及び／又は膜を夜通し血清中に浸漬して接種される生
検細胞との一層良好な相容性を確保することが有利であ
る。栄養素海流は　　□ぜん動ポンプ又は重力流れによ
って行う。
第４及び５図は本発明に従う別の培養容器５０を−示す
もので、上部シェル要素１２に透明な視界窓５２を有す
る。第５図の断面図に示すように、容器５０は第１〜３
図の容器１０に類似した構造を有し、キャビティを定め
る上部及び下部シェル要素１２．１４を含み、キャビテ
ィ内に中空シリンダー１８と、膜２２．２４と、ガスケ
ット２６．２８とで形成される細胞室２０が収まってい
る。
入口３０、出口３２．３４、口３６．３８は、構造が本
質的に第１−２図中の同一番号の要素と同じであり、か
つ同じ機能を果す。
第６図に第４−５図の容器を用いる系６０を示す。該第
６０は容器５０の窓５２を通して照らす。
好ましくは青色単色光の光源６２を有する。容器５０か
らの光はフィルター６４を通過する。該７　　゛イルタ
ー６４は、好ましくは整合青色フィルターで、かつ青色
波長を吸収して緑色がかったけい光だけを通過させる。
けい光は低倍率（ｌ　ｏｗ−ｐｏｖｒｒ　）顕微鏡に装
着したカメラ６６によってとらえられかつ光濃度計６８
によりて処刑されて検定手順の各工程において細胞生存
能力測定を与える。カメラ６６は静止写、真をとり、そ
れの・ネガを光濃度計６８によって分析することができ
、或は、代り６に、カメラ６６と計量器６８とを完全自
動化作動の高速ビデオ走査及び電子処理加工装置として
形成することもできる。第７ａ及び７ｂ図は第６図の系
を採用した検定の結果を示す。加えて、写真の計算機走
査は細、胞の増殖又は死を客観的に評価すべきパラメー
タを与える。
本発明に従って細胞毒性検定を行う典型的な調書ば、生
検資料を１６ゲージステンレススチールメツシユに通し
てこして容器に接種するのに適当な断片を得ることから
始まる。酵素抽出及び単一細胞懸濁液を用いる必要はな
い。こす過程を必要な通りに繰り返すことができ、およ
そα２ｍ−程度の、資料断片を得る。
次いで、断−片をＲＰＭＩ−１６４０培地等の培地中０
℃で約５、分間デカントする。培地において、非凝集の
正常細胞（すなわち、赤血球、リンパ球、マク０７アー
ジ）・が出没み懸濁液を形成し、悪性細胞の集合を沈殿
物層に集めることができる。デカンテーションの手順を
更に２度繰り返す。典型的には、沈殿物は約８０〜９０
％の腫瘍細胞を含む。所望の場合には、沈降細胞断片は
、更に、細胞懸濁液をアルブミンの溶液又は同様の比重
の炭水化物溶液−の上に層にし、かつ例えば約２０〜３
００ＸＧで約５分間遠心分離することによって精製する
ことができる。これらの条件下で、精製し７を腫瘍細胞
集合体が界面に分離し、かつ溶液と離すことができる。
生検断片を再びＲＰＭＩ培地等の培地と混合し、かつ注
射器を一方又は他方の口５６．３８の隔壁プラグに通す
ことによって容器１０又は５０の細胞室２０の中に接種
する。細胞室内で、膜２２．２４（代表的には平均して
およそ２０ミクロンの細孔寸法を有するセルロース繊維
を織り交ぜたろ紙）が腫瘍集合体を室内に固定し、他方
−１栄養培地が容器を拡散して通る通路を与える。
適当な培養期間（代表的には１−１０日）の後に、けい
光基質を１つ又は両方の口に通して直接細胞室に注入す
るか、或は、好ましくは循環培地　゛の中に混入するこ
とによって適用することができる。（発けい光基質を培
地中の子牛血清に代えることができる）。基質に露呈□
゛することは、室温において典型的には約１５分〜２時
間、好ましくは３０分間続く。
露呈後、基質を含有する循環培地を、新しい培地、好ま
しくは血清成分を含む培地に代える。通常、細胞室を洗
浄して過剰の基質を除く必要はな・い。次いで、容器流
出物又、は細胞室自体を竺査してけい光レベルを検出し
、それによって細胞の状態を求める。この手順を毎日繰
り返して長期の効果を求めることができる。試験される
べき治！剤を導入する前に約２４時間の調整期間が好ま
しい。
治療剤は、典型的には、循環培地に加えて導入し、それ
によって患者がＭｍされる方法をまねる。
露呈後、培養を再び発けい光基質に露呈させる前に、約
２４時間の別の調整期間が好ましい。
上述した好適り実施態・様の付加、減法、変更態様が当
業者にとって明虻かになると思うが、それらは特許請求
の範囲内である。
【図面の簡単な説明】
、第１図は本発明に゛従う細胞培養装置の分解斜視図で
ある。 第２図は第１図の装置の略側断面図である。 第３図は第１図の装置の平断面図である。 第゛４図は本発明に従う細ｍ培養装置の別の実施態様で
ある。 第５図は第４図の装置の略側断面図である。 第６図、は第４図の装置を採用する細胞動性検定系の略
図である。 第７＆及び７ｂ図は検定結果を示す写真である。 第７ａ図は処理しない対照腫瘍を示し、第７ｂ図はアド
リアマイシンにより５日間処理した腫瘍を。 示す。 １０．５０：培養容器 １２．１４ニジエル要素 ２０：細胞室　　　　　　、−，５ ２６，２８：０−リングガスτクト　　　３２．３４：
出口　　　　　′　　□ ３６．３ａ二口　　　” ４０．４２：チューブ 図面、′″ノ許；’Ｘ、′Ｖ’＝”：干に：ン゛髪弓・
乙〕手続補正書（方式） ％式％ 事件の表示　昭和６０年特　願第１５４４５１、発明の
名称　　細胞培養法及び装置 補正をする者

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １、ａ，細胞を導入して培養することができる閉鎖容器
    を定める手段と、 ｂ、閉鎖容器に栄養素を導入する手段と、 ｃ、閉鎖容器にけい光誘発化合物を導入し、それによつ
    て生細胞が特有量のけい光を蓄積する手段と、 ｄ、閉鎖容器に薬剤を導入して培養細胞の一部を殺す手
    段と、 ｅ、けい光を細胞培養の薬剤に対する感度の指標として
    測定する手段 とを含む細胞毒性検定容器。 ２、栄養素を供給する手段が更に、少くとも１つの流体
    透過性膜面を含む特許請求の範囲第１項記載の容器。 ３、膜面が、また、細胞閉鎖容器の少くとも一部を定め
    る働きをもする特許請求の範囲第２項記載の容器。 ４、栄養素を供給する手段が、更に、少くとも２つの流
    体透過性膜面を含む特許請求の範囲第１項記載の容器。 ５、膜面が、また、細胞閉鎖容器の２つの対抗側面を定
    める働きをもする特許請求の範囲第４項記載の容器。 ６、栄養素を供給する手段とけい光誘発化合物を導入す
    る手段の両方が、更に、容器内に流体透過性循環系を含
    む特許請求の範囲第１項記載の容器。 ７、けい光を測定する手段が、更に、透明な外面であつ
    てそれを通して閉鎖容器内のけい光活性を観測できるも
    のを少くとも１つ含む特許請求の範囲第１項記載の容器
    。 ８、けい光を測定する手段が、更に、細胞閉鎖容器から
    溶出される流体を試料採取する少くとも１つの口を含む
    特許請求の範囲第１項記載の容器。 ９、ａ、培養細胞を収容することができるシェルと、ｂ
    、少数の被生検細胞をシェルに接種する少くとも１つの
    口と、 ｃ、栄養素とけい発色基質とを細胞に供給するシェル内
    の半透過性循環系と、 ｄ、循環流体を導入しかつシェルから取り出す入口及び
    出口 とを含むけい発色細胞毒性検定に使用する細胞培養容器
    。 １０、容器が、更に、シェル内の流体を試料採取する少
    くとも１つの口を含む特許請求の範囲第９項記載の容器
    。 １１、容器が、更に、シェル内にけい光の変化を観測す
    るための透明窓を含む特許請求の範囲第９項記載の容器
    。 １２、循環系が、更に、少くとも１つの流体膜面を含む
    特許請求の範囲第９項記載の容器。 １３、ａ、細胞を容器の中で培養し、 ｂ、細胞を発けい光基質に接触させ、それによつて生細
    胞が特有量のけい光を蓄積し、 ｃ、薬剤を容器の中に導入し、 ｄ、細胞の薬剤に対する感度の指標としてけい光の変化
    を測定する ことを含む被生検細胞の治療剤に対する感度の検定方法
    。 １４、けい光の変化を測定する工程が、更に、容器から
    溶出される流体のけい光活性を監視することを含む特許
    請求の範囲第１３項記載の方法。 １５、けい光の変化を測定する工程が、更に、細胞内の
    けい光の強さを光度分析することを含む特許請求の範囲
    第１３項記載の方法。
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