JPS6163283A - ハイブリ−ド−マの培養方法 - Google Patents
ハイブリ−ド−マの培養方法Info
- Publication number
- JPS6163283A JPS6163283A JP18272384A JP18272384A JPS6163283A JP S6163283 A JPS6163283 A JP S6163283A JP 18272384 A JP18272384 A JP 18272384A JP 18272384 A JP18272384 A JP 18272384A JP S6163283 A JPS6163283 A JP S6163283A
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- Japan
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- serum
- mouse
- human
- culture
- hybridoma
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- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はマウス・ヒトハイブリドーマを培養増殖させる
ための培養方法に関するものである。更に詳しくはマウ
ス・ヒトハイブリドーマを無血清培地を用いて大量に高
密度で培養する方法に関するものである。
ための培養方法に関するものである。更に詳しくはマウ
ス・ヒトハイブリドーマを無血清培地を用いて大量に高
密度で培養する方法に関するものである。
大規模による動物細胞大量培養は、例えばウィルス、ワ
クヂン、インターフェロンなどの抗ウィルス剤、あるい
はホルモンなどの生物薬品の製造に必須である。殊に近
年特定タンパク質などを標的とするモノクローナル抗体
の生産は抗体産生細胞とミＩ ｎ−マ等によるハイプリ
ドーマ大１ｍによるものであり、その技術の解決は工業
的に重要なテーマである。
クヂン、インターフェロンなどの抗ウィルス剤、あるい
はホルモンなどの生物薬品の製造に必須である。殊に近
年特定タンパク質などを標的とするモノクローナル抗体
の生産は抗体産生細胞とミＩ ｎ−マ等によるハイプリ
ドーマ大１ｍによるものであり、その技術の解決は工業
的に重要なテーマである。
従来、細胞培養は一般にシャーレ、試験管、培養びんな
どを用いて実験室的規模で行なわれている。近年初物細
胞の大量培養法及びそのための装冒として、いくつかの
提案がなされている。
どを用いて実験室的規模で行なわれている。近年初物細
胞の大量培養法及びそのための装冒として、いくつかの
提案がなされている。
−股に動物細胞の培養に当っては、子牛或いは牛胎児等
から得られる血清を培地として使用されているが、この
血清は、高価であるのみならず、品質の不均一性、不安
定性、大苗入手の困難から、動物細胞を大ａに培養し、
有用生理活性物質を大量に得るための培地としては、適
したものとは云えない。
から得られる血清を培地として使用されているが、この
血清は、高価であるのみならず、品質の不均一性、不安
定性、大苗入手の困難から、動物細胞を大ａに培養し、
有用生理活性物質を大量に得るための培地としては、適
したものとは云えない。
一方、これらの血清を用いないで、人為的に合成された
所謂無血清培地の開発も盛／υに行なわれている。無血
清培地は、種々の無機塩類、アミノ酸類、ビタミン類、
糖類、抗生物質、時には成長促進物質などを人為的に種
類と割合を組合せて合成したものであり、品質の安定性
、人足供給性、価格の安さ、ｊ１１養物の精製・回収の
容易性など謄れた利点がある。
所謂無血清培地の開発も盛／υに行なわれている。無血
清培地は、種々の無機塩類、アミノ酸類、ビタミン類、
糖類、抗生物質、時には成長促進物質などを人為的に種
類と割合を組合せて合成したものであり、品質の安定性
、人足供給性、価格の安さ、ｊ１１養物の精製・回収の
容易性など謄れた利点がある。
そこで本発明者らは、有用な抗体を産生するマウス・ヒ
トハイブリドーマを無血清培地中で大騒に、高密度で培
養することが可能な方法について研究を進めた結果、本
発明に到達した。
トハイブリドーマを無血清培地中で大騒に、高密度で培
養することが可能な方法について研究を進めた結果、本
発明に到達した。
すむわ１う、本発明は、マウス・ヒトハイブリドーマを
リポ蛋白質を含有づる無血清培地を用いて、培養するこ
とを特徴とするバイプリドーマの培養方法である。
リポ蛋白質を含有づる無血清培地を用いて、培養するこ
とを特徴とするバイプリドーマの培養方法である。
かかる本発明により、マウス・ヒトハイブリドーマを無
血清培地中にて効果的な増殖を行うことができまた高密
度で増殖することが可能になり、有用な抗体を経済的に
有利に生産することが可能となる。
血清培地中にて効果的な増殖を行うことができまた高密
度で増殖することが可能になり、有用な抗体を経済的に
有利に生産することが可能となる。
本発明の無血清培地を用いる培養方法に適用されるマウ
ス・ヒトバイプリドーマは、マウスミニ１コーマ細胞ヒ
ト由来の細胞の融合によって得られたハイブリドーマで
あればよいが、殊にマウスミニ［１−マ細胞とヒト抗体
産生性正常細胞とを融合して１ワられたマウス・ヒトハ
イブリドーマであることが有利である。
ス・ヒトバイプリドーマは、マウスミニ１コーマ細胞ヒ
ト由来の細胞の融合によって得られたハイブリドーマで
あればよいが、殊にマウスミニ［１−マ細胞とヒト抗体
産生性正常細胞とを融合して１ワられたマウス・ヒトハ
イブリドーマであることが有利である。
特にマウスミエローマのうちヒボキサンチン−グアニン
−ホスホリポシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴ）欠
損株とヒトＢ細胞との融合細胞が本発明のマウス・ヒト
ハイブリドーマとして利用される。
−ホスホリポシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴ）欠
損株とヒトＢ細胞との融合細胞が本発明のマウス・ヒト
ハイブリドーマとして利用される。
マウスミエローマ細胞としては、例えばＰ３７／Ｘ６３
−Ａ（１８，Ｐ３／Ｘ６３−Ａｇ・ ８，６５３． Ｐ
３／Ｎ５Ｉ−１−Ａ（１４〜１．Ｐ３／Ｘ６３−Ａｇ８
゜Ｕ ｔ、 ５Ｐ２−ＡＱ１４ 、 ＦＯ，Ｓ １９４
／ ５． ＸＸＯ，ＢＵ、 １． ＭＰＣＩＩ−４５
，６ＴＧ １，７． ２１０゜ＲＣＹ、Ａ（１１，２，
３などを具体例として挙げることが出来、これらをハイ
ブリドーマの親株として用いる。これらと、ガン患者、
例えば肺ガン。
−Ａ（１８，Ｐ３／Ｘ６３−Ａｇ・ ８，６５３． Ｐ
３／Ｎ５Ｉ−１−Ａ（１４〜１．Ｐ３／Ｘ６３−Ａｇ８
゜Ｕ ｔ、 ５Ｐ２−ＡＱ１４ 、 ＦＯ，Ｓ １９４
／ ５． ＸＸＯ，ＢＵ、 １． ＭＰＣＩＩ−４５
，６ＴＧ １，７． ２１０゜ＲＣＹ、Ａ（１１，２，
３などを具体例として挙げることが出来、これらをハイ
ブリドーマの親株として用いる。これらと、ガン患者、
例えば肺ガン。
胃ガンなどの患者から採取したリンパ球等とを差金して
マウス・ヒトハイブリドーマを得ることができる。
マウス・ヒトハイブリドーマを得ることができる。
本発明において用いられる無血清培地としては、通常動
物細胞の培養のために開発され、或いは使用される血清
を含まない培地であればよい。
物細胞の培養のために開発され、或いは使用される血清
を含まない培地であればよい。
無血清培地を形成する基礎培地としては、前述したよう
に動物細胞の培養に使用されるものであればよいが、具
体的には、中井準之助ら編集による「組織培養」 （朝
倉書店発行： １９８１年）の７〜２４頁に記載されて
いる合成培地を基礎培地として使用することが出来る。
に動物細胞の培養に使用されるものであればよいが、具
体的には、中井準之助ら編集による「組織培養」 （朝
倉書店発行： １９８１年）の７〜２４頁に記載されて
いる合成培地を基礎培地として使用することが出来る。
またこれら基礎培地にエタノールアミン（５〜３０μＭ
）、ホスホリピド（１０〜１００μｇ／ｍｅ）、インシ
ュリン（２〜１０μ９／ｄ）、ｔ−ランスフェリン（１
０〜３５μ！？／＃１１り。
）、ホスホリピド（１０〜１００μｇ／ｍｅ）、インシ
ュリン（２〜１０μ９／ｄ）、ｔ−ランスフェリン（１
０〜３５μ！？／＃１１り。
セレニウム（ｉｏ−〜１０” Ｍ ） 、ピルビン酸（
０，５〜５ｍＭ）、チミジン（１ｘ１０−７〜Ｉ Ｘ１
０″５Ｍ） 。
０，５〜５ｍＭ）、チミジン（１ｘ１０−７〜Ｉ Ｘ１
０″５Ｍ） 。
ヒポキサンチン（１×１０４〜１ｘｌｏ−’Ｍ）などの
一種又はそれ以Ｙを添加すると一層望ましい。具体的ｊ
８地としてはＴＥＳ、（ＴＥＳ、ＭＩＴＥＳｒ（Ｄ
Ｈ１Ｍ１１ｒａｋａｎ＋ｉ ｅｔ、 ａｔ、 ｐｒｏｃ
、 Ｎａｔｌ。
一種又はそれ以Ｙを添加すると一層望ましい。具体的ｊ
８地としてはＴＥＳ、（ＴＥＳ、ＭＩＴＥＳｒ（Ｄ
Ｈ１Ｍ１１ｒａｋａｎ＋ｉ ｅｔ、 ａｔ、 ｐｒｏｃ
、 Ｎａｔｌ。
Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、 ＵＳＡ、 Ｖｏｌ、７９．
ｐｐ１１５Ｂ−１１６２゜Ｆｅｂｒｕａｒｙ １９８
２． Ｃｅ１ｌ ８１ｏ１ｏａｙ、 （ｉ）Ｈ、１ｖｌ
ｕｒａｋａｌｌｌ！ ｅＣ，ａｌ、、 Ａｇｒｉｃ、
３ｉ０１．ＣｈＱｎｌ、、 ４６（７） １Ｂ３１−
１８３７ （１９８２） 、（ト） 村上、下材、“！
４１織培養パ９（１３１，５１５−５Ｎ） （１９Ｂ３
）参！’、ｔｌ ］むどを挙げることが出来る。これら
のうちエタノールアミンを添加したものがより好ましい
ものとして挙げることが出来る。
ｐｐ１１５Ｂ−１１６２゜Ｆｅｂｒｕａｒｙ １９８
２． Ｃｅ１ｌ ８１ｏ１ｏａｙ、 （ｉ）Ｈ、１ｖｌ
ｕｒａｋａｌｌｌ！ ｅＣ，ａｌ、、 Ａｇｒｉｃ、
３ｉ０１．ＣｈＱｎｌ、、 ４６（７） １Ｂ３１−
１８３７ （１９８２） 、（ト） 村上、下材、“！
４１織培養パ９（１３１，５１５−５Ｎ） （１９Ｂ３
）参！’、ｔｌ ］むどを挙げることが出来る。これら
のうちエタノールアミンを添加したものがより好ましい
ものとして挙げることが出来る。
また上記培地にリポ蛋白質を添加することにより、増殖
能力が一層増大するので望ましい。リポ蛋白質は複合タ
ンパクの一トＦとして生体から分画されるものであり、
それ自体知られている物質である。
能力が一層増大するので望ましい。リポ蛋白質は複合タ
ンパクの一トＦとして生体から分画されるものであり、
それ自体知られている物質である。
リポ蛋白質は、蛋白質の母として無血清培地１ｄ当り５
〜ｉｏｏμ７．好ましくは１０〜８０μ９添加するのが
有利である。
〜ｉｏｏμ７．好ましくは１０〜８０μ９添加するのが
有利である。
かくして本発明方法においては、マウス・ヒトハイブリ
ドーマをリポ蛋白質を含む無血清培地を用い【培筋する
のであるが、その培養方式としては種々の方法を採用す
ることが可能である。
ドーマをリポ蛋白質を含む無血清培地を用い【培筋する
のであるが、その培養方式としては種々の方法を採用す
ることが可能である。
すなわち、前記無血清培地を装入したシ１７−レ、容器
中にハイブリドーマを植え付けて培養する、所謂静置培
養であってもよく、また水性媒体中でハイブリドーマを
浮遊状態で培養する所謂サスペンション培ｉｊ（スピナ
ー培養）でもよい。
中にハイブリドーマを植え付けて培養する、所謂静置培
養であってもよく、また水性媒体中でハイブリドーマを
浮遊状態で培養する所謂サスペンション培ｉｊ（スピナ
ー培養）でもよい。
更に、培養容器中のサスペンション状態で連続的或いは
間歇的に該容器中に新しい前記無血清培地を供給しなが
ら、古い培地を容器外への排出することによって培養す
る所謂サスペンション培養（パーヒユージョン培養）で
あってちよい。
間歇的に該容器中に新しい前記無血清培地を供給しなが
ら、古い培地を容器外への排出することによって培養す
る所謂サスペンション培養（パーヒユージョン培養）で
あってちよい。
本発明において前記リポ蛋白賃金有無血清培地を用いる
ことによりマウス・ヒトハイブリドーマの擾れた増殖と
、人品の高密度培養が可能となった。さらに無血清培地
であるために、ハイブリドーマからの抗体の精製・回収
が容易となり、診断薬、治療薬としてのモノクローナル
抗体の実用的生産が期待出来る。
ことによりマウス・ヒトハイブリドーマの擾れた増殖と
、人品の高密度培養が可能となった。さらに無血清培地
であるために、ハイブリドーマからの抗体の精製・回収
が容易となり、診断薬、治療薬としてのモノクローナル
抗体の実用的生産が期待出来る。
以下実施例を掲げて本発明を詳述する。
実施例
マウス・ミより一マＰ３Ｕ ＩとヒＩ−Ｂ ＩＩＩ胞と
を融合によってａられたマウス・ヒトハイブリドーマ４
Ｈ１１株を用いて以下の培養実験を行った。
を融合によってａられたマウス・ヒトハイブリドーマ４
Ｈ１１株を用いて以下の培養実験を行った。
シャーレに下記培地のそれぞれにリポ蛋白質を下肥のｉ
１１度となるように加えた無血清培地（ＩＴＥＳ）を２
ｄ入れ上記ハイブリドーマ４Ｈ１１株を５ ｘ １０”
ｃｅｌ ｌ／ ｍｌ、の濃度で植えつけた。１〜５日
間３７℃にてＣＯ２インキユベータ内（ＣＯ２：５％）
でインキュベートした後、細胞密度を調べた。
１１度となるように加えた無血清培地（ＩＴＥＳ）を２
ｄ入れ上記ハイブリドーマ４Ｈ１１株を５ ｘ １０”
ｃｅｌ ｌ／ ｍｌ、の濃度で植えつけた。１〜５日
間３７℃にてＣＯ２インキユベータ内（ＣＯ２：５％）
でインキュベートした後、細胞密度を調べた。
その結果を下記表に示した。
Claims (1)
- １、マウス・ヒトハブリドーマをリポ蛋白質を含有する
無血清培地を用いて、培養することを特徴とするハイブ
リドーマの培養方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18272384A JPS6163283A (ja) | 1984-09-03 | 1984-09-03 | ハイブリ−ド−マの培養方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18272384A JPS6163283A (ja) | 1984-09-03 | 1984-09-03 | ハイブリ−ド−マの培養方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6163283A true JPS6163283A (ja) | 1986-04-01 |
Family
ID=16123315
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP18272384A Pending JPS6163283A (ja) | 1984-09-03 | 1984-09-03 | ハイブリ−ド−マの培養方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6163283A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6342699A (ja) * | 1986-07-11 | 1988-02-23 | マイルス・ラボラトリ−ス・インコ−ポレ−テツド | 組み換え蛋白質の生産 |
| US5356798A (en) * | 1992-04-24 | 1994-10-18 | Novo Nordisk A/S | Recombinant protein production in serum-free medium |
| JPH10265341A (ja) * | 1997-03-26 | 1998-10-06 | Shiseido Co Ltd | 育毛薬剤検定方法 |
-
1984
- 1984-09-03 JP JP18272384A patent/JPS6163283A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6342699A (ja) * | 1986-07-11 | 1988-02-23 | マイルス・ラボラトリ−ス・インコ−ポレ−テツド | 組み換え蛋白質の生産 |
| JPH0630610B2 (ja) * | 1986-07-11 | 1994-04-27 | マイルス・ラボラトリ−ス・インコ−ポレ−テツド | 組み換え蛋白質の生産 |
| US5356798A (en) * | 1992-04-24 | 1994-10-18 | Novo Nordisk A/S | Recombinant protein production in serum-free medium |
| JPH10265341A (ja) * | 1997-03-26 | 1998-10-06 | Shiseido Co Ltd | 育毛薬剤検定方法 |
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