JPS61272202A - アフイニテイクロマトグラフイ用材料の製法 - Google Patents

アフイニテイクロマトグラフイ用材料の製法

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JPS61272202A JP61117684A JP11768486A JPS61272202A JP S61272202 A JPS61272202 A JP S61272202A JP 61117684 A JP61117684 A JP 61117684A JP 11768486 A JP11768486 A JP 11768486A JP S61272202 A JPS61272202 A JP S61272202A
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    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、硫酸化多糖類がアミノ基を有する担体物質に
結合されているアフイニティクはマドグラフィ用の材料
の製法に関する。
この材料は、硫酸化多糖類と相互に作用する物質の単離
および精製に使用することができる。
（発明の背景） 酵素の単離法については、アフィニティクロマトグラフ
イ技術によって、近年著しく改良されている。この方法
は、物質量の特異的相互作用を利用するものである。こ
の目的のために、物質は不溶性の担体（マ）　ＩＪソッ
クス上のリガントとして共有結合する。リガンドは単１
［れるべき物質と錯体の性格をそなえた相互作用を行な
い得るものでなければならない。リガンドは、それと特
異的に反応する物質のみを保持し、その他の物質を洗浄
除去する。この保持された目的物質は、未結合のリガン
ド溶液の使用または例えば塩濃度勾配溶液（ｓａｌｔ　
ｇｒａｄｉｅｎｔ）の使用により担体物質よシ溶出する
ことができる。
アフイニテイクロマトグラフィが成功するがどうかは、
単離されるべき物質とリガンドとの間に自然に起こる相
互作用がいかによくシミュレートされるかにかかつてい
る。このようにマトリックスの選択とリガンドの固定化
方法は重要である。マトリックスは親水性であシ、良好
な物理的および化学的安定性を有するべきである。相互
作用を妨げる立体の効果は、スペーサによって有利に影
響を受けることができる。マトリックスまたはスＲ−サ
のいずれも非特異的吸着作用を引き起すものであっては
ならない。
タンパク質単離のためには、単一のタンパク質またはい
くつかのタンパク質のみと相互作用を行なうリガンドを
使用することが最も好ましいことはもちろんである。吸
着剤の能力は、マトリックスへのリガンドの負荷が充分
に高いかどうかにかかつている。化学結合は、可能な限
シ均一かつ安定であるべきであシ、すなわちできるだけ
加水分解されにくいことが必要である。
アフイニテイクロマトグ２フイは、例えば血漿からのた
んばく質特にアンデスロンビン■の単離に使用すること
ができる。固定された硫酸化多糖類は、本発明の目的達
成のための親和性物質％に担体結合ヘパリンとして有効
であることが証明されている。しかし、ヘパリンおよび
他の硫酸化多糖類の固定化において、生物活性の低下を
伴なうリガンドの修飾が起こシ得ることは周知である。
本発明は、硫酸化多糖類を担体に共有結合させることに
よって高生物学的活性、高リガンド密度および高安定性
を有する材料を得ることよシなるアフイニテイクロマト
グ２フイのための材料を調製することをその目的とする
。
（従来の技術） 特にヘパリンを使用するアフイニテイクロマトグラフイ
は、硫酸化多糖類とともに、錯体を形成するタンパク質
の単離に利用される。
この目的のために、硫酸化多糖類は適当な担体に結合さ
れるが、この多糖類はムコ多糖類であることが多い。５
ｅｐｈａｒｏｓｅ■４Ｂ　（スウェーデン国　Ｐｈａｒ
ｍａｃｉａ社製、溶球形態のアガロースゲル）が担体マ
トリックスとして特に有効であることが証明されている
。
硫酸化多糖類と担体との共有結合は、主に、具化シアノ
ーケ゛ンによる担体物質即ち′硫酸化多糖類の活性化に
よって達成される（　Ｔｈｒｏｍｂ。
Ｒｅｓ、　５．４３９〜４５２　（１９７４）、西独国
公開公報第２．２４３，６８８号公報〕、シかしこの方
法は固有の問題点を有している。リガンドのアミノ基と
慣用の担体物質のヒドロキシ基との間に形成されるイソ
尿素結合は、求核性試薬に対しである程度不安定である
。このことは、リガンドの脱離は、溶ｉ便条件、特に声
上昇下において期待されるべきものであることを意味す
る。ｌ：　Ｅｎｚ７ｍｅＭｉｃｒｏ’ｂ、　Ｔｅｃｈｎ
Ｏｌ、　４．１６１〜１６３　（１９８１）に記載〕。
この問題点は、臭化シアノーゲンをオキシラン基含有の
活性剤によって置換することによって解決することがで
きる。エピクロロヒドリンＣ、Ｔ、　ｃｈｒｏｍａｔｏ
ｇｒ、　５１．４７９　（１９７０）に記載〕またｄ、
１．４−ブタンジオールビス（エポキシプロビル）エー
テル（、Ｔ、　Ｏｈｒｏｍａｔｏｇｒ、　Ｊ９，８７（
１９７４）　〕のような〕ビスーオキシラを使用するこ
とによって、オキシラン基をヒドロキシ基を含有するマ
トリックスへ誘導することが可能となる。誘導されたオ
キシラン基をアンモニアによジアミノ基に変換すること
ができる。カルポリイミド［Ａｎａｌ、Ｂｉｏｃｉｈｅ
ｍ、　１２６４１４〜４２１（１９８２））を使用して
、カルボキシル基を含有する硫酸化多糖類をこれらのア
ミノ基に結合させることができる。
得られたアミド結合は、高化学的安定性で特徴づけられ
る。この方法による問題点は、多数のカルボキシル基が
、カルボジイミドによる活性化中にＮ−アシル尿素誘導
体に変換される点にある。このことは、本方法が化学的
修飾の結果として硫酸化多糖類による多大の担体の負荷
を達成するにもかかわらず、アフイニテイクロマトグラ
フイにより単離される物質に対して比較的低い結合能力
しか得られないことを意味する。
しかし、アミノ基が誘導されている担体物質へ硫酸化多
糖類を結合させることは、還元的カップリングによる化
学的に明白な方法で行なうことができる。（Ａｎａｌｙ
ｔ、　Ｂｉｏｃｈｓｍ、　１２６，４１４〜４２１　（
１９８２））。この方法は、糖類の鎖の還元末端（アル
デヒド基）をポリマーのアミノ基に結合させシッフ塩基
を形成することを含む。Ｃ−Ｎ二重結合を安定化させる
ために、例えばシアノホウ化水素化ナトリウムを用いて
還元し第２アミノとする。この方法によって、アミノ基
が導入されている５ｅｐｈａｒｏｓｅ［Ｆ］４Ｂに例え
ばヘパリンを適当に負荷させることはできるが、他のポ
リマーに対してはそのままで直接応用することはできな
い。
広く使用されている５ｅｐｈａｒｏｓｅ［Ｆ］４Ｂの代
わシに、担体物質としてヒドロキシ基を含有する他のポ
リマー、例えばＦｒａｃｔｏｇｅｌ　　訝−６５（Ｆ）
　Ｃヒドロキシ基含有合成親水性ポリマー：　Ｊ、　Ｃ
ｂｒａｔｍ−ｔｏｇｒ、ぷユ、７４７〜７５４　（１９
８２）　）を使用することは原則として可能である。こ
のポリマーは、その化学的および物理的性質よＪ）％　
ｓθｐｈａｒｏｓｅ■４Ｂよシも工業的使用には適して
いることが多い。
しかし、アミノ基を導入した後に、　ＩＰｒｌＬｃｔｏ
ｇｅｌＲＨＷ−６ｓ　（Ｆ）を満足できる収率において
硫酸化多糖類の還元末端に結合するための方法は知られ
ていない。
本発明は、従来技術に伴う問題点を解決し、かつ高収率
において、適当に誘導された硫酸化多糖類をアミノ基が
導入されている担体物質に結合することを可能とする。
発明の要約 前記した方法において、硫酸化多糖類は、ジオール分解
酸化剤（ａｉｏｌ−ｃｌｅａｖｉｎｇｏｘｉｄｉｚｉｎ
ｇａｇｅｎｔ）　　により変成され、追加的アルデヒド
基がこうして多糖類上に生成される。この種の誘導体は
、高収率でアミノ基が導入されている担体に結合させる
ことができる。生成されたシック塩基は例えばシアノホ
ウ化水素ナトリウムのような還元剤によってアミノに還
元することができる。
このように、本発明は、担体に結合されている硫酸化多
糖類の調製方法に関する。その方法は、グリコールをア
ルデヒドに酸化する酸化剤を用いる炭素鎖の分解を伴う
硫酸化多糖類の処理およびこの変成された硫酸化多糖類
とアミノ基を有する担体との反応よシなる。
出発物質として、周知の硫酸化多糖類の１つ、好ましく
はヘパリンまたはそのナトリウム塩を使用することがで
きる。アルデヒド基は、ジオールと反応してアルデヒド
基を生成することが公知である酸化剤、好ましくは過ヨ
ウ素酸アルカリ金属による処理によって水性溶液中で生
成する。反応溶液は、塩基、好ましくは水酸化アルカリ
金属特に水酸化リチウムによって−５〜９、好ましくは
６〜８に維持される。ヘパリン１２当シ過ヨウ素酸アル
カリ金属５〜１ｏｏＩＩｑ１好ましくは過ヨウ素酸ナト
リウム３ｏ〜４ｏＩＩＩＦが％に好適であることが明ら
かにされている。反応時間は、１０分間〜５時間であり
、反応温度は０℃〜３０℃に維持される。酸化反応は、
１時間４℃において行なうのが好ましい。
ポリアルデヒド誘導硫酸化多糖類を結合するために、酸
化混合物をアミノ基が導入されている担体に直接加える
ことが可能である。アミノ基が導入されている担体は、
「Ａｎａｌｙｔ、阻ｏｃｈｅｍ、　Ｊ皇、４１４〜４２
１　（１９８２）に記載されている。
下記のものは、機能化のための担体物質として適当であ
る。
即ち、ヒドロキシ基を含有し、かつ適当な方法によって
アミノ基を導入し得る不溶性のポリマー、例えば炭水化
物を基本とするポリマーである。これらの中には、デキ
ストランおよびアカロース樹脂と共にメタクリル酸誘導
体ば７ｐエリトリツト、ポリエチレングリコールおよび
ジビニルベンゼンのコポリマーであってｔｒ’ｒａｃｔ
ｏｇｅｌ。
の商標名で市販されているものも含まれる。
アミノ基がこのようにして導入された担体は、ポリアル
デヒド−誘導多糖類との反応に付され好ましくは多糖類
３０〜４０Ｆに対して担体１０００−の割合で反応させ
られる。反応は、−６〜９好ましくは室温および水性緩
衝溶液、特にリン酸緩衝液においてｐＨ６〜７で行なわ
れる。
反応体を混合した後、シアノホウ化水素ナトリウムを追
加する。室温における反応は１〜３０日間行なう。好適
な反応時間は１２〜１６日間である。生成物を水洗し、
無水酢酸で処理することによってまだ遊離しているアミ
ノ基がアセチル化される。
適当な酸化剤を使用して、例えば糖のような隣接する炭
素原子上にヒドロキシ基を有するジオール（グリコール
）は、炭素−炭素結合の開裂によってアルデヒド基を生
成させる。驚くべきことであるが必要な「強」酸化剤の
作用は、硫酸化多糖類の生物学的活性を減少させること
がなく、前記した方法によりポリアルデヒドに誘導され
たヘパリンは、へ／Ｊ　リンとともに錯体を形成するタ
ン、Ｊり質とは高結合親和力および高活性を示す。この
生物学的活性は、担体に結合された誘導体にも保持され
る。結合の収率は。
担体上のアミノ基の数だけでなくリガンド中のアルデヒ
ド基の数にも左右されるので、リガンド中の多数のアル
デヒド基によって好適な結合反応が達成される。アミノ
基をほとんど有しない担体は、多数の反応性アルデヒド
基を必要とする。
吸着されるべきタンパク質に対する吸着剤の結合能力は
、リガンドの負荷に直接影響を受ける。
前記の方法により得られた親和性材料を用いて、タンパ
ク質の溶液よりこれらのタンパク質を硫酸化された多糖
類に結合したものとして吸着させ、適当である場合には
それらを脱着することが可能であるが、それは例えば血
漿からのａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｉｎ　１１の脱着であシ
得る。樹脂内のアミノ基数がヘパリンおよびポリアルデ
ヒド透導化ヘパリンに対する結合反応へ与える影響は、
好適に用いられる５ｅｐｈａｒＯθｅ［Ｆ］４Ｂおよび
ＦｒａｃｔｏｇｅｌｏＨＷ−６５（Ｆ’）のようなポリ
マーによって示されている。
本方法によってポリアルデヒド−誘導されたヘパリンが
アミノ−セファロース４Ｂに結合すれた場合に、ａｎｔ
ｉｔｈｒｏｍｂｉｎ　ｌ［に対する結合能力は、ヘパリ
ンおよびアミノ−８ｅｐｈａｒｏｓｅから周知の方法に
より調製された材料を用いた場合の２．５倍あることが
明らかとなっている。よシ少ない数のアミノ基を有する
担体例えばアミノ−Ｆｒａｃｔｏｇｅｌ　ＨＷ−６５Ｃ
Ｆ）を用いた場合の差異はなお著しＧものがある。追加
のアルデヒド基にょつて、結合能力は未変成の固定化さ
れたリガンドの２〜５倍まで増大する。
リガンド結合の化学的性質によって、誘導された（酸化
された）硫酸化された多糖類を使用して調製された吸着
剤により示されるリガンドの損失の傾向は極めて低い。
臭化シアノーゲンによる活性化により生成されたインク
レア結合を経て固定化されたリガンドと比較すると、比
較可能な条件下におけるリガンドの損失は、前記した方
法によって０．１〜１チまで減少することができる。
実施例　１ アミノ基の５ｅｐｈａｒｏθθ■４Ｂへの誘導水ｉ、５
００−および２Ｎの水酸化ナトリウム溶液６５０−を完
全に洗浄した５ｅｐｈａｒｏｓｅ■４Ｂ　ｉ、０００−
中へ加えた。この懸濁液を４０℃まで加熱し、エピクロ
ロヒドリン１５０ｓｔ／を加え、混合物を４゜℃におい
て２時間振盪した。生成物を水によって中性になるまで
洗浄し、アンモニア溶液（密度α９１　ｆ／ｌｄ　’）
　７５０ｙｄによって４０℃において９０分間処理した
。過剰の試薬を除去すべく、水洗し中和反応に付した。
ヘパリンのナトリウム塩の酸化 ヘパリン（約１６０工Ｕ／ｙ　）のナトリウム塩３０Ｆ
を水５００ｄ中に溶解し、水酸化リチウム溶液２０　ｆ
／ｆｌによってｐＨ７に調整した。溶液を４℃に冷却し
、過酸化す）　ＩＪウム１．２２を加えた。１時間酸化
を続け、水酸化リチウム溶液２０ｆ／ｆ！、を滴下する
ことによ＃）−を７に維持した。この溶液を、アミノ基
が導入されている担体に結合するのに直接用いた。
酸化ヘパリンのアミノ−８ｅｐｈａｒｏｅｅ　４Ｂへの
結合　　　　゛アミノ基が誘導されている５ｅｐｈａｒ
ｏｓｅ■４Ｂ１０００−をリン酸水素二ナトリウム緩衝
液０．２ｍｏｉｌ、／　Ｘ　１．０００　ｄ％−９中に
懸濁した。酸化へｌぐリン５ｏダとシアノホウ化水素ナ
トリウム１１．５２をこの懸濁液へ加えた。この混合物
を室温において１６日間攪拌し、固形物を除去し、完全
に水洗した。生成物を酢酸す）　ＩＪウム溶液０．２ｍ
ｏｌ、／１１．　ＯＯＯｍｌ中に懸濁し、４℃において
無水酢酸５００−を加えた。５０分後に水洗による中和
を行なった。
実施例　２ アミノ基のＦｒａｃｔｏｇｅｌ＠　ＨＷ−６５（Ｆ）　
ヘの導入水３２５−および５Ｎの水酸化ナトリウム溶液
２７５−をＦｒａＯｔＯｇｅｌ■ＦＩＮ−６５（Ｆ’）
　１，０００−へ加えた。エビクロロヒドリン２００−
をこの混合物中へ加え４５℃において２時間振盪した。
生成物を戸別し、数回水洗した。アミノ基の導入をアン
モニア溶液（密度０．９１　ｆ／ｒｎｔ　）　５００−
によって４５℃において９０分行なった。この樹脂を戸
別し、水洗して中和した。
醸化ヘパリンのアミ７基が導入されているＦ’ｒａｃｔ
ｏｇｅｌＯＨＷ−６５（Ｅｌ’）　ヘの結合アミノ−Ｆ
ｒａＱｔＯｇｅｌ　ＨＷ−６５（Ｆ）　１，０００ｍｌ
をリン酸ナトリウムＱ、　５　ｒｎｏｆｌ／１．緩衝液
５００−１聞６．５中で懸濁し、実施例１と同様に酸化
ヘパリン３０１を加えた。オルト−リン酸（８５ｏｒ／
１溶液）によってｐＨ６，５に維持した。水３０ｄ中に
溶解したシアノホウ化水素ナトリウム１１．５１をこの
懸濁液へ加えた。室温において１６日間攪拌し、固形物
を戸別し水洗した。生成物を酢酸す）　ＩＪウム溶液［
Ｌ２ｍｏｌ／！Ｌｉ００−中で懸濁し、無水酢酸５００
−を加えて、この混合物を４℃において３０分間攪拌し
た。固形物を吸引によって取υ出し、水洗した。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １）硫酸化多糖類を、炭素鎖の開裂によつてグリコール
    をアルデヒドに酸化する酸化剤によつて処理し、この変
    成された硫酸化多糖類をアミノ基を有するポリマーと反
    応させ、適当である場合には、この得られた物質を還元
    剤により処理することからなる担体に結合された硫酸化
    多糖類の製法。 ２）硫酸化多糖類がヘパリンである前記特許請求の範囲
    第（１）項記載の方法。 ３）酸化剤がアルカリ金属過ヨウ素酸塩である前記特許
    請求の範囲第（１）項記載の方法。 ４）アミノ基を有するポリマーが不溶性である前記特許
    請求の範囲第（１）項記載の方法。 ５）アミノ基を有するポリマーがアガロースである前記
    特許請求の範囲第（１）項記載の方法。 ６）アミノ基を有するポリマーが、アミノ基が導入され
    ているＦｒａｃｔｏｇｅｌ＾（＾Ｒ＾）である前記特許
    請求の範囲第（１）項記載の方法。 ７）水性溶液中のヘパリンを、ヘパリン１ｇあたり５〜
    １００ｍｇのアルカリ金属過ヨウ素酸塩によつて、ｐＨ
    ６〜８、温度０〜３０℃において１０分間から５時間処
    理し、その結果得られた生成物を、アミノ基を有するポ
    リマーと反応させ、そして必要な場合にはその結果得ら
    れた生成物をアルカリ金属ボロ水素化物により還元する
    前記特許請求の範囲第（１）項記載の方法。 ８）前記特許請求の範囲第（１）項記載の方法によつて
    調製される担体に結合された硫酸化多糖類。 ９）硫酸化多糖類に結合するタンパク質をこの多糖類に
    吸着させ、そして必要な場合にはそれより脱着させるこ
    とよりなる担体に結合されかつ前記特許請求の範囲第（
    １）項記載の方法によつて得られる硫酸化多糖類の使用
    。 １０）ａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｉｎIIIを多糖類上に吸着
    させ、そして必要な場合にはそれより脱着させることよ
    りなる担体に結合され、かつ前記特許請求の範囲第（１
    ）項記載の方法によつて得られる硫酸化多糖類の使用。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1992018537A1 (fr) * 1991-04-18 1992-10-29 Toray Industries, Inc. Composition a base d'interleukine 6 et procede de production

Families Citing this family (36)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4859581A (en) * 1986-03-10 1989-08-22 Board Of Regents, The University Of Texas System Endoglycosidase assay
DE3724726A1 (de) * 1987-07-25 1989-02-02 Behringwerke Ag Verfahren zur reinigung des plazentaren gewebeproteins pp4
SE464687B (sv) * 1987-11-10 1991-06-03 Biocarb Ab Foerfarande foer framstaellning av en gelprodukt
US5280016A (en) * 1991-03-29 1994-01-18 Glycomed Incorporated Non-anticoagulant heparin derivatives
US5250519A (en) * 1991-03-29 1993-10-05 Glycomed Incorporated Non-anticoagulant heparin derivatives
US5599352A (en) * 1992-03-19 1997-02-04 Medtronic, Inc. Method of making a drug eluting stent
US5571166A (en) * 1992-03-19 1996-11-05 Medtronic, Inc. Method of making an intraluminal stent
US5510077A (en) * 1992-03-19 1996-04-23 Dinh; Thomas Q. Method of making an intraluminal stent
US5591224A (en) * 1992-03-19 1997-01-07 Medtronic, Inc. Bioelastomeric stent
DK100592D0 (da) * 1992-08-10 1992-08-10 Mouritsen & Elsner Aps Metode til kemisk kobling paa faste faser
CN1130386A (zh) * 1993-08-19 1996-09-04 美国3M公司 肝素官能亲合性载体
US5532311A (en) * 1995-02-01 1996-07-02 Minnesota Mining And Manufacturing Company Process for modifying surfaces
US5583213A (en) * 1995-05-12 1996-12-10 Minnesota Mining And Manufacturing Company Process to activate sulfated polysaccharides
US5679659A (en) * 1995-08-22 1997-10-21 Medtronic, Inc. Method for making heparinized biomaterials
JPH105329A (ja) * 1996-06-21 1998-01-13 Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd 直接血液灌流に用いる吸着体用担体およびその小粒径化法
US6146771A (en) * 1997-07-01 2000-11-14 Terumo Cardiovascular Systems Corporation Process for modifying surfaces using the reaction product of a water-insoluble polymer and a polyalkylene imine
US6197289B1 (en) 1997-07-01 2001-03-06 Terumo Cardiovascular Systems Corporation Removal of biologically active agents
SE0000178D0 (sv) * 2000-01-21 2000-01-21 Pharmacia & Upjohn Ab Protein purification I
WO2001074420A1 (fr) * 2000-04-05 2001-10-11 Toray Industries, Inc. Adsorbants pour proteines de la famille hmg et colonne de purification de liquide organique
EP1582531A1 (en) * 2004-03-24 2005-10-05 Aventis Pharma S.A. Process for oxidizing unfractionated heparins and detecting presence or absence of glycoserine in heparin and heparin products
US20060154894A1 (en) * 2004-09-15 2006-07-13 Massachusetts Institute Of Technology Biologically active surfaces and methods of their use
EP1715344A1 (en) * 2005-04-22 2006-10-25 Universiteit Utrecht Holding B.V. Immobilisation of antigenic carbohydrates to support detection of pathogenic micro-organisms
AU2006316039B2 (en) * 2005-11-21 2011-08-18 Ge Healthcare Bio-Sciences Ab A method of chromatography using semi-synthetic heparin ligands
CA2630823C (en) 2005-12-13 2015-02-10 Exthera Ab Method for extracorporeal removal of a pathogenic microbe, an inflammatory cell or an inflammatory protein from blood
WO2008155683A1 (en) 2007-06-18 2008-12-24 Firmenich Sa Malodor counteracting compositions and method for their use
US8758286B2 (en) 2009-12-01 2014-06-24 Exthera Medical Corporation Method for removing cytokines from blood with surface immobilized polysaccharides
WO2012112724A1 (en) 2011-02-15 2012-08-23 Exthera Medical, Llc Device and method for removal of blood-borne pathogens, toxins and inflammatory cytokines
CN103517725A (zh) * 2011-03-04 2014-01-15 Dic株式会社 糖类固定化病毒去除用高分子基材、及病毒的去除方法
DK2861273T3 (da) 2012-06-13 2017-11-27 Exthera Medical Corp Anvendelse af heparin og kulhydrater til behandling af cancer.
WO2014209782A1 (en) 2013-06-24 2014-12-31 Exthera Medical Corporation Blood filtration system containing mannose coated substrate
CN105705177B (zh) 2013-11-08 2019-10-22 艾克塞拉医疗公司 使用吸附介质诊断感染性疾病的方法
DE15782250T1 (de) 2014-04-24 2017-08-10 Exthera Medical Corporation Verfahren zur Entfernung von Bakterien aus Blut unter Verwendung einer hohen Durchflussrate
CA2959975A1 (en) 2014-09-22 2016-03-31 Exthera Medical Corporation Wearable hemoperfusion device
WO2017151797A1 (en) 2016-03-02 2017-09-08 Exthera Medical Corporation Method for treating drug intoxication
US11911551B2 (en) 2016-03-02 2024-02-27 Exthera Medical Corporation Method for treating drug intoxication
JP2022534191A (ja) 2019-05-16 2022-07-28 エクスセラ メディカル コーポレイション 内皮糖衣構造を調節するための方法

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SE392038B (sv) * 1971-09-08 1977-03-14 Kabi Ab Forfarande for isolering av antitrombin ur blod eller blodprodukter
US4041233A (en) * 1976-03-15 1977-08-09 Nasa Aldehyde-containing urea-absorbing polysaccharides
FR2403098A1 (fr) * 1977-09-19 1979-04-13 Merieux Inst Nouveau materiau capable de fixer de facon reversible des macromolecules biologiques, sa preparation et son application
CA1171375A (en) * 1980-09-15 1984-07-24 Ulf P.F. Lindahl Oligosaccharides having selective anticoagulation activity
FR2527222A1 (fr) * 1982-05-19 1983-11-25 Christine Fougnot Procede de separation et de purification des proteases et des antiproteases de la coagulation sanguine, ainsi que du complexe protease/antiprotease
CA1221307A (en) * 1982-12-02 1987-05-05 Nobutaka Tani Adsorbent and process for preparing the same
US4600652A (en) * 1985-04-01 1986-07-15 Warner-Lambert Company Permanently bonded antithrombogenic polyurethane surface

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1992018537A1 (fr) * 1991-04-18 1992-10-29 Toray Industries, Inc. Composition a base d'interleukine 6 et procede de production

Also Published As

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ES8704267A1 (es) 1987-03-16
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DE3519011A1 (de) 1986-11-27
ATE69310T1 (de) 1991-11-15
DE3682325D1 (de) 1991-12-12
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