JPS61271987A - ウロキナ−ゼ前駆体の製造方法 - Google Patents
ウロキナ−ゼ前駆体の製造方法Info
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- JPS61271987A JPS61271987A JP60113938A JP11393885A JPS61271987A JP S61271987 A JPS61271987 A JP S61271987A JP 60113938 A JP60113938 A JP 60113938A JP 11393885 A JP11393885 A JP 11393885A JP S61271987 A JPS61271987 A JP S61271987A
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- Japan
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- culture
- carrier
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- cells
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、ウロキナーゼ前駆体（以下、前駆体という）
の製造方法に関する。更に詳しくは、本発明は、前駆体
産生性の線維芽細胞様細胞を培養して、前駆体を製造す
るに際して、培養用担体として繊維状担体を用いること
を特徴とする前駆体の製造方法に関する。
の製造方法に関する。更に詳しくは、本発明は、前駆体
産生性の線維芽細胞様細胞を培養して、前駆体を製造す
るに際して、培養用担体として繊維状担体を用いること
を特徴とする前駆体の製造方法に関する。
本発明の前駆体は、先に本発明の共同研究者等が見出し
たものであり、その詳細は特願昭５８−１７０３５４号
に記載されている。即ち、本前駆体はそのままでは不活
性であるが、プラスミン処理することにより酵素活性を
発現する、いわゆるチモゲンの一種である。この前駆体
はヒト腎細胞の無血清培地中において生成できることが
最近判明した６本前駆体はアミノ酸４１１個の鎖状構造
を有しており、分子量５万、フィブリンに特異的な親和
性を示し、従来のウロキナーゼとは全く異なる性質を有
する。また、合成基質法では活性が認められず、平板法
で活性を示す。
たものであり、その詳細は特願昭５８−１７０３５４号
に記載されている。即ち、本前駆体はそのままでは不活
性であるが、プラスミン処理することにより酵素活性を
発現する、いわゆるチモゲンの一種である。この前駆体
はヒト腎細胞の無血清培地中において生成できることが
最近判明した６本前駆体はアミノ酸４１１個の鎖状構造
を有しており、分子量５万、フィブリンに特異的な親和
性を示し、従来のウロキナーゼとは全く異なる性質を有
する。また、合成基質法では活性が認められず、平板法
で活性を示す。
この前駆体産生細胞は線維芽細胞様細胞であり、プラス
チックおよびガラスのような担体の表面上において増殖
する。このような細胞を増殖させるためには、通常、平
面状容器あるいはマイクロキャリアビーズに細胞を接着
させ、増殖を行う、平面状容器として、フラスコ、ロー
ラーボトル等を用いる場合は付着表面がせまく、ビーズ
を細胞の担体として用いた場合は、培地交換時に静置し
、ビーズを下にしずめて徐々に培地をぬかなければなら
ないため、培養操作上きわめて煩雑である。
チックおよびガラスのような担体の表面上において増殖
する。このような細胞を増殖させるためには、通常、平
面状容器あるいはマイクロキャリアビーズに細胞を接着
させ、増殖を行う、平面状容器として、フラスコ、ロー
ラーボトル等を用いる場合は付着表面がせまく、ビーズ
を細胞の担体として用いた場合は、培地交換時に静置し
、ビーズを下にしずめて徐々に培地をぬかなければなら
ないため、培養操作上きわめて煩雑である。
また、かかる担体を使用した場合の前駆体の産生量は高
いものとはいえず、前駆体産生量のより多い培養方法な
いし製造方法が切望される。
いものとはいえず、前駆体産生量のより多い培養方法な
いし製造方法が切望される。
本発明の目的は、前駆体産生性細胞の培養に際して、迅
速な培地交換を可能にした細胞培養方法による前駆体の
製造方法を提供することにある。
速な培地交換を可能にした細胞培養方法による前駆体の
製造方法を提供することにある。
本発明の他の目的は、前駆体の産生量の優れた、培養に
よる前駆体の製造方法を提供することにある。
よる前駆体の製造方法を提供することにある。
本発明者らは、上記目的を解決するために、前駆体産生
性細胞の培養用担体について鋭意検討した結果、担体と
して繊維状担体を用いることにより、細胞を固定し培地
との分離を容易にし、また、前駆体の産生を向上できる
ことを見出し、本発明を完成した。
性細胞の培養用担体について鋭意検討した結果、担体と
して繊維状担体を用いることにより、細胞を固定し培地
との分離を容易にし、また、前駆体の産生を向上できる
ことを見出し、本発明を完成した。
即ち、本発明は、ウロキナーゼ前駆体産生性の線維芽細
胞様細胞を培養して、ウロキナーゼ前駆体を製造するに
際して、培養用担体として繊維状担体を用いることを特
徴とするウロキナーゼ前駆体の製造方法に関する。
胞様細胞を培養して、ウロキナーゼ前駆体を製造するに
際して、培養用担体として繊維状担体を用いることを特
徴とするウロキナーゼ前駆体の製造方法に関する。
（１）前駆体産生性細胞の調製
前駆体産生性細胞の原料としては、従来既知のものを用
いればよいが、好適にはヒト腎細胞が用いられる。たと
えば、ヒト腎細胞より得たプライマリ−カルチャー（ｐ
ｒｉｍａｒｙ ｃｕｌｔｕｒｅ ）またはディプロイド
セル（ｄｉｐｌｏｉｄ ｃｅｌｌｓ ）を継代培養し
て得られる前駆体を産生ずる細胞が用いられる。この種
細胞を、例えば２０万〜３０万ｃａｌｌｓ／ｗＪ植え込
み、培地〔たとえば、ウェイマウス（Ｗａｙａｏｕｔｈ
）培地あるいはドゥルベコの変性ＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅ
ｃｃｏ’ｓ ５ｏｄｉ目ｅｄ ＭＥＭ ）培地に熱不活
化生胎児血清２〜５ ｗ ／ ｖ％を添加したもの〕で
２〜３日間培養を続けた後、必要ならば培地を新しく交
換して継代培養し、細胞数を１００万〜２００万ｃａｌ
１ｇ／−に調整する。
いればよいが、好適にはヒト腎細胞が用いられる。たと
えば、ヒト腎細胞より得たプライマリ−カルチャー（ｐ
ｒｉｍａｒｙ ｃｕｌｔｕｒｅ ）またはディプロイド
セル（ｄｉｐｌｏｉｄ ｃｅｌｌｓ ）を継代培養し
て得られる前駆体を産生ずる細胞が用いられる。この種
細胞を、例えば２０万〜３０万ｃａｌｌｓ／ｗＪ植え込
み、培地〔たとえば、ウェイマウス（Ｗａｙａｏｕｔｈ
）培地あるいはドゥルベコの変性ＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅ
ｃｃｏ’ｓ ５ｏｄｉ目ｅｄ ＭＥＭ ）培地に熱不活
化生胎児血清２〜５ ｗ ／ ｖ％を添加したもの〕で
２〜３日間培養を続けた後、必要ならば培地を新しく交
換して継代培養し、細胞数を１００万〜２００万ｃａｌ
１ｇ／−に調整する。
もちろん、前駆体を産生ずる遺伝子組換えによって得ら
れる線維芽細胞様細胞も使用しうる。
れる線維芽細胞様細胞も使用しうる。
（２）培養条件
基本培地としては、たとえば、ウェイマウス培地あるい
はドゥルベコの変性ＭＥＭ培地に０．０５〜０．２ ｗ
／ ｖ％ヒト血清アルブミンを添加した無血清培地が
用いられる。また、ラクトアルブミン氷解物、トランス
フェリン、インシュリン等のホルモンなどの公知添加物
を添加してもよい、培養は、上記培地中で行って前駆体
を産生させ、２〜３日毎に培養培地を新しく交換するこ
とが好ましい、そしてこの交換した培地中に存在する前
駆体を回収する。
はドゥルベコの変性ＭＥＭ培地に０．０５〜０．２ ｗ
／ ｖ％ヒト血清アルブミンを添加した無血清培地が
用いられる。また、ラクトアルブミン氷解物、トランス
フェリン、インシュリン等のホルモンなどの公知添加物
を添加してもよい、培養は、上記培地中で行って前駆体
を産生させ、２〜３日毎に培養培地を新しく交換するこ
とが好ましい、そしてこの交換した培地中に存在する前
駆体を回収する。
培地からの前駆体の回収は公知の手段を用いて行えばよ
く、たとえば当該培地を遠心分離、減圧濃縮、塩析分画
、ゲル濾過、濃縮、イオン交換クロマトグラフィー、ア
フィニティクロマトグラフィーを適宜組み合わせて処理
することによって行われる。
く、たとえば当該培地を遠心分離、減圧濃縮、塩析分画
、ゲル濾過、濃縮、イオン交換クロマトグラフィー、ア
フィニティクロマトグラフィーを適宜組み合わせて処理
することによって行われる。
（３）培養用担体
本発明において使用される培養用担体は繊維状担体であ
る。かかる担体の材質としては、前駆体産生性細胞が付
着可能なものであればよく、この分野で既知のものを使
用すればよい０例えばその表面がプラスに電荷されたも
のが使用される。プラスに電荷されたものとしては、ガ
ラス繊維、その表面がプラスに電荷処理（例えば、コラ
ーゲンによるコーティング処理など）されたダクロン、
テフロン、ナイロン、オルロンなどのプラスチック繊維
などが挙げられる。当該繊維状担体の直径は１０〜３０
０−程度が好ましく、長さは１０ｍｍ以上であることが
好ましい。
る。かかる担体の材質としては、前駆体産生性細胞が付
着可能なものであればよく、この分野で既知のものを使
用すればよい０例えばその表面がプラスに電荷されたも
のが使用される。プラスに電荷されたものとしては、ガ
ラス繊維、その表面がプラスに電荷処理（例えば、コラ
ーゲンによるコーティング処理など）されたダクロン、
テフロン、ナイロン、オルロンなどのプラスチック繊維
などが挙げられる。当該繊維状担体の直径は１０〜３０
０−程度が好ましく、長さは１０ｍｍ以上であることが
好ましい。
この繊維状担体は、通常、培地に対してｏ、ｏｏｔ〜０
．５ｇ／ｃ＋Ｊ、好ましくは０．Ｏ１〜０．２０ｇ／ｃ
＋ｊ程度の密度で培養器につめる。
．５ｇ／ｃ＋Ｊ、好ましくは０．Ｏ１〜０．２０ｇ／ｃ
＋ｊ程度の密度で培養器につめる。
（４〕培養用装置
本発明で使用される培養用装置としては、マイヤーフラ
スコ、スピンナーフラスコ、カラム等の形状のものが好
適に利用される。好適な具体例を第１．２．３図に示し
た。
スコ、スピンナーフラスコ、カラム等の形状のものが好
適に利用される。好適な具体例を第１．２．３図に示し
た。
第１図において、ｌは繊維状担体を、２は培地を、３は
マイヤーフラスコを示す、この場合、シェーカー等を用
いて振とう培養することが好ましい。
マイヤーフラスコを示す、この場合、シェーカー等を用
いて振とう培養することが好ましい。
第２図において、１は繊維状担体を、２は培地を、３は
スピンナーフラスコを、４はハネを示し、このＢ様にお
いてはスターラーを用いてハネ４を回転させることによ
って培地が攪拌される。
スピンナーフラスコを、４はハネを示し、このＢ様にお
いてはスターラーを用いてハネ４を回転させることによ
って培地が攪拌される。
第３図において、１は繊維状担体を、２は培地を、３は
カラムを、５はペリスタポンプを示す。
カラムを、５はペリスタポンプを示す。
この態様においては、連続培養が可能であり、掻めて効
率的である。この態様においてはべりスタポンプを用い
て培地の流量をカラムの容積が１〜５０回／時間交換す
ることが好ましい。
率的である。この態様においてはべりスタポンプを用い
て培地の流量をカラムの容積が１〜５０回／時間交換す
ることが好ましい。
本発明においては、担体として繊維状の担体を用いたの
で、当該担体を培地の下方に沈めることなく培地交換が
行えるので、培養操作が極めて簡便である。また、第３
図に示した如き連続培養装置が使用できるという効果も
有する。さらに、本発明においては細胞におよぼす物理
的シラツクが小さく、より生体に近い培養条件であると
ころから、本前駆体の産生は従来のビーズ状担体法に比
べて活性比で約２倍程度増強することができる。
で、当該担体を培地の下方に沈めることなく培地交換が
行えるので、培養操作が極めて簡便である。また、第３
図に示した如き連続培養装置が使用できるという効果も
有する。さらに、本発明においては細胞におよぼす物理
的シラツクが小さく、より生体に近い培養条件であると
ころから、本前駆体の産生は従来のビーズ状担体法に比
べて活性比で約２倍程度増強することができる。
実験例１
全量３００１ｍ７のスピンナーフラスコに６ｇのガラス
ウールを底より８０ｄの位置以下につめ、第２図のよう
に組み立てた。コントロール実験として、０．３６ｇの
サイトデンクスｌ （マイクロキャリアビーズ：ファル
°マシア社製）を同様のスピンナーフラスコに入れ、Ｏ
，ｌ Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，０＞に懸濁し、それぞ
れオートクレーブ滅菌する０次に培地を５％牛脂児血清
添加ウェイマウス培地で置換したのち、１０００１＋
１０’ ｃｅｌｌｓ／−の実施例１と同じ前駆体産生細
胞を６−ずつ加える。その後５分間ガラスウールを用い
たものは１５０ｒ、ｐ、ｍ、、サイトデエックスを用い
たものは２０ ｒ、ｐ、−、で撹拌し、４時間静置する
。細胞を担体に接着させたのち、培養量を１２０１にし
、２〜３日おきに前記５％牛脂児血清添加ウェイマウス
培地を用いて培地交換を行いながら培養する。細胞が増
殖し、ウロキナーゼ活性が安定すれば、牛胎児血清（Ｆ
ｅ２）の代わりにヒト血清アルブミン（Ｈ３Ａ）を０．
１％添加し、培養を続ける。培養液中に産生されるウロ
キナーゼ活性を経時的に測定し、両培養担体による効果
を比較検討した。結果は第４図に示すように、本発明の
方法による時、墳養開始後５０日目において、コントロ
ールに比して約２倍の産生量を示した。活性量の測定は
、ＰＭＣＡ法により以下のように行った。即ち、検体０
．１ ｔ（とプラスミン溶液（０，２ｃｕ／＋ａ／、ゼ
ラチン緩衝液（ｐＨ８，６） テＩＪＲ製したも（７）
）０．１＠ｌを混合後、３７℃で１０分間インキエベー
シッンし、ｐ−ＭＣＡ溶液（０，１ｍＭ Ｇｌｕ−Ｇ
ｌｙ−Ａｒｇ−ＭＣＡ）１−を加え、さらに３７℃で２
０分間インキエベーションし、１８ｖ／ｖ％酢酸を加え
て反応を止めた後、Ｅｘ（励起波長）３７０ｎ＋＊、Ｅ
ｍ （螢光波長）４６０ｎ−にて螢光強度を測定した。
ウールを底より８０ｄの位置以下につめ、第２図のよう
に組み立てた。コントロール実験として、０．３６ｇの
サイトデンクスｌ （マイクロキャリアビーズ：ファル
°マシア社製）を同様のスピンナーフラスコに入れ、Ｏ
，ｌ Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，０＞に懸濁し、それぞ
れオートクレーブ滅菌する０次に培地を５％牛脂児血清
添加ウェイマウス培地で置換したのち、１０００１＋
１０’ ｃｅｌｌｓ／−の実施例１と同じ前駆体産生細
胞を６−ずつ加える。その後５分間ガラスウールを用い
たものは１５０ｒ、ｐ、ｍ、、サイトデエックスを用い
たものは２０ ｒ、ｐ、−、で撹拌し、４時間静置する
。細胞を担体に接着させたのち、培養量を１２０１にし
、２〜３日おきに前記５％牛脂児血清添加ウェイマウス
培地を用いて培地交換を行いながら培養する。細胞が増
殖し、ウロキナーゼ活性が安定すれば、牛胎児血清（Ｆ
ｅ２）の代わりにヒト血清アルブミン（Ｈ３Ａ）を０．
１％添加し、培養を続ける。培養液中に産生されるウロ
キナーゼ活性を経時的に測定し、両培養担体による効果
を比較検討した。結果は第４図に示すように、本発明の
方法による時、墳養開始後５０日目において、コントロ
ールに比して約２倍の産生量を示した。活性量の測定は
、ＰＭＣＡ法により以下のように行った。即ち、検体０
．１ ｔ（とプラスミン溶液（０，２ｃｕ／＋ａ／、ゼ
ラチン緩衝液（ｐＨ８，６） テＩＪＲ製したも（７）
）０．１＠ｌを混合後、３７℃で１０分間インキエベー
シッンし、ｐ−ＭＣＡ溶液（０，１ｍＭ Ｇｌｕ−Ｇ
ｌｙ−Ａｒｇ−ＭＣＡ）１−を加え、さらに３７℃で２
０分間インキエベーションし、１８ｖ／ｖ％酢酸を加え
て反応を止めた後、Ｅｘ（励起波長）３７０ｎ＋＊、Ｅ
ｍ （螢光波長）４６０ｎ−にて螢光強度を測定した。
その結果は第４図に示す通りである。第４図中、○はガ
ラスウールを、・はビーズを示し、それぞれの平均活性
はガラスウール６７２１／ａ／、ビーズ３４９ Ｕ／−
である。
ラスウールを、・はビーズを示し、それぞれの平均活性
はガラスウール６７２１／ａ／、ビーズ３４９ Ｕ／−
である。
なお、単位はＩＪ／ａｔを用いた。Ｕはウロキナーゼ国
際単位であり、１ υ／ｄは検体ｌ−につきプラスミン
処理によって発現する線維素溶解活性が１ ｕに相当す
ることを意味する。
際単位であり、１ υ／ｄは検体ｌ−につきプラスミン
処理によって発現する線維素溶解活性が１ ｕに相当す
ることを意味する。
実施例１
全１２５０ｆｆｉ７のマイヤーフラスコに１．８ｇのガ
ラスウールを５０ｃｃ体積につめて第１図のように調製
した装置に注入し、再培養し、熱不活化牛胎児血清５−
／シ％含有ウェイマウス培地中で、３日間培養後、次い
で０．１ｗ／シ％ヒト血清アルブミン含有ウェイマウス
培地（無血清培地）に交換し、上記前駆体産生細胞をさ
らに３日間培養した。培養液を細胞の培養した培養担体
と分離し、培養担体には新しい培地を添加して培養を続
けた０分取した培養液中には前駆体（活性は１ｍ１当た
り１５ｏＯＵに相当）が含まれていた。
ラスウールを５０ｃｃ体積につめて第１図のように調製
した装置に注入し、再培養し、熱不活化牛胎児血清５−
／シ％含有ウェイマウス培地中で、３日間培養後、次い
で０．１ｗ／シ％ヒト血清アルブミン含有ウェイマウス
培地（無血清培地）に交換し、上記前駆体産生細胞をさ
らに３日間培養した。培養液を細胞の培養した培養担体
と分離し、培養担体には新しい培地を添加して培養を続
けた０分取した培養液中には前駆体（活性は１ｍ１当た
り１５ｏＯＵに相当）が含まれていた。
実施例２
実施例１により得られた前駆体を含む培養上清をｐＨ１
５，５に調整した後、ＣＭ−セファデツクスＣ−５０に
接触した。 ０．１６Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ５，５）で
吸着されている前駆体を溶出させた。一方、前駆体で予
め免疫しておいたマウスＢ Ａ Ｌ Ｂ／Ｃの肺臓細胞
とマウスミエローマ細胞をポリエチレングリコールによ
り融合させたハイブリドーマのうち、前駆体に対する抗
体産生の高いクローンを選択した。この融合細胞の培養
液から、前駆体モノクローナル抗体を回収した。このモ
ノクローナル抗体をＣＮ−Ｂ ｒ活性化セファロース４
Ｂ（ファルマシア社製）に固定した。
５，５に調整した後、ＣＭ−セファデツクスＣ−５０に
接触した。 ０．１６Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ５，５）で
吸着されている前駆体を溶出させた。一方、前駆体で予
め免疫しておいたマウスＢ Ａ Ｌ Ｂ／Ｃの肺臓細胞
とマウスミエローマ細胞をポリエチレングリコールによ
り融合させたハイブリドーマのうち、前駆体に対する抗
体産生の高いクローンを選択した。この融合細胞の培養
液から、前駆体モノクローナル抗体を回収した。このモ
ノクローナル抗体をＣＮ−Ｂ ｒ活性化セファロース４
Ｂ（ファルマシア社製）に固定した。
このモノクローナル抗体カラムを０．４ＭＮａＣ１含宵
０． Ｉ Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，０）で平衡化し、
これに前記の前駆体を含有する溶出液を接触した。
０． Ｉ Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，０）で平衡化し、
これに前記の前駆体を含有する溶出液を接触した。
０．４Ｍ ＮａＣ！含有リン酸緩衝液（ｐＨ７，０）
テカラムを洗浄した後、吸着していた当該前駆体を０．
５Ｍ ＮａＣｊ含有０．２Ｍグリシン−ＨＣｌ水溶液
（ｐＨ２，５）で溶出させた。溶出液を除菌濾過した後
、凍結乾燥し、比活性が少なくとも１０ＳＵ／ｍｇの高
度精製前駆体を得た。なお、この精製品は５ＤＳ−ポリ
アクリルアミドゲル電°気泳動法により分子量５万の１
本の帯を示した。
テカラムを洗浄した後、吸着していた当該前駆体を０．
５Ｍ ＮａＣｊ含有０．２Ｍグリシン−ＨＣｌ水溶液
（ｐＨ２，５）で溶出させた。溶出液を除菌濾過した後
、凍結乾燥し、比活性が少なくとも１０ＳＵ／ｍｇの高
度精製前駆体を得た。なお、この精製品は５ＤＳ−ポリ
アクリルアミドゲル電°気泳動法により分子量５万の１
本の帯を示した。
第１図は本発明を実施するためのマイヤーフラスコであ
る。 ｌ：繊維状担体 ２：培地 ３：マイヤーフラスコ 第２図は本発明を実施するためのスピンナーフラスコで
ある。 ｌ：繊維状担体 ２：培地 ３：スピンナーフラスコ ４：ハネ 第３図は本発明を実施するためのカラム型装置である。 第４図は、本発明の効果を示すグラフである。 第３図 第４図 ４養日（技。 手 続 争甫 正 書帽発） 昭和６０年８月１日
る。 ｌ：繊維状担体 ２：培地 ３：マイヤーフラスコ 第２図は本発明を実施するためのスピンナーフラスコで
ある。 ｌ：繊維状担体 ２：培地 ３：スピンナーフラスコ ４：ハネ 第３図は本発明を実施するためのカラム型装置である。 第４図は、本発明の効果を示すグラフである。 第３図 第４図 ４養日（技。 手 続 争甫 正 書帽発） 昭和６０年８月１日
Claims (2)
- （１）ウロキナーゼ前駆体産生性の線維芽細胞様細胞を
培養して、ウロキナーゼ前駆体を製造するに際して、培
養用担体として繊維状担体を用いることを特徴とするウ
ロキナーゼ前駆体の製造方法。 - （２）繊維状担体の長さが、少なくとも１０ｍｍ以上で
ある特許請求の範囲第（１）項記載のウロキナーゼ前駆
体の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60113938A JPS61271987A (ja) | 1985-05-27 | 1985-05-27 | ウロキナ−ゼ前駆体の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60113938A JPS61271987A (ja) | 1985-05-27 | 1985-05-27 | ウロキナ−ゼ前駆体の製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61271987A true JPS61271987A (ja) | 1986-12-02 |
Family
ID=14624963
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60113938A Pending JPS61271987A (ja) | 1985-05-27 | 1985-05-27 | ウロキナ−ゼ前駆体の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61271987A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6420082A (en) * | 1986-12-27 | 1989-01-24 | Chiyoda Chem Eng Construct Co | Animal cell culture and device therefor |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5921388A (ja) * | 1982-07-29 | 1984-02-03 | Japan Synthetic Rubber Co Ltd | 細胞培養方法 |
| JPS6024183A (ja) * | 1983-04-22 | 1985-02-06 | ストル・リサ−チ・アンド・デベロプメント・コ−ポレ−シヨン | 細胞培養方法 |
| JPS6062981A (ja) * | 1983-09-13 | 1985-04-11 | Green Cross Corp:The | 線維素溶解酵素 |
-
1985
- 1985-05-27 JP JP60113938A patent/JPS61271987A/ja active Pending
Patent Citations (3)
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| JPS6420082A (en) * | 1986-12-27 | 1989-01-24 | Chiyoda Chem Eng Construct Co | Animal cell culture and device therefor |
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