JPS6138463A - アンモニアの定量法 - Google Patents
アンモニアの定量法Info
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- JPS6138463A JPS6138463A JP16014384A JP16014384A JPS6138463A JP S6138463 A JPS6138463 A JP S6138463A JP 16014384 A JP16014384 A JP 16014384A JP 16014384 A JP16014384 A JP 16014384A JP S6138463 A JPS6138463 A JP S6138463A
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- Japan
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- ammonia
- solution
- test solution
- oxidizing agent
- imidazole
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-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/58—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving urea or urease
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- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、アンモニアの定量法に関する。
更に詳しくは、本発明は、フェノール系化合物又はＮ、
Ｎ−ジ置換アニリン系化合物、酸ｆヒ剤、並びにイミダ
ゾール又は／及びイミダゾール誘導体を用いて行なう、
アンモニアの定量法に関する。
Ｎ−ジ置換アニリン系化合物、酸ｆヒ剤、並びにイミダ
ゾール又は／及びイミダゾール誘導体を用いて行なう、
アンモニアの定量法に関する。
アンモニアの定量法は従来より種々検討されているが、
なかでも、ニトロプル７ツドナトリウムを反応促進剤と
して、フェノール・次亜塩素酸反応［Ｂｅｒｔｈｅｌｏ
ｔ反応］又はサリチル酸・次亜塩素酸反応で発色させ、
生じた青色色素を比色定量する方法が一般に広く行なわ
れている。本反応の発色は極めて鋭敏であり、微量のア
ンモニアの比色定量法としては非常にすぐれた方法であ
るが、有毒有害で、且つ光に不安定なニトロプルジッド
ナトリウムを触媒として用いる点で問題があり、また、
血清中の尿素をウレアーゼでアンモニアに変換し、それ
金本反応で定量する、いわゆるウレアーゼ・インドフェ
ノール反応による比色法に於ては呈色が強すぎて、極大
吸収波長（λｍａｘ＝６３０〜７００ ｎｍ ）での測
定では正常値でも高い吸光度金示してしまうため、極大
吸収波長から外れた低吸収波長（５７０〜５８０ ｎｍ
）で測定しなければならず、測定範囲が極端に狭くな
ってしまうという問題点があった。また、ウレアーゼ・
インドフェノール法による血清尿素の定量試薬に於ては
、通常ウレアーゼ、サリチル酸、ニドミグ・ルシッドナ
トリウムを同一溶液とした測定試液と次亜塩素酸ナトリ
ウム溶液との２液型の試液で、２ステップ操作法で使用
されているが、この場合のウレアーゼの安定性は、ウレ
アーゼのみの溶液に比べて極端に悪くなるので、使用期
間を延長するためには、ウレアーゼ量？必要量の数倍〜
数十倍使用（−なければならなかった。
なかでも、ニトロプル７ツドナトリウムを反応促進剤と
して、フェノール・次亜塩素酸反応［Ｂｅｒｔｈｅｌｏ
ｔ反応］又はサリチル酸・次亜塩素酸反応で発色させ、
生じた青色色素を比色定量する方法が一般に広く行なわ
れている。本反応の発色は極めて鋭敏であり、微量のア
ンモニアの比色定量法としては非常にすぐれた方法であ
るが、有毒有害で、且つ光に不安定なニトロプルジッド
ナトリウムを触媒として用いる点で問題があり、また、
血清中の尿素をウレアーゼでアンモニアに変換し、それ
金本反応で定量する、いわゆるウレアーゼ・インドフェ
ノール反応による比色法に於ては呈色が強すぎて、極大
吸収波長（λｍａｘ＝６３０〜７００ ｎｍ ）での測
定では正常値でも高い吸光度金示してしまうため、極大
吸収波長から外れた低吸収波長（５７０〜５８０ ｎｍ
）で測定しなければならず、測定範囲が極端に狭くな
ってしまうという問題点があった。また、ウレアーゼ・
インドフェノール法による血清尿素の定量試薬に於ては
、通常ウレアーゼ、サリチル酸、ニドミグ・ルシッドナ
トリウムを同一溶液とした測定試液と次亜塩素酸ナトリ
ウム溶液との２液型の試液で、２ステップ操作法で使用
されているが、この場合のウレアーゼの安定性は、ウレ
アーゼのみの溶液に比べて極端に悪くなるので、使用期
間を延長するためには、ウレアーゼ量？必要量の数倍〜
数十倍使用（−なければならなかった。
近年、これらの欠点全改良する方法がいくつか検討され
ており、例えば、極太吸収波長で測定できる方法も開発
されている（特公昭５８−１１０２４号公報）。この方
法は、Ｂｅｒｔｈｅｌｏｔ法に於て触媒として使用する
ニトロプルジッドナトリウムの代わりにピラゾール全使
用するというもので、発色感厳か低く、血清尿素の測定
では、極大吸収波長（サリチル酸ナトリウム使用で６５
５ｎｍ）で測定できる利点を有している。しかしながら
、この方法も、ピラゾールの濃度により発色度が異なり
、且つ直線性の範囲も変動するなど実用化の面でまだ解
決されていない問題を多く含んでいる。
ており、例えば、極太吸収波長で測定できる方法も開発
されている（特公昭５８−１１０２４号公報）。この方
法は、Ｂｅｒｔｈｅｌｏｔ法に於て触媒として使用する
ニトロプルジッドナトリウムの代わりにピラゾール全使
用するというもので、発色感厳か低く、血清尿素の測定
では、極大吸収波長（サリチル酸ナトリウム使用で６５
５ｎｍ）で測定できる利点を有している。しかしながら
、この方法も、ピラゾールの濃度により発色度が異なり
、且つ直線性の範囲も変動するなど実用化の面でまだ解
決されていない問題を多く含んでいる。
また、解媒としてニトロプル７ツドナトリウムを用いな
い方法として、２価のマンガンイオンを角了媒として用
いる方法も開発されているが（Ｊ。
い方法として、２価のマンガンイオンを角了媒として用
いる方法も開発されているが（Ｊ。
Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｍ、 、 Ｖａｌ、 １５６ 、４
５７ 、１９４５年）、この方法も沸腸水ふ中で加熱反
応させるなど過酷な条件を必要とするため、臨床検査室
に於ける日常検査には不向きである。
５７ 、１９４５年）、この方法も沸腸水ふ中で加熱反
応させるなど過酷な条件を必要とするため、臨床検査室
に於ける日常検査には不向きである。
本発明者らは、これらの問題点を解決すべく鋭意研究の
結果、イミダゾール又はイミダゾール誘導体にＢｅｒｔ
ｈｅｌｏｔ反応に於ける発色反応促進効果があることを
見出し、更にこれ？用いた場合には、血清尿素の定量に
於て、ウレアーゼ等の試薬の安定性が飛翔的に向上する
こと、及び発色感度が従来のニトロプル７ツドナトリウ
ムを用いた場合の約すと低く、血清尿素の定量に於て、
極大吸収波長での測定が可能となること金併せて見出し
、本発明を完成するに到った。
結果、イミダゾール又はイミダゾール誘導体にＢｅｒｔ
ｈｅｌｏｔ反応に於ける発色反応促進効果があることを
見出し、更にこれ？用いた場合には、血清尿素の定量に
於て、ウレアーゼ等の試薬の安定性が飛翔的に向上する
こと、及び発色感度が従来のニトロプル７ツドナトリウ
ムを用いた場合の約すと低く、血清尿素の定量に於て、
極大吸収波長での測定が可能となること金併せて見出し
、本発明を完成するに到った。
即ち、本発明は、フェ“ノール系化合物及び酸化剤を用
いるアンモニアの比色定量法に於て、イミダゾール又￥
′ｉ、／及びイミダゾール誘４体の存在下にこれを行な
うこと全特徴とする、アンモニアの定量法、並びに、イ
ミダゾール又は／及びイミダゾール誘導体の存在下、Ｎ
、Ｎ−ジ置換アニリン系化合物、及び酸化剤を用いて行
なう、アンモニアの定量法である。
いるアンモニアの比色定量法に於て、イミダゾール又￥
′ｉ、／及びイミダゾール誘４体の存在下にこれを行な
うこと全特徴とする、アンモニアの定量法、並びに、イ
ミダゾール又は／及びイミダゾール誘導体の存在下、Ｎ
、Ｎ−ジ置換アニリン系化合物、及び酸化剤を用いて行
なう、アンモニアの定量法である。
本発明で用いるイミダゾール又はイミダゾール誘導体は
無毒無害であり、従来用いられていたニトロプルジット
“ナトリウムのように光による分解を受けにくい性質を
有しているので、試液の調製も容易であり、血清尿素の
定量に用いるウレアーゼの試液中に於ける安定性もこれ
により飛躍的に向上する。しかも発色感度は、従来のニ
トロプルジッドナトリウムを用いた場合に比べて約捗。
無毒無害であり、従来用いられていたニトロプルジット
“ナトリウムのように光による分解を受けにくい性質を
有しているので、試液の調製も容易であり、血清尿素の
定量に用いるウレアーゼの試液中に於ける安定性もこれ
により飛躍的に向上する。しかも発色感度は、従来のニ
トロプルジッドナトリウムを用いた場合に比べて約捗。
であるため、ウレアーゼ金剛いる血清尿素の測定が極大
吸収波長で測定できるので、血清中の着色物質、例えば
、ヘモグロビン等の影響も受けないという利点を有する
。
吸収波長で測定できるので、血清中の着色物質、例えば
、ヘモグロビン等の影響も受けないという利点を有する
。
本発明に用いるイミダゾール誘導体としては、（式中、
Ｒ’ 、 Ｒ２，Ｒ３，Ｒ’は水素、又はメチル基エチ
ル基、プロピル基等のアルキル基、ベンジル基、フェネ
チル基等のアラルキル基、フェニル基。
Ｒ’ 、 Ｒ２，Ｒ３，Ｒ’は水素、又はメチル基エチ
ル基、プロピル基等のアルキル基、ベンジル基、フェネ
チル基等のアラルキル基、フェニル基。
トリル基等のアリール基金示す。）で表わされる化合物
、あるいけ一般式 （式中、ｘ’ 、 ｘ２． ｘ’ 、 ｘ’ 、 Ｘ５
． ｘ’は、水素、又はメチル基、エチル基、プロピル
基等のアルキル基、ベノジル基、フェネチル基等のアラ
ルキル基フェニル基、トリル基等のアリール基を示す。
、あるいけ一般式 （式中、ｘ’ 、 ｘ２． ｘ’ 、 ｘ’ 、 Ｘ５
． ｘ’は、水素、又はメチル基、エチル基、プロピル
基等のアルキル基、ベノジル基、フェネチル基等のアラ
ルキル基フェニル基、トリル基等のアリール基を示す。
）で表わされる化合物か挙げられる。具体的には、１−
メチルイミダゾール、■−エチルイミダゾール、 １−
フェニルイミダゾール、■−ベンジルイミダゾール、
２−メチルイミダゾール、２−エチルイミダゾ〜ル、２
−フェニルイミダゾール、４（５）−メチルイミダゾー
ル、１，２−ジメチルイミダゾール、１）４−ジメチル
イミダゾール、１ｊ５−ジメチルイミダゾール、２少４
（２，５）−ジメチルイミダゾール、４う５−ジメチル
イミダゾール、１ｊ２３５−１−ジメチルイミダゾール
。
メチルイミダゾール、■−エチルイミダゾール、 １−
フェニルイミダゾール、■−ベンジルイミダゾール、
２−メチルイミダゾール、２−エチルイミダゾ〜ル、２
−フェニルイミダゾール、４（５）−メチルイミダゾー
ル、１，２−ジメチルイミダゾール、１）４−ジメチル
イミダゾール、１ｊ５−ジメチルイミダゾール、２少４
（２，５）−ジメチルイミダゾール、４う５−ジメチル
イミダゾール、１ｊ２３５−１−ジメチルイミダゾール
。
ｚ４３ｓ−トリメチルイミダゾール、２，４ｓ５−トリ
メチルイミダゾール、１−エチル−２−メチルイミダゾ
ール、 ４ （５）−メチル−２−フェニルイミタゾー
ル、ベンズイミダゾール、２−メチルベンズイミダゾー
ル、２−エチルペンスイミタゾール等、アミン基金布さ
ない誘導体が挙げられる。
メチルイミダゾール、１−エチル−２−メチルイミダゾ
ール、 ４ （５）−メチル−２−フェニルイミタゾー
ル、ベンズイミダゾール、２−メチルベンズイミダゾー
ル、２−エチルペンスイミタゾール等、アミン基金布さ
ない誘導体が挙げられる。
本発明に用いるイミダゾール又はイミダゾール誘導木枯
、又はこれらの任意の混合物の濃度は最終−呈色液中、
１ ｍｍｏＬ／１以上あれば充分であるが、通常１−１
００ ｍｍｏｔ／ Ｌが好ましく用いられる。
、又はこれらの任意の混合物の濃度は最終−呈色液中、
１ ｍｍｏＬ／１以上あれば充分であるが、通常１−１
００ ｍｍｏｔ／ Ｌが好ましく用いられる。
本発明に於て用いられる発色成分としては、フェノール
系化合物の他に、Ｎ）Ｎ−ジ置換アニリン系化合物が挙
げられる。即ち、従来、発色成分、酸化剤及び反応促進
剤を用いて行なうアンモニアの定量法に於て、発色成分
として用いられるのはフェノール系化合物のみであった
が、本発明者らは、このような発色成分及び酸化剤を用
いるアンモニア定量法の改良法について研究の途上、従
来の７工ノール系化合物の他に、Ｎ）Ｎ−ジ置換アニリ
ン系化合物もフェノール系化合物同様、アンモニアの定
量法に於ける発色成分として充分有効に使用し得ること
全見出したのであるが、イミダゾール処（よ／反伏゛イ
ミダゾール訪導体金用いる本発明の方法に於ても、かか
るＮ、Ｎ−ジ置換アニリン系化合物がフェノール系化合
物同様発色成分として用いられイ１）るのである。
系化合物の他に、Ｎ）Ｎ−ジ置換アニリン系化合物が挙
げられる。即ち、従来、発色成分、酸化剤及び反応促進
剤を用いて行なうアンモニアの定量法に於て、発色成分
として用いられるのはフェノール系化合物のみであった
が、本発明者らは、このような発色成分及び酸化剤を用
いるアンモニア定量法の改良法について研究の途上、従
来の７工ノール系化合物の他に、Ｎ）Ｎ−ジ置換アニリ
ン系化合物もフェノール系化合物同様、アンモニアの定
量法に於ける発色成分として充分有効に使用し得ること
全見出したのであるが、イミダゾール処（よ／反伏゛イ
ミダゾール訪導体金用いる本発明の方法に於ても、かか
るＮ、Ｎ−ジ置換アニリン系化合物がフェノール系化合
物同様発色成分として用いられイ１）るのである。
本発明に於て、発色成分として用いるフェノール誘導体
としては、一般式 （式中、ｙｌ 、 ｙ２は水素、炭素数１〜５の低級ア
ルキル基、炭素数１〜５の低級アルコキシ基。
としては、一般式 （式中、ｙｌ 、 ｙ２は水素、炭素数１〜５の低級ア
ルキル基、炭素数１〜５の低級アルコキシ基。
スルホン基、カルボキシル基、又はハロゲンを示す。）
で表わされる化合物が挙げられる。具体的にはフェノー
ル、サリチル酸８ｍ−ヒドロキシ安息香酸、ｐ−ヒドロ
キシ安息香酸、スルホサリチル酸、Ｏ−クレゾール、ｍ
−クレゾール、ｐ−クレソール、０−メトキシフェノー
ル、ｍ−メトキンフェノール、ｐ−メトキンフェノール
、チモール、ｐ−７エノールスルホン酸等が挙げられる
が、これらに限定されるものではない。
で表わされる化合物が挙げられる。具体的にはフェノー
ル、サリチル酸８ｍ−ヒドロキシ安息香酸、ｐ−ヒドロ
キシ安息香酸、スルホサリチル酸、Ｏ−クレゾール、ｍ
−クレゾール、ｐ−クレソール、０−メトキシフェノー
ル、ｍ−メトキンフェノール、ｐ−メトキンフェノール
、チモール、ｐ−７エノールスルホン酸等が挙げられる
が、これらに限定されるものではない。
また、本発明に於て、フェノール系化合物同様。
発色成分として用いられるＮＪＮ−ジ置換アニリン系化
合物としては、一般式 （式中 ｚｌ 、 ｚ２は炭素数１〜５の低級アルキル
基、炭素数１〜５のヒドロキンアルキル基、炭素数１〜
５のスルホアルキル基又は炭素数１〜５のヒドロキンス
ルホアルキル基金示し、Ｚ３．Ｚ′ハ水素、炭素数１〜
５の低級アルキル基、炭素数１〜５の低級アルコキシ基
、ハロゲン、カルボキシル基、又はスルホン基を示す。
合物としては、一般式 （式中 ｚｌ 、 ｚ２は炭素数１〜５の低級アルキル
基、炭素数１〜５のヒドロキンアルキル基、炭素数１〜
５のスルホアルキル基又は炭素数１〜５のヒドロキンス
ルホアルキル基金示し、Ｚ３．Ｚ′ハ水素、炭素数１〜
５の低級アルキル基、炭素数１〜５の低級アルコキシ基
、ハロゲン、カルボキシル基、又はスルホン基を示す。
）で表わされる化合物が挙けられる。具体的には、Ｎ、
Ｎ−ジメチル７−： ’） ：／ 、 Ｎ ５ Ｎ−ジ
エチルアニリン、Ｎ、Ｎ−ジメチル−ｍ−トルイジン、
Ｎ３Ｎ−ジエチル−ｍ−）ルイシン、Ｎ−エチルーＮ〜
β−ヒドロキンエチル−ｍ−トルイジン、Ｎ）Ｎ−ジエ
チル−３，５−キンリジン、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒ
ドロキン−３−スルホプロピル）−ｍ−）ルイジンナト
リウム、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スル
ホプロピル）−３、５−キシリジンナトリウム、Ｎ−エ
チル−Ｎ−（２−ヒドロキ／−３−スルホプロピル）−
３３５−ジメトキシアニリンナトリウム、Ｎ−エチル−
Ｎ−（２−ヒドロキン−３−スルホプロピル）−アニリ
ンナトリウム、Ｎ−エチル−Ｎ−（３−スルホプロピル
）−アニリンナトリウム、Ｎ−エチル−Ｎ−（３−スル
ホプロピル）−ｍ−メトキシアニ′リンナトリウム、Ｎ
−エチル−Ｎ−（３−スルホプロピル）−３１５−ジメ
トキシアニリンナトリウム、Ｎ−エチル−Ｎ−（３−ス
ルホプロピル）−３、５−キシリジンナトリウム等が挙
げられるが、これらに限定されるものではない。
Ｎ−ジメチル７−： ’） ：／ 、 Ｎ ５ Ｎ−ジ
エチルアニリン、Ｎ、Ｎ−ジメチル−ｍ−トルイジン、
Ｎ３Ｎ−ジエチル−ｍ−）ルイシン、Ｎ−エチルーＮ〜
β−ヒドロキンエチル−ｍ−トルイジン、Ｎ）Ｎ−ジエ
チル−３，５−キンリジン、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒ
ドロキン−３−スルホプロピル）−ｍ−）ルイジンナト
リウム、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スル
ホプロピル）−３、５−キシリジンナトリウム、Ｎ−エ
チル−Ｎ−（２−ヒドロキ／−３−スルホプロピル）−
３３５−ジメトキシアニリンナトリウム、Ｎ−エチル−
Ｎ−（２−ヒドロキン−３−スルホプロピル）−アニリ
ンナトリウム、Ｎ−エチル−Ｎ−（３−スルホプロピル
）−アニリンナトリウム、Ｎ−エチル−Ｎ−（３−スル
ホプロピル）−ｍ−メトキシアニ′リンナトリウム、Ｎ
−エチル−Ｎ−（３−スルホプロピル）−３１５−ジメ
トキシアニリンナトリウム、Ｎ−エチル−Ｎ−（３−ス
ルホプロピル）−３、５−キシリジンナトリウム等が挙
げられるが、これらに限定されるものではない。
本発明に用いる酸化剤としては、次亜塩素酸塩、ジクロ
ロイソシアヌル酸塩、クロラミンＴ等の塩素系酸化剤が
好ましく用いられるが、これらに限定されるものではな
い。
ロイソシアヌル酸塩、クロラミンＴ等の塩素系酸化剤が
好ましく用いられるが、これらに限定されるものではな
い。
フェノール系化合物又はＮ、Ｎ−ジ置換アニリン系化合
物は最終呈色液中１０ｍｍｏｊ／を以上あればよいが、
通常、５０〜５００ ｍ ｍｏｔ／ ｔが好ましく用い
られる。
物は最終呈色液中１０ｍｍｏｊ／を以上あればよいが、
通常、５０〜５００ ｍ ｍｏｔ／ ｔが好ましく用い
られる。
一塩素系酸化剤の濃度としては、有効塩素濃度として、
最終呈色液中０．０１％以上になるように加えればよい
が、通常、０．０３〜０．３％が好ましく用いられる。
最終呈色液中０．０１％以上になるように加えればよい
が、通常、０．０３〜０．３％が好ましく用いられる。
ま友、最終反応液性はｐＨ＝ ９以上であればよいが、
通常はｐＨ＝ｌＯ〜１２で行なわれる。
通常はｐＨ＝ｌＯ〜１２で行なわれる。
本発明の方法により血清中の尿素の定量全行なう場合ｖ
ｃＶｉ、例えば、血Ｍ２０μｔを試験管にとり、イミダ
ゾール又はイミダゾール誘導体、又はこれらの任意の混
合物、フェノール系化合物又はＮ、Ｎ−ジ置換アニリン
系化合物、及びウレアーゼ金含む第１試液（！−２ｍｌ
加えて、３７℃恒温槽中一定時間放置後、酸化剤士含む
第２試液’ｇ ２ ｍｔ加え、更に３７℃恒温槽中一定
時間放置した後、試薬ブラ／り？対照として極大吸収波
長での吸光度全測定する。
ｃＶｉ、例えば、血Ｍ２０μｔを試験管にとり、イミダ
ゾール又はイミダゾール誘導体、又はこれらの任意の混
合物、フェノール系化合物又はＮ、Ｎ−ジ置換アニリン
系化合物、及びウレアーゼ金含む第１試液（！−２ｍｌ
加えて、３７℃恒温槽中一定時間放置後、酸化剤士含む
第２試液’ｇ ２ ｍｔ加え、更に３７℃恒温槽中一定
時間放置した後、試薬ブラ／り？対照として極大吸収波
長での吸光度全測定する。
また、要すれば従来性なわれているように、呈色安定性
を良くするため、反応後の過剰の酸化剤を分解する化合
物、例えばエチレングリコール等を第１試液中に加えて
もよい。
を良くするため、反応後の過剰の酸化剤を分解する化合
物、例えばエチレングリコール等を第１試液中に加えて
もよい。
また、試料中のアンモニアを測定する場合は、ウレアー
ゼ金倉まない第１試液を用い、試料を一定量とり、第１
試液ヲ加えて混和後、直ちに第２試液を加えて、３７℃
恒但槽中一定時間放置後、試薬ブランク金対照として極
太吸収波長で吸光度を測定すればよい。
ゼ金倉まない第１試液を用い、試料を一定量とり、第１
試液ヲ加えて混和後、直ちに第２試液を加えて、３７℃
恒但槽中一定時間放置後、試薬ブランク金対照として極
太吸収波長で吸光度を測定すればよい。
本発明は、アンモニアの定量法として広く用いられてい
る方法で、特に血清中の尿素の測定に重要であるＢｅｒ
ｔｈｅｌｏｔ法に於ける問題点即ち、有害（有毒〕で且
つ不安定な薬品金剛いる点、試薬（特にウレアーゼ）の
安定性が悪い点、感度が高いので測定範囲が狭い点等を
改良したすぐれた測定方法全提供するものであり、斯業
に貢献する処極めて大きい。
る方法で、特に血清中の尿素の測定に重要であるＢｅｒ
ｔｈｅｌｏｔ法に於ける問題点即ち、有害（有毒〕で且
つ不安定な薬品金剛いる点、試薬（特にウレアーゼ）の
安定性が悪い点、感度が高いので測定範囲が狭い点等を
改良したすぐれた測定方法全提供するものであり、斯業
に貢献する処極めて大きい。
次に本発明？実施例により更に具体的に説明するが、本
発明はこれらに限定されるものではない。
発明はこれらに限定されるものではない。
実施例１． 試薬安定性
〔測定試薬〕
■ 第１試液
サリチル酸ナトリウムを４％、イミダゾールを ゛
２０ｍｍｏｔ／Ｌ、ウレアーゼｔ ６，０００ Ｕ／ｌ
、 ＥＤＴＡ−２ＮＩＬｔ−０，０２ｉＦ）濃度にな
るようＶＣｏ、 １ Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ＝７．０）
に溶解した。
２０ｍｍｏｔ／Ｌ、ウレアーゼｔ ６，０００ Ｕ／ｌ
、 ＥＤＴＡ−２ＮＩＬｔ−０，０２ｉＦ）濃度にな
るようＶＣｏ、 １ Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ＝７．０）
に溶解した。
■ 第２試液
次亜塩素酸す） ＩＪウム溶１’ｒ有効塩素籏度０．２
チになるように加えた０、５Ｎ水酸化ナトリウム溶ｉを
調製した。
チになるように加えた０、５Ｎ水酸化ナトリウム溶ｉを
調製した。
試料として尿素標準液（尿素窒素２００ ｍｙ／ｄｉ
）を２０μｌとり、第１試液１ｒｎｌを加えて、３７℃
恒温槽中５分間加温後、第２試液２ｒｎｌを加え、３７
℃恒温槽中更に５分間加温した。試薬ブランクを対照と
して、波長６５０ｎｍに於ける吸光度を測定した。
）を２０μｌとり、第１試液１ｒｎｌを加えて、３７℃
恒温槽中５分間加温後、第２試液２ｒｎｌを加え、３７
℃恒温槽中更に５分間加温した。試薬ブランクを対照と
して、波長６５０ｎｍに於ける吸光度を測定した。
参考例１゜
〔測定試薬〕
■ 第１試液
サリチル酸ナトリウムを４％、ニトロプルジッド′ナト
リウム全０．２％、ウレアーゼを６．０００ Ｕ／ｌ。
リウム全０．２％、ウレアーゼを６．０００ Ｕ／ｌ。
ＥＤＴＡ −２Ｎａ ｋ Ｏ，０２％の濃度になるよう
に０．１Ｍ ＩＪン酸緩衝液（ｐＨ＝７．０）に溶解し
た。
に０．１Ｍ ＩＪン酸緩衝液（ｐＨ＝７．０）に溶解し
た。
■ 第２試液
実施例１．に同じ
〔測定方法〕
実施例１．で用いた試料を２０μｔとり、実施例１と同
一操作で試料中の尿素を測定した。但し、測定波長は５
７Ｏｎｍ金用いた。
一操作で試料中の尿素を測定した。但し、測定波長は５
７Ｏｎｍ金用いた。
実施例１．と参考例１．に於て調製直後の第１試液に示
す。
す。
表 １
表１から明らかなように、実施例１では５日間保存後で
も発色度は変化しないが、参考例１では５゛日間保存後
の発色度は調製直後の発色度の約４０％に低下していた
。
も発色度は変化しないが、参考例１では５゛日間保存後
の発色度は調製直後の発色度の約４０％に低下していた
。
第１試液調製直後と室温（１９〜２４℃）５日間保存後
のウレアーゼ活性を測定した結果を表２に示す。ただし
、ウレアーゼ活性測定法は、以下に示す方法で行なった
。
のウレアーゼ活性を測定した結果を表２に示す。ただし
、ウレアーゼ活性測定法は、以下に示す方法で行なった
。
α−ケトグルタル酸ｔ １ ｍｍｏｔ／ｌ、 ＥＤＴＡ
−２Ｎａ’ｉ０．１２％、グルタミン酸脱水素酵素１
１００，０００Ｕ／ｌ 、 ＮＡＤＨ２Ｎａ （３Ｈｉ
Ｏ） ｋ １５０ ”Ｉ／ｌの濃度になるように、これ
らｉ ０．１ Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ＝８．０）に溶解
し、ウレアーゼ活性測定試薬とした。
−２Ｎａ’ｉ０．１２％、グルタミン酸脱水素酵素１
１００，０００Ｕ／ｌ 、 ＮＡＤＨ２Ｎａ （３Ｈｉ
Ｏ） ｋ １５０ ”Ｉ／ｌの濃度になるように、これ
らｉ ０．１ Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ＝８．０）に溶解
し、ウレアーゼ活性測定試薬とした。
試料（７Ｅ１試１）ｋ５０μｔとり、これにウレアーゼ
活性測定試薬３ ｍｌを加え、３７℃恒温槽中３分間加
温後、６Ｍ尿素溶ｉｏ、１ｍｊｌ加え、３７℃に於ける
波長３４０ｎｍの吸光度変化（ΔＥ／Ｍ）’を測定した
。
活性測定試薬３ ｍｌを加え、３７℃恒温槽中３分間加
温後、６Ｍ尿素溶ｉｏ、１ｍｊｌ加え、３７℃に於ける
波長３４０ｎｍの吸光度変化（ΔＥ／Ｍ）’を測定した
。
次式からウレアーゼ活性全算出した。
表 ２
表２から明らかなように、実施例１．では５日間保存後
でもウレアーゼの失活は認められなかったが、参考例１
．では調製直後に対し約２３％まで低下した。
でもウレアーゼの失活は認められなかったが、参考例１
．では調製直後に対し約２３％まで低下した。
実施例２．尿素窒素の定量
〔測定試薬〕
■ 第１試液
実施例１．に同じ。
■ 第２試液
実施例１．に同じ
〔測定方法〕
尿素窒素５０ Ｗｉｄｅ 、 １００ ｍ９７ｄｉ 、
１５０ｍＶ／ｄｅ。
１５０ｍＶ／ｄｅ。
２００１ｎＷ ／ ｄｉ ｆ含む標準液２０μｔ２試料
として用い、調製直後の第１試液を用いて、実施例１．
と同様に操作して吸光度を求めた。
として用い、調製直後の第１試液を用いて、実施例１．
と同様に操作して吸光度を求めた。
各尿素窒素濃度（ｍｙ／ｃ／６）に対してプロットした
吸光度（ＯＤ）を結ぶ検量線は、第１図に示されるよう
に、原点を通る直線となり、検量線は良好な定量性を示
している。
吸光度（ＯＤ）を結ぶ検量線は、第１図に示されるよう
に、原点を通る直線となり、検量線は良好な定量性を示
している。
実施例３．尿素窒素の定量
〔測定試薬〕
■ 第１試液
実施例１．に同じ
■ 第２試液
実施例１．に同じ
〔測定方法〕
試料として血清２０μｔを用い、調製直後の第１試液を
用いて、実施例１．と同様に操作して吸光度を求めた。
用いて、実施例１．と同様に操作して吸光度を求めた。
別に作成した検量線から血清中の尿素窒素濃度（■／ｄ
ｉ）ｆｃ求めた。結果は表３に示されるとおりである。
ｉ）ｆｃ求めた。結果は表３に示されるとおりである。
参考例２゜
〔測定試薬〕
■ 第１試液
参考例１．に同じ
■ 第２試液
実施例１．に同じ
〔測定方法〕
試料として実施例３．で用いた血清を２０μを用い、調
製直後の第１試液を用いて、参考例１．と同様に操作し
て吸光度金求めた。
製直後の第１試液を用いて、参考例１．と同様に操作し
て吸光度金求めた。
別に作成した検量線から血清中の尿素窒素ｒ度（η／ｄ
ｅ）ｋ求めた。結果は表３に示されるとおりである。
ｅ）ｋ求めた。結果は表３に示されるとおりである。
表 ３
表３に示されるように、実施例３、の値と参考例２．０
値とはよい相１３Ｉｌを示し、その間に有意差は認めら
れない。（ｒ ＝０．９９９ 、 Ｙ＝１．０３Ｘ −
２）実施例４．尿素窒素の定量 〔測定試薬〕 ■ 第１試液 フェノールケ２％、イミグゾールｉｏ、１５％。
値とはよい相１３Ｉｌを示し、その間に有意差は認めら
れない。（ｒ ＝０．９９９ 、 Ｙ＝１．０３Ｘ −
２）実施例４．尿素窒素の定量 〔測定試薬〕 ■ 第１試液 フェノールケ２％、イミグゾールｉｏ、１５％。
ウレアーゼｆｒ： ６０００ Ｕ／ｌ 、 ＥＤＴＡ
−２Ｎａ ｆＯ１０２％の濃度になるように０．１ Ｍ
’Ｊン酸緩衝液（ｐＨ＝７．０）に溶解した。
−２Ｎａ ｆＯ１０２％の濃度になるように０．１ Ｍ
’Ｊン酸緩衝液（ｐＨ＝７．０）に溶解した。
■ 第２試液
ジクロロインンアヌル酸カリウムを、有効塩素濃度０．
２５％になるように加えた０、５Ｎ水酸化ナトリウム溶
液ヲ調製した。
２５％になるように加えた０、５Ｎ水酸化ナトリウム溶
液ヲ調製した。
試料として血清２０μｔｆ用い、第１試液ｌｄ金加えて
、３７℃恒温槽中５分間加温後、第２試液２−を加え、
３７℃恒温槽中更に５分間加温した。試薬ブランクを対
照として、波長６５５ｎｍに於ける吸光度全測定した。
、３７℃恒温槽中５分間加温後、第２試液２−を加え、
３７℃恒温槽中更に５分間加温した。試薬ブランクを対
照として、波長６５５ｎｍに於ける吸光度全測定した。
別に作成した検量線から血清中の尿素窒素濃度Ｃｍｆｌ
ｄｉ）ｋ求めた。結果は表４に示されるとおりである。
ｄｉ）ｋ求めた。結果は表４に示されるとおりである。
参考例３゜
■ 第１試液
参考例１．に同じ
■ 第２試液
実施例４．に同じ
〔測定方法〕
試料−とじて実施例４．で用いた血清を２０μを用い、
参考例１．と同様に操作して吸光度を求めた。
参考例１．と同様に操作して吸光度を求めた。
別に作成した検量線から血清中の尿素窒素濃度（ｍＶ／
ｄ７りを求めた。結果は表４に示されるとおりである。
ｄ７りを求めた。結果は表４に示されるとおりである。
表 ４
表４に示されるように、実施例４．０値と参考例３．０
値とはよい相関を示し、その間に有意差は認められない
。（ｒ＝０．９９１ 、Ｙ＝０．９４５Ｘ＋１．１）実
施例５．アンモモアの定量 〔測定試薬〕 ■ 第１試液 サリチル酸ナトリウムを５％、イミダゾールを２２ ｍ
ｍｏｔ／ｌの濃度になるように０．１ Ｍ ＩＪン酸緩
衝液（ｐＨ＝７．０）に溶解した。
値とはよい相関を示し、その間に有意差は認められない
。（ｒ＝０．９９１ 、Ｙ＝０．９４５Ｘ＋１．１）実
施例５．アンモモアの定量 〔測定試薬〕 ■ 第１試液 サリチル酸ナトリウムを５％、イミダゾールを２２ ｍ
ｍｏｔ／ｌの濃度になるように０．１ Ｍ ＩＪン酸緩
衝液（ｐＨ＝７．０）に溶解した。
■ 第２試液
次亜塩素酸ナトリウム溶液を、有効塩素濃度０．２％に
なるように加えた０、 ５ Ｎ水酸化ナトリウム溶液を
調製した。
なるように加えた０、 ５ Ｎ水酸化ナトリウム溶液を
調製した。
アンモニア窒素５０ｍｙ ／ ｄｉ 、 １００ Ｗｐ
ｙ／ ｄｉ 。
ｙ／ ｄｉ 。
１５０■／ｄｌ、２００キ／ｄ７！を含むアンモニア標
準液（硫酸アンモニウム水溶液〕２０μｔｔ−試料とし
て用い、第１試液１−を加えて、３７℃恒温槽中５分間
加温後、第２試液２ｍｊ！’ｉ加え、３７℃恒温槽中更
に５分間加温した。試薬ブランク金対照として、波長６
５０ｎｍに於ける吸光度全測定した。
準液（硫酸アンモニウム水溶液〕２０μｔｔ−試料とし
て用い、第１試液１−を加えて、３７℃恒温槽中５分間
加温後、第２試液２ｍｊ！’ｉ加え、３７℃恒温槽中更
に５分間加温した。試薬ブランク金対照として、波長６
５０ｎｍに於ける吸光度全測定した。
各アンモニア窒素濃度（＋＋ｖ／ｃ／７りに対してプロ
ットした吸光度（ＯＤ）を結ぶ検量線は、第２図に示さ
れるように、原点を通る直線となり、検量線は良好な定
量性を示している。
ットした吸光度（ＯＤ）を結ぶ検量線は、第２図に示さ
れるように、原点を通る直線となり、検量線は良好な定
量性を示している。
実施例６、 アンモニアの定量
〔測定試′薬〕
■ 第１試液
実施例５．の第１試液組成のうち、イミダゾール２２ｍ
ｍｏｔ／Ｌの代りに、２−メチルイミダゾール２２ｍｍ
ｏＡ／Ｌ金用いた第１試液を調製した。
ｍｏｔ／Ｌの代りに、２−メチルイミダゾール２２ｍｍ
ｏＡ／Ｌ金用いた第１試液を調製した。
■ 第２試液
実施例５．に同じ。
７７ ％ ＝ ７窒素５０ ｍｙ／ ｄｅ 、 ｉｏｏ
ｍｙ、、’ｈｘ 、 １５０ｍｙ／ ｄｅ 、 ２００
”！／ ｄｌ’ｚ含むアンモニア標準液（硫酸アンモ
ニウム水溶液）２０μｔ２試料として用い、実施例５．
と同様に操作して吸光度を求めた。
ｍｙ、、’ｈｘ 、 １５０ｍｙ／ ｄｅ 、 ２００
”！／ ｄｌ’ｚ含むアンモニア標準液（硫酸アンモ
ニウム水溶液）２０μｔ２試料として用い、実施例５．
と同様に操作して吸光度を求めた。
各アンモニア窒素濃度（η／ｄｔ）に対してプロ。
ツトした吸光度（ＯＤ）を結ぶ検量線は、第３図に示さ
れるように、原点を通る直線となり、検量線は良好な定
量性を示している。
れるように、原点を通る直線となり、検量線は良好な定
量性を示している。
実施例７゜
〔測定試薬〕
■ 第１試液
実施例５．の第１試液組成のうち、イミダゾール２２
ｍｍｏｔ／ｌの代りに、１−メチルイミダゾール２２
ｍｍａＬ／Ｌ １ｒ、用いた第１試液を調製した。
ｍｍｏｔ／ｌの代りに、１−メチルイミダゾール２２
ｍｍａＬ／Ｌ １ｒ、用いた第１試液を調製した。
■ 第２試液
実施例５．に同じ
〔測定方法〕
アンモニア窒素５０ Ｔｎｙ／ｄｔ 、 １００ ’ｒ
ｌｉ／ｄｉ 。
ｌｉ／ｄｉ 。
１５０１Ｎ／ｄｉ 、 ２００ ｍ９／ｄｅｆｃ含むア
ンモニア標準液（硫酸アンモニウム水溶液）２０μｔｆ
試料として用い、実施例５．と同様に操作して吸光度を
求めた。
ンモニア標準液（硫酸アンモニウム水溶液）２０μｔｆ
試料として用い、実施例５．と同様に操作して吸光度を
求めた。
各アンモニア窒素濃度（η／ｄ７りに対してプロットし
た吸光度ＣＯＤ ）’に結ぶ検量線は、第４図。
た吸光度ＣＯＤ ）’に結ぶ検量線は、第４図。
に示されるように、原点全通る直線となり、検量線は良
好な定量性全示している。
好な定量性全示している。
実施例８．アンモニアの定量
〔測定試薬〕
■ 第１試液
Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピ
ル）−ｍ−トルイジンナトリウムを２％イｉダゾール’
ｚ ２０ ｍｍｏｔ／ｌの濃度になるように０．１Ｍリ
ン酸緩衝液（ｐＨ＝７．ｏ）に溶解した。
ル）−ｍ−トルイジンナトリウムを２％イｉダゾール’
ｚ ２０ ｍｍｏｔ／ｌの濃度になるように０．１Ｍリ
ン酸緩衝液（ｐＨ＝７．ｏ）に溶解した。
■ 第２試液
ジクロロイソジアルカリ
効塩素’ｉ０．２５％含む０．５Ｎ水酸化ナトリウム溶
液を調製した。
液を調製した。
アンモニア窒素５ ０ ’ｌ／ｄｅ 、 １００ ｍ９
／ｄｉ 。
／ｄｉ 。
１５０ｑ／ｄ７！．、、２００ｍＶ／ｄｅｋ含むアンモ
ニア標準液（硫酸アーイモニウム水溶液）２０μｔを試
料として用い、これに第１試液１ｄ’ｚ加えて混和後、
第２試液２−を加えて３７℃１０分間加温後、試薬盲検
全対照として波長６５５ｎｍに於ける吸光度を測定した
。
ニア標準液（硫酸アーイモニウム水溶液）２０μｔを試
料として用い、これに第１試液１ｄ’ｚ加えて混和後、
第２試液２−を加えて３７℃１０分間加温後、試薬盲検
全対照として波長６５５ｎｍに於ける吸光度を測定した
。
各アンモニア窒素濃度Ｃｍ７／ｄ１りに対してプロット
した吸光度（ＯＤ）を結ぶ検量線は、第５図に示される
ように、原点を通る直線となり、検量線は良好な定量性
金示している。
した吸光度（ＯＤ）を結ぶ検量線は、第５図に示される
ように、原点を通る直線となり、検量線は良好な定量性
金示している。
実施例９．アンモニアの定量
〔測定試薬〕
■ 第１試液
サリチル酸ナトリウム全５％，ベンズイミダゾール＠Ｏ
．ＺＳ％の濃度になるように０、ｌ Ｍ ＩＪン酸緩衝
液（ｐＨ＝７、０）Ｋ溶解した。
．ＺＳ％の濃度になるように０、ｌ Ｍ ＩＪン酸緩衝
液（ｐＨ＝７、０）Ｋ溶解した。
■ 第２試液
次亜塩素酸す） ＩＪウム溶液を有効塩素濃度０、２５
％になるように加えた０，５Ｎ水酸化す） ｌ）ウーム
溶液全調製した。
％になるように加えた０，５Ｎ水酸化す） ｌ）ウーム
溶液全調製した。
アンモニア窒素５ ０ ｍＶ／ｄ７！， １００ ｍｙ
／ｄｌ 。
／ｄｌ 。
１ ５ ０ ｍＷｌｄｌ 、 ２０ ０ ｍ９１ｄｉを
含むアンモニア標準液（硫酸アンモニウム水溶液）２０
μｔｆ試料として用い、第１試液ｌ−を加えて、３７℃
恒温槽中１５分間加温後、第２試液２ｒｎｌ（ｉ７加え
、３７℃恒帛槽中更に１０分間加温した。試薬ブランク
を対照として、波長６５０ｎｍに於ける吸光度全測定し
た。
含むアンモニア標準液（硫酸アンモニウム水溶液）２０
μｔｆ試料として用い、第１試液ｌ−を加えて、３７℃
恒温槽中１５分間加温後、第２試液２ｒｎｌ（ｉ７加え
、３７℃恒帛槽中更に１０分間加温した。試薬ブランク
を対照として、波長６５０ｎｍに於ける吸光度全測定し
た。
各アンモニア窒素濃度（ｒｑ／ｄｅ）に対してプロット
した吸光度（ ＯＤ ）を結ぶ検量線は、第６図に示さ
れるように、原点を通る直線となり、検量線は良好な定
耽性を示している。
した吸光度（ ＯＤ ）を結ぶ検量線は、第６図に示さ
れるように、原点を通る直線となり、検量線は良好な定
耽性を示している。
実施例１ ０． 尿素窒素の定量
〔測定試薬〕
■ 第１試液
サリチル酸ナトリウムを５係，ベンズイミダゾール’ｚ
２ ０ ｍ ｍａｔ／ Ｌ 、ウレアーゼｔ６０００
Ｕ／ｌ。
２ ０ ｍ ｍａｔ／ Ｌ 、ウレアーゼｔ６０００
Ｕ／ｌ。
ＥＤＴＡ − ２ Ｎａ ｆ Ｏ．０ ２％の濃度にな
るように０．１Ｍ ＩＪン酸緩衝液（ｐＨ＝７．０）に
溶解した。
るように０．１Ｍ ＩＪン酸緩衝液（ｐＨ＝７．０）に
溶解した。
■ 第２試液
次亜塩素酸ナトリウム溶液を、有効塩素濃度０、２５％
になるように加えた０．５Ｎ水酸化ナトリウム溶液全調
製した。
になるように加えた０．５Ｎ水酸化ナトリウム溶液全調
製した。
試料として血清２０μｔ２用い、第１試液ｌｒｎｔを加
えて、３７℃恒温槽中１５分間加温後、第２試液ｚｒｎ
ｌ金加え、３７℃恒温槽中丈に１０分間加温した。試薬
ブランクを対照として、波長６５０ｎｍに於ける吸光度
を測定した。
えて、３７℃恒温槽中１５分間加温後、第２試液ｚｒｎ
ｌ金加え、３７℃恒温槽中丈に１０分間加温した。試薬
ブランクを対照として、波長６５０ｎｍに於ける吸光度
を測定した。
別に作成した検量線から血清中の尿素窒素濃度（η／ｄ
ｉ）を求めた。結果は表５に示されるとおりである。
ｉ）を求めた。結果は表５に示されるとおりである。
参考例４。
■ 第１試液
参考例１．に同じ。
■ 第２試液
実施例１．に同じ。
試料として実施例１０．で用いた血清？２０μｔ５用い
、調製直後の第１試液を用いて、参考例１．と同様に操
作して吸光度を求めｔｏ 別に作成した検量線から血清中の尿素窒素濃度Ｃｒｑ／
ｄｉ）’ｒ求めた。結果は表５に示されるとお。
、調製直後の第１試液を用いて、参考例１．と同様に操
作して吸光度を求めｔｏ 別に作成した検量線から血清中の尿素窒素濃度Ｃｒｑ／
ｄｉ）’ｒ求めた。結果は表５に示されるとお。
りである。
表 ５
表５に示されるように、実施例１０．の値と参考例４．
０値とはよい相関を示し、その間に有意差は認められな
い。（γ＝ ０．９９１ 、 Ｙ ＝ １．０２ Ｘ
−０，４６） 実施例１１．アンモニアの定量 〔測定試薬〕 ■ 第１試液 ｐ−クロロフェノールを１％、イミダゾール金０．１５
％の濃度になるように０．１ Ｍ リン酸緩衝液（ｐＨ
＝７．０）に溶解した。
０値とはよい相関を示し、その間に有意差は認められな
い。（γ＝ ０．９９１ 、 Ｙ ＝ １．０２ Ｘ
−０，４６） 実施例１１．アンモニアの定量 〔測定試薬〕 ■ 第１試液 ｐ−クロロフェノールを１％、イミダゾール金０．１５
％の濃度になるように０．１ Ｍ リン酸緩衝液（ｐＨ
＝７．０）に溶解した。
■ 第２試液
次亜塩素酸ナトリウム溶液？、有効塩素濃度０．２５％
になるように加えた０、５Ｎ水酸ｆヒナトリウ−ム溶液
を調製した。
になるように加えた０、５Ｎ水酸ｆヒナトリウ−ム溶液
を調製した。
Ｃ６１＋１定方法〕
アンモニア窒素５０キ／ｄ７！、１００η／ｄｌ。
１５０Ｗ／ｄ７１！、２００ｍＶ／ｄｌｋ含むアンモニ
ア標準液（硫酸アンモニウム水溶ｔｉ、）２０μｔ２試
料として用い、第１試液１ｒｎｌ’ａ−加えて、３７℃
恒温槽中５分間加温後、第２試液２ばを加え、更に、３
７℃恒温槽中５分間加温した。試薬ブランクを対照とし
て、波長４３０ｎｍに於ける吸光度を測定した。
ア標準液（硫酸アンモニウム水溶ｔｉ、）２０μｔ２試
料として用い、第１試液１ｒｎｌ’ａ−加えて、３７℃
恒温槽中５分間加温後、第２試液２ばを加え、更に、３
７℃恒温槽中５分間加温した。試薬ブランクを対照とし
て、波長４３０ｎｍに於ける吸光度を測定した。
各アンモニア窒素濃度（■／ｄｌ！、）に対してプロッ
トした吸光度Ｃ０Ｄ）を結ぶ検量線は、第７図に示され
るように、原点全通る直線となり、検量 ５線は良好な
定量性金示している。
トした吸光度Ｃ０Ｄ）を結ぶ検量線は、第７図に示され
るように、原点全通る直線となり、検量 ５線は良好な
定量性金示している。
第１図は、実施例２で得られた検量線を表わし、横軸の
各尿素窒素濃度Ｃｍ’ｌ／ｄｌ）について得られた吸光
度（ＯＤ ） ｋ縦軸に沿ってプロットした点 １０全
結んだものである。 第２図、第３図、第４図、第５図、第６図及び第７図は
、夫々実施例５．、実施例６１．実施例７．。 実施例８．、実施例９．及び実施例１１．に於て得られ
た検量線を表わし、いずれも横軸の各アンモニア１５窒
素濃度（η／ｃｔｅ）について得られた吸光度ＣＯＤ）
？縦軸に沿ってプロットした点を結んだものである。 特許出願人 和光純薬工業株式会社 茅 １ 図 刀と ネ タ【 票 這Ｋ（−２／ｄｉ）′笛 ２ 困 １ル二了窒＃う１炙 （−／ｄ）） アノＬニブｉ享５Ｊ／Ｌ （＠Ｈ／ｄｌ）笛 ４ 図 １ン七ニア′ｉ＃ｌｔ度 ｒ−２／１Ｄ１５ 図 １ンとニア゛口５ＬＬ （□−）） 第 ６ 因 アン七二了１１１ネ儂崖 （悄ト全Ｊ）名 ７ 圓 フンＥニア襄ネ儂Ｌ（−７／ｄｌ ） 手続補正書 −昭和６０年１０月ｌｌ 日
各尿素窒素濃度Ｃｍ’ｌ／ｄｌ）について得られた吸光
度（ＯＤ ） ｋ縦軸に沿ってプロットした点 １０全
結んだものである。 第２図、第３図、第４図、第５図、第６図及び第７図は
、夫々実施例５．、実施例６１．実施例７．。 実施例８．、実施例９．及び実施例１１．に於て得られ
た検量線を表わし、いずれも横軸の各アンモニア１５窒
素濃度（η／ｃｔｅ）について得られた吸光度ＣＯＤ）
？縦軸に沿ってプロットした点を結んだものである。 特許出願人 和光純薬工業株式会社 茅 １ 図 刀と ネ タ【 票 這Ｋ（−２／ｄｉ）′笛 ２ 困 １ル二了窒＃う１炙 （−／ｄ）） アノＬニブｉ享５Ｊ／Ｌ （＠Ｈ／ｄｌ）笛 ４ 図 １ン七ニア′ｉ＃ｌｔ度 ｒ−２／１Ｄ１５ 図 １ンとニア゛口５ＬＬ （□−）） 第 ６ 因 アン七二了１１１ネ儂崖 （悄ト全Ｊ）名 ７ 圓 フンＥニア襄ネ儂Ｌ（−７／ｄｌ ） 手続補正書 −昭和６０年１０月ｌｌ 日
Claims (8)
- （１）フェノール系化合物及び酸化剤を用いるアンモニ
アの比色定量法に於て、イミダゾール又は／及びイミダ
ゾール誘導体の存在下にこれを行なうことを特徴とする
、アンモニアの定量法。 - （２）尿素にウレアーゼを作用させて生じるアンモニア
を定量する、特許請求の範囲第１項記載のアンモニアの
定量法。 - （３）酸化剤が塩素系酸化剤である、特許請求の範囲第
１項又は第２項記載のアンモニアの定量法。 - （４）塩素系酸化剤が次亜塩素酸塩、ジクロロイソシア
ヌル酸塩又はクロラミンＴである、特許請求の範囲第３
項記載のアンモニアの定量法。 - （５）イミダゾール又は／及びイミダゾール誘導体の存
在下、Ｎ，Ｎ−ジ置換アニリン系化合物、及び酸化剤を
用いて行なう、アンモニアの定量法。 - （６）尿素にウレアーゼを作用させて生じるアンモニア
を定量する、特許請求の範囲第５項記載のアンモニアの
定量法。 - （７）酸化剤が塩素系酸化剤である、特許請求の範囲第
５項又は第６項記載のアンモニアの定量法。 - （８）塩素系酸化剤が次亜塩素酸塩、ジクロロイソシア
ヌル酸塩又はクロラミンＴである、特許請求の範囲第７
項記載のアンモニアの定量法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP16014384A JPS6138463A (ja) | 1984-07-30 | 1984-07-30 | アンモニアの定量法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP16014384A JPS6138463A (ja) | 1984-07-30 | 1984-07-30 | アンモニアの定量法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6138463A true JPS6138463A (ja) | 1986-02-24 |
Family
ID=15708795
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP16014384A Pending JPS6138463A (ja) | 1984-07-30 | 1984-07-30 | アンモニアの定量法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6138463A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008047802A1 (en) | 2006-10-18 | 2008-04-24 | National University Corporation Nagoya University | D-serine dehydratase and use thereof |
-
1984
- 1984-07-30 JP JP16014384A patent/JPS6138463A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008047802A1 (en) | 2006-10-18 | 2008-04-24 | National University Corporation Nagoya University | D-serine dehydratase and use thereof |
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