JPS6134439B2

JPS6134439B2 -

Info

Publication number: JPS6134439B2
Application number: JP52047030A
Authority: JP
Inventors: Masahiko Fujino; Tsunehiko Fukuda; Cheko Kitada
Original assignee: Takeda Chemical Industries Ltd
Current assignee: Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1977-04-22
Filing date: 1977-04-22
Publication date: 1986-08-07
Also published as: US4159979A; DE2817208A1; FR2387943A1; JPS53132539A

Description

【発明の詳細な説明】本発明はアミノ酸またはペプチドのω位のアミ
ノ基の新規かつ有用な保護基に関する。

ペプチドの製造に当つて、ペプチドの構成アミ
ノ酸残基に、たとえばリジン、オルニチン、α・
γ−ジアミノブチリツクアシド、α・β−ジアミ
ノプロピオン酸等のω−アミノ基を有するアミノ
酸が含まれている場合には、側鎖ω−アミノ基は
製造途中適当な保護基によつて保護し、副反応を
防がなければならない。しかも途中の工程で一般
に行われるα−アミノ基の除去に際して、安定な
保護基であり、かつ、最終工程に於いて、完全に
脱離させることが出来るものが理想的である。し
かるに現在一般に利用されているω−アミノ基の
保護法は上記の条件を完全に満足するものとはい
い難く、多くの欠点を持つている。これは一般に
保護をウレタン型化合物に求めているために脱離
の撰択性に不満足なところがあるために起因する
欠点であると本発明者は考えている。たとえば固
相合成では一般にα−アミノ基をｔ−ブトキシカ
ルボニルで保護し、ω−アミノ基はカルボベンゾ
キシで保護する方法が採用されているが、α位の
ｔ−ブトキシカルボニルの切断反応時にω位のカ
ルボベンゾキシも多少切断され、これが枝分れペ
プチド等の副生物の原因となり、この集積によつ
て多くの不純物を与えるとされている。これを改
良すべく２−クロロ−ベンジルオキシカルボニル
やジイソプロピルメチロキシカルボニルが開発さ
れているが、これらは完全な除去に問題があり、
さらに弗化水素を用いる除去に際して、長時間処
理や比較的高温を必要とし、従つてペプチド自体
に好ましくない影響を与える。この理由は全て、
ウレタン型保護基であるため撰択性に乏しいもの
と考えられ、この点に注目して、本発明者らはス
ルホニルアミン型の保護基を種々検討して、本発
明を完成したものである。

ω−アミノ基を有する炭素数が６までの直鎖状
アミノ酸を含有するペプチドの製造にあたり、該
ω−アミノ基含有原料化合物のω−アミノ基をｐ
−メチルベンジルスルホニルで保護して、ペプチ
ド縮合した後保護基を弗化水素で脱離せしめるこ
とを特徴とするペプチドの製造法。

本発明に係わるω−アミノ基を有するアミノ酸
として、前記したものが例示され、最も普通のも
のはリジンであり、これを含むペプチドは天然の
生理活性ペプチド中に数多く存在する。たとえば
MSE（メラノホーレステイミユレイテイング
ホルモン）、ACTH リジン−バソプレシン、
ニウロテンシン、シイラム・サイミツク・フアク
ター、エンドルフイン類、サブスタンスＰ、サイ
モシンα、グルカゴン、モチリン等、殆んどすべ
ての生理活性ペプチドにはリジン残基が存在す
る。

本発明のｐ−メチルベンジルスルホニルで保護
されうるアミノ酸は、少くともω位にアミノ基を
有するアミノ酸であり、とりわけα−位にもアミ
ノ基を有するα・ω−ジアミノ酸に有利に適用で
きる。アミノ酸について光学活性体がありうる場
合は、Ｌ体、Ｄ体、ラセミ体のいずれであつても
よい。たとえば炭素数が６までの直鎖状α・ω−
ジアミノ酸に本発明の保護基を有利に適用しうる
場合が多い。

本発明のｐ−メチルベンジルスルホニルで保護
されたω−アミノ基を有するアミノ酸のカルボキ
シル基は遊離の形でも、あるいは公知の手段で適
宜活性化あるいは保護されていてもよい。そして
α−位にもアミノ基を有する場合、このα−アミ
ノ基は遊離のまゝでもあるいは公知の保護基で適
宜保護されていてもよい。

本発明のｐ−メチルベンジルスルホニルで保護
されたω−アミノ基を有するアミノ酸は、ω−ア
ミノ基を保護する常套手段で製造できる。たとえ
ば、ｐ−メチルベンジルスルホニルハライド、好
ましくはクロライドとω−アミノ基を有するアミ
ノ酸と反応させることにより製造できる。この反
応は、たとえば約−10−＋50℃の範囲の適宜の湿
度で、溶媒（例、水、含水テトラヒドロフラン、
含水ジオキサン、含水ジメチルホルムアミド）を
使用して実施してもよい。

α・ω−ジアミノ酸の場合、その金属塩、好ま
しくは銅塩とｐ−メチルベンジルスルホニルハラ
イドを反応させると、ω−アミノ基が上記保護基
で保護されたα・ω−ジアミノ酸の金属塩を製造
でき、これを常套手段（例、硫化水素または樹脂
処理）で金属を除去して遊離のα−アミノ基およ
びカルボキシル基を有するω−保護アミノ酸を製
造でき、所望によりその遊離のα−アミノ基を公
知の保護基（例、ｔ−ブトキシカルボニル、カル
ボベンゾキシなど）で常套手段で保護することも
でき、またその遊離のカルボキシル基を公知の保
護基（例、金属塩、低級アルキルエステル）で保
護したり、あるいは公知の手段で活性化（例、酸
無水物、アジド、活性エステル）させることもで
きる。

上記の本発明のｐ−メチルベンジルスルホニル
で保護されたω−アミノ基を有するアミノ酸は、
該アミノ酸残基を有するペプチドを常套手段で製
造する方法にきわめて有利に使用しうる。本発明
の保護基は、たとえば弗化水素で約−20℃、１時
間処理することにより容易に除去できる。

本発明のｐ−メチルベンジルスルホニルで保護
したω−アミノ基を有するアミノ酸および該保護
されたアミノ酸残基を有するペプチドは、たとえ
ば次の如き有用な特性を有するので、それらを適
宜利用してペプチド合成の常套手段でペプチドを
有利に製造できる。

(1) 簡便な処理（弗化水素処理）で、短時間でほ
とんど定量的に保護基（ｐ−メチルベンジルス
ルホニル）を除去することができる。

(2) 保護基は特異的選択性を有し、ペプチド合成
の途中の工程で繁用される種々の条件、たとえ
ばα−アミノ基の保護基のｔ−ブトキシカルボ
ニルを除去するために繁用される条件（例、ト
リフルオロ酢酸、トリフルオロ酢酸−ジクロル
メタンまたは2NHCl−ジオキサンなど）、カル
ボベンゾキシやベンジルエステルを除去する接
触還元に対し分解されずきわめて安定である。

(3) 固相法は勿論のこと液相法にも同様に有利に
使用しうる。

(4) ペプチドを高純度、好収率で製造できる。

なお、上記アミノ基、カルボキシル基の保護、
活性化する公知手段、ペプチド合成の常套手段に
ついては、たとえば、J.P.Greenstein and M.
Wintitz、“Chemistry of the Amino Acids”、
Volume2、（1961）、John Wiley ＆ Sons、
Inc.New York、U.S.A.、またはSchro¨der and
Lubke、“The Peptides”、Vol.1（1966）、
Academic Press、New York、U.S.A.に記載さ
れている。

本明細書において、アミノ酸、ペプチド、保護
基、活性基等に関し、IUPAC−IUB
Commission on Biological Nomenclatureに基づ
く略号あるいは当該分野における慣用略号で表示
する場合がある。それらを例示する。

BOC：ｔ−ブトキシカルボニルＺ：カルボベンゾキシ２−Cl−Ｚ：２−クロロ−ベンジルオキシカル
ボニル Xys：ｐ−メチルベンジルスルホニル（ｐ−キシ
リル−α−スルホニル） HONb：Ｎ−ヒドロキシ−５−ノルボルネン−
２・３−ジカルボキシイミド OSu：Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル ONP：パラニトロフエニルエステル OBzl：ベンジルエステル Bzl：ベンジルエーテル OBu^t：ｔ−ブチルエステル MBS：ｐ−メトキシベンゼンスルホニル DCC：ジシクロヘキシルカルボジイミド Lys：リジン Gly：グリシン Glu：グルタミン酸 Leu：ロイシン Tyr：チロシン Asn：アスパラギン Pro：プロリン Arg：アルギニン Ile：イソロイシン Ala：アラニン Ser：セリン PGlu：ピログルタミン酸実施例において、アミノ酸に関し、光学異性体
がありうる場合、特に明記しないかぎりＬ体を示
すものとする。

実施例１ｐ−メチルベンジルスルホニルクロリドの合成亜硫酸ナトリウム（67ｇ、0.53モル）を10％水
酸化ナトリウム水溶液（250ml）に溶かし、ここ
にｐ−メチルベンジルクロリド（75ｇ、0.53モ
ル）を加え、撹拌しつつ４時間加熱還流させる。
反応液を水で２倍に薄め、熱時、自然ろ過し、母
液を冷却する。析出したｐ−メチルベンジルスル
ホン酸ナトリウム塩の結晶をろ取する。収量51ｇ
（46％）。

充分乾燥したｐ−メチルベンジルスルホン酸ナ
トリウム塩（30ｇ、0.145モル）をジメチルホル
ムアミド（90ml）中に分散させ、−10℃に冷却
し、撹拌しつつ、ここに塩化チオニル（19.2ml、
0.29モル）を滴下する。室温で３時間撹拌を続け
た後、反応液を氷水（500ｇ）に注ぎ、これをエ
ーテルで抽出する（150ml、３回）。エーテル層を
集め、冷水で２度洗つた後、硫酸ナトリウムで乾
燥する。エーテルを留去して得られる結晶状残渣
に石油エーテルを加え、冷却した後、結晶をろ取
する。

収量23.5ｇ（78％）、融点80−81℃ 実施例２Ｈ−Lys（Xys）−OHの合成リジン銅塩（65ミリモル）を２規定水酸化ナト
リウム水溶液（54ml）に溶かし、ジオキサン（15
ml）を加えた後、０℃で激しく撹拌しつつ、ｐ−
メチルベンジルスルホニルクロリド（14.7ｇ、72
ミリモル）を含んだジオキサン溶液（40ml）を滴
下する。滴下後、０℃で１時間、室温で４時間撹
拌を続ける。析出した沈殿をろ取し、水及びアル
コールで洗つた後乾燥する。これを１規定塩酸中
で分散させ、硫化水素ガスを約30分間吹き込んだ
後、温水（１）を加えて析出している目的物を
溶かした後、硫化銅をろ去する。母液に濃アンモ
ニア水を加えてPH７とし、冷却後、結晶をろ取す
る。これを熱水から再結晶する。

収量8.2ｇ（40.7％）、融点261℃（分解） Rf¹（ｎ−ブタノール：酢酸エチル：酢酸：水＝
１：１：１：１）＝0.73、〔α〕^２０ _Ｄ＋15.5゜（Ｃ
0.5、酢酸）元素分析 C₁₄H₂₂O₄N₂Sとして計算値Ｃ 53.48；Ｈ 7.05；Ｎ 8.91；Ｓ 10.20 分析値Ｃ 53.36；Ｈ 7.35；Ｎ 8.86；Ｓ 10.00 実施例３ Boc−Lys（Xys）−OHの合成Ｈ−Lys（Xys）−OH（6.3ｇ、20ミリモル）、
トリエチルアミン（4.2ml）及び、２−ｔ−ブト
キシカルボニル−４・６−ジメチル−２−メルカ
プトピリミジン（6.2ｇ、26ミリモル）を水−ジ
オキサン（25ml−25ml）の混合溶媒中、激しく撹
拌しつつ、室温で48時間反応させる。水（50ml）
を加えた後、これをエーテルで抽出する（50ml、
２回）。水層を冷却し、３規定塩酸を加えてPH２
とし、酢酸エチル（100ml）で抽出、次いで酢酸
エチル層を１規定塩酸（50ml、３回）及び水で洗
い、硫酸ナトリウムで乾燥する。酢酸エチルを留
去し、残渣を石油エーテルで結晶化させ、冷却後
これをろ取する。

収量7.6ｇ（91.7％）、融点94−95℃ Rf²（クロロホルム：メタノール：酢酸＝９：
１：0.5）＝0.58。〔α〕^２０ _Ｄ−1.5゜（Ｃ 0.5、メ
タ
ノール）元素分析 C₁₉H₃₀O₆N₂Sとして計算値Ｃ 55.05；Ｈ 7.30；Ｎ 6.76 分析値Ｃ 55.27；Ｈ 7.09；Ｎ 6.72 実施例４アミノ基の保護基としての、Xys基、２−クロ
ル−ベンジルオキシカルボニル基及び、Ｚ基の
トリフルオル酢酸に対する安定性の比較 Boc−Lys（Xys）−OH（41.4mg、0.1ミリモ
ル）、Boc−Lys（２−Ll−Ｚ）−OH・ｔ−ブチル
アミン塩（48.8mg、0.1ミリモル）及び、Boc−
Lys（Ｚ）−OH・ジシクロヘキシルアミン塩
（56.1mg、0.1ミリモル）を、それぞれアニソール
（0.03ml）を含んだトリフルオル酢酸（0.5ml）に
溶かし、24時間室温に放置する。トリフルオル酢
酸を留去し、残渣に冷水を加えて20mlとする。こ
の溶液の一定量を取り、アミノ酸分析器にて溶液
中のリジンの含量を定量し、リジンの生成率（各
ε−アミノ保護基の切断率）を計算する。

Xys基： 0.0％２−Cl−Ｚ基： 4.8％Ｚ基： 70.6％実施例５アミノ基の保護基としての、Xys基、ベンジル
スルホニル基及び、２−クロル−ベンジルオキ
シカルボニル基のフツ化水素による切断率の比
較 Boc−Lys（Xys）−OH（124.4mg、0.3ミリモ
ル）、Ｎ〓−ベンジルスルホニルリジン（90mg、
0.3ミリモル）及びBoc−Lys−（２−Cl−Ｚ）−
OH・ｔ−ブチルアミン塩（146.4mg、0.3ミリモ
ル）をそれぞれ、アニソール（0.1ml）存在下、
フツ化水素（２ml）cm²−20℃、１時間処理する。
フツ化水素を留去した後、残渣をそれぞれ水（50
ml）に溶す。この一定量を取り、アミノ酸分析器
にて溶液中のリジンを定量し、リジンの生成率を
計算する。

Xys基： 97.3％ベンジルスルホニル基： 64.4％２−Cl−Ｚ基： 86.3％実施例６Ｈ−Gly−Lys−Gly−OHの合成 (a) Boc−Lys（Xys）−GlyOBzlの調製 Boc−Lys（Xys）−OH（829mg、２ミリモ
ル）、Ｈ−Gly−OBzl・TosOH（742mg、2.2ミ
リモル）及びHONb（396mg、2.2ミリモル）を
アセトニトリル（30ml）に溶かし、０℃に冷却
する。トリエチルアミン（0.31ml）とジシクロ
ヘキシルカルボジイミド（454mg、2.2ミリモ
ル）を加えた後、０℃で３時間、室温で15時間
撹拌を続ける。ジシクロヘキシルウレアをろ去
した後、溶媒を留去し、残渣を酢酸エチル（50
ml）に溶かし、これを５％炭酸水素ナトリウム
水溶液、１規定塩酸、及び水で洗い、硫酸ナト
リウムで乾燥する。溶媒を留去し、残渣にエー
テルを加えて結晶化させ、冷却後ろ取する。

収量1.10ｇ（97.9％）、融点87−89℃、〔α〕^２０ _Ｄ−
9.4゜（Ｃ 0.5、メタノール） Rf²＝0.59 元素分析 C₂₈H₃₉O₇N₃Sとして計算値Ｃ 59.87；Ｈ 7.00；Ｎ 7.48 分析値Ｃ 59.99；Ｈ 6.70；Ｎ 7.55 (b) Boc−Gly−Lys（Xys）−Gly−OBzlの調製 Boc−Lys（Xys）−Gly−OBzl（562mg、1.0
ミリモル）をトリフルオル酢酸（２ml）に溶か
し、室温で20分反応させた後、トリフルオル酢
酸を留去する。残渣にエーテル（20ml）を加え
て粉末とし、これをろ取、乾燥する。このトリ
フルオル酢酸塩とＺ−Gly−ONb（370mg、1.0
ミリモル）をジメチルホルムアミド（10ml）に
溶かし、トリエチルアミン（0.14ml）を加え、
以後室温で１時間撹拌する。溶媒を留去し、残
渣を酢酸エチル（20ml）に溶し、この溶液を５
％炭酸水素ナトリウム水溶液、１規定塩酸及び
水で洗つた後、硫酸ナトリウムで乾燥する。溶
媒を留去し、残渣にエーテルを加えて結晶化さ
せ、さらにここに石油エーテルを加え、冷却後
に結晶をろ取する。

収量561mg（86％）、融点70−71℃ 〔α〕^２０ _Ｄ＋1.34゜（Ｃ 0.5、メタノール） Rf²＝0.48 元素分析 C₃₃H₄₀O₈N₄Sとして計算値Ｃ 60.71；Ｈ 6.18；Ｎ 8.58；Ｓ 6.91 分析値Ｃ 60.71；Ｈ 6.27；Ｎ 8.57；Ｓ 4.89 (c) Ｈ−Gly−Lys−Gly−OHの合成Ｚ−Gly−Lys（Xys）−Gly−OBzl（195mg、
0.3ミリモル）をアニソール（0.3ml）存在下、
フツ化水素（３ml）で、−20℃、１時間処理す
る。フツ化水素を留去した後、残渣を水（20
ml）に溶かし、これをエーテルで抽出する。水
層をアンバーライトIR−45（酢酸型、２×５
cm）のカラムに通し、次いでカラムを水（30
ml）で洗う。通過液と洗液を合わせ、ここに１
規定塩酸（0.6ml）を加えた後、凍結乾燥す
る。羽毛状白色粉末を得る。

収量91mg（90.4％）、〔α〕^２０ _Ｄ−22.7゜（Ｃ
0.5、１規定塩酸）、Rf¹＝0.13 元素分析 C₁₀H₂₀O₄N₄・2HCl・1/2H₂Oとして計算値Ｃ 35.09；Ｈ 6.77；Ｎ 16.37 分析値Ｃ 35.41；Ｈ 6.70；Ｎ 16.16 実施例７Ｈ−Gly−Lys（Xys）−Gly−OHの合成Ｚ−Gly−Lys（Xys）−Gly−OBzl（130mg、
0.2ミリモル）を、エタノール−水（15ml−15
ml）の混合溶媒中、パラジウム黒を触媒として、
室温で３時間、接触還元する。触媒をろ去した
後、溶媒を留去して得られる結晶残渣を水−エタ
ノールから再結晶する。

収量75mg（87％）、融点214℃（分解）〔α〕^２０ _Ｄ−
14.5゜（Ｃ 0.5、酢酸）、Rf＝0.61 元素分析 C₁₈H₂₆O₆N₄S・1/2H₂Oとして計算値Ｃ 49.41；Ｈ 6.68；Ｎ 12.80；Ｓ 7.33 分析値Ｃ 49.78；Ｈ 6.81；Ｈ 12.86；Ｓ 6.77 実施例８ PGlu−Leu−Tyr−Glu−Asn−Lys−Pro−
Arg−Arg−Pro−Tyr−Ile−Leu−OH（ニユ
ーロテンシン）の合成 (a) Ｚ−Asn−Lys（Xys）−Pro−OBzlの調製 Boc−Lys（Xys）−OH（4.14ｇ、10ミリモ
ル）、Ｈ−Pro−OBzl・HCl（2.65ｇ、11ミリモ
ル）、及びHONb（1.99ｇ、11ミリモル）をア
セトニトリル（30ml）に溶かし、０℃に冷却す
る。ここにトリエチルアミン（1.54ml）と、ジ
シクロヘキシルカルボジイミド（2.27ｇ、11ミ
リモル）を加え、０℃で４時間、室温で15時間
撹拌する。ジシクロヘキシルウレアをろ去した
後、溶媒を留去する。残渣を酢酸エチル（100
ml）に溶かし、これを５％炭酸水素ナトリウム
水溶液、１規定塩酸及び水にて洗浄した後、硫
酸ナトリウムで乾燥する。酢酸エチルを留去し
て、シロツプ状のBoc−Lys（Xys）−Pro−
OBzlを得る。（5.9ｇ、98％、Rf¹＝0.82）。

これをトリフルオル酢酸（30ml）に溶かし、
室温に30分放置する。6.5規定塩酸−ジオキサ
ン（２ml）を加えた後、トリフルオル酢酸を留
去する。油状残渣にエーテル（50ml）と石油エ
ーテル（50ml）を加えてよくかきまぜて上澄み
を捨てる。この操作を３度行ない残渣を水酸化
ナトリウム存在下に乾燥する。このトリフルオ
ル酢酸塩とＺ−Asn−OH（2.61ｇ、10ミリモ
ル）、及びHONb（2.07ｇ、11.5ミリモル）をジ
メチルホルムアミド（30ml）に溶かし、０℃に
冷却した後、トリエチルアミン（1.4ml）及び
ジシクロヘキシルカルボジイミド（2.38ｇ、
11.5ミリモル）を加え、０℃で３時間、室温で
15時間撹拌する。沈殿をろ去し、溶媒を留去す
る。残渣を３％メタノール−クロロホルムを展
開溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフ
イー（６×15cm）で精製する。流出液の500ml
から640mlまでを集め、溶媒を留去し、残渣に
石油エーテルを加えて粉末とし、これを取す
る。

収量2.7ｇ（36％）、融点75−78℃ 〔α〕^２０ _Ｄ−33.4゜（Ｃ 0.5、ジメチルホルムアミ
ド）。Rf¹＝0.58 元素分析 C₃₈H₄₇O₉N₅Sとして計算値Ｃ 60.86；Ｈ 6.32；Ｎ 9.34；Ｓ 6.28 分析値Ｃ 60.71；Ｈ 6.24；Ｎ 9.14；Ｓ 4.17 (b) Ｈ−Asn−Lys（Xys）−Pro−OHの調製Ｚ−Asn−Lys（Xys）−Pro−OBzl（2.25
ｇ、３ミリモル）をエタノール−水（70ml−40
ml）の混合溶媒に溶かし、パラジウム黒を触媒
として、室温で４時間、接触還元を行なう。触
媒をろ去して溶媒を留去する。残渣にアセトニ
トリル（50ml）を加えて粉末とし、これをろ取
する。

収量1.39ｇ（89％）、融点108℃（分解）、〔α〕
^２０ _Ｄ−38.7゜（Ｃ 0.5、酢酸） Rf¹＝0.63 元素分析 C₂₃H₃₅O₇N₅Sとして計算値Ｃ 52.55；Ｈ 6.71；Ｎ 13.33；Ｓ 6.10 分析値Ｃ 52.65；Ｈ 6.88；Ｎ 12.75；Ｓ 5.92 (c) Boc−Glu（OBzl）−Asn−Lys（Xys）−Pro
−OHの調製 Boc−Glu（OBzl）−OH（1.01ｇ、３ミリモ
ル）とHONb（537mg、３ミリモル）をアセト
ニトリル（20ml）に溶かし、０℃に冷却し、こ
こにジシクロヘキシルカルボジイミド（618
mg、３ミリモル）を加え、０℃で３時間、室温
で５時間撹拌する。析出したジシクロヘキシル
ウレアを去した後、溶媒を留去してBoc−
Glu−ONbを得る。（以下、Noc−アミノ酸の
HONb活性エステルは同様の操作で調製す
る。）Ｈ−Asn−Lys（Xys）−Pro−OH（1.39ｇ、
2.67ミリモル）をジメチルホルムアミド（40
ml）に溶かし、ここにトリエチルアミン（0.38
ml）及び、上記Boc−Glu（OBzl）−ONbを加
え、室温で20時間撹拌する。溶媒を留去し、残
渣を５％炭酸水素ナトリウム水溶液（80ml）に
溶かし、酢酸エチルで抽出する（40ml、２
回）。水層を冷却して、３規定酢酸でPH２と
し、これを酢酸エチル−ｎ−ブタノール（100
ml−20ml）の混合溶媒で抽出する。有機層を水
洗し、硫酸ナトリウムで乾燥した後、溶媒を約
15mlにまで濃縮する。ここにエーテル（60ml）
を加えて冷却後、生じた沈殿をろ取する。

収量1.55ｇ（69％）、融点124℃（分解）、〔α〕
^２０ _Ｄ−23.9゜（Ｃ 0.5、ジメチルホルムアミ
ド）、Rf³（酢酸エチル：ピリジン：酢酸：水＝
60：20：６：11）＝0.60 元素分析 C₄₀H₅₆O₁₂N₆Sとして計算値Ｃ 56.85；Ｈ 6.68；Ｎ 9.96；Ｓ 3.80 分析値Ｃ 56.70；Ｈ 6.78；Ｎ 9.84；Ｓ 3.69 (d) Boc−Tyr−Glu（OBzl）−Asn−Lys
（Xys）−Pro−OHの調製 Boc−Glu（OBzl）−Asn−Lys（Xys）−Pro
−OH（1.01ｇ、1.2ミリモル）をトリフルオル
酢酸（10ml）に溶かし、室温に30分放置する。
トリフルオル酢酸を留去した後、残渣にエーテ
ル（30ml）を加え、沈殿をろ取し、乾燥する。
これをジメチルホルムアミド（20ml）に溶か
し、ここにトリエチルアミン（0.34ml）及び、
Boc−Tyr−OSu（570mg、1.5ミリモル）を加
え室温で48時間撹拌を続ける。反応液に２％ク
エン酸水溶液（100ml）を加え、沈殿物をｎ−
ブタノール（100ml）で抽出する。ｎ−ブタノ
ール層を充分水洗した後、これを約10mlにまで
濃縮し、ここにエーテル（50ml）を加えて冷却
し、沈殿を取する。

収量1.13ｇ（93.4％）、融点119−120℃、〔α〕^２０ _Ｄ
−22.9゜（Ｃ 0.5、ジメチルホルムアミド）。
Rf³＝0.46 元素分析 C₄₉H₆₅O₁₄N₇Sとして計算値Ｃ 58.37；Ｈ 6.50；Ｎ 9.73；Ｓ 3.18 分析値Ｃ 58.29；Ｈ 7.14；Ｎ 9.61；Ｓ 3.16 (e) Boc−Leu−Tyr−Glu（OBzl）−Asn−Lys
（Xys）−Pro−OHの調製 Boc−Tyr−Glu（OBzl）−Asn−Lys
（Xys）−Pro−OH（860mg、0.85ミリモル）を
トリフルオル酢酸（５ml）に溶かし、室温に30
分放置した後、トリフルオル酢酸を留去する。
エーテル（30ml）を加えて沈殿をろ取し、乾燥
する。これをジメチルホルムアミド（20ml）に
溶かし、トリエチルアミン（0.24ml）と、Boc
−Leu−ONb（Boc−Leu−OH、HONb、及び
DCC各々1.02ミリモルから調製した。）を加
え、室温で20時間撹拌する。反応液に２％クエ
ン酸水溶液（100ml）を加え、生じた沈殿を
取し、充分水洗する。これをアセトニトリル−
エーテルから再沈殿する。

収量824mg（88.2％）、融点158−160℃、〔α〕^２０ _Ｄ
−21.4゜（Ｃ 0.5、ジメチルホルムアミド）、
Rf³＝0.48 元素分析 C₅₅H₇₆O₁₅N₈Sとして計算値Ｃ 58.91；Ｈ 6.83；Ｎ 9.99；Ｓ 2.86 分析値Ｃ 58.77；Ｈ 7.10；Ｎ 9.99；Ｓ 2.71 (f) Ｚ−pGlu−Leu−Tyr−Glu（OBzl）−Asn−
Lys（Xys）−Pro−OHの調製 Boc−Leu−Tyr−Glu（CBzl）−Asn−Lys
（Xys）−Pro−OH（6.17mg、0.55ミリモル）を
トリフルオル酢酸（５ml）に溶かし、室温に30
分放置した後、トリフルオル酢酸を留去する。
ここにエーテル（30ml）を加えて生じた沈殿を
ろ取する。これをジメチルホルムアミド（10
ml）に溶かし、ここにトリエチルアミン（0.16
ml）とＺ−pGlu−ONb（281mg、0.66ミリモ
ル）を加えて室温で48時間撹拌する。反応液に
２％クエン酸水溶液（100ml）を加え、生じた
沈殿をろ取し、充分水洗する。この粗製物を熱
アセトニトリル（30ml）で洗う。

収量595mg（85.4％）、融点209−211℃、〔α〕^２０ _Ｄ
−31.2゜（Ｃ 0.5、ジメチルホルムアミド）、
Rf²＝0.43 元素分析 C₆₃H₇₉O₁₇N₉Sとして計算値Ｃ 59.75；Ｈ 6.29；Ｎ 9.95；Ｓ 2.53 分析値Ｃ 59.48；Ｈ 6.50；Ｎ 9.73；Ｓ 2.18 (g) Ｚ−Arg（MBS）−Pro−OButの調製Ｚ−Arg（MBS）−OH（7.79ｇ、15ミリモ
ル）とＨ−Pro−OBut（3.57ｇ、15ミリモル）
をアセトニトリル（100ml）に溶かし、０℃に
冷却する。ここにDOC（3.71ｇ、18ミリモ
ル）を加えて、０℃で５時間、室温で15時間撹
拌する。ジシクロヘキシルウレアをろ去し、ア
セトニトリルを留去する。残渣を酢酸エチル
（150ml）に溶かし、これを５％炭酸水素ナトリ
ウム水溶液、１規定塩酸、及び水で抽出した
後、硫酸ナトリウムで乾燥する。酢酸エチルを
留去し、残渣にエーテルを加え、擦つて結晶さ
れる。これを酢酸エチル−エーテルから再結晶
する。

収量6.62ｇ（70％）、融点107−108℃、〔α〕^２０ _Ｄ
−27.5゜（Ｃ 0.5、ジメチルホルムアミド）。
Rf²＝0.69 元素分析 C₃₀H₄₀O₈N₅Sとして計算値Ｃ 57.03；Ｈ 6.54；Ｎ 11.09；Ｓ 5.08 分析値Ｃ 57.01；Ｈ 6.45；Ｎ 11.13；Ｓ 5.09 (h) Ｚ−Arg（MBS）−Arg（MBS）−Pro−OBu^t
の調製Ｚ−Arg（MBS）−Pro−OBu^t（5.05ｇ、８
ミリモル）をメタノール（100ml）に溶かし、
ここにパラジウム黒触媒を加え、水素ガスを16
時間通じて接触還元を行なう。触媒を去した
後メタノールを留去する。残渣及びＺ−Arg
（MBS）−OH（4.15ｇ、８ミリモル）をジメチ
ルホルムアミド（50ml）に溶かし、０℃に冷却
する。ここにDCC（1.98ｇ、9.6ミリモル）を
加え、０℃で５時間、室温で12時間撹拌を続け
る。析出した沈殿を去し、母液に水（300
ml）を加え、析出した油状物を酢酸エチル−ｎ
−ブタノール（200ml−50ml）の混合触媒で抽
出する。有機層を５％炭酸水素ナトリウム水溶
液、１規定塩酸、及び水で洗浄した後、硫酸ナ
トリウムで乾燥する。溶媒を約30mlにまで濃縮
し、ここにエーテル（100ml）を加え、析出し
た沈殿を冷却後にろ取する。

収量5.30ｇ（69.2％）、融点119℃（分解）。
〔α〕^２０ _Ｄ−17.7゜（Ｃ 0.5、ジメチルホルムアミ
ド）。Rf²＝0.34 元素分析 C₄₃H₅₉O₁₂N₉S₂・H₂Oとして計算値Ｃ 52.90；Ｈ 6.30；Ｎ 12.92；Ｓ 6.57 分析値Ｃ 53.21；Ｈ 6.37；Ｎ 12.92；Ｓ 6.29 (i) Ｚ−Ile−Leu−OButの調製Ｚ−Ile−ONb（6.41ｇ、15ミリモル）とＨ
−Leu−OBu^t（2.81ｇ、15ミリモル）をアセト
ニトリル（30ml）に溶かし、室温に24時間放置
する。アセトニトリルを留去し、残渣を酢酸エ
チル（100ml）に溶かし、この溶液を５％炭酸
水素ナトリウム水溶液、１規定塩酸、及び水で
洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥する。溶媒
を留去した後、残渣を少量の石油エーテルから
結晶化させ、冷却後これを取する。

収量5.90ｇ（90.4％）、融点83−85℃、〔α〕^２０ _Ｄ−
18.5゜（Ｃ 0.5、ジメチルホルムアミド）、
Rf²＝0.80 元素分析値 C₂₄H₃₈O₅N₂として計算値Ｃ 66.34；Ｈ 8.81；Ｎ 6.45 分析値Ｃ 66.52；Ｈ 8.97；Ｎ 6.44 (j) Ｚ−Tyr−Ile−Leu−OBu^tの調製Ｚ−Ile−Leu−OBu^t（3.05ｇ、７ミリモル）
をメタノール（100ml）に溶かし、パラジウム
黒を加えた後、水素ガスを３時間通じて接触還
元を行なう。触媒をろ去した後溶媒を留去す
る。この残渣と、Ｚ−Hyr−ONb（3.81ｇ、８
ミリモル）をアセトニトリル（80ml）に溶か
し、室温に24時間放置する。溶媒を留去した
後、残渣を酢酸エチル（100ml）に溶かし、こ
の溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液、１規
定塩酸、水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥す
る。酢酸エチルを留去して得られる結晶残渣
を、酢酸エチル−石油ベンジンから再結晶す
る。

収量3.10ｇ（74.2％）。融点142−144℃。〔α〕^２０ _Ｄ
−22.2゜（Ｃ 0.5、ジメチルホルムアミド）。
Rf²＝0.64。

元素分析 C₃₃H₄₇O₇N₃として計算値Ｃ 66.31；Ｈ 7.93；Ｎ 7.03 分析値Ｃ 66.12；Ｈ 7.93；Ｎ 7.05 (k) Ｚ−Arg（MBS）−Ars（MBS）−Pro−Tyr
−Ile−Leu−OBu^tの調製Ｚ−Tyr−Ile−Leu−OBu^t（2.09ｇ、3.5ミ
リモル）をエタノール（50ml）に溶かし、パラ
ジウム黒を触媒として、４時間接触還元を行な
う。触媒をろ去した後、溶媒を留去して、Ｈ−
Tyr−Ile−Leu−OBu^tを得る。

Ｚ−Arg（MBS）−Arg（MBS）−Pro−OBu^t
（3.35ｇ、3.5ｇ、3.5ミリモル）をトリフルオル
酢酸（20ml）に溶かし０℃で1.5時間放置す
る。トリフルオル酢酸を留去した後、残渣に冷
水（50ml）を加え、生じた油状物をクロロホル
ム−ｎ−ブタノール（120ml−30ml）の混合溶
媒で抽出する。有機層を水洗し、硫酸ナトリウ
ムで乾燥した後、溶媒を留去する。残渣にエー
テル（50ml）を加え、生じた粉末を取してＺ
−Arg（MBS）−Arg（MBS）−Pro−OHを得る
（3.15ｇ、100％）。

Ｚ−Arg（MBS）−Arg（MBS）−Pro−OH、
Ｈ−Tyr−Ile−Leu−OH及び、HONb（822
mg、4.55ミリモル）をジメチルホルムアミド
（50ml）に溶かし０℃に冷却した後、DOC
（940mg、4.55ミリモル）を加える。０℃で５時
間、室温で15時間撹拌を続けた後、ジシクロヘ
キシルウレアを去し、溶媒を留去する。残渣
を酢酸エチル−ｎ−ブタノール（120ml−30
ml）の混合溶媒に溶かし、これを５％炭酸水素
ナトリウム水溶液、１規定塩酸及び、水で洗浄
した後、硫酸ナトリウムで乾燥する。溶媒を約
10mlにまで濃縮し、ここにエーテル（100ml）
を加え、生じた沈殿を冷却後ろ取する。これを
クロロホルム−酢酸エチルから再沈殿する。

収量3.5ｇ（74.5％）。融点138−141℃。〔α〕^２０ _Ｄ
−24.5゜（Ｃ 0.5、ジメチルホルムアミド）。
Rf²＝0.29。

元素分析 C₆₄H₉₀O₁₆N₁₂S₂・H₂Oとして計算値Ｃ 56.28；Ｈ 6.79；Ｎ 12.31；Ｓ 4.70 分析値Ｃ 56.08；Ｈ 6.62；Ｎ 12.08；Ｓ 4.52 (l) pGlu−Leu−Tyr−Glu−Asn−Lys−Pro−
Arg−Arg−Pro−Tyr−Ile−Leu−OH（ニユ
ーロテンシン）の合成Ｚ−Arg（MBS）−Arg（ABS）−Pro−Tyr
−Ile−Leu OBu^t（472mg、0.35ミリモル）をエ
タノール−ジメチルホルムアミド（20ml−10
ml）の混合溶媒に溶かし、パラジウム黒の存在
下、室温で７時間、水素ガスを通じ、接触還元
を行なう。触媒をろ去した後、溶媒を留去す
る。この残渣とＺ−pGlu−Leu−Tyr−Glu
（OBzl）−Asn−Lys（Xys）−Pro−OH（443
mg、0.35ミリモル）及び、HONb（123mg、0.7
ミリモル）をジメチルホルムアミド（10ml）に
溶かし、０℃に冷却する。ここにDCC（144
mg、0.7ミリモル）を加え、以後０℃で５時
間、室温で24時間撹拌を続ける。析出したジシ
クロヘキシルウレアを去し、母液に酢酸エチ
ル（50ml）を加え、生じた沈殿をろ取する。こ
の粉末を熱アセトニトリル（30ml）で洗い、Ｚ
−pGlu−Leu−Tyr−Glu（OBzl）−Agn−Lys
（Xys）−Pro−Arg（MBS）−Arg（MBS）−Pro
−Tyr−Ile−Leu−OBu^tを得る。

収量677mg（78.5％）。融点189−190℃。〔α〕^２０ _Ｄ
−32.6゜（Ｃ 0.5、ジメチルホルムアミド）。
Rf³＝0.74、Rf¹＝0.87。

元素分析 C₁₁₉H₁₆₁O₃₀N₂₁U₃として計算値Ｃ 58.05；Ｈ 6.59；Ｎ 11.95；Ｓ 3.91 分析値Ｃ 57.72；Ｈ 6.66；Ｎ 11.67；Ｓ 3.66 この保護されたトリデカペプチド（482mg、
0.196ミリモル）を粉砕し、アニソール（0.25
ml）存在下、フツ化水素（７ml）で−20℃１時
間処理する。フツ化水素を留去した後、残渣を
５％酢酸水溶液（20ml）に溶かし、これをエー
テルで洗浄する（20ml、２回）。水層をアンバ
ーライトIR−410（酢酸型、２×７cm）のイオ
ン交換樹脂カラムに通し、洗液も合わせて（合
計約80ml）凍結乾燥する。得られた粉末を、少
量のｎ−ブタノール：酢酸：水＝４：１：５の
上層溶液に溶かし、同じ混合溶媒の下層部分で
平衡させたセフアデツクスＧ−25のカラム
（2.5×120cm）の上端に流し込む。以後同混合
溶媒の上層溶液で展開する。流速は40ml／時間
とし、８mlずつ流出液を分取する。流出液の
320mlから400mlまでの部分を集め、溶媒を留去
した後、残渣を水（100ml）に溶かして凍結乾
燥すると純粋な目的物が羽毛状粉末として得ら
れる。

収量215mg（56％）。〔α〕^１９ _Ｄ−100.6゜（Ｃ
0.5、１％酢酸水溶液）。Rf⁴（ｎ−ブタノー
ル：ピリジン：酢酸：水＝15：10：３：12）＝
0.50。Rf¹＝0.61。

元素分析 C₇₈H₁₂₁O₂₀N₂₁・3CH₃COOH・５ H₂Oとして計算値Ｃ 51.93；Ｈ 7.42；Ｎ 15.14 分析値Ｃ 52.05；Ｈ 7.42；Ｎ 15.31 アミノ酸分析 Lys 1.00；アンモニア 0.93；
Arg 2.13；Asp 1.10；Glu 1.93；Pro
2.24；Ile 0.94；Leu 1.87；Tyr 1.90 実施例９ Serum thymic factor（Ｐ・Glu−Ala−Lys−
Ser−Gln−Gly−Gly−Ser−Asn−OH）の製
造 BOC−Asn−樹脂３ｇを自動ペプチド合成機
（島津製作所、APS−800）の反応器に入れ、ジシ
クロメタンで12時間膨潤せしめ、次に示すサイク
ルで各アミノ酸を導入した。

ジクロルメタン（３分間×３回）→50％トリフ
ルオロ酢酸／ジクロルメタン（10分間および30分
間）→ジクロルメタン（３分間×３回）→エタノ
ール（３分間×３回）→クロロホルム（５分間×
３回）→10％トリエチルアミン／クロロホルム
（10分間）→クロロホルム（３分間×３回）→ジ
クロルメタン（３分間×２回）→BOC−アミノ
酸−無水物（常法でBOC−アミノ酸とDOCより
合成、直ちに使用）（30分および60分）→アセチ
ル化（ジクロルメタン、トリエチルアミンおよび
無水酢酸使用）（10分×２回）→ジクロルメタン
（３分×３回）〔但し、BOC−GlnはBOC−Gln−
ONPで導入し、またpGlu−OHはDMF中で直接
DCCで縮合反応を行つた〕最後に樹脂をメタノール、氷酢酸、ジメチルホ
ルムアミドで洗つて、エーテルで洗い乾燥する。
収量3.94ｇこの樹脂３ｇとアニソール３mlを入れたテフロ
ン樹脂のシリンダーに弗化水素30mlを導入し、０
℃で１時間かきまぜる。直ちに弗化水素を減圧で
留去し、残留物を水100mlで２回抽出する。抽出
液をエーテル50mlで３回洗い、これをアンバーラ
イト（Amberlite）IRA−410（酢酸型）のカラム
（φ1.5cm×30cm）に通過させる。通過液を凍結乾
燥すると白色粉末190mgを得る。これを0.1規定酢
酸水にとかし、セフアデツクス（Sephadex）LH
−20のカラム（φ２×150cm）でゲルろ過し、さ
らにセフアデツクスＧ−26のカラム（φ２×160
cm）でゲルろ過すると目的のノナペプチド110mg
を得る。

アミノ酸分析（5.7規定・塩酸加水分解）：Lys
1.05、Asp 0.56、Glu 2.08；Ser 1.87、Gly
1.92、Ala 1.00（回収率86％）実施例 10 Ｎ〓−ｐ−メチルベンジルスルホニル−DL−
α・β−ジアミノプロピオン酸の合成 DL−α・β−ジアミノプロピオン酸・塩酸塩
（140mg）を１規定水酸化ナトリウム水溶液（３
ml）に溶かし、塩基性炭酸銅（180mg）を加え
る。室温で２時間撹拌したのち、不溶物を去す
る。液にジオキサン（５ml）を加え、氷冷す
る。激しく撹拌しつつｐ−メチルベンジルスル
ホニルクロリド（408mg）をジオキサン（３ml）
に溶かした溶液を少しづつ加える。途中１規定水
酸化ナトリウム水溶液を追加し、PH10以上の液性
を保つ。加え終つた後、室温でさらに３時間撹拌
を続ける。ジオキサンを留去し、残留水溶液に濃
硫酸を加えてPH２としたのち、硫化水素ガスを吹
き込む。析出した硫化ナトリウムを去し、液
をアンバーライトIR−120（H⁺型）のイオン交換
樹脂のカラム（１×５cm）に流す。カラムを水
（20ml）で洗つた後、１規定ピリジン水溶液（20
ml）を流し目的物を溶出する。ピリジン水溶液を
約５mlにまで濃縮し、析出した結晶を取する。
これを熱水から再結晶する。収量37mg（13.6
％）、融点235℃（分解）、Rf¹＝0.62 元素分析 C₁₁H₁₆O₄N₂Sとして計算値：Ｃ、48.51：Ｈ、5.92：Ｎ、10.29：Ｓ、11.78 分析値：Ｃ、48.11：Ｈ、5.80：Ｎ、10.14：Ｓ、11.65 実施例 11 (1) PGlu−Ala−Lys（Xys）−Ser（Bzl）−Gln−
Gly−Gly樹脂の製造 BOC−Gly−樹脂6.0ｇを自動ペプチド合成機
（島津製作所、APS−800）の反応器に入れ、ジク
ロルメタンで12時間膨潤せしめ、実施例９に示し
たサイクルで各アミノ酸を導入する。GlnとPGlu
についても、実施例９と同様に行う。最後に樹脂
をメタノール、氷酢酸、ジメチルホルムアミドで
洗つて、エーテルで洗い乾燥する。収量7.0ｇ (2) PGlu−Ala−Lys（Xys）−Ser（Bzl）−Gln−
GLy−Gly−NHNH₂の製造 PGlu−Ala−Lys（Xys）−Ser（Bzl）−Gln−
Gly−Gly−樹脂3.6ｇをジメチルホルムアミド
18mlに懸濁し、抱水ヒドラジン２mlを加え、室
温で48時間ゆるやかにかきまぜる。樹脂をろ去
してろ液を減圧留去し、残留物にエーテルを加
え粉末としてろ取する。収量476mg これを酢酸エチル：ピリジン：酢酸：水
30：10：１：５の溶媒で充填したシリカゲルカ
ラム（2.7×３cm）の上端に流しこみ、以後同
じ溶媒で溶出して70〜80mlの分画を集める。溶
媒を留去して残留物にエーテルを加えて粉末と
しろ取する。収量168mg、融点196−199℃、Rf₃
＝0.16、Rf₁＝0.51 ５、７規定塩酸加水分解物のアミノ酸分析値
Lys 0.96、Ser 0.92、Glu 2.02、Gly 1.94、
Ala 1.0、平均回収率 76.6％ (3) シアラムサイミツクフアクター（Serum
thymic factor）（PGlu−Ala−Lys−Ser−Gln
−Gly−Gly−Ser−Asn−OH）の製造 PGlu−Ala−Lys（Xys）−Ser（Bzl）−Gln−
Gly−Gly−NHNH₂140mgをジメチルホルムアミ
ド５mlに溶解し、−70℃に冷却して、６、５、
１規定塩酸−ジオキサン0.05mlとイソアミナ
イトリル0.02mlを加え、−30℃で35分かきま
ぜ、再び−70℃に冷却して、トリエチルアミン
0.05mlを加える。さらにＺ−Ser−Asn−
OBu^t123mgを還元して得たHCl−Ｈ−Ser−Asn
−OBu^tをジメチルホルムアミド２mlに溶かし
て加え、次にトリエチルアミン0.05mlを加え−
15℃〜５℃で30時間かきまぜる。不溶物をろ去
し、ろ液を減圧留去して残留物にエーテルを加
え粉末としてろ取する。この粉末とアニソール
を入れたテフロン樹脂のシリンダーに弗化水素
５mlを導入し、０℃で１時間かきまぜる。直ち
に弗化水素を減圧で留去し、残留物を水10mlで
２回抽出する。抽出液をエーテル３mlで３回洗
い、これをアンバーライト（Amberlite）IRA
−410（酢酸型）のカラム（1.5×10cm）に通
し、通過液を凍結乾燥して白色粉末170mgを得
る。これをセフアデツクス（Sepha−dex）LX
−20のカラム（2.2×119cm）でゲルろ過し、
176〜188mlの流出液を集めて凍結乾燥し、目的
のノナペプチド23mgを得る。〔α〕^２７ _Ｄ−65.6゜
（Ｃ 0.5、水）、Rf₄（セルロース）＝0.19、PH
6.5、600V電気泳動値 0.17×Arg（Argの泳動
5.4cm）5.7規定塩酸加水分解物のアミノ酸分
析値 Lys 1.10、Asp 1.03、Ser 1.86、Glu
2.05、Gly 2.0、Ala 1.0、平均回収率 71.3％

Claims

【特許請求の範囲】

１ ω−アミノ基を有する炭素数が６までの直鎖
状アミノ酸を含有するペプチドの製造にあたり、
該ω−アミノ基含有原料化合物のω−アミノ基を
ｐ−メチルベンジルスルホニルで保護して、ペプ
チド縮合した後保護基を弗化水素で脱離せしめる
ことを特徴とするペプチドの製造法。