JPS61500913A - ホルモン活性を有する生物学的作用物質、その製法およびヒストンの医薬的用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ホルモン活性を宵する生物学的作用物質、その製法およびヒストンの医薬的用途 多数の異なった種類の胸腺製剤が知られている。コムサ（Ｃｏｍｓａ）およびベ ルナルジ（Ｂｅｒｎａｒｄｉ）　［ｒエキストラクション、フラクシタネーショ ン、アンド、テスティング、オブ、ア、ホモジーナス、デミツク、ホルモン、プ レバレーシｌン（Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　、　Ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｉｏｎ　ａ ｎｄ　Ｔｅｓｔｆｎｇｏｒ　ａ　Ｈｏｍｏｇｅｎｏ＊ｓ　Ｔｈｙｓｊｃ　Ｈｏｒ ｍｏｎｅ　Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　）Ｊ、アンナルス、オブ、ザ、ニューヨー ク、アカデミ−、オブ、サイエンシズ（Ａｎｎａｌｓｏｒ　ｔｈｅ　Ｎｅｗ　Ｙ ｏｒｋ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｒ　５ｃｉｅｎｃｅｓ）、２４０巻、４０２〜４０ ．３頁（１９７５年２月２８日）に発表コによる胸腺製剤（ＨＴＨ）もこれに属 する。

コサムは、このほかにも、ＨＴＨが免疫系において免疫促進的および内分泌学的 な作用特性を有することを示した。彼はこの作用が特殊な胸腺ホルモンと関係し ていると推測した〔「ホルモナル、コープイネ−ジョン、オブ、インミ二−ン、 レスポンス（Ｈｏｒｍｏｎａｌ　Ｃｏｏｒｄｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆｔｈｅ　Ｉ　 ｍ＋＋ｎ；ｎｅ　Ｒｅ５ｐｏｎｓｅ　）Ｊ　２９巻（１９８２年）、スプリンガ ー、フェアラーグ（Ｓ　ｐｒｉｒ＋ｇｅｒ　−Ｖ　ｅｒｌａｇ　）刊〕。またコ ムサは、胸腺製剤がまだ特定されていない物質の不明確な副作用によって、治療 上無効であったり、また１よ有害であることさえあることを明らかにした。即ち 、胸腺製剤中に存在していると推定される胸腺ホルモンの作用特性を打ち消し、 阻害し、ひいては患者にとって少なからぬ危険となる異物質が存在していること が考えられる。

この発明の目的は、有害に作用すると考えられる異物質を本質的に全く含んでお らず、しかも所望の胸腺ホルモン作用と明らかに関連している前述のような生物 学的活性を有する物質を提供することにある。とりわけこの目的を追求するため 、まずそのような標品の作用の標準化を行ない、それによって生物学的出発物質 から、活性物質を調製し、できるだけ精製し、異物を全く含んでいないホルモン 類似作用を有する製剤に誘導することによって、そのような物質の目的とする利 用の道を開くことが可能となる。

二の目的は、この発明の請求の範囲に示す方法により達成することができる。

予期に反して、コムサおよびベルナルジにょるＨＴＨ−脚線画分には、なんら明 瞭な免疫学的および内分泌学的特性を有する特異的ｐＡ線ホルモンの局在部位を つきとめることができなかった。ＨＴＨに関する検討において、ホルモン性作用 物質として、再現性のある検出力’Ｔｔｌな２つのポリペプチド鎖、即ちＨＴＨ αおよびＨＴＨβが見いだされ、またそれらのアミノ酸配列が８２Ａおよび８２ Ｂヒストンの配列と驚くほど一致していることが証明された。このようにこの発 明によって、これまで単に細ｌ！！核タンパク質として知られていただけのヒス トンが、細胞外で内分泌活性を示すホルモン類似の特性を有しているに相違ない ということを初めて示すことができた。ヒストンと胸腺ホルモンの構造比較から 、ヒストンのホルモン類似の、特に胸腺ホルモン様の性質は、少なくとも本質的 にヒストンの進化学的可変部分によって決定される（下記の記載および第３Ａ図 ）のであって、進化学的に不変な（一定した）ヒストン部分には見いだされない ことが判明した。この発明は構造比較によって、進化学的可変ヒストンセグメン トに、Ｈ２ヒストンのホルモン作用を有する部分配列（活性ヒストン配列）をつ きとめ、これが胸腺ホルモンと相似していることを示した（下記の記載およびｉ ３Ｂ図）、またこの場合、相似は特にＮ−末端ヒストン部分に存在し、免疫系ヒ ストン類およびタンパク質問の相関関係は、特にユビキチンの存在であることが 判明した。

したがってこの発明は、ヒストンのホルモン類似の、特に胸腺性特性が、特にＨ ２ＡおよびＨ２Ｂヒストンとそれに関連している特定部分に存在し、細胞核構成 要素には全く存在していないことを明らかにする。

また種々の公知のＭｌｌ調製剤含まれている免疫刺激作用性および／または内分 泌学的作用物質の免疫系が、ヒストンの進化学的可変セグメントと相似を示し、 したがって新たに発見されたそれらのホルモン特性の観点から、所望により定義 されるであろうヒストン科（ヒストンファミリー）に包含されるであろうことを 示した。

それと同時に、この発明は、まず標準化が可能な標品作用を有する免疫系免疫刺 激作用および／まｒこは内分泌学的作用を有する標品から、目的とする製造を行 なう比較的簡単な径路を明らかにする。この場合、所望の作用を有する特定のペ プチドを必ずしも胸腺標品だけから単離することが不可欠ではなく、単離可能な ヒストン、特にＨ２ＡおよびＨ２Ｂヒストンができるだけ豊富な、他の生物学的 出発物質からの標品も製造することができる。

なかでも仔ウシのＨ２ＡおよびＨ２ＢヒストンがヒトのＨ２Ａおよび８２Ｂヒス トンと同一であることはよく知られているので、この発明のヒト医薬用標品を、 例えば仔ウシの胸腺、または仔ウシまたはウシのＨ２ＡおよびＨ２Ｂヒストンが 豊富な他の好適な内分泌器官から製造することは、全く問題のないことである。

合成的径路によるこの発明標品の経済的な製造には、ヒストンの免疫系免疫刺激 および／または内分泌学的活性特性がヒストンの進化学的可変セグメントにある という知識が重要である。これによって、単に関連のあるヒストンの進化学的可 変セグメントまたはその活性配列を含んでいる部分を合成すれば十分である。遺 伝子技術的製造またはそれらの製造方法を組合わせる場合も、このことは同様に 当てはまる。

したがってこの発明は、ヒストン、特にＨ２Ａおよび８２Ｂヒストンを、免疫刺 激的または内分泌学的作用薬品として使用することだけに限定されない。この発 明は単に進化学的可変セグメントまたはこの可変セグメントの作用活性部分だけ を使用してもよく、またそのようなセグメントの１個またはそれ以上と、１個ま たはそれ以上のヒストンから成る組合わせを使用することもできる。

要するに、この発明はホルモン類似活性を宵するヒストンまたはヒストンセグメ ントの使用だけに限定されるものではない。この発明により、そのようなヒスト ンまたはヒストンセグメントを、少なくとも免疫系の１個のタンパク質、特にユ ビキチンと共に都合よく使用することができる。

この発明において「ヒストン」語は、ヒストンを単に細胞核構成要素として理解 していた従来の意味よりも広く、新たに発見されたホルモン性特性の意味に理解 される。

この発明においては、ヒストン全体、または少なくとも新たに認められた作用に 関係する部分配列の形で、ヒストンがそのホルモン性作用を発揮できるために血 管系および／ま几はリンパ系を循環しているという前提に立って、ヒストン作用 を免疫刺激作用物質および内分泌喋の協同およＵ／ま几は拮抗作用物質（内分泌 効果）として認識する。これまでのヒストンの定義において、そのような作用が 期待されたことはない。

この発明の根拠となるヒストンの新しい特性に関する知見と、これに関連してい る胸腺ホルモン（ＨＴＨ）のホメオスターシス的な研究についてこのあと引続き 記載する。説明中、括弧内に示した数字は、本明細書末尾に示ビた参考文献目録 の文献位置を示したものである。まγ；添付した図面は研究結果を明らかにした ものであって、以下図面について説明を加える。

第１Ａ図は、ベルナルジおよびコムサ（２）の記載にしたがい、０．１％トリフ ルオロ酢酸中、イソプロパツール！１度勾配（％Ｂ）で、μボンダバック・Ｃ１ ８・カラムを用いたＨＰＬＣによるＨＴＨ製剤の精製を示す。

第１Ａ図の内部に、（ａ）ＨＴＨ出発物質および（ｂ）ＨＴＨ画分Ｃ（ＨＴＨα およびＨＴＨβ構成威分）の５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動を示す。

第１Ｂ図は、０．１　％トリフルオロ酢酸中、アセトニトリル濃度勾配（％Ｂ） で、μボンダパック・Ｃ１８・カラムを用いたＨＰＬＣによるＨＴＨ画分Ｃ（第 １Ａ図）のＨＴＨαおよびＨＴＨβの２成分への分割を示す。

第２図は、ヒストンＨ２Ａ％Ｈ２ＢおよびＨ３のＣ末端領域の一次配列である。

ヒストンＨ２ＡおよびＨ２Ｂは仔ウシまたはヒト由来（仔ウシおよびヒトのＨ２ ヒストンは同一である）Ｈ３ヒストンは仔ウシに由来しテイル。Ｈ２Ａ配列の６ ２〜９４．８２Ｂ配列７）７３〜１０５、Ｈ３配列の１０３〜１３５（Ｃ−末端 終末）を相互に対比させている。同一のアミノ酸を実線で囲んでいる。

第３Ａ図は、ヒストン群（第１群）と胸腺ホルモン群（第２群）のアミノ酸配列 の比較である。ヒストンＨ３（仔ウシ（３７））、Ｈ２Ｂ（仔ウシおよびヒト（ ３７））、８２Ｂ　Ｐ、Ａ、（ウニ精液、パレキナス、アングロサス（Ｐａｒｅ ｃｈｉｎｐｓ　ａｎｇ＊ＩｏｓＬ！ｓ　Ｘ３７））、Ｈ２Ａ　（仔ウシおよびヒ ）（３７））およびＨ２Ａ、Ｚ　（仔ウシの変種（２８））。ＦＴＳは胸腺血清 を表わす（ブタ（１４））。チモポイエチン（雄ウシ（１３））、チモシンα１ ３、β４およびβ、（仔ウシ（１０〜１２））、ユビキチン（雄ウシ（１６）） およびプレアルブミン（ヒト（１７））。両群間で一致したアミノ酸は連続した 実線で囲む０両群のうちの一方の側だけで一致しているアミノ酸は点線で囲んで いる。配列間隙（ギャップ）は、構造の対応を最もよく明確にするため、前方へ つめる。

ｌＡ図＋１、本質的に８２Ａおよび８２Ｂヒストンの進化学的可変のヒストンセ グメント部分を把えている（Ｈ２Ａは約１〜３６のアミノ酸、）（２Ｂは約１〜 ３１のアミノ酸）。これらのセグメントのなかに、この発明にとって特に重要な 活性配列を含んでいる。

第３Ｂ図は、第３Ａ図のタンパク質群と、さらにもう１つのタンパク質群、即ち 、細胞表面抗原（ラット（Ｔｈｙｌ　））、免疫グロブリン（ヒトまたは家兎（ ＩｇＥ、ＩｇＧ））、組織適合性抗原ヒト（ＨＩ、Ａ−Ｂ７））およびβ、−ミ クログロブリン（ヒト（β、−＋ｅ））を比較する。一致したアミノ酸は連続し た実線の囲いの中に入れる。

第３Ｂ図は、特に進化学的可変ヒストン部分内部の８２ＡおよびＨ２Ｂセグメン トを示しており（Ｈ２Ａアミノ酸１１〜２３、Ｈ２Ｂアミノ酸４４〜２６）、こ の発明に重要な活性配列のさらに詳しい局在部位を示している。

リンパ性前駆細胞の増殖と分化、および種々の胸腺ホルモンの産生と分泌など、 胸腺の多くの機能が既に明らかに証明されている。これらのホルホンの１つであ るホメオスターシスな胸腺ホルモン（ＨＴＨ）は、既に初めに述べたようにコム サおよびその共同研究者（１，２）によって早くから発見されている。ＨＴ）Ｉ に関しては、胸腺摘出によってそれが完全に抑制されること（３）、胸襟摘出動 物において抗体産生が回復すること（４）、およびリンパ球に走化性の影響を及 ぼすこと（５）が報告されている。また、他の内分泌腺に対するＨＴＨの調整効 果も示されている（６．７）。ＨＴＨは、チロシキン（６）、副腎皮質刺激ホル モン（ＡＣＴＨ）、デスオキシコルチコステロン、サイロトロピン（Ｔ　Ｓ　Ｈ ）およびゴナドトロピンの拮抗物質である。ＨＴＨは成長ホルモンとの協同作用 物質である（６．７）。さらに、ＨＴＨの放射線防御作用が提案されている（８ ）。

ＨＴＨは、性的成熟期前のラットの胸腺、リンパ節およびｎｖａに見いだされる ０胸腺を摘出後３日月に、それはリンパ節および膵臓から完全に消失することが 報告されている（５．６）。ヒトの尿からＨＴ）Ｉと同様の画分を単離すること ができるが、モルモットの場合、胸腺摘出によってこれは阻止される。この胸腺 に補充される両分が、ある少女の尿中に欠除していたが、これは早くから胸腺を 完全に除去していたためであろう（５）。このように、ＨＴＨが分泌され、体内 に分配され、選別される種々の事実が証明されている。

ＨＴＨの構造は、まだこれまで解明できていない、その代わり、胸腺の他の一連 のポリペプチド、即ち、幾つかのチモシン（９〜１２）、チモポイエチン（１３ ）、および短かいノナペプチドの「血清胸腺因子Ｊ（ＦＴＳＸ１４）が既に形質 決定された。ユビキチンも、胸腺から単離された後、タンパク質構造が決定され 、そのタンパク質分解に対して考えられている影響は、現在よく知られている（ １５）。またさらに、「血清胸腺ホルモン」と血清プレアルブミンの同一性も明 らかとなり（１７）、またこれは消化管ホルモンと近縁関係の可能性があること が判明した（１８）。

胸腺ホルモンの短かいポリペプチドをはじめリンパ球刺激ホルモン（ＬＳＨγ、 Ｍγ８００００）（１９）およびもう１つの大きなタンパク質に至る種々の大き さを考慮すると、それはおそらく一層大きいタンパク質の幾つかの鎖状フラグメ ントであろうと思われる。この推測は、７個のアミノ酸から成り、チモシンα、 の配列に付着しているチモシンα、１の最近の発見と、約１１２個のアミノ酸か ら成るプロホモンが、そのアミノ末端にチモシンα１の配列を含んでいる（２０ ）ことによって可能性が強まった。その上に、プロホルモン開裂を示す典型的な シグナルであるＬｙｓ−Ａｒｇ構造（２１，２２）が、すべてのチモボイエチン のＣ−末端終末に存在している（１３）。これを要約すると、ＨＴＨ以外の多数 の胸腺ホルモンが形質決定されていると言うことができる。プロホルモンの開裂 は重要であるように見えるが、これまでに証明されたことは、ごく僅かの機能面 だけであって、構造的な近縁関係はなんら証明されていない。

以下、さらにＨＴＨαおよびＨＴＨβの２つの構成成分の精製および収量を記載 することによって、唯一つ再現性をもつて検出できるＨＴＨ・標品のポリペプチ ド鎖について説明を行なう。ＨＴＨαおよびＨＴＨβのアミノ酸配列の測定に関 しては、発明者により別法に記載されたが（２３）、その配列はヒストンＨ２Ａ および８２Ｂと同一であることが認められた。これまでヒストンに関して、細胞 外、または内分泌性の活性は釡＜知られていないので、Ｈ２ＡおよびＨ２ＢがＨ ＴＨ標品中の単なる汚染物であるかどうか、その可能性を検討した。然しながら 、ＨＴＨαおよびＨＴＨβは単一の成分であり、ＨＴＨ標品のなかでそれらの濃 縮が可能であった０画成分がＨＴＨそのものでない場合は、ＨＴＨ活性は、少な くともＨＴＨに存在しているべきｌ成分に由来するはずであるし、ヒストンと共 に精製されるはずである。この可能性の明らかにするため、ＨＴＨα／Ｈ２Ａお よびＨＴＨβ／Ｈ２Ｂ構造の詳細な検討を実施すると同時に、特に可能性ある開 裂シグナルおよび他の胸腺ホルモンとの相似に関して検討した。この関係に基づ いて、新しく、しかも思いがけないヒストンのｍ能が明らかとなり、またそれに よって、ＨＴＨおよび、おそらく他の胸腺ホルモンも、場合によってヒストンお よびユビキチンと共に１つの調節系において一緒に作用するものと説明され、ま たそれによって、この発明に示すピストンの医薬的利用の道がはじめて開かれる こととなった。

ＨＴＨの精製（第１Ａ図および第１Ｂ図）仔ウシ胸腺から、文献（１）の記載の ように、酸抽出物（ｌλ４Ｈ，ＳＯ，）を硫酸アンモニウムおよびエタノールで 沈澱させ、ついでセファデック　゛スＧ−１００、水酸化リン灰石およびセファ デックスＧ−２５を用いるクロマトグラフィーによる分Ｍ（２）を行なうことか ら成る５段階の精製方法を用いて、ホメオスターシスな胸腺ホルモンＨＴＨを単 離した。精製はタンパク質分解酵素の影響によって妨害されるので、酵素阻害剤 を追加し乙。この両分は、先の説明の項で記載した生物学的試験により活性を示 した。０．１　％トリフルオロ酢酸中、イソプロパツールまたはアセトニトリル 濃度勾配を用いるμボンダバックー０１８−カラムによるウォーターズ製ＨＰＬ Ｃ装置を使用し、Ｍγ１５０００および１６５００の２成分の最終的精製を実施 した。

ヱＥ／豊ｙ烈立丘 ）（ＴＨをＣＮ　Ｂγおよびタンパク質分解＃素で分解し？＝（２３）。ペプチ ド混合物をＩｌｌセファデックスＧ−５０上で３０％酢酸で予備分画し、完全な 形のＨＴＨ成分については、前記と同様に、ＨＰＬＣによりさやに精製した。

手動式配列分析はジメチルアミノアゾベンゼン法を用いた。液相シーフェンス分 析は、グリシン前処理ポリブレンの存在で、ベックマン８９０Ｄ装置により　０ ゜ＩＭクアドロール・ペプチドプログラムを用いて実施した。フェニルチオイソ ヒダントインは、ＨＰＬＣを用いて同定した（２３）。

配列比較 ＨＴＨα／Ｈ２ＡおよびＨＴＨβ／Ｈ２Ｂについて測定したアミノ酸配列を、ヒ ストンＨ３（２４，２５）、チモシン（９〜１２）、チモポイエチン（１３）、 ＦＴＳ（１４）、ユビキチン（１６）およびプレアルブミン（２６）のアミノ酸 配列と比較した。この場合、配列間隙（ギャップ）に関係なく、また偶然の類似 構造の程度（２７）を判別し得るためにそれ自身の構成をもつランダム構造を適 用し、種々のセグメント長の相似を検出するために使用されるコンピュータープ ログラムを利用した。

ＨＴＨの精製結果 タンパク質分解酵素を使用せずに単離するベルナルジおよびコムサ（２）の生物 学的活性ＨＴＨ標品は短かいペプチドを含有していない。この標品を、還元条件 または非還元条件下で、７．５、％ゲルで行な一：＋几ＳＤＳ−ポリアクリルア ミドゲル電気泳動により、それぞれＭγ１５０００およびＭγ１６５００に相当 する一定した位置に２本のペプチドバンドがその都度得られた（男Ｉ　Ａ図）。

セファデックスを使用した排除グロマトグラフィーによるこの天然ＨＴＨの分子 量測定の結果、約３００００の値が得られ、これは天然ＨＴＨの２量体の形であ ることが推定された。

天然ＨＴＨが糖タンパク質であろうという報告（５）およびトリフルオロ酢酸に よって沈澱し得ないという報告（１）に反して、このものは、まず炭化水素を全 く検出し得す、タンパク質であることが判明し、またトリフルオロ酢酸で沈澱が 可能であった。

短かい変化する不純物から２つの主ポリペプチド鎖を分離するため、ＨＴＨ標品 をＨＰＬＣにより、イソプロパツール濃度勾配を用いて分割した。２つの成分は 第１Ａ図のＣで示される主ピーク中に溶出した。このピークに先立って、２つの 小さなピーク（ＡおよびＢ）が溶出した。

このうち遅れて出るピークＢは、量および電気泳動の位置が変化する多数の成分 に対応しており（第４Ａ図）、先に行なった精製段階の不活性成分と一致する。

還元条件または非還元条件下において、Ｃ画分のプローブの５ＤＳ−ポリアクリ ルアミドゲル電気泳動によって、２つのペプチド主成分の存在が実証された（第 １Ａ図）。然しダンシル法による末端基ではプロリンだけがＮ−末端アミノ酸と して示された（２番目のポリペプチドは封鎖Ｎ末端を宵している）、＠和なアセ トニトリル濃度勾配を用いるＨＰＬＣによって、Ｃ画分は、５Ｏ８−ポリアクリ ルアミドゲル電気泳動（第１Ａ図）によって実証された上うに、純粋な形のＨＴ ＨαおよびＨＴＨβの２成分に分離された（第１Ｂ図）。２つのタンパク質のア ミノ酸配列を、文献（２３）に記載のように、ＣＮＢγおよびタンパク質分解酵 素による切断と組合わせる配列分析によって決定した。

その結果、）ＩＴＨαはヒストンＨ２Ａと同一であり、またＨＴＨβはヒストン Ｈ２Ｂと同一であることが判明した。ＨＴＨのアミノ酸が修飾されたと考えられ る微候は、全く認められなかっに（２３）。

他の配夕１との比較（第３Ａ図、第３Ｂ図）タンパク質が官能的に胸腺ホルモン と近縁なのか、あるいは、ヒストンと近縁なのかを確かめるために、ＨＴＨα／ Ｈ２ＡおよびＨＴＨβ／Ｈ２Ｂの構造を、チモシンα８、α１１％β４、β、（ ９〜１２）、チモボイエチン（１３）、ヒストンＨ２Ａ、Ｈ２ＢＳＨ３、および 亜型Ｈ２Ａ。

Ｚ（２Ｂ）、ユビキチン（１６）およびプレアルブミン（２６）に関して、相似 を検討した。可変フラグメント長を用いるコンピューター・プログラム（２７） により、なんら目につくような相似は存在せず、また個々の比較において類似を 意味していると思われる対も見当たらなかった。Ｈ２Ａ−８２Ｂ、Ｈ２Ａ−Ｈ３ およびＨ２Ｂ−Ｈ３の間で、これらのヒストンのＣ−末端部分の相互間に、但し 交互には関係なく、全部で最高１５個の対応の７個（１５個のアミノ酸当り６個 および７個の同一アミノ酸）が適合しく第２図）、最も可能性のある一致を示す 。

ヒストンおよびＨＴ）（構造のＮ−末端部分における直接比較の検討の結果、対 になった比較による一致は一層少ない（１５個のアミノ酸当た９５個またはそれ 以下）。然し、配列間隙（ギャップ）の導入によって種々の比較対間の相同を高 めろことができる。同−基の数を最大に、ギャップの数を最小に含有するＮ−末 端比較部分で、３個の他と無関係な一致が得られる。この領域を第３Ａ図に示す 。また配列間隙がほとんど少ないこの部分では、ヒストン自身の相互間の類似し ているＣ−末端部分による相似で示される一致が存在する（第２図）、そのうえ さら、に、この部分は結合相互作用（２９）に関与する（第３Ｂ図）範囲に包含 する（第３Ａ図）。したがって、個々に提供される機能上の類似とは無関係に、 ただ明瞭に存在している構造上の最大の一致と結び付いている。結局、ＨＴＨα および）ＴＴＨβ、または８２Ｂは、その前葛形態から活性ホルモンを遊離する タンパク質分解酵素に対する典型的なしぐなるシグナルと見なたれるＬｙｓ−Ａ ｒｇ対および他の２塩基構造を、ｉｓＡ図に示される部分の終末近くに存してい る。ヒストン群におけるこれらのシグナルの位置は、免疫刺激性および／まさま 内分泌学的特性を有するこの発明における重要な活性配列に局在しており、本質 的に重要である。

ＨＴＨの　製と形　決定による結論 ＨＴ）（は、５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動により一定して観察され る２つの成分を含有している。これらの２つの成分は高収量で存在し、標品のホ ルモン活性部位と一致している。同様に他の成分も測定することができたが、そ れらは収量が一層少なく、また一定せず、製剤間で差があった。２つの主成分、 ＨＴＨαおよびＨＴＨβ：よ、ざろ（二ＨＰＬＣクロマトグラフィーによって精 製した。もしＨＴＨに痕跡成分が全くないならば、これまでＨＴＨに関して記載 されているすべての特性は、この画成分のうちの１つに帰すべきものであるか、 まにはさらに、相乗的または相加的に作用しあう場合はその双方に帰すべきであ る。

構造分析の結果、ＨＴＨαおよびＨＴＨβは１２９個または１２５個のアミノ酸 を含んでおり、これは５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動による推定分子 ｊｌ１５０００とよく一致している。同様にこの分析は、ＨＴＨαおよびＨＴＨ βの一次構造が仔ウシまたはヒトのヒストンＨ２Ａまたは８２Ｂと同じであるこ とを示している（２３）。またこれは、内部ヒストンがＨ２Ａ　：　Ｈ２Ｂの２ １に体の形で存在しているので、排除クロマトグラフィーによって測定したＨＴ Ｈの分子量が約３００００であることも解明している。ＨＴＨ中にヒストン構造 のアミノ酸交換またはその他の修飾と考えられる徴候は、全く認められなかった （２３）。

ヒストンのホルモン特性と新規機能の可能性ＨＴＨ標品が、ヒストンポリペプチ ド１ＩＨ２Ａおよび８２Ｂを明らかな２１体構造で主成分として含有していると いう知見は、これまで知られていなかったヒストンの新＊ｍａに対する可能性を 予見させる。そこでヒストン構造を、他の脚線ホルモン類、ヒストン類および！ ！能的に近縁の分子と、その構造的相似について検討した。ペプチドホルモンは 、往々にして大きな前駆形懸から由来することがあるので、とりわけタンパク質 開裂の可能性が考えられるシグナル位置を注意し、また特にヒストン修飾との相 互作用および他の特性にも注意した。個々の観察が、それ自体、単独ではその都 度有意でない場合でも、機能面の新しい可能性に関する概要を入手するため、さ らに処理を行なう。

構造上の比較 第２図および第３図に描かれた相似で、ヒストン類と比較したタンパク質との間 に高い一致が認められる。１つ１つの対のそれぞれの比較そのものは：工とんど 意味がないが（恐らくは第２図を除き）、総合的な相似は他の観察と符合してい る。結合相互作用の近縁（２９）およびその他の機能特性は相似を説明するのに 十分である。ＨＴＨとヒストンＨ２の間の同一性の関係および以前の比較関係（ ２９）で、第３・Ａ図の一致した構造は、２つのヒストンそのものがプロホルモ ンの形を表わしているこ存在（２０）によって裏づけられるチモシンおよびチモ ポイエチンの肪駆形Ｓの存在と矛盾しない。

プロホルモン・相似性 ８２Ｂにおける２つの部分構造が、プロホルモンの開裂位置に典型的な、例えば 、主にＬｙｓ−Ａｒｇ構造（２１）のような２塩基性アミノ酸列の類似構造を示 す。そのような領域の一つは、２８位に始まるＬｙｓ　−Ａｒｇ　−ＬＹＳ−Ａ ｒｇであり、もう１つは８５位に始まるＬｙｓ　−Ａｒｇである。両者とも、そ の後トロアンチシグナルが欠けている（２２）。両方の位置とも、α−へリック スの外側２次構造のβ−ターンの部分にあり（３０）、そのためにタンパク質分 解酵素切断に対してなんら明らかな安定性をも示さない（３］、３２）。同様に 、Ｈ２Ａにおいても類似した位置に２塩基構造が存在している。Ｈ２Ａおよび８ ２Ｂにおける第１の部分構造は、それぞれヒストンおよび胸襟ホルモン間の一致 しｆ；構造のほぼ終末にある（第３Ａ図）。第２の部分は、１３Ａ図に関連して 、Ｃ末端部分でプレアルブミンの領域と一致する。この領域は、先に述べたよう にプレアルブミンが消化管ホルモンに開裂する部分に相当している（１８）。

ヒストンＨ２ＡおよびＨ２Ｓは、イン、ビトロ（試験管内）で、前もって変性し なくても限定された部位で切断されることが判明している。Ｈ２Ｓは大体、２０ 位のＬｙｓおよび２３位のＬｙｓの後で（３３）、またＨ２Ａは大体、１１位の Ａｒｇおよび１１８位のＬｙｓＯ後で（３４）切断される。したがって、ヒスト ン分子の天然構造を、プロホルモンの選択的切断と類似した形の完全なタンパク 質分解に対して保護する。内因性のタンパク質分解酵素によってＨ２Ｓの同じＮ −およびＣ−末端領域が切断されることが認められており（３５，３６）、遊離 するＨ２Ｓの対応する断片は、元来ＨＴＨについて記載されている大きさに相当 する約２０００の分子量を示す。ここにおいて、この発明における利用に重要な 意味を宵するＨＴＨβ／８２Ｂの胸腺ホルモン活性部分はＮ−末端領域にあるも のと推論される（第３Ａ図）。実在の胸はホルモンは、チモボイエチンのＣ−末 端のＬｙｓ−Ａｒｇ構造によって同様に保護されている。以上、詳述したことか ら、ヒストンの切断位置は生物学的活性配列の局在している部位に相当しており 、この発明に重要な意味を有することが明らかである。

立主豊産隻 ヒストンに関して、化学的修飾型が存在していることが知られている（３７）。

ヒストン２Ｂの６位のセリンは生体内で容易にリン酸化され、また３２位のＳｅ ｔおよび３６位のＳｅｒは、ＣＡＭＰ依存性プロティンキナーゼによって、恐ら く試験管内でリン酸化される（３８）。この２つのリン酸化の位置は、既に述べ たこの発明に重要なヒストン領域のＮ−末端である。それ故に、リン酸化／脱リ ン酸化は、クロマチン内のヒストンのコンホーメーシジン特性の調節を受けるだ けはでなく、切断に鋭敏な位置におけるシグナルの調節をも含めて考慮されるべ きであると推論される。

機能性に関するもう１つの推論 Ｈ２Ａの約５〜１５％およびＨ２Ｓではそれよりも若干低い％がユビキチンと結 合している（３９．４０）。ユビキチンがタンパク質と結合していることとタン パク質分解の調節に関して観察が行なわれた（１５）。

ユビキチンのクロマチン縮合または核における形質発現の際に果たす機能を考え るとユビキチンも、矢張り折りたたみのシグナルの役割りをもっており、その結 果、ＨＴＰまたはＨ２Ａ％）１２Ｂの選択的切断に作動する。ユビキチンはほと んどすべての核で見いだされるので、恐らく胸腺組織に特異的なプロテアーゼで あり、その化学的修飾は）（ＴＨ（Ｈ２Ａ。

Ｈ２Ｓ）の開裂および活性にとって不可欠である。同様に、タンパク質異化お上 びユビキチン機能に対する影響は、調節系に対する）ＩＴＨ（Ｈ２Ａ％８２Ｂ） のさらに大きい効果と直接的な関連性を示した。

それと同時に、この発明は、Ｈ３、Ｈ４お上びＤＮＡと比べて）１２ＡおよびＨ ２Ｓが極めて高い結合−分解速度を存すること（４１）、およびＨ２ＡとＨ２Ｓ の離Ｉ！Ｆｒ後、天然コアヒストン構造全体を再構成することが可能であること （４２）に基づいて、Ｈ２Ａおよび）１２Ｂの、クロマチン構造タンパク質とし ての特性以外に、はじめて追加的機能を指摘する免疫グロブリン類似の折り１； たみ構造を存する分子の結合領域とチモボイエチンにおいて、部分構造の相同が 見られることが、既に提示されている（２９）。この発明によって示された構造 （第３Ａ図および第３Ｂ図）を適用することによって、この比較はさらに拡大さ れる。この発明によって８２Ｂのこの部分構造の内側に、免疫グロブリン構造自 体でほぼ同じ間隔で繰り返されているのと同種の反復配列（領域１６〜２０と領 域１１６〜１２０が同一）を含んでいることが判明した。そのような構造上の相 似は、免疫グロブリンのＨ鎖のＦｃ部分（４３）、またはヒト白血球の細胞表面 タンパク質（４４）と抗ヒストン抗体とのよく知られている交差返応ともよく両 立できる。

結論 この発明において指摘したＨＴＨと、ヒストンＨ２Ａおよび８２Ｂの一致した活 性特性により、これまで知ちれてぃなかったヒストンの機能をよく説明すること ができる。この発明において観察された胸腺ホルモンとヒストン間の相似は、恐 らくタンパク質分解調節の際に働＜ＨＴＨ／ヒストン機能に関する分子メカニズ ムを示唆するユビキチンの新しい相関関係について結論づけたものである。

結局、この発明の観察は進化に関する推論に帰結することができる。

精査した範囲に属する分子間に見られる８原を同じく結合から、観察した相似は 、先に提案された「上位科（Ｌｉｂｅｒｆａｍｉｌｉｅ　）Ｊ　（４５）を拡張 するものとして説明できる。好ましい結合領域に対して標識を与え、ユビキチン または通常のタンパク質によってＨＴＨ／ヒストン類の生物学的活性部位を遊離 することができるのであるから、この相似は収斂進化によって説明することがで きる。たとえこの発明において判明した近縁関係の源がどのようなものであろう とも、この発明によって、ＨＴＨ，ヒストンおよびエビキチン間の相互作用の理 解のための新しい可能性が提供され、それによってこの発明における胸腺ホルモ ン様特性を有する生物学的活性物質を創製し、またはそのような活性物質の製造 方法を提供し、また標準的な標品作用を有する医学的または薬学的製剤としてヒ ストンまたはその活性配列の利用方法が提供される。

この出願の主要部分は発明者によって、プロシージングズ、オン、ザ、ナショナ ル、アカデミ−１才ブ、サイエンシズ、Ｕ、　Ｓ、　Ａ、　（Ｐｒｏｃｅ−ｅｄ ｌｎｇＳ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　５ｃｉｅ ｎｃｅｓ　、　Ｕ、　Ｓ、　Ａ、　）に公開するため提出される。

象」二ｆ［見 １、ベツソノフＣＢｅｚｓｓｏｎｏｒｒ、　Ｎ、Ａ、）およびコムサ（Ｃｏｍｓ ａ）アナルス、才ブ、エンドクリノロジー（Ａｎｎ、　Ｅｎｄｃｒ、）、（１９ ５８年）、１９巻、２２２〜２２７頁。

２、ベルスルジ（Ｂｅｒｎａｒｄｉ、　Ｇ、）およびコムサ（Ｃｏｍｓａ、　Ｊ 、）、エクスベリエンチア（Ｅｘｐｅｒｉｅｎｔｉａ）、（１９６５年）、２１ ＠、４１５〜４１７頁。

３、コムサ（Ｃｏａｓａ、　Ｊ、）、アメリカン、ジャーナル、オン、メジカル 、サイエン（Ａｍ、　Ｊ、　Ｍｅｄ、　Ｓｃｉ、）、２５０巻、７９〜８５頁。

４、コムサ（Ｃｏｍｓａ、　Ｊ、）およびフィリップ（ｐｔｏｔｐｐ）、アンナ ール、デュ、アンスティティ、パスツール（Ａｎｎ、Ｉｎａｔｉｔ、　Ｐａ５ｔ ｅｖｒ）、（１９６６年）、１１０＠、３６５〜３７２頁。

５、コムサ（Ｃｏｍｓａ、　Ｊ　、）、デミック、ホルモンズ（’ｌ’　ｈｙｍ ｉｃ　Ｈｏｒｍｏｎｅｓ）、ラッキー（Ｌｃｃｋｅｙ、　Ｔ、Ｄ、）ｇ、（１９ ７３年）、ユニバージティー、プレス、バルチモア（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｐ ｒｅｓｓ、　Ｂａ１ｔｆｏｒｅ）、３９〜５８頁０６、コムサ（Ｃｏｍｓａ、　 Ｊ　、）、デミック、ホルモンズ（Ｔｈｙ＋＋＋ｉｃ　Ｈｏｒｍｏｎｅｓ）、ラ ッキー（１，＊ｃｋｅｙ、　Ｔ、Ｄ、）！、（１９７３年）、ユニバージティー 、プレス、バルチモア（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｐｒｅｓｓ、　Ｂａｌｔｉｍｏ ｒｅ）刊。

７、コムサ（Ｃｏｍｓａ、　Ｊ　、）、しオンハルト（Ｌｅｏｎｈａｒｄｔ、　 Ｈ，、）およびウエカーレ（Ｗｅｋｅｒｌｅ、　Ｈ，）、レビユー、才ブ、フィ ジオロジカル、バイオケミカル、７フルマコロジー（Ｒｅｖ、　Ｐｈｙｓｉｏｌ 、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、）、（１９８２年）、９２巻、１ １５〜１９１頁。

８、コムサ（Ｃｏｍｓａ、　Ｊ、）、バウマン（ＢａＬｍａｎｎ、　Ｂ、）、ゼ ツベザウエル（ＺｅｐｐｅｚａＬ！ｅｒ、　Ｈ，）、しオンハルト（Ｌｅｏｎｈ ａｒｄｔ、　Ｈ，）およびウェーバ−（Ｗｅｂｅｒ、　Ｎ、）、コンプテス、レ ングス、エブドマデー＆−デ、セアンス、ド、ル、アカデミ−、デ、シアンセ（ Ｃ，Ｒ，Ａｃａｄ、　ＳＣ，Ｐａｒｉｓ）、（１９７９年）、２８８巻、１Ｂ、 １〜１８７頁。

９、ロー（Ｌｏｗ、Ｔ、Ｌ、に、）およびゴールドスタイン（Ｇｏｌｄｓｔｅｉ ｎ、　Ａ。

Ｌ、）、ジャーナル、才ブ、バイオロジカル、ケミストリー（Ｊ、　Ｂｉｏｌ。

Ｃｈｅｗ、）、（１９７９年）、２５９＠、９８７〜９９５頁。

１０、カルダレラ（Ｃａｌｄａｒｅｌｌａ、　Ｊ　、）、グツドール（Ｇｏｏｄ ａｌ、１．　Ｇ、Ｊ　、）、フェリックス（Ｆｅｌｉｘ、　Ａ、Ｈ，）、ノ＼イ マーＣＨｅ１ＩＩｌｅｒ、　Ｅ、Ｐ、）、サルビン（Ｓａｌｖｉｎ、　Ｓ、Ｂ、 ）およびホレッカー（Ｈｏｒｅｃｋｅｒ、　Ｂ、Ｌ、）、プロシージンゲス、オ ン、ザ、ナショナル、アカデミ−、オン、サイエンシズ、オン、ＬＪＳＡ（Ｐｒ ｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｅｔ、　ＵＳＡ）、（１９８３年）、８０ 巻、７４２４〜７４２７頁。

比ｏ−（Ｌｏｗ、Ｔ、Ｌ、に、）、ツー（ＨＬｌ、　Ｓ、−に、）およびゴール ドスタイン（Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ、　Ａ、Ｌ、）、プロシージンゲス、オン、ザ 、ナショナル、アカデミ−、オン、サイエンシズ、ＵＳＡ（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔ ｌ、　Ａｃａｄ。

Ｓｃｉ、ＵＳＡ）、（１９８１年）、７８巻、１１６２〜１１６６頁。

１２、ハンナベル（Ｈａｎｎａｐｐｅｌ、　Ｅ　、）、ダブ−スト（Ｄａｖｏ＊ ｓｔ、　Ｓ　、）およびホレッカー（Ｈｏｒｅｃｋｅｒ、　Ｂ、Ｌ　、）、プロ シージンゲス、オン、ザ、ナショナル、アカデミ−、オン、サイエンシズ、ＵＳ Ａ　（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ。

Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ）、（１９８２年）、７９巻、１７０８〜１７１ １頁。

１３゜オージャ（Ａｔ＋ｄｈｙａ、　Ｅ、）、シュレジンガー（Ｓｃｈｌｅｓｉ ｎｇｅｒ、　Ｇ、）、およびゴールドスタイン（Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ、　Ｇ、　 ）バイオケミストリー（Ｂｉｏ−ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、（１９８１年）、２０ 巻、６１９５〜６２００頁。

１４、プｏ−（Ｐｌｅａｕ、　Ｊ、−Ｍ、）、ダーテンヌ（Ｄａｒｄｅｎｎｅ、 　Ｈ，）、ブルーキット（Ｂ　］ｏｐｑ＊ｉｔ、　Ｙ　、）およびバッハ（Ｂａ ｃｂ、Ｊ、−Ｆ、）、ジャーナル、才ブ、バイオロジカル、ケミストリー（Ｊ　 、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｗ、）、（１９７７年）、２５２＠、８０４５〜８０４ ７頁。

１５、ハーシ二コ（Ｈｅｒｓｈｋｏ、　Ａ、）、セル（Ｃｅｌｌ）、（１９８３ 年）、３４（Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ、　Ｇ、）およびニアル（Ｎｉａｌｌ、　Ｈ， Ｄ、）、バイオケミストリー　（Ｂ　ｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、（１９７５年 ）、１４巻、２２１４〜２２１Ｂ頁。

１７、バートン（Ｂｕｒｔｏｎ、　Ｐ、）、イデン（Ｉｄｅｎ、　Ｓ、）、、ミ ッチェル（Ｍｉｔｃｂｅｌｌ、　Ｋ、）およびホワイト（Ｗｈｉｔｅ、　Ａ、） 、プロシージンゲス、才ブ、ザ、ナショナル、アカデミ−、オン、サイエンシズ 、ＬＩＳＡ（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＬＪＳＡ）、（ １９７８年）、７５巻、８２３〜８２７頁。

１Ｂ、ジェルボール（Ｊ　ｏｒｎｖａｌｌ、　Ｈ、）、カールストレーム（Ｃａ ｒｌｓｔｒｏｍ。

Ａ、）、ベダーリン（Ｐ　ｅｔｔｅｒｓｓｏｎ、　Ｔ　、）、ヤコブソン（Ｊａ ｃｏｂｓｓｏｎ、　Ｂ、）、バーソン（Ｐ　ｅｒｓｓｏｎ、　Ｍ、）およびマッ ト（Ｍｕｔｔ、　Ｖ、）、ネーチャー（ＮａｔＬｉｒｅ）、（１９８１年）、２ ９１巻、２６１〜２６３頁。

１９、ロビー（Ｒｏｂｅｙ、　Ｇ、）、キャンベル（Ｃａｍｐｂｅｌｌ、　Ｂ、 Ｊ　、）およびラッ＊−ＣＬＬ！ｃｋｅｙ、　Ｔ、Ｄ、）、インフェクション、 アンド、インムニティ（Ｉ　ｎｆｅｃｔｉｏｎ　ａ、　Ｉ　ａｍｅｎｉｔｙ）、 （１９７２年）、６巻、６８２〜６８８頁。

２０、　ハリトス（Ｈａｒｉｔｏｓ、　Ａ、Ａ、）、グツドール（Ｇｏｏｄａｌ ｌ、　Ｇ、Ｊ　、）、およびホレッカー（Ｈｏｒｅｃｋｅｒ、　Ｂ、Ｌ、）、プ ロシージンゲス、オン、ザ、ナシｅナル、アカデミ−１才ブ、サイエンシズ、Ｕ ＳＡ（Ｐｒｏｅ、　Ｎａｔｌ。

Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ）、（１９８４年）、８１巻、１００８〜１０１ １頁。

２１、プラディロル（Ｐａｒａｄａｒｏｌ、　Ｌ、）、ジェルンボール（Ｊ　ｏ ｒｎｖａｌ　１　。

Ｈ，）、マット（ＭＬｔｔ、　Ｖ、）およびライベット（Ｒｉｂｅｔ、　Ａ、） 、Ｆ’ＥＢＳレターズ（ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔ、）、（１９８０年）、１０９巻、 ５５〜５８頁。

２２、ジェルンボール（Ｊｏｒｎｖａｌｌ、　）！、）およびパーソン（Ｐ　ｅ ｒｓｓｏｎ、　Ｂ　、）、バイオサイエンス、レポート（Ｂｉｏｓｃｌ　Ｒｅｐ 、）、（１９８３年）、３巻、２２５〜２３２頁。

２３、ライヒハルト（Ｒｅｉｃｈｈａｒｔ、　Ｒ，）、ジェルンボール（Ｊ　ｏ ｒｎｖａｌｌ。

Ｈ，）およびツェペンウェル（Ｚｅｐｐｅｎｚａｑｅｒ、　Ｍ、）、ＦＥＢＳレ ターズ（ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔ）、（１９８４年）、印刷中。

２４、ド１ラジン（ＤｅＬａｎｇｅ、　Ｒ，Ｊ　、）、ツーバー（Ｈｏｏｐｅｒ 、　Ｊ、Ａ、）およびスミス（Ｓｍｉｔｈ、　Ｅ、Ｌ、）、プロシージンゲス、 オン、ザ、ナショナル、アカデミ−、オン、サイエンシズ、ＵＳＡ（Ｐｒｏｃ、 　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ。

Ｓｃｉ、ＬＩＳＡ）、（１９７２年）、６９巻、８８２〜８８４頁。

２５、オルソン（Ｏｌｓｏｎ、　Ｍ、Ｏ，Ｊ、）、ジターダン（Ｊ　ｏｒｄａｎ 、　Ｊ　、）およびプツシｚ（Ｆ３ｔｓｂ、　Ｈ，）％バイオケミカル、バイオ フィジカル、す゛サーチ、コミュニケーシヨンズ（Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐ ｈｙｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏｗｌｌｌｕｎ、）、（１９７２年）、４６巻、５０〜 ５５頁。

２６、カンフ（Ｋａｎｄａ、　Ｙ、）、グツトマン（Ｇｏｏｄｌｌａｎ、　Ｄ、 Ｓ、）、カンフイールド（Ｃａｎｆｉｅｌｄ、　Ｒ，Ｅ、）およびモーガン（Ｍ ｏｒｇａｎ、　Ｆ、Ｊ、）、ジャーナル、オン、バイオロジカルケミストリー（ Ｊ　、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｔ）、（１９７４年）、２４９巻、６７９６〜６８ ０５頁。

２７、ジェルボール（Ｊｏｒｖａｌｌ。Ｈ，）、マット（Ｍｕｔｔ、　Ｖ、）お よびパーソン（Ｐｅｒｓｓｏｎ、　Ｍ、）、ホッペザイラーズ、ツアイトシ二リ フト、フユール、フイジオロギッシェ、ヒエミー（Ｈｏｐｐｅ−Ｓｅｙｌｅｒ’ ｓ　Ｚ、　ｐｈｃｓｉｏｌ。

Ｃｈｅｔ）。

２８．ボール（Ｂａｌｌ、　Ｄ、Ｊ　、）、スターフタ−（Ｓ　ｌａＬｇｈｔｅ ｒ、　Ｃ，Ａ、）、ヘンズレイ（Ｈｅｎｓｌｅｙ、　Ｐ　、）およびギヤラード （Ｇａｒｒａｒｄ、　Ｗ、Ｔ、）、　ＦＥＢＳレターズ（ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔ、 ）、（１９８３年）、１５４巻、１６６〜１７０頁。

２９、バーン（Ｈａｈｎ、　Ｇ、Ｓ、）およびハンバーガー（ＨａｍｂＬ：ｒｇ ｅｒ、Ｒ，Ｎ　、）、ジャーナル、オン、イムノロジー（Ｊ　、Ｉ　ｍｇ＋＊ｎ ｏ１．）、（１９８１年）、１２６巻、４５９〜４６２頁。

３０、モス（Ｍｏｓｓ、　Ｔ、）、キャリー（Ｃａｒｙ、　Ｄ、Ｐ、）、アバ− クロンビー（Ａｂｅｒｃｒｏｍｂｉｅ、　Ｂ、Ｄ、）、クレーン−Ｃ７ビンソン （Ｃｒａｎｅ−Ｒｏｂｉｎｓｏｎ。

Ｃ，）およびプラトバリー（Ｂｒａｄｂｕｒｙ、　Ｅ、Ｈ，）、ヨーロピアン、 ジャーナル、オン、バイオケミストリー（ＥＩ！ｒ、　Ｊ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、 　）、（１９７６年）、７１巻、３３７〜３５０頁。

３１、ガイソウ（Ｇｅｉｓｏｖ、　Ｈ，Ｊ、）およびスミス（Ｓ＋ｙｔｈ、　Ｄ 、Ｇ、）、ジ、エンザイモロジー、オン、ボストトランスレーシラナル、モディ フィケーション、オン、プロテインズ（Ｔｈｅ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ　ｏｆ　 Ｐｏ５ｔ−ｔｒａ−ｎｓｌａｔｉｏｎａｌ　Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　 Ｐｒｏｔｅｉｎｓ）、フリートｖ　ン（Ｆｒｅｅｄｍａｎ。

Ｒ，Ｂ、）およびホーキンズ（Ｈａ％ｋｉｎｓ、　Ｈ，Ｃ，）Ｗ、第１巻、２５ ９〜２８７頁、７カデミツク、プレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、　Ｌｏ ｎｄｏｎ）刊０３２、ジェルンボール（Ｊｏｒｎｖａｌｌ、　Ｈ，）、エフマン （Ｅｋｍａｎ、　Ｒ，）、カールキスト（Ｃａｒｌｑｕｉｓｔ、　Ｈ，）および パーソン（Ｐ　ａｒｓｏｏｎ、　Ｂ　、’）、バイオジエネティックス、オン、 モー一口ホルモナル、ペブタイズ（Ｂｉｏｇｅｒｒｅｔｉｃｓ　ｏｒ　Ｎｅ＊ｒ ｏｈｏｒｍｏｎａｌ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ）、ハカンソン（Ｈａｋｚｎｓｏｎ、　 Ｒ，）およびソレル（Ｔｈｏｒｅｌｌ、　Ｊ　、）編、アカデミツク、プレス（ ＡｃａｄｅａｉｅＰｒｅｓｓ、　Ｌｏｎｄｏｎ）刊、印刷中。

３３、ベーム（Ｂｏｈｍ、　ｌ、、）、ブライアンド（Ｂｒｉａｎｄ、　Ｇ、） 、ツーチェール（Ｓａｖｔｉｅｒｅ、　Ｐ、）およびクレーンーロビンソン（Ｃ ｒａｎｅ−Ｒｏｂｉ、ｎ５ｏｎ、　Ｃ。

）、ヨーロピアン、ジャーナル、オン、バイオケミストリー（Ｅ↓ｒ、Ｊ。

Ｂｉｏｃｈｅｍ、　）、（１９８２年）、１２３巻、２９９〜３０３頁。

３４、ベーム（Ｂｏｂ＋＋、　Ｌ、）、クレーンーロビンソン（Ｃｒａｎｅ−Ｒ ｏｂｉｎｓｏｎ。

Ｃ，）、ソーチェール（Ｓ　ａｕｔｉｅｒｅ、　Ｐ　、）、ヨーロピアン１、ジ ャーナル、オン、バイオケミストリー（ＥＵｒ、　Ｊ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　） 、（１９８０年）、１０６＠、５２５〜５３０頁。

３５、リル（Ｒｉｌｌ、　Ｒ，Ｌ、）およびウースターホフ（Ｏｏｓｔｅｒｈｏ ｆ、Ｄ、に、）、ジャーナル、オン、バイオロジカル、ケミストリー（Ｊ、Ｂｉ ｏｌ、Ｃｈｅｍ、）、（１９８２年）、２５７＠、１４８７５〜１４８８０頁。

３６、アイクプッシ：Ｌ（Ｅｉｃｋｂｔ；ｓｈ、　Ｔ、Ｈ，）、ワトソン（Ｗａ ｔｓｏｎ、　Ｄ、Ｋ。

）およびムードリアナキス（ＭｏＬ：ｄｒｉａｎａｋｌｓ、　Ｅ、Ｎ　、）、セ ル（Ｃｅｌｌ）、（１９７６年）、９＠、７８５〜７９２頁。

３７、アイゼンベルブ（Ｉ　ｓｅｎｂｅｒｇ、Ｉ　、）、アニュアル、レビュー ズ、オン、バイオケミストリー（Ａｎｎ、　Ｒｅｖ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、）、（ １９７９年）、４８＠、１５９〜１９１頁。

３８、イーマン（Ｙｅａｍａｎ、　Ｓｊ、）、コーエン（Ｃｏｈｅｎ、　Ｐ、） 、ワトソン（Ｗａｔｓｏｎ、　Ｄ、Ｃ，）およびディクソン（Ｄｉｘｏｎ、　Ｇ 、Ｈ，）、ノ（イオケミカル、ジャーナルＣＢ　ｊｏｃｈｅｍ、　Ｊ　、）、（ １９７７年）、１５２＠、４１１〜４２１頁。

３９、プツシ５（Ｂｕｓｈ、　Ｈ，）、バラル（Ｂａｌｌａｌ、　Ｎ、Ｒ，）、 ブツシュ（Ｂｕｓｈ、　Ｒ，に、）、ショア（Ｃｂｏｉ、　Ｙ、Ｃ，）、デービ ス（Ｄａｖｉｓ、　Ｆ、）、ゴールドクノップフ（ＧｏｌｄｋｎｏｐＬ　Ｉ　、 Ｌ、）、マツイ（Ｍａｌｓｕｉ、　Ｓ−１、）、ラオ（Ｒａｏ、Ｍ、Ｓ、）およ びロートプラム（Ｒｏｔｈｂｌシｉ、　Ｌ、Ｊ、）、コールド、スプリング、ハ ーバ−、シンポジウム、オン、クオンティタティブ、バイオロジー（Ｃｏｌｄ　 Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｓｙｍｐ、　Ｑｕａｎｔ、　Ｂｉｏｌ、）、（１ ９７８年）、４２巻、６６５〜６８３頁。

９８０年）、８＠、４６７１〜４６８０頁。

４１、グローブ（Ｇｒｏｖｅ、　Ｇ、Ｗ、）およびツパイドラ−（Ｚｗｅｉｄｌ ｅｒ、　Ａ、）、バイオケミストリー（Ｂ　ｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、（１９ ８４年）、２３巻、４４３６〜４４４３頁。

４２、ジョルダノ（Ｊｏｒｄａｎｏ、　Ｊ、）、モンテｏ　（Ｍｏｎｔｅｒｎ、 　Ｆ　、）およびパラシアン（Ｐａｌａｃｉａｎ、　Ｅ、）、バイオケミストリ ＝ＣＢ　ｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、（１９８４年）、２３巻、４２８０頁。

４３、ハンネスタド（Ｈａｎｎｅｓｔａｄ、　Ｋ、）およびストーラー（Ｓ　ｔ ｏｌｌｅｒ、　Ｂ　。

Ｄ、）、ネーチャー　（Ｎ　ａｔｃｒｅ）、（１９７８年）、２７５巻、６７１ 〜６７３頁。

４４．レフビッグ（Ｒｅｋｖｉｇ、　０．Ｐ、）およびハンネスタド（Ｈａｎｎ ｅｓｔｘｄ。

Ｋ、）、ジャーナル、オン、エキスペリメンタル、メジシン（Ｊ、ＥＸｐ。

Ｍｅｄ、）、（１９８０年）、１５２巻、１７２０−１７３３頁。

４５、ウィリアムス（Ｗｆｌｌｉａｍｓ、　Ａ、Ｆ　、）、ネーチャー　（Ｎ　 ａｔ＊ｒｅ）、（１９８４年）、３０８巻、１２〜１３頁。

容量（ｈζ） ２ニー（ ニコー 第３Ａ図 第３Ｂ図 り″／ｙ９５ｔセクンントアミノ酸配列国捺調交報告

Claims (20)

【特許請求の範囲】
1. １．少なくとも１個のヒストンおよび／または少なくともホルモン性特性を示す １個のヒストンセグメントまたはヒストンフラグメントから成るホルモン性活性 を有する生物学的作用物質。
2. ２．該物質が少なくとも１個のヒストンおよび／または少なくともホルモン性特 性を示す１個のヒストンセグメントまたはヒストンフラグメントを含有している ことから成るホルモン性活性を有する生物学的作用物質．
3. ３．該物質がＨ２Ａヒストンおよび／またはＨ２Ｂヒストンであることから成る 請求の範囲第１項または第２項記載の生物学的作用物質。
4. ４．該ヒストンセグメントが本質的に進化学的可変ヒストン部分またはその１部 によって決定されることを特徴とする請求の範囲第１項または第２項記載の生物 学的作用物質。
5. ５．該ヒストンセグメントが本質的にヒストンのＮ−末端部分によって決定され ることから成る請求の範囲第４項記載の生物学的作用物質。
6. ６．医薬的または薬学的製剤中に存在するかまたは上記製剤として前記請求の範 囲各項の１項またはそれ以上の項記載の生物学的作用物質。
7. ７．診断学的目的または診断学的処置に供される前記請求の範囲各項の１項また はそれ以上の項記載の生物学的作用物質。
8. ８．胸腺ホルモン様活性を有する請求の範囲第１項〜第７項のいずれか１項記載 の生物学的作用物質。
9. ９．免疫系の刺激作用および／または内分泌学的活性を有する請求の範囲第６項 または第７項記載の生物学的作用物質。
10. １０．免疫療法、免疫虚弱（例えば栄養障害）および免疫欠損症の処置を目的と する請求の範囲第６項または第７項記載の生物学的作用物質。
11. １１．胸線摘除術後の処置および胸腺大量照射にともなう放射線障害性白血病の 防御を目的とする請求の範囲第６項または第７項記載の生物学的作用物質。
12. １２．拮抗作用物資［チロキシン、副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）、デスオ キシコルチコステロン、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、ゴナドトロピンの］お よび／または協同作用物質（成長ホルモンの）として使用される請求の範囲第６ 項または第７項記載の生物学的作用物質。
13. １３．少なくとも、免疫系の１タンパク質、特にユビキチンと結合または組合わ せることから成る前記各項の１項またはそれ以上の項に記載の生物学的作用物質 。
14. １４．少なくとも１個のヒストン（特にＨ２Ａヒストン、Ｈ２Ｂヒストン）およ び／またはホルモン性特性を有する少なくとも１個のヒストンセグメントまたは ヒストンフラグメントを製造し、生物学的媒質に添加することから成る請求の範 囲前記各項の１項またはそれ以上の項に記載の生物学的物質の製造方法。
15. １５．進化学的可変部配列またはその部分を包含しているヒストンセグメント（ ヒストンフラグメント）を製造する請求の範囲第１４項の方法。
16. １６．少なくとも１個のヒストンまたはその１部のＮ−末端部分から出発して行 なわれる請求の範囲第１５項記載の方法。
17. １７．少なくとも１個のヒストン（特にＨ２Ａおよび／またはＨ２Ｂヒストン） および／または少なくとも１個のホルモン類似特性を有するヒストンセグメント またはヒストンフラグメント（特にＮ−末端ヒストン部分）を、ホルモン活性を 有する医薬的または薬学的製剤に加え、またはそのような製品として用いる利用 。
18. １８．少なくとも１個のヒストンおよび／または少なくとも１個のホルモン性特 性を有するヒストンセグメントまたはヒストンフラグメントを、診断目的または 診断的処置に用いる利用。
19. １９．少なくとも免疫系の１タンパク質、特にユビキチンと結合して用いる請求 の範囲第１７項または第１８項に記載の方法。
20. ２０．ホルモン性活性を有する医薬品または診断目的の医薬品の製造に利用され 、合成または遺伝子技術によって製造され、または内分泌臓器（例えば仔ウシの 胸腺）から単離されるヒストン（特にＨ２Ａおよび／またはＨ２Ｂヒストン）お よび／またはそれから得られるホルモン類似の（胸腺ホルモン様の）作用を有す るヒストンセグメント。