JPS61282099A - １２−ケト−３α，７α−ジヒドロキシコラン酸の製造方法 - Google Patents
１２−ケト−３α，７α−ジヒドロキシコラン酸の製造方法Info
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- JPS61282099A JPS61282099A JP12276985A JP12276985A JPS61282099A JP S61282099 A JPS61282099 A JP S61282099A JP 12276985 A JP12276985 A JP 12276985A JP 12276985 A JP12276985 A JP 12276985A JP S61282099 A JPS61282099 A JP S61282099A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明はコール＠（３α、７α、１２α−トリヒドロキ
シ−５β−フラン酸）から、胆石溶解剤としであるいは
利胆剤ウルソデオキシコール酸（ＵＤＣ） （７）合成
原料として有用なケノデオキシコール酸（ＣＤＣ）の製
造中間体である１２−ケト−３α、７α−ジヒドロキシ
−５β−フラン酸（以下１２−ケトコール酸と略称する
）を、微生物を用いて効率よく製造する方法に関する。
シ−５β−フラン酸）から、胆石溶解剤としであるいは
利胆剤ウルソデオキシコール酸（ＵＤＣ） （７）合成
原料として有用なケノデオキシコール酸（ＣＤＣ）の製
造中間体である１２−ケト−３α、７α−ジヒドロキシ
−５β−フラン酸（以下１２−ケトコール酸と略称する
）を、微生物を用いて効率よく製造する方法に関する。
（従来の技術）
従来、微生物を用いてコール酸よシ１２−ケトコール酸
を製造する方法には、アルスロバクタ−属の微生物を用
いる方法（特開昭５７−８７９６号など）、ブレビバク
テリウム属の微生物を用いる方法（特開昭５６−２９９
９８号など）などが公知である。また、本発明者等も、
ミクロコツカス属及びコリネバクテリウム属に属する特
定の微生物が培地中に添加されたコール酸塩よシ１２−
ケトコール酸塩を生成することを見出し特許出願をした
。
を製造する方法には、アルスロバクタ−属の微生物を用
いる方法（特開昭５７−８７９６号など）、ブレビバク
テリウム属の微生物を用いる方法（特開昭５６−２９９
９８号など）などが公知である。また、本発明者等も、
ミクロコツカス属及びコリネバクテリウム属に属する特
定の微生物が培地中に添加されたコール酸塩よシ１２−
ケトコール酸塩を生成することを見出し特許出願をした
。
（特願昭５７−２２７４８７号等）
（発明が解決しようとする問題点）
しかし、これらのいずれの方法においても短時間で高収
量、高純度の１２−ケトコール酸を得るのは困難であシ
、本発明者等の知見によれば、培地中にコール酸塩を添
加し、培養して１２−ケトコール酸塩を得る方法では１
２−ケトコール酸の生成速度、残存するコール酸の量、
得られる１２−ケトコール酸の着色度合等におのずと限
界があり、効率よい方法とは判断できない。本発明の目
的は、高濃度のコール酸から短時間で高収量、高純度の
１２−ケトコール酸を得ることにある。
量、高純度の１２−ケトコール酸を得るのは困難であシ
、本発明者等の知見によれば、培地中にコール酸塩を添
加し、培養して１２−ケトコール酸塩を得る方法では１
２−ケトコール酸の生成速度、残存するコール酸の量、
得られる１２−ケトコール酸の着色度合等におのずと限
界があり、効率よい方法とは判断できない。本発明の目
的は、高濃度のコール酸から短時間で高収量、高純度の
１２−ケトコール酸を得ることにある。
（問題点を解決するための手段）
本発明者等は、長年、コール酸から１２−ケトコール酸
を生成する微生物及びその微生物を用いた１２−ケトコ
ール酸の製造方法について研究を重ねてきた。その結果
、ミクロコツカス属に属する特定の微生物を培養し、そ
の菌体または菌体を含む培養液を、コール酸及び／又は
その塩を含む緩衝液と混合して反応させ、反応液中に１
２−ケトコール酸及び／又はその塩を生成せしめこれを
採取する方法によシ高収量、高純度の１２−ケトコール
酸が得られることを知見し、本発明を完成するに致った
。
を生成する微生物及びその微生物を用いた１２−ケトコ
ール酸の製造方法について研究を重ねてきた。その結果
、ミクロコツカス属に属する特定の微生物を培養し、そ
の菌体または菌体を含む培養液を、コール酸及び／又は
その塩を含む緩衝液と混合して反応させ、反応液中に１
２−ケトコール酸及び／又はその塩を生成せしめこれを
採取する方法によシ高収量、高純度の１２−ケトコール
酸が得られることを知見し、本発明を完成するに致った
。
、 本発明で使用される微生物には、ミクロコッカスＳ
Ｄ−１０１（微工研菌寄第６８４１号）及び、その突然
変異株並びに遺伝子組替え株等であるが、特にこれらの
微生物に限定するものでなく、ミクロコツカス属に属す
る微生物でコール酸及び／又はその塩よシ１２−ケトコ
ール酸及び／又はその塩を生成するものであれば特に限
定はない。
Ｄ−１０１（微工研菌寄第６８４１号）及び、その突然
変異株並びに遺伝子組替え株等であるが、特にこれらの
微生物に限定するものでなく、ミクロコツカス属に属す
る微生物でコール酸及び／又はその塩よシ１２−ケトコ
ール酸及び／又はその塩を生成するものであれば特に限
定はない。
本発明で使用される培地は、前記微生物が培養によ）増
殖し得るものならば任意のものでよく、例えば炭素源と
してはグルコース、フラクトース、シュクロース、酢酸
１エチルアルコール、グリセリンなど、窒素源としては
一’！ｆトン、肉エキス、酵母エキス、コーンステイー
プリカー等の有機窒素、硫酸アンモニウム、硝酸アンモ
ニウム等の無機窒素が用いられる。また、このほかにリ
ン酸二水素カリウム、リン酸水素二カリウム、硫酸第一
鉄、硫酸マンガン、硫酸マグネシウムなどの無機塩が添
加される。
殖し得るものならば任意のものでよく、例えば炭素源と
してはグルコース、フラクトース、シュクロース、酢酸
１エチルアルコール、グリセリンなど、窒素源としては
一’！ｆトン、肉エキス、酵母エキス、コーンステイー
プリカー等の有機窒素、硫酸アンモニウム、硝酸アンモ
ニウム等の無機窒素が用いられる。また、このほかにリ
ン酸二水素カリウム、リン酸水素二カリウム、硫酸第一
鉄、硫酸マンガン、硫酸マグネシウムなどの無機塩が添
加される。
本発明における培養は好気的条件下に例えば通気攪拌法
や往復振盪法によって培養することができる。温度は２
０〜３８℃のいずれでもよいが、好ましくは２２〜２７
℃である。この範囲よシ低温では微生物の生育速度が遅
く、またこの範囲よシ高温では、微生物がコール酸及び
／又はその塩から１２−ケトコール酸及び／又はその塩
を生成する変換活性が著しく悪化する。培養時の声は６
．０〜９．０のいずれでもよいが、好ましくは培養初期
にｐＨ７，０〜８．０とし、成る程度培養が進んだ段階
でｐＨ５，８〜６．２とすることが適当である。この範
囲よシ低−では微生物の生育遺産が遅（、寸たこの範囲
よシ高ＰＨでは微生物がコール酸及び／又はその塩から
１２−ケトコール酸及び／又はその塩を生成する変換活
性が悪化する。培養時間は８〜３０時間程度で実施する
。
や往復振盪法によって培養することができる。温度は２
０〜３８℃のいずれでもよいが、好ましくは２２〜２７
℃である。この範囲よシ低温では微生物の生育速度が遅
く、またこの範囲よシ高温では、微生物がコール酸及び
／又はその塩から１２−ケトコール酸及び／又はその塩
を生成する変換活性が著しく悪化する。培養時の声は６
．０〜９．０のいずれでもよいが、好ましくは培養初期
にｐＨ７，０〜８．０とし、成る程度培養が進んだ段階
でｐＨ５，８〜６．２とすることが適当である。この範
囲よシ低−では微生物の生育遺産が遅（、寸たこの範囲
よシ高ＰＨでは微生物がコール酸及び／又はその塩から
１２−ケトコール酸及び／又はその塩を生成する変換活
性が悪化する。培養時間は８〜３０時間程度で実施する
。
菌体は培養液を遠心分離などの方法で処理し、集菌した
のち、あるいはさらに生理食塩水等で洗浄したのち、コ
ール酸及び／又は含む緩衝液に懸濁してもよく、集菌せ
ずに菌体の浮遊した培養液とコール酸及び／又はその塩
を含む緩衝液を直接混合してもよい。得られる生成物は
集菌ののち懸濁して反応させたもののほうが着色が少な
いが、工業的には集菌せずに混合する方法がよシ容易で
ある。
のち、あるいはさらに生理食塩水等で洗浄したのち、コ
ール酸及び／又は含む緩衝液に懸濁してもよく、集菌せ
ずに菌体の浮遊した培養液とコール酸及び／又はその塩
を含む緩衝液を直接混合してもよい。得られる生成物は
集菌ののち懸濁して反応させたもののほうが着色が少な
いが、工業的には集菌せずに混合する方法がよシ容易で
ある。
本発明の変換反応時のコール酸及び／又はその塩の濃度
は５〜５００１１／Ｉｔでよく、反応時間、操作法など
の条件を考慮し、１０ｇ〜１００１１７！程度が好まし
い。用いる緩衝液はリン酸２水素カリウムとリン酸１水
素カリウムなどのリン酸塩、トリヒドロキシメチルアミ
ノメタン塩酸塩、ホウ酸ナトリウムなどのホウ酸塩、四
ホウ酸ナトリウムなどの四ホウ酸塩等でよく、変換反応
時の濃度は１０ミリモル／！〜５００ミリモル／！でよ
いが、特にホウ酸塩、四ホウ酸塩を１０ミリモル／！〜
５００ミリモル／ｊの濃度で用いるのが好ましい。ホウ
酸塩、四ホウ酸またはそれらの塩の添加により、副生物
の生成は極めて低い割合におさ、見られるが、リン酸塩
、トリスヒドロキシメチルアミノメタンの塩では副生物
が少量生成する。
は５〜５００１１／Ｉｔでよく、反応時間、操作法など
の条件を考慮し、１０ｇ〜１００１１７！程度が好まし
い。用いる緩衝液はリン酸２水素カリウムとリン酸１水
素カリウムなどのリン酸塩、トリヒドロキシメチルアミ
ノメタン塩酸塩、ホウ酸ナトリウムなどのホウ酸塩、四
ホウ酸ナトリウムなどの四ホウ酸塩等でよく、変換反応
時の濃度は１０ミリモル／！〜５００ミリモル／！でよ
いが、特にホウ酸塩、四ホウ酸塩を１０ミリモル／！〜
５００ミリモル／ｊの濃度で用いるのが好ましい。ホウ
酸塩、四ホウ酸またはそれらの塩の添加により、副生物
の生成は極めて低い割合におさ、見られるが、リン酸塩
、トリスヒドロキシメチルアミノメタンの塩では副生物
が少量生成する。
変換反応時のＰＨはｐＨ６，７〜９．０でよいが、声６
．７〜７．２が好ましい。緩衝液にホウ酸、四ホウ酸及
び／又はその塩を用いた場合でもこの範囲よシ高−では
副生物が少量生成する。この範囲より低声ではコール酸
が析出し、変換活性が失なわれる。−の調整は水酸化ナ
トリウム等のアルカリ金属水酸化物の水溶液と、塩酸、
硫酸等の酸で行なう。変換反応時の温度は２０〜４５℃
でよいが、３５〜４１℃が好ましい。この範囲よシ低温
では残存するコール酸及び／又はその塩が多く、この範
囲よシ高温では変換活性の失活が短時間で起こる。変換
反応の時間はコール酸濃度等の条件にょって異なるが２
〜７２時間程度で実施する。
．７〜７．２が好ましい。緩衝液にホウ酸、四ホウ酸及
び／又はその塩を用いた場合でもこの範囲よシ高−では
副生物が少量生成する。この範囲より低声ではコール酸
が析出し、変換活性が失なわれる。−の調整は水酸化ナ
トリウム等のアルカリ金属水酸化物の水溶液と、塩酸、
硫酸等の酸で行なう。変換反応時の温度は２０〜４５℃
でよいが、３５〜４１℃が好ましい。この範囲よシ低温
では残存するコール酸及び／又はその塩が多く、この範
囲よシ高温では変換活性の失活が短時間で起こる。変換
反応の時間はコール酸濃度等の条件にょって異なるが２
〜７２時間程度で実施する。
反応液からの生成物すなわち１２−ケトコール 酸
の回収は公知の方法によって収率よく行なうことができ
る。例えば、反応液のＰＨを酸の添加によシ低下させ得
られた１２−ケトコール酸の沈澱をろ過後、乾燥しても
よく、−を低下させた後、酢酸エチルなどの有機溶媒に
よって１２−ケトコール酸を抽出した後、溶媒を留去し
てもよい。
の回収は公知の方法によって収率よく行なうことができ
る。例えば、反応液のＰＨを酸の添加によシ低下させ得
られた１２−ケトコール酸の沈澱をろ過後、乾燥しても
よく、−を低下させた後、酢酸エチルなどの有機溶媒に
よって１２−ケトコール酸を抽出した後、溶媒を留去し
てもよい。
（作 用）
本発明においては、微生物をコール酸塩を含む培地中で
培養させることなく、コール酸及び／又はその塩を含ま
ない培地中で培養し、その菌体をコール酸及び／又はそ
の塩を含む緩衝液に懸濁又は混合し反応させる方法によ
シ、微生物のコール酸及び／又はから１２−ケトコール
酸及び／又はへの変換活性を最も高らしめる条件での培
養を可 □能とし、また変換反応時の温度、声等の
条件を正確に制御することを可能としたため、短時間で
高収量、高純度の１２−ケトコール酸を得ることができ
るものである。
培養させることなく、コール酸及び／又はその塩を含ま
ない培地中で培養し、その菌体をコール酸及び／又はそ
の塩を含む緩衝液に懸濁又は混合し反応させる方法によ
シ、微生物のコール酸及び／又はから１２−ケトコール
酸及び／又はへの変換活性を最も高らしめる条件での培
養を可 □能とし、また変換反応時の温度、声等の
条件を正確に制御することを可能としたため、短時間で
高収量、高純度の１２−ケトコール酸を得ることができ
るものである。
培養温度は２２〜２７℃の範囲でコール酸及び／又はそ
の塩から１２−ケトコール酸及び／又はその塩を生成す
る酵素の菌体内での合成が最も活発であるものと推定さ
れる。また培養時声も−５，８〜６．２で当該酵素の合
成が最も活発であると推定される。
の塩から１２−ケトコール酸及び／又はその塩を生成す
る酵素の菌体内での合成が最も活発であるものと推定さ
れる。また培養時声も−５，８〜６．２で当該酵素の合
成が最も活発であると推定される。
また、変換反応温度については、高温はどコール酸又は
その塩と１２−ケトコール酸又はその塩との化学平衡が
、１２−ケトコール酸又はその塩側に存在すると推定さ
れ、コール酸及び／又はその塩から１２−ケトコール酸
及び／又はその塩を生成する酵素の至適温度が４０’Ｃ
付近であシ、コール酸及び／又はその塩から副生物を生
成する酵素及び１２−ケトコール酸及び／又はその塩か
ら副生物を生成する酵素の至適温度は３７℃よシ低温に
あると考えられる。
その塩と１２−ケトコール酸又はその塩との化学平衡が
、１２−ケトコール酸又はその塩側に存在すると推定さ
れ、コール酸及び／又はその塩から１２−ケトコール酸
及び／又はその塩を生成する酵素の至適温度が４０’Ｃ
付近であシ、コール酸及び／又はその塩から副生物を生
成する酵素及び１２−ケトコール酸及び／又はその塩か
ら副生物を生成する酵素の至適温度は３７℃よシ低温に
あると考えられる。
°変換反応時の−については、コール酸及び／又はその
塩から１２−ケトコール酸及び／又はその塩を生成する
酵素の至適−がｐＨ６，８付近に存在しコール酸及び／
又はその塩から副生物を＃虎ナス酵素及び１２−ケトコ
ール酸及び／又はその塩から副生物を生成する酵素の至
適…は７．２〜７．５にあるものと考えられる。
塩から１２−ケトコール酸及び／又はその塩を生成する
酵素の至適−がｐＨ６，８付近に存在しコール酸及び／
又はその塩から副生物を＃虎ナス酵素及び１２−ケトコ
ール酸及び／又はその塩から副生物を生成する酵素の至
適…は７．２〜７．５にあるものと考えられる。
さらに、ホウ酸、四ホウ酸及び／又はその塩はｐＨ５，
８〜６．２の範囲でコール酸及び／又はその塩から副生
物を生成する酵素及び１２−ケトコール酸及び／又はそ
の塩から副生物を生成する酵素を強く阻害するものと推
定される。
８〜６．２の範囲でコール酸及び／又はその塩から副生
物を生成する酵素及び１２−ケトコール酸及び／又はそ
の塩から副生物を生成する酵素を強く阻害するものと推
定される。
（効 果）
本発明によればミクロコツカス属に属する特定の微生物
を培養しその菌体あるいは菌体を含む培養液をコール酸
及び／又はその塩を含む緩衝液に懸濁、あるいは混合し
、反応させることにょシ、高濃度のコール酸及び／又は
その塩よυ高収量、高純度の１２−ケトコール酸を得る
ことが可能である。さらに前記の特定温度範囲、特定声
範囲、特定緩衝液を用いればその効果は著しい。さらに
また、このような微生物菌体を一種の触媒として用いる
方法は、菌体の〈シ返しの使用による経費の節減、ある
いは他の微生物において公知の方法による菌体の固定化
などの可能性を強く示唆するものである。
を培養しその菌体あるいは菌体を含む培養液をコール酸
及び／又はその塩を含む緩衝液に懸濁、あるいは混合し
、反応させることにょシ、高濃度のコール酸及び／又は
その塩よυ高収量、高純度の１２−ケトコール酸を得る
ことが可能である。さらに前記の特定温度範囲、特定声
範囲、特定緩衝液を用いればその効果は著しい。さらに
また、このような微生物菌体を一種の触媒として用いる
方法は、菌体の〈シ返しの使用による経費の節減、ある
いは他の微生物において公知の方法による菌体の固定化
などの可能性を強く示唆するものである。
以下、本発明の実施例を示すが、本発明はこれに限定さ
れるものではない。
れるものではない。
実施例１
下記組成の培地を５にジャーファーメンタｉに入れ、１
２０℃４０分のオートクレーブ加熱滅菌を行なった。冷
却後、２規定水酸化ナトリウム溶液によシーを７．２に
調整し、無菌的にグルコース４０ｇを加えた。この培地
に、予め同一培地で５００ｄ三角フラスコによシ前培養
しておｈたミクロコッカスＳＤ−１０１の培養液５Ｑｍ
を加え、２５℃で２４時間培養した。菌の生育とともに
声は低下し、ｐＨ６，０になった時点から１４チアンモ
ニア水の添加を開始し、−を６．０〜６．２に保った。
２０℃４０分のオートクレーブ加熱滅菌を行なった。冷
却後、２規定水酸化ナトリウム溶液によシーを７．２に
調整し、無菌的にグルコース４０ｇを加えた。この培地
に、予め同一培地で５００ｄ三角フラスコによシ前培養
しておｈたミクロコッカスＳＤ−１０１の培養液５Ｑｍ
を加え、２５℃で２４時間培養した。菌の生育とともに
声は低下し、ｐＨ６，０になった時点から１４チアンモ
ニア水の添加を開始し、−を６．０〜６．２に保った。
次に、との培養液１！をとり、コール酸４０．９を含む
２００ミリモル／！のホウ酸緩衝液（声７．０）１！に
加え、声を７．０にした。この反応液を３７℃で２６時
間通気攪拌したのち、遠心分離した。
２００ミリモル／！のホウ酸緩衝液（声７．０）１！に
加え、声を７．０にした。この反応液を３７℃で２６時
間通気攪拌したのち、遠心分離した。
上清の−を１規定塩酸でｐＨ２−まで降下させ、生成物
を析出させた。吸引ろ過後、風乾して１２−ケトコール
酸を得た。変換反応の進行度合は、反応開始後冬時間の
反応液を下記の方法で分析することによシ確かめられた
。結果は表１に示す通りである。
を析出させた。吸引ろ過後、風乾して１２−ケトコール
酸を得た。変換反応の進行度合は、反応開始後冬時間の
反応液を下記の方法で分析することによシ確かめられた
。結果は表１に示す通りである。
培地組成
グルコース ２チ（別に滅菌して添加）硫酸アンモニ
ウム ０．２％ リン酸水素１カリウム ０．２チ リン酸水素２カリウム ０．５チ 酵母エキス ０．２チ 硫酸マグネシウム ０．０５チ 硫酸第−鉄 ４ ｐｐｍ 硫酸マンガン ４ ｐｐｍ 水道水 分析方法 液体クロマトグラフによる定量。試料をＣＤＣを内部標
準とした修正内部標準法及び単純面積百分率法で定量し
た。
ウム ０．２％ リン酸水素１カリウム ０．２チ リン酸水素２カリウム ０．５チ 酵母エキス ０．２チ 硫酸マグネシウム ０．０５チ 硫酸第−鉄 ４ ｐｐｍ 硫酸マンガン ４ ｐｐｍ 水道水 分析方法 液体クロマトグラフによる定量。試料をＣＤＣを内部標
準とした修正内部標準法及び単純面積百分率法で定量し
た。
カ ラ ム ： ５ｈｏｄｅｘ ＯＰＳ
ｐａｋ Ｆ ４１１ポ ン プ；日本分光（株）製
ＢＩＰ−１型ディテクタ； ｇｈｏｄｅｘ −ＲＩ Ｓ
Ｅ −３１型移 動 相；７５：２５メタノール−水混
合液、リン酸０．０２モル／！ カラム温度；３０℃ 送 液； ｌ Ｍ／ｍｉＨ 試料量；２０μを 表 １ 実施例２ 反応温度を２４時間目から４１℃にしたほかは全て実施
例１と同様に行なった。結果は表２に示すとうシであっ
た。
ｐａｋ Ｆ ４１１ポ ン プ；日本分光（株）製
ＢＩＰ−１型ディテクタ； ｇｈｏｄｅｘ −ＲＩ Ｓ
Ｅ −３１型移 動 相；７５：２５メタノール−水混
合液、リン酸０．０２モル／！ カラム温度；３０℃ 送 液； ｌ Ｍ／ｍｉＨ 試料量；２０μを 表 １ 実施例２ 反応温度を２４時間目から４１℃にしたほかは全て実施
例１と同様に行なった。結果は表２に示すとうシであっ
た。
表 ２
実施例３
実施例１と同じ方法で培養した培養液１！をとシ、遠心
分離によシ集菌してコール酸４０．Ｆを含む１００ミリ
モル／！のホウ酸緩衝液ＩＪに菌体を懸濁し−を７．０
とした。その後実施例２と同じ方法で反応させた。結果
は表３に示すとうりであった。
分離によシ集菌してコール酸４０．Ｆを含む１００ミリ
モル／！のホウ酸緩衝液ＩＪに菌体を懸濁し−を７．０
とした。その後実施例２と同じ方法で反応させた。結果
は表３に示すとうりであった。
表 ３
実施例４
培養温度を３５℃にしたほかは全て実施例１と同様に行
なった。結果は表４に示すとうシであった。
なった。結果は表４に示すとうシであった。
表 ４
実施例５
培養温度を２７℃にしたほかは全て実施例１と同様に行
なった。結果は表５に示すとうシであった。
なった。結果は表５に示すとうシであった。
表 ５
実施例６
培養時−を７，０に保ったほかは全て実施例１と同様に
行なった。結果は表６に示すとうりであった。
行なった。結果は表６に示すとうりであった。
表 ６
実施例７
反応にコール酸４０Ｉを含む２００ミリモル／！の四ホ
ウ酸緩衝液（ｐＨ７，０）１７を用いたほかは、全て実
施例１と同様に行なった。結果は表７に示すとうシであ
った。
ウ酸緩衝液（ｐＨ７，０）１７を用いたほかは、全て実
施例１と同様に行なった。結果は表７に示すとうシであ
った。
表 ７
実施例８
反応にコール酸４０ｇを含む１モル／！のホウ酸緩衝液
（ｐＨ７，０）１７を用いたほかは全て実施例１と同様
に行なった。結果は表８に示すとうシであった。
（ｐＨ７，０）１７を用いたほかは全て実施例１と同様
に行なった。結果は表８に示すとうシであった。
実施例９
反応にコール酸４０．９を含む２００ミリモル／！のリ
ン酸緩衝液（ＰＩ−１７，０）ｌ＃を用いたほかは全て
実施例１と同様に行なった。結果は表９に示すとうシで
あった。
ン酸緩衝液（ＰＩ−１７，０）ｌ＃を用いたほかは全て
実施例１と同様に行なった。結果は表９に示すとうシで
あった。
実施例１０
反応にコール酸４０．９を含む２００ミリモル／！のト
リスヒドロキシメチルアミノメタン緩衝液（ｐＨ７，０
） 、Ｉ Ａを用いたほかは全て実施例１と同様に行な
った。結果は表１０に示すとうシであった。
リスヒドロキシメチルアミノメタン緩衝液（ｐＨ７，０
） 、Ｉ Ａを用いたほかは全て実施例１と同様に行な
った。結果は表１０に示すとうシであった。
表１０
実施例１１
反応時声を７．３に保ったほかは全て実施例１と同様に
行なった。結果は表１１に示すとうシであった。
行なった。結果は表１１に示すとうシであった。
表１１
実施例１２
反応時−を６．５に保ったほかは全て実施例１と同様に
行なった。結果は表１２に示すとうシであった。
行なった。結果は表１２に示すとうシであった。
表１２
実施例１３
反応温度を３２℃にしたほかは全て実施例１と同様に行
なった。結果は表１３に示すとうシであった。
なった。結果は表１３に示すとうシであった。
実施例１４
反応温度を４５℃にしたほかは全て実施例１と同様に行
なっな。結果は表１４に示すとうシでちった。
なっな。結果は表１４に示すとうシでちった。
表１４
実施例１５
反応にコール酸１００Ｉを含む２００ミリモル／！のホ
ウ酸緩衝液（ｐＨ７，０）を用い、反応時間を４８時間
まで延長したほかは、全て実施例１と同様に行なった。
ウ酸緩衝液（ｐＨ７，０）を用い、反応時間を４８時間
まで延長したほかは、全て実施例１と同様に行なった。
結果は表１５に示すとうシであった０
表１５
実施例１６
反応にコール酸３００．９を含む２００ミリモル／！の
ホウ酸緩衝液（ｐＨ７，０）を用い、反応時間を７２時
間まで延長したほかは全て実施例１と同様に行なった。
ホウ酸緩衝液（ｐＨ７，０）を用い、反応時間を７２時
間まで延長したほかは全て実施例１と同様に行なった。
結果は表１６に示すとうりであった。
表１６
比較例１
実施例１に示す培地に、ｍ廖２０１ｒＫｉ／ｄ）−１ｘ
Ａようにコール酸を加えて、−を７．０としてから滅菌
し、実施例１に示す方法で前培養した同−菌を同−量加
え、３５℃で２４時間培養した。培養冬時間の培地中の
コール酸及び１２−ケトコール酸の濃度は表１７のよう
であった。
Ａようにコール酸を加えて、−を７．０としてから滅菌
し、実施例１に示す方法で前培養した同−菌を同−量加
え、３５℃で２４時間培養した。培養冬時間の培地中の
コール酸及び１２−ケトコール酸の濃度は表１７のよう
であった。
Claims (5)
- （１）ミクロコッカス属に属し、コール酸及び／又はそ
の塩から、１２−ケト−３α，７α−ジヒドロキシコラ
ン酸及び／又はその塩を生成する能力を有する微生物を
栄養培地で培養し、その菌体又は菌体を含む培養液をコ
ール酸及び／又はその塩を含む緩衝液と混合して反応さ
せ、反応液中に１２−ケト−３α，７α−ジヒドロキシ
コラン酸及び／又はその塩を生成せしめ、これを採取す
ることを特徴とする１２−ケト−３α，７α−ジヒドロ
キシコラン酸及び／又はその塩の製造方法。 - （２）用いる微生物がミクロコッカスＳＤ−１０１また
はその変異株である特許請求の範囲第１項記載の製造方
法。 - （３）緩衝液がホウ酸、四ホウ酸及び／又はその塩であ
る特許請求の範囲第１項記載の製造方法。 - （４）培養温度が２２〜２７℃、培養時ｐＨがｐＨ５．
８〜６．２である特許請求の範囲第１項記載の製造方法
。 - （５）反応温度が３５〜４１℃、反応時ｐＨがｐＨ６．
７〜７．２である特許請求の範囲第１項記載の製造方法
。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12276985A JPS61282099A (ja) | 1985-06-07 | 1985-06-07 | １２−ケト−３α，７α−ジヒドロキシコラン酸の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12276985A JPS61282099A (ja) | 1985-06-07 | 1985-06-07 | １２−ケト−３α，７α−ジヒドロキシコラン酸の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61282099A true JPS61282099A (ja) | 1986-12-12 |
| JPH0151998B2 JPH0151998B2 (ja) | 1989-11-07 |
Family
ID=14844157
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP12276985A Granted JPS61282099A (ja) | 1985-06-07 | 1985-06-07 | １２−ケト−３α，７α−ジヒドロキシコラン酸の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61282099A (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP3082973B2 (ja) * | 1991-10-24 | 2000-09-04 | 三菱東京製薬株式会社 | ３α，７α−ジヒドロキシ−１２−ケト−５β−コラン酸の製造方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59120098A (ja) * | 1982-12-28 | 1984-07-11 | Showa Denko Kk | １２−ケト−３α，７α−ジヒドロキシコラン酸の製造法 |
-
1985
- 1985-06-07 JP JP12276985A patent/JPS61282099A/ja active Granted
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59120098A (ja) * | 1982-12-28 | 1984-07-11 | Showa Denko Kk | １２−ケト−３α，７α−ジヒドロキシコラン酸の製造法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0151998B2 (ja) | 1989-11-07 |
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