JPS61246200A - 腸内ウイルスに対するワクチン接種に有用なペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は腸内ウィルス、特にポリオウィルスに起因する
病気に対するワクチンで主に使用するための、生物学的
活性を有するペプチドに係る。 ポリオウィルスは特定免疫血清との中和反応に基づいて
３つの血清型に分類される。しかしながらそのウィルス
学的特性及び臨床的効果は互に類似しており、これら３
種類の血清型の核酸及びアミノ酸配列はいずれも酷似し
ている（スタンウェイ（Ｓｔａｎｗａｙ）他、核酸リサ
ーチ誌（Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ会基８１．　１５
３９〜１５４３．　１９８４年）。 ３型ポリオウイルスの中和に係る単一の主要抗原部位の
位置は既に判明している（マイナー（Ｍｉｎｏｒ）他、
ネーチャー（ＮａｔＬＩｒｅ）誌３０１．　６７４〜６
７９　、１９８３年：エバンス（Ｅｖａｎｓ）他、ネー
チャー誌３０４．　４５９〜４６２　、１９８３年）。 英国特許出願ＧＢ−八第へ、１２８，６２１号で我々は
腸内ウィルスに起因する病気に対するワクチン接種又は
その病気の診断に有用な合成ポリペプチドを開示した。 このポリペプチドは３型ポリオウイルス丈ビン（Ｓａｂ
ｉｎ）株の構造カプシドタンパク質ＶＰ１をコードする
ＲＮＡ配列におけるコドン９３〜９８によってコードさ
れるか、又は別の腸内ウィルスの等価コドンによってコ
ードされる抗原的に有効なヘキサペプチドからなる。こ
の場合のコドンの番号は■Ｐ１カプシドタンパク質をコ
ードするヌクレオチド配列の５′末端から数えたもので
ある。 これに対し、１型ポリオウイルスの中和には複数の別個
の抗原部位が係ることが示唆された（エミ＝（ｒ＋ｎ１
ｎｉ）他、ウィルス半語（Ｊ、　Ｖｉｒｏｌ、）　４６
゜４６６〜４７４　、１９８３年）。緊密な関係をもつ
これらウィルス間にこのような差が確かに存在するとす
レバ、ウィルスヘブチド配列をワクチンとして使用し得
るというこれまでの予測に問題が生じることになる。 我々は、腸内ウィルスの構造カプシドタンパクｍｖｐｉ
をコードするゲノム領域内のＲＮＡ配列によりコードさ
れる第２の抗原的に有意義なペプチドを発見するに１つ
だ。 以上の理由から本発明は、３型ポリオウイルスサビン株
の構造カプシドタンパク質ＶＰ１をコードするＲＮＡ配
列におけるコドン２８６〜２８８、好ましくはコドン２
８６〜２９０によってコードされる内ウィルスに起因す
る病気に対するワクチン接種又は診断に使用するのに適
した合成ペプチドを提供する。 従って本発明のペプチドは、前述の如くコードされる抗
、原的に有効なペプチド単位からなる。本発明のペプチ
ドは、■Ｐ１カプシドタンパク質自体のように、腸内ウ
ィルスの破壊後に適切な純粋形状で回収されてきた自然
発生的ペプチドではない。本発明のペプチドの製造には
むしろ人の手が介在してきた。詳細には、本発明のペプ
チドは単アミノ酸又は六＃小さめの予形成ペプチドから
化学的合成によって製造し得、又はこれらペプチドを回
収可能な形態にする生体を産生すべく遺伝子工学的方法
を用いて製造し得る。 「等価コドン」とは３型ポリオウイルスサビン株の構造
カプシドタンパク質ＶＰ１をコードするＲＮＡ配列内の
コドン配列２８６〜２８８又は２８６〜２９０に相当す
る、別の腸内ウィルスの構造カプシドタンパク質ｖＰ１
をコードするＲＮＡ配列内の〜２８８又は２８６〜２９
０の同等物として用いられる、これら同等コドンは、別
の腸内ウィルスのＲＮΔ配列においてＶＰ１タンパク質
をコードすΦ る塩基配列を、３型ボリウィルスサピン株の対応塩基配
列と共に並べてみれば容易に検知できる。 別の腸内ウィルスにおけるこれら等価コドンも２８８〜
２８８又は２８６〜２９０であってよいが、必ずしもそ
うである必要はない。減毒丈ビン株の有毒性原種たる３
型ポリオウイルスレオン（Ｌｅｏｎ）株では、前記等価
コドンは２８６〜２８８又は２８６〜２９０である。２
型ポリオウイルスサビン株でも等価コドンは２８６〜２
８８又は２８６〜２９０である。但し、１型ポリオウイ
ルスサビン株では場合によって４つの等価コドン２８７
〜２９０、又は６つの等価コドン２８７〜２９２が存在
する。従って３ｖ４類のポリオウィルスのサビン株に対
する塩基配列を比較すると次のようになる（トヨタ（Ｔ
ｏｙｏｄａ）他、分子生物学部（Ｊ、　）ｌｏｌ、　Ｂ
ｉｏｌ、）　１７４．５６１〜５８５　、１９８４年）
。 ３型　サビン：コドン２８６２８７　　２８８２８９２
９０ＡＧＧ　　ＡＡＣＡＡＣＤＵＧ　　ＧＡＣ２型　サ
ビン：コドン２８６２８７２８８　　２８９２９０ＡＡ
Ａ　ＧＡＵ　ＧＧＧ　　　ＣＵＣＡＣＧ１型　サビン：
コドン２８７２８８２８９２９０２９１２９２ＡＡＧ　
ＧＡＵ　ＧＧＵ　ＡＣＧ　ＣＵＤ　ＡＣＡ現存する腸内
ウィル°ス（野生型又は突然変異型）によりコードされ
る任意の特定「天然」ペプチド配列の「抗原等価物」は
、それ自体免疫原性でなくても、これを免疫原性にする
ような物質と結合づ゛ると「天然」ペプチドと同じ又は
極めて類似した抗体反応を誘発し得るようなペプチドで
ある・内ウィルスを中和し、従って抗原性は実質的に等
価である。 「天然」ペプチドの抗原等価物は長さは同じであるが、
野生型又は公知の突然変異型の腸内ライぐ」・ ルスによりコードされるのではなく、抗原性に影響しな
い配列内のアミノ酸に対して１つ以上の変化を含むよう
なペプチドであり得る。例えば、酸水性、大きさ及び構
造を保持し、従って免疫学的構造も保持する１つ以上の
別のアミノ酸で夫々置換したものであってもよい。−例
として、ＳｅｒによるＴｈｒの置換及びその逆の置換、
ＱｌｕによるＡＳｎの置換及びその逆、Ｑ’Ｉｎによる
ＡＳｎのＩｎ及中− びそ逆などが可能である。 抗原等価物は「天然」ペプチド配列を含みｌ長さはより
長いが等価の抗原性を依然として示すようなペプチドで
あってもよい。前記「天然」ペプチド配列は従って、適
切な免疫反応を誘発し得るようにこのより長いペプチド
中で露出されるのであり、このより長いペプチドの内部
に「埋もれ」てそのためにそれ自体が免疫反応を誘発し
得なくなるのではない。 抗原等価物はその伯に、「天然」配列内の反応基の修飾
、又はＮ末端アミノ基及び／又はＣ末端容し得るキ無機
及び有縁囁及び塩基を用いて形成される塩を含み得る。 他の等価物はエステルもしくはアミドを生成すべく修飾
したカルボキシル基、又はＮ−ｔ−ブトキシカルボニル
の如き典型的アミノ酸保護基を含み得る。この種の好ま
しい修飾はｉｎ　ｖｉｖｏで酵素分解し難い、より安定
した活性ペプチドを産生せしめるような修飾である。 ぜで本発明の抗原等価ペプチドを得ることもできる。例
えば、成る「天然」配列の１つ以上のアミノ酸を変える
ことによってこの「天然」配列から誘導したペプチド配
列をより長いペプチドに組込んでもよい。 以下、特定例としてポリオウィルスについて本発明を説
明するが、本発明の概念は他の腸内ウィルス、即ち例え
ばＥＣｔｌＯ（Ｅｎｔｅｒｉｃ　ＣｙｔｏｐＱ士ｈｉｃ
　Ｈｕｍ−ａｎ：　Ｏｒ　ｐｈ　ａ　ｎ−腸内細胞毒性
ヒトオーファン）及びコックスサラキー（Ｃｏｘｓａｃ
ｋｉｅ）　Ｂ型１クィルスの如き腸内に見られるウィル
スにも適用できる。慣例に従い、本明細書で使用する塩
基は次の記号で表わす。 Ａ＝アデニン Ｇ＝ニブアニ ン＝シトシン Ｕ＝ウラシル 同様に、アミノ酸については慣例に従い次の記号を使用
する： アラニン　　　　−Ａｌａ アルギニン　　　・・Ａｒ１Ｊ アスパラギン　　−ＡＳｎ アスパラギン酸　・・ＡＳＤ システィン　　　−Ｃｙｓ グルタミン　　　・・Ｑｌｎ グルタミン酸　　＝　Ｇ　Ｉｕ グリシン　　　　＝＝ＧＩＶ ヒスチジン　　　−Ｈｉｓ イソロイシン　　＝Ｉｌｅ ロイシン　　　　＝　ｌ　ｅｕ リジン　　　　　＝Ｌｙｓ メヂオニン　　　＝−１ｙｌｅｔ フェニルアラニン＝Ｐｈｅ プロリン　　　　−Ｐｒ。 セリン　　　　　−Ｓｅｒ スレオニン　　　＝Ｔｈｒ トリプトファン　＝　Ｔ　ｒｐ チロシン　　　　＝Ｔｖｒ バリン　　　　＝Ｖａｌ これらのアミノ酸への言及は総てＤ−及びＬ−配置の双
方に係るものとする。但し本発明では、これらアミノ酸
は天然の配置、即ちし一装置をとる方が好ましい。 ３型ポリオウイルスサビン株のＶＰｌカプシドタンパク
質をコードするヌクレオチド配列が実際に添刊図面に示
す姐くコドンＧＧＵ　　Ａｔ１Ｊ・・・・・・で始まる
のか、又は該図面中の第１２番目の〕トンＧＧＣ・・・
・・・で始まるのかは未だ確実には究明されていない。 しかしながら本明細書では３型ポリオウイルスサビン株
のＶＰ１１カプシドタンパク質のヌクレオチド配列に対
するコドンを添付図面の第１コドンＴｆＪわちＧＧＵか
ら数えることにする。 その結果ナビン３型ポリオウィルスの一トン２８６〜２
８８によりコードされる適切なＲＮΔ配列及び対応トリ
ペプチドは次のように示される。 ＡＧＧ　ＡＡＣＡＡＣ ＾ｒｇ−ＡＳｎ−ＡＳｎ 表１は３型ポリオウイルスのレオン株及び突然変異株と
、２型ボリオウイルスサピン株と、１型ポリオウィルス
のサビン株及びマホニー（Ｈａｈｏｎｅｙ）株とのコド
ン及びアミノ酸残基を３型ポリオウイルスサビン株のコ
ドン２８６〜２９０と比較して示している。 ３型ポリオウイルスに起因する病気に対するワクチン接
種又は診断に使用するのに適した本発明の好ましいペプ
チドは、次式（Ｉ＞ Ａ　　−Ａ１−Ａ２ Ｑ　　　　　　　　　　　　　　　　　（Ｉ）で示され
るトリペプチド、又は次式（ＩＩ）Ａｏ−Ａ１−Ａ２−
Ｌｅｕ−Ａ３　　　（ＩＩ）で示されるペンタペプチド
、又はその抗原等価物である。式中、（ｉ）　Ａ　ｏｌ
、ｔＡ　ｒｇ、Ａ１及びＡ２は夫々島曇奪Ａｓｎもしく
はＧｌｎ、Ａ３はＡＳＯもしくはＧｌｕを表わし、又は
（ｉｉ）　　　　　　　　　゛・　　　　−一　　　　
　　八。がしｙｓを表わすか、又はＡ１もしくはＡ２が
ＡｓｐもしくはＧｌｔＬであり、それ以外のＡ。−Ａ３
が（ｉ）の定義に従う。好ましくはＡ１及びＡ２の双方
がＡＳｎであり、Ａ３がＡｓｐである。より好ましくは
ＡＱがＡｒｇである。 ２型ポリオウイルスに起因する病気に対するワクチン接
種又は診断で使用づ゛るのに適した好ましいペプチドは
、ＡｏがＬｙｓであり、Ａ１がＡＳＩ）もしくはＧｌｕ
、Ａ２がＧＩＶ、Ａ３がＴｈｒもしくはＳｅｒである場
合の式（Ｉ）のトリペプチド或いは式（ＩＩ）のペンタ
ペプチド、又はその抗原等価物である。より好ましくは
Ａ　がＡＳｆ）であり、Ａ３がＴｈｒである。 １型ポリオウイルスに起因する病気に対するワクチン接
種又は診断で使用するのに適した好ましいペプチドは次
式（ＩＩＩ） Ｌ’／Ｓ　　Ａ４　　ＧＩＶ−−Ａ５　　　　　　　　
　（Ｉ［［）で示されるテトラペプチド、或いは次式（
ＴＶ）Ｌｙｓ　　Ａ４　　ＧＩＶ−Ａ５　　　Ｌｅｕ　
　Ａ６　　　　（ＩＶ）で示されるヘギサベブチド、又
はその抗原等価物である。式中、Ａ４はＡｓｐ又はＧｌ
ｕ、Ａ５及びＡ６は夫々別個にＳｅｒ又は７ｈｒである
。より好ましくはＡ４がＡｓｐ、Ａ５及び八〇が双方共
Ｔ　ｈｒテある。 本発明は更に、２型又は３型ポリオウイルスの場合には
ベースのトリペプチド又はペンタペプチドより長いペプ
チドも含み、１型ポリオウイルスの場合にはベースのテ
トラペプチド又はヘギサベブチドより長いペプチドも含
む。ｔＳ−別のアミノ酸及び／又はペプチド（２ベース
のペプチド鎖の一端又は両端に結合すること力゛できる
。好ましくは１．２．３又は４個のアミノ酸残塁をベー
スのペプチドのＣ末端に付加し、及び／又は１．２．３
又ｔ；Ｉ：　４　囮のアミノ酸残基をベースのペプチド
のＮ末ｇ′５に付加してもよい。これらの付加アミノ酸
は「天然」配列におけるアミノ酸に相当するのが好まし
い。例えば本発明のより長いペプチドは３型ポリオウイ
ルスサビン株のＶＰｌカプシドタンパク質をコードする
ＲＮΔ配列のコドン２８２〜２９２、又は別のポリオウ
ィルス、例えば１型もしくは２型ポリオウイルスサビン
株の等価コドンに対応し得る。サビン株に係るこの種の
ペプチドは次の通りである。 （１型）　Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−
Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｌ
ｅｕ （２型）　Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−
Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ （３型）　Ｇｌｙ−Ｖａｌ−＾５ｐ−Ｔｙｒ−Ａｒｉｌ
−ＡＳｎ−ＡＳｎ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ これらのより長いポリペプチドは一端又は両端がＣｖｓ
残基で終ってよい。変形例として、ベースのペプチド鎖
自体又はこの鎖を含むより長いペプチドを−・端又は両
端でタンパク質及び／又はその他のキャリヤに結合して
もよい。 例えば、「天然」ペプチド又はその抗原等価物のベース
の３又は４アミノ酸配列をより長いペプチドに含ませる
場合には、ベースのペプチドに付ノ酸に相当するのが好
ましい。３型サビンポリオウイルスでは、ベースのトリ
ペプチドに付加し得る第１Ｎ末端アミノ酸は”ｒｙｒ（
添付図面から明らかなようにｔＪＡＵによってコードさ
れる）である。 この場合に付加し得る第１０末端アミノ酸はしｅｕ（Ｕ
ＵＧでコードされる）である。この場合の更−別の適切
なアミノ酸は添付図面から決定し得る。 より大きい化合物ではベースのペプチド配列が適切な免
疫反応を容易に誘発し得るように、そして特にこのペプ
チド配列が当該分子中に「埋もれ」ないように配置され
る。従って、例えばベースの共消□、結合によって互に
結合してもよい。本発明のペプチド配列に適切なアミノ
酸が含まれていない場合には、この目的でいずれかの末
端に別の酸、特にＣｙＳを付加し得る。Ｃｙｓはジスル
フィド結合の形成を通して共不１結合を可能にする。 変形例として、鎖の各末端で互に結合し得る基を含ませ
ることによって、より長いペプチドをループ状に形成す
ることもできる。ループは勿論、成し得る。より長いペ
プチドは種々のタイプのポリオウィルスに関する配列を
含んでもよい。このようなペプチドは２種又は３種総て
のポリオウィルスに対するワクチンとして、又はその診
断において有用である。 本発明のペプチドは英国特許出願ＧＢ−Δ第２、１２８
，６２１号に記載のポリペプチドの配列に結合されたベ
ースのペプチド配列を含み得る。前記ＧＢ−Ａ第２，１
２８，６２１号のポリペプチドは３型ポリオウイルスサ
ビン株の構造カプシドタンパク質ＶＰ１をコードするＲ
ＮＡ配列のコドン９３・−９８によりコードされるか或
いは別の島内ウィルスの等価コドンによりコードされる
ヘキサペプチド、又はこの種のへキサペプチドの抗原等
価物である。 互に結合される本発明のベースのペプチド配列と前記Ｇ
Ｂ−Ａ第２．１２８．６２１号のポリペプチドとは、る 同一・タイプの腸内ウィルスに１著のであることが好ま
しくは、更には同−株に係るものであることが好ましい
。 ３型ポリオウイルスに対するワクチンとして、又はその
診断において有用な前記ＧＢ−Ａ第２．１２８，６２１
号の好ましいヘキサペプチドは次式％式％［） 式中（Ａ）Ａｌｔ）はＧｌｕ、Ａ１１はＧｌｎ、Ａ１２
はｐｒｏ、Ａ１３はＴｈｒ、　Ａ１４はＴｈｒ１Ａ１５
はＡｒ（ｌであるか、又は （Ｂ）　Ａ　１０”　Ａ　１５の残りＦ！（Ａ）の定義
に従うものとして、（ａ）Ａ１０がＧｌｙ、　（ｂ）　
Ａ、３がｌ　１ｅＳ３ｅｒ、ＡｌａもしくはＡ　ｓｎ、
　（ｃ）Ａ１４がＡＳｒｌ、３ｅｒもしくｔよ　（ｌｅ
、　　（ｄ）Ａ１５がＱｌｎ、ＴｒＤもしくはＧｌｙ、
又は（ｅ）Ａ１３がｌｌｅでありＩ且つＡ１４がＡ３ｎ
もしくはＡｌａである。 従ってこのヘキサペプチドは、面出の式（Ｉ）で示され
る好ましい３型ポリオウイルストリペプチドに結合し得
る。 ２型ポリオウイルスのワクチンとして、又はその診断に
おいて有用な前記Ｇ　８−Ａ第２．１２８．６２１号の
好ましいヘキサペプチドは、Ａ１０がＡｓｐ、Ａ１１が
Ａ　Ｉ　ａ　、　Ａ　１２がＰｒｏ、Ａ１３がＴｈｒ、
Ａ１４がＬ　ｙＳ、　Ａ　１ｓがＡｒｇの場合の式（１
）で示される。 従ってこのへキサペプチドは前記式（１）で示される好
ましい２型ポリオウイルストリペプチドに結合し得る。 １型ポリオウイルスのワクチンとして、又はその診断に
おいて有用な前記ＧＢ−八第へ、　１２８．６２１号の
好ましいヘキサペプチドは、Ａ１１がＡ　ｌａ。 Ａ１２がＳ　ｓｒ、　Ａ　１３がＴｈｒ、Ａ１５がＡＳ
ｎであり、且つ（Δ）Ａｌｏが５ｅｒ１Ａ１４がＬｙｓ
であるか、又は（Ｂ）Ａｌｏがｐｒｏ、Ａ１４がＴｈｒ
である場合の式（ＩＩＩ）で示される。従ってこのヘキ
サペプチドは前出の式（ＩＩ）で示される好ましい１型
ポリオウイルストリペプチドに結合し得る。 ＧＢ−Ａ第２，１２８，６２１号のへキサペプチドはよ
り長いポリペプチドに組合せることができ、これらのよ
り長いポリペプチドも本発明のペプチドに結合し得る。 例えばＧ　Ｂ　−Ａ　Ｉ　２．１２８，６２１号の好ま
しい３型ポリオウイルスオクタペプチドは次式％式％（
） で示される。式中Ａ１０はＧｌｕ、Ａ、４はＴｈｒ又は
５ｅｒＳＡ１５はＡｒ（］である。より好ましくは（Ａ
）ＡｌＱがＧｌｕ、、Ａ１１がＧＩｎＳ　Ａ１２がＰ　
ｒｏ、　Ａ　１３がＴｈｒ。 Ａ１４が１°ｈｒ、ＡｌｓがＡｒ（１，Ａ１６がＡｌａ
、Ａ１□がＧｌｎであるか、又は（Ｂ）　Ａ　１０−　
Ａ　１７の残りｌ５（Ａ）の定義に従うものとして、 （ａ）ＡｌｏがＧ　＋ｙ、又は （ｂ）Ａ１３がＩｌｅ、ＡｌａもしくはＡ　ｓｎ、又は
（Ｃ）、Ａ１４がＡｓｎＸ５ｅｒもしくはｌ　Ｉｅ、又
は（ｄ）Ａ１５がＧｌｎもしくはＴ　ｒｐ、又は（ｅ）
Ａ１６が−ｒｈｒもしくはＶａｔ、又は（「）Ａ１７が
Ｌ　ｅｕ、　　Ｐｒｏ、　Ａｒｒ＋もしくはＨｉｓ、又
は （ｇ）Ａｌ１が３　ｅｒ、　ＩｌｅもしくはＡＳｎＴ”
Ａ１６がＴｈｒ、又は （ｈ）Ａ１３がＩｌｅ、Ａ１４がＡＳｎもしくはＡ　Ｉ
　ａテＡ　１６がＴｈｒ である。 好ましい２型ポリオウイルスオクトペプチドは、Ａ　が
Ａｓｐ、Ａ　　がＡｌａ、Ａ１２がＰｒｏ、Ａ１３がＴ
ｈｒ、Ａ　　がＬＶＳｌ　Ａ１５がＡｒ［］、Ａ１６が
Ａ　ｌａ。 Ａ１７が３ｅｒの場合の式（ｒｔ／）で示される。 好ましい１型ポリオウイルスオクタペプチドの１つは、
Ａ１１がＡｌａ、Ａ１２が５ｅｒ１Ａ１３がＴ　ｈｒ。 Ａ１５がＡＳｎ％Ａ１６がしｙｓ、ＡｎがＡｓｐであり
、且つ（＾）　Ａ　１０７ｆｉＳ　ｅｒｌＡ　１４がし
ｙｓであるか、又はＣＢ）Ａｌｏがｐｒｏ、Ａ１４がＴ
ｈｒである場合の式（ｒＶ）で示される。 ＧＢ−Ａ第２，１２８，６２１号のこれら８アミノ酸ポ
リペプチド鎖の一端又は両端には更に別のアミノ酸及び
／又はペプチドを結合し得る。−例として、下記のもの
を結合すればドデカペプチド又はオクタデカペプチドが
得られる。 （３型ポリオウイルス）　Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−Ａ
ｓｎ−。 （２型ポリオウイルス）　Ｇｌｔｌ−Ｖａｔ−＾５ｐ−
Ａｓｎ−。 （１型ポリオウイルス）　Ｔｈｒ−Ｖａｔ−Ａｓｐ−Ａ
ｓｎ−、式（ＩＶ）の残基Ａ１ｏに１、又は （３型ポリオウイルス）＾１ａ−１１ｅ−Ｉｌｅ−Ｇｌ
ｕ−Ｖａｌ−＾５ｐ−Ａｓｎ−及び −Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ。 （２型ポリオウイルス）　Ａｌａ−１１ｅ−１１ｅ−Ｇ
ｌｕ−Ｖａｔ−Ａｓｐ−＾Ｓロー及び −Ａｒ（１，−ＬｅｌＪ−Ｐｈｅ、又は（１型ポリオウ
イルス）Δ１ａ−Ｉｌｅ−１１ｅ−Ｔｈｒ−Ｖａｔ／−
Ａｓｐ−Ａｓｎ−（Ａ　１０がＳｅｒ　、　Ａ１４がＬ
ｙｓの場合）又は Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｈｅｊ−Ｔｈｒ−Ｖａｌ−ＡＳｐ−Ａ
ｓｎ−（Ａ　１ｏＳｐｒｏ　、Ａ　１４がＴｈｒの場合
）及び−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ −Ｐｈｅ、式（ｒＶ）の残基Ａ１゜ 及びＡ１□に。 本発明のベースのペプチド配列はＧＢ−Ａ第２．１２８
，６２１号のポリペプチドに任意の適切な方法で結合し
得る。これらを互に直接結合してもよいし、又は１つ以
上のアミノ酸残基を介して、もしくは各々に付加された
Ｃｙｓ残基相互間のジスルフィド架橋によって結合して
もよい。同一ポリオウィルス型のペプチドのみならず、
異なるタイプのペプチドを互に結合させることもでき、
その場合には２種又は全３種のポリオウィルスに対する
ワクチンとして、又はその診断において有用な単一・ペ
プチドが形成される。 本発明のペプチドは、当該ベース配列に対応す（型） るものと同じタイプで好ましくは同じ株の腸内ウィルス
、特にポリオウィルスのＶＰＳカプシドタンパク質の残
基５８及び５９、例えば残基５８〜６１を含別のペプチ
ドはＶＰ３残基７７及び７９も含み得る。 ３型ポリオウイルスの場合には、補助的抗原部位ン２８
６〜２９０によってコードされるペンタペプチル ドが、作用的に異なる単一の抗原部位を構成すると考え
られる。 従って本発明は、式（Ｖ）又は式（Ｖｌ）、Ａ７−Ａｇ
　−Ａｇ　−Ｌｙｓ　　　　　　　　　（Ｖ）Ａ、−Ａ
８−Ａ９−１−ｖｓ・Ａｌｏ−Ａｌ１　（、ＶＩ）で示
されるＶＰ３ペプチドに結合された前記式（Ｉｆ）の３
型ペンタペプチドを含むような・３型ポリオウイルスに
起因する病気に対するワクチン接種及び診断に有用なペ
プチドを提供する。前記式中、（りＡ７及びＡｌｏは夫
々別個にＱｌｕ又はＡｓｐであり、Ａ　　、Ａ　　及び
Ａ１１は夫々別個にＴｈｒもしくは３ｅｒであり、Ａ　
及びＡ１１は夫々Ｌｙｓ残基及びＡＩＯに直接的に、或
いはアミノ酸残基を介して結合され、又は（ｉｉ）Ａ７
〜Ａ１１の残りが（ｉ）の定義に従うものとして、Ａ７
がＡｓｎもしくはＱｌｎであるか、又はＡ８がＡｒｇ、
ＡＳｎもしくはＧｌｎである。従って式（Ｖｌ）のペプ
チドは例えばナビン又はレオン株３型ポリオウィルスの
ＶＰ３アミノ酸残基５８〜７９に対応し得る。好ましく
はＡ　がＧＩｕＡ　　及びＡ１１が双方共３ｅｒ’。 ７　　　　　　箋　　　８ Ａ９がＴｈｒｌＡｌｏがＡＳｐテアル。 本発明は、更に２型ポリオウイルスに起因づ°る病気に
対するワクチン接種又は診断に有用なペプチドであって
、式（■）又は（■） Ａｌ２−　Ａｌ３　Ａ　１４　Ａ　ｒｇ（■）Ａ　　　
Ａ　　　Ａ　　　ＡｒＱ−Ｈ！Ｓ”・Ａ１５　　　（Ｖ
ｌ）で示されるＶＰ３ペプチドに結合された前記式（Ｉ
［）の２型ペンタペプチドを含むようなペプチドをも提
供する。前記式中、Ａｌ２及びＡｌ３は夫々別個にＴｈ
ｒ又は３ｅｒであり、Ａ１４はＧｌｎ又はＡｓｎであり
、Ａ１５はＡＳｆ）又はＧｌｕであり、ト１ｉｓ残基及
びＡ１．は夫々Ａｒ（］残基及びｌ−１ｉｓ残基に直接
的に又はアミノ酸残基を介して結合される。従って式（
■）のペプチドは例えばサビン株２型ボリオウ一 イルスＶＰ３アミノ酸残基５８〜７９に対応し得る。 好ましくはＡ　が〒ｈｒ、　Ａ　　がＳｅｒ、Ａｌ４が
Ｑｌｎ、Ａ１５がＡＳＩ）である。 本発明は更に、１型ポリオウイルスに起因する病気に対
するワクチン接種又は診断に有用なペプチドであって、
式（ＴＸ）又は（Ｘ）、ＡｌＧ−Ａ　Ｉ　ａ　−Ｌｙｓ
−Ｌｙｓ　　　　　　　　　　（ＴＸ）Ａ１６−Ａｌａ
　−Ｌｌ／Ｓ’−ＬＶＳ・”Ｈｉｓ”’Ａ１７　　（Ｘ
）で示される■Ｐ３ペプチドに結合された前記式（ＩＶ
）の１型へキサペプチドを含むようなペプチドも提供す
る。前記式中、Ａ１６はＴｈｒ又はＳ　ｅｒ。 Ａ１７はＡｓｐ又はＧｌｕであり、ｌ−１ｉｓ３ｉ基及
びＡ１Ｐｒは夫々式（Ｘ）でＨｉｓ残基に隣接するＬｙ
ｓ残基及び１−１ｉｓ残基に直接的に又はアミノ酸残基
を介して結合される。従ってねＸ）のペプチドは例えば
ナビン又はマホニー株１型ポリオウィルスのＶＰ３アミ
ノ酸残基５８〜７９に対応し得る。好ましくはＡｌＢが
３ｅｒであり、Ａ１７がＡｓｐである。 式（ｒＶ）のへキサペプチドは式（ＩＸ　）又は（Ｘ）
のペプチドに、且つ（ＩＩ）の３型及び２型ベンタベブ
ヂドは夫々式（Ｖ）又は（Ｖｌ）のペプチド及び式（■
）又は（■）のペプチドに、本発明のベースのペプチド
配列をＱＢ−Ａ第２，１２８，６２１号のボリペプヂド
に結合させ得る方法と同じ方法で結合し得る。 本発明のペプチドはそれ自体で免疫原活性を有（ｃｏｒ
Ｉｊｔｔ３ａ、ｆ：、ｅ） さなくても、免疫原活性を示すような１１７丁で成ツベ
くキャリヤに結合することパできる。この場合のキャリ
ヤはウシ血清アルブミン、ヂログロプリン、オボアルブ
ミンもしくはキーホールリンベット（Ｋｅｙｈｏｌｅ　
ｌｉｍｐｅｔ）ヘモシアニンの如きタンパク質、又はパ
ルミチン酸Ｃあってもよい。ヒトを免疫する場合には、
このキャリヤは人体に安全な生理学的に許容し得るキャ
リヤでなければならない。しかしながら前記ペプチドは
′好ましくは破傷風トキソイド及び／又はジフテリアト
キソイドに結合させ、それによって免疫原と多価ワクチ
ンとを同時に得るようにする。或いはこのペプチドを不
活性キャリヤに化学的に結合させ、これを用いてアフィ
ニティクロマトグラフィにより適切なウィルスに対する
抗体のアッセイ及び／又は単離を実施できるようにして
もよい。この種の不活性キャリヤとしてはセファ０−ズ
の如きデキストランが挙げられる。 本発明は本発明のペプチドの製法にも係る。この製法は
（ａ）３型ポリオウイルスサビン株の場合のコドン２８
６〜２８８、好ましくはコドン２８６〜２９０であるか
又はそれと等価である腸内ウィルス応するＤＮＡ配列内
の対応コドンを同定し、このようにして同定された二ト
ンに対応するペプチド配列を含む合成ペプチド、又はそ
の抗原等価物を製造することからなる。 本発明のペプチドは例えば一般的に知られている方法の
１つを用いて化学的合成により製造し得る。これらの公
知方法では通常、単アミノ酸が又は２つ以上のアミノ酸
残基を含む予形成したペプチドのいずれかを用いてＮ末
端、又はより一般的にＣ末扇から形成する。特定のペプ
チド合成法には、大ぎさの増大するペプチドを通常

【訪
アミノ酸チドをメリフィールド（Ｍ　ｅｒｒｉｆｉｅｌ
ｄ）樹脂の如き樹脂に結合した状態で構築する固相ペプ
チド合成法を使用してもよい。これらの合成では通常、
標準的保護基、例えばｔ−ブトギシ力ルボニルを用いて
アミノ酸上の基を保Ｉする。必要であればこれらの保護
基は合成終了後に適切に除去されるが、当該ペプチドを
含む化合物による適切な免疫反応の誘発能力に影響がな
い場合には、そのまま残しておいてもよい。ペプチドは
その他にも、合成中又は合成後に様々に修飾し得る。 本発明のペプチドの製造には更に、遺伝子工学の技術を
利用し、それによって当該ペプチドをコードづるＤＮＡ
配列をプラスミド内に導入することからなる方法を使用
することもできる。前記プラスミド自体は前記ペプチド
を回収可能な形態にするために誘導されるバクテリアの
如き生体内に導入される。このように本発明はペプチド
だけでなく、前述の如き合成で使用し得るペプチドをコ
ードするＤＮＡ又はＲＮ八へ列にも係る。但し本発明の
ペプチド鎖におけるアミノ酸は少数であるため、最適の
製法は前述の如き鎖を構築するための合成法からなる。 本発明のペプチドは特に、腸内ウィルス、特定的にはポ
リオウィルスに起因する病気に対する患者のワクチン接
種に使用される。ワクチン接種は本発明のペプチドをそ
のままで、又はキャリヤに結合して有効量患者に投与す
ることによって行なう。通常は１００Ｎ〜ｌｌｌ１ｇの
ペプチドをヒトに鉱内投与する。 この目的で使用する場合は、該物質は特に大きさに関し
て、免疫反応を生起させるようなものでなければならな
、い。従って本発明のペプチドは通常前述のタンパク質
の如き免疫原活性のあるキャリＡ７に結合されるか、又
は当該ペプチド配列を含むより長いペプチドの形状を有
する。このより長いペプチドは当該ペプチドをポリ−Ｉ
ＶＳの如き合成ポリペプチドに結合することによって得
られる。 前記ワクチンは本発明のペプチドを１種類だけでなく２
種類以上含み得る。例えば３つの異なる型のポリオウィ
ルスの各々に１つずつ対応するように複数の異なるペプ
チドを含ませれば、３つの型のポリオウィルス総てに対
して思考を免疫することができ、このワクチンはまた、
異なる同−型ウィルス間でのペプチドの変化も考慮し得
る。 従って本発明のペプチドは英国特許出願第２、１２８．
６２１号のポリペプチド及び／又は前述の如きＶＰ３の
ペプチドと共に投与することもできる。 これらのペプチドは互いに混合してもよく、又はチドを
投与する。本発明のペプチドと同時に又は別個に投与し
得る英国特許出願第２．１２８．　ｆ３２１号の好まし
いポリペプチド及び好ましいＶＰ３ペプチドは前述した
ようなペプチドである。変形例として、英国特許出願第
２，１２８，６２１号のポリペプチド及び／又はＶＰ３
ペプチドを本発明のポリペプチドと同じキャリヤに結合
させてもよい。 他の抗原、特に破傷風、ジフテリャ及び百日咳の如き幼
児のワクチンで−・般的に用いられる抗原を含む物理学
的混合物としてワクチン組成物を調製するのも好ましい
。但しこの種の抗原は、前述の如く、所望であれば本発
明のペプチドを免疫原性にすべく該ペプチドに化学的に
結合させることもできる。 本発明のペプチドは免疫原形態１＝ｈ３ｔｉｔ！適切な
抗体の産生を誘発して患者を保護するワクチンの役割を
果たし得るが、該ペプチドは更に化学療法効果を示し得
る可能性もある。−ｆｌｌ、゛げ＼抗体の産生を誘発し
得る同じペプチド配列幌、患者体内でウィルス自体を細
胞にｔ」着せしめ、それによって感染を生起させるウィ
ルスカプシドタンパク質中の配列であってもよいとぢえ
られる。従って本発明のペプチドは競合作用を有し得、
適切な細胞リセブタ部位を占めることによってウィルス
が患者に感染するのを阻止し得る。本発明のペプチドを
含む免疫原は通常箔内注射によって投与されるが、腹腔
投与又は皮下投与なども可能である。 本発明のペプチドはまた、腸内ウィルスに起因する病気
に対するワクチ接種への反応を高めるべく、患者の免疫
系を刺＠　（ｏｒｉｎｃｅ）するのに使用することもで
きる。その場合は、通常１００ｕｇ〜１１１１（］であ
る有効量の本発明のペプチドを患者に投与し、適切な時
間が経過した後従来の方法で、対ン接秒に必要な物質量
は本発明のペプチドｌも従来のワクチン接種用のもの１
もより少なくてすみ、且つ必要な抗原投与数（ｃｈａ　
ｌ　Ｉｅｎａｃ）もより少なくてすむ。 本発明は本発明のペプチドを活性成分として、これを医
薬上許容し得るキャリヤ又は希釈剤と共に含む医薬側生
物も提供する。この組成物中のペプチドの実際の形態、
即ち別の化合物に結合されるかされないかは、この組成
物の用途に応じて決定される。この組成物は例えば、フ
ロイント・コンプリート・アジュバント（Ｆ　ｒｅｕｎ
ｄｓＣｏｍｐｌｅｔｅ　Ａ　ｄｊｕｖａｎｔ　＝　Ｆ　
ＣＡ　）又は生理学的に量のペプチドを含むワクチンの
形態を有し得る。 本発明のペプチドは腸内ウィルスによる感染の診断にも
使用できる。この診断は患者体内の適切なウィルスに対
する抗体の存在又は不在を検出することによって行なわ
れる。この目的で使用される場合には、本発明のペプチ
ドは通常前述の如き不活性キャリヤに結合される。これ
らペプチドはこのような状態で更に、当該ウィルスに対
する抗体の単離におけるアフィニティクロマトグラフイ
媒体としても使用し得る。従って本発明のペプチドは腸
内ウィルスに対する抗体の検出に有用なティストキット
の成分を構成し得る。このキットは当該ペプチドに結合
した抗体を検査するための手段も含む。この抗体の検査
には任意の適切なイムノアッセイシステム、例えばラジ
オイムノアッセイシステムを使用し得る。 以下実施例を挙げて本発明をより詳細に説明する。 実施例１ おける抗体処理・フィルスのプラーク形成により単離し
た。（マイナー［Ｍｉｎｏｒ］等、１９８３）　。それ
等は３型ポリオウイルスＰ３　　Ｌｅｏｎ／ＵＳＡ／１
９３７株（マイナー等１９８３、エバンス［Ｅ　Ｖａｎ
ｅ］等）及びその弱毒化誘導株ナビンワクチン株より単
離した。この変異株は、後に示す表２の１２のモノクロ
ーナル抗体標本による中和に対して感受性を有すること
を特徴とする。Ｐ３／Ｌｅａｎ／３７ウイルスから誘導
した合計２１３のブう−クから得た変異株は、その中和
パターンに基いて１６の別のグループに分類できた。同
様に、サビンワクチン株からの合計１２９のプラークか
らの変異株も１５の別のグループに分けられた。 第２の独立抗原部位に対する証拠は、株高特異性モノク
ローナル抗体１３８を用いて得た。このモノクローナル
抗体は、サビン３型ワクチンウィルスあるいはそれから
誘導された殆んどのものを中和するが、Ｐ　３　／Ｌｅ
ｏｎ／３７やその他の株は中和しない（ファーガソン［
Ｆ　ｅｒｇｕｓｏｎｌ等、１９８２）　。第１部位を置
換した変異株を選択する１２の抗体ｌに対して抵抗性を
有するサビン株の変異株は全て、やはり抗体１３８に対
して感受性を有することが判明し、また抗体１３８に対
する低抗性により選択された変異株は全てこれ等の部位
１抗体に対して完全に感受性を有していた。従って抗体
１３８は、第１部位とは異なる独立して変異可能な部位
に向けられるものと考えられる。この第２の部位は以下
のように同定した。 ヌクレオチド配列の研究（スタンウェイ［３ｔａｎｗａ
Ｖコ等、１９８３．１９８４］によれば、Ｌ　ｅｏｎ１
２ａｉｂ　　（ナビン株）とＰ３／Ｌｅｏｎ／ＵＳＡ１
９３７間のゲノム構造部分における差異は２つのアミノ
酸だけであるとされており、一つはタンパクＶＰ３をコ
ードする領域中にあり、もう１つはＶＰｌをコードする
領域の５′末端からのコドン２８６にあり、これはＰ３
／Ｌｅｏｎ／３７においてはリジンであり、サビンワク
チン株においてアルギニンである。サビン３型ワクヂン
ウィルスとＰ３／　Ｌ　ｅｏｎ　／　１９３７のゲノム
の完全にクローン化したｃＤＮＡ複写物から組換えプラ
スミドを調製し、この組換えゲノムはサビン株のＶＰ３
領域としｅｏｎの■Ｐ１領域を含むものとした（Ｇ、ウ
ェスドロップ［Ｗｅｓｔｒｏｐ］　、未出版）。 このプラスミドによる細胞のトランスフェクションによ
りウィルスを回収しくラカニエロ［Ｒａｃａｎｉｅｌ　
ｌｏ］及びボルチモア（Ｂ　ａｌｔｉｍｏｎｅコ１９８
１）　、これは■Ｐ１及びＶＰ３をコードする領域中の
ゲノムの部分的な配列により特徴づけられる。この組換
えウィルスは抗体１３８とは反応せず、これは特異的部
位（すサビン株のＶＰ３は含んでいないが、ＶＰｌのＮ
末端から２８６部位にそのアミノ酸を含んでいることを
示している。 サビンウィルスから単離した１３８抵抗性変異株は隣接
コドン（２８７）において塩基置換を有しており、これ
はアスパラギンに対するアスパラギン酸塩残基の置換と
なる。 さらに、低ガンマグロブリン血症ワクチン接種者からも
一連の単離物を得た。この接種者は、１価３型ｌナビン
ワクチンの投与後長期間に亘り３型ポリオウイルスに由
来するワクチンを分泌する（マツカラム１９７１　）。 これ笠の株の６つのものがそのＲＮＡ中のＴ１オリゴヌ
クレオチドマツプにより互いに異なるものであったが、
これ等は全て抗体１３８（Ｐ　、マイナー、未出版）と
反応しなかった。配列を研究したところ、■Ｐ１のＮ・
末端からコドン２８８にあるアミノ酸は、これ等の６つ
の分泌株においてはアスパラギン酸塩であり、親のナビ
ンワクチンウイルスではアスパラギンであった。 これ等の組換えウィルス、変異ウィルス及び分泌株につ
いて観察されたことは、抗体１３８がＶＰｌのＮ末端か
ら２８６−２８８コドンを含む株特異性抗原部位を認識
することを強く裏付けるものである。 実施例２ ３型ポリオウイルスサビン　のＶＰｌ力ゝζ　パ　　コ
ー゛するＲＮΔ配列 前述のミノエローマ細胞を有する免疫化Ｂａ１ｂ／Ｃマ
ウスから１８た牌臓細胞の融合によりモノクローナル抗
体を調製した（Ｖアーガソン等、１９８４）。 マウスは、フィンランドでのポリオの流行に関りを持つ
抗原変動株（Ｐ　３　／　２３１２７／　Ｆ　１ｎｌａ
ｎｄ／　８４）（レニツキ［Ｌ　ｅｎｉｋｋｉコ等、１
９８５）あるいは前述したようにトリプシン処理したポ
リオウィルス３型リビン株（フリマウス［１：　ｒｉｃ
ｋｓｌ等、１９８５）の、抗原異常ウィルスにより免疫
化した。ハイブリドーマ浮遊物は、改変単純放（ト）拡
散測定法（抗原ブロッキングテスト）を使用してスクリ
ーニングし、モノクローナル抗体は−・般に、遺伝子的
に同質なマウス中で調製した媒水として使用した（ファ
ーガソン等、１９８４）。免疫化スケジュール及び他の
手順は全ての融合において同様なものを使用した。 両者のタイプのウィルスで免疫化された動物から生産さ
れたモノクローナル抗体は、未処理ウィルス及び抗原必
須部位、即ちアミノ１１８９から１００のＶＰ１カプシ
ドタンパク領域に置換を有する全ての変異株を中和する
ことができた。これ等の抗体の下記の４つにより変異株
を選択した。前述したような抗体含有アガー被覆におい
て抗体処理したウィルスによるＨ　ｅＤ２ｃ細胞上での
プラーク形成により、抗原変異体を選択した。変異体と
推定されるものは２回の選択サイクルにかけ、第２のプ
ラーク小片から入長した小部分を貯えた。 選択した変異株の抗原反応パターンを、以前に発表され
た２つの変異株のものと共に表３に示す。 変異株１は、ＶＰｌ中の９８位にアミノ酸置換を有して
おり、ここではアルギニンの代りにグリシン残りが認め
られる。変異株２はＶＰｌ中の２８７位に変異を有して
おり、ここではアスパラギンに代ってアスパラギンｌ！
塩が見られた。１３の変異株は３つのオーバーラツプし
ない異なるグループに分けられ、これは３つの独立した
抗原部位が存在することを示している。 変異株３〜１３のゲノムＲＮＡは、ブライマーエクステ
ンションから１型あるいは３型ポリオウイルスにおいて
抗原的に有意な変異を含む部分に対応する５つの領域が
配列される。これ等は、Ｖ’Ｐ１の残塁８９〜１００．
２２０〜２２２及び２８６〜２９０、ＶＦ６の残Ｍ５０
〜８０及びＶＦ２の残基１６０〜１８０をコードする領
域を含む。結果を表４に示す。 変異株２〜８は単一塩基置換を有し、それ等はＶＰｌの
残Ｍ２８７及び２９０、ＶＦ６の残基５８．５９゜７７
及び７９における予想されたアミノ酸変化であった。抗
体１０２３，８４０，２５１，５５７．１０８４及び１
００７の反応は、ＶＦ６の残基５８及び５９、ＶＰｌの
残基２８７及び２９０における変異の両方により影響を
う【ノたことが特筆される。ＶＰｌの残基２８６〜２９
０から成る第２の抗原部位と残基５８．５９．７７及び
１９がら成る補助抗原部位は単一・の作用的に異なる抗
原部位を形成すると考えられる。 実施例３ Ａ　ｓｐ−Ｔ　ｙｒ−Ａ　ｒ−△５ｎ−Ａ　５ｎ−ｅｕ
　−ｓ　−ｒｏ　−ｅｕ−ＣＳ　　ペプチド２）必要な
ペプチドは、固相ペプチド合成のＦ　ｍｏｃ−ボリアε
ドモード（ブラウンＣＢ　ｒｏｗｎ］等、１９８３及び
そこに引用されている文献）により合成した。−・般的
な手順は以下の通りである。 ポリジメチルアクリルアシドゲル樹脂（ジメチルアクリ
ルア宕・ドーエヂレンビスアクリルアＳドーアクリロイ
ルサルコシンメチルエステルのコポリマー）の０．３ｍ
当量／ｇ樹脂のサルコシンを含有するものを、エチレン
ジアミンで一晩処理した。 完全に洗浄した優、酸不安定結合剤の４−ヒドロキシメ
チルフェノキシ酢酸をその対称的無水物として加えた。 これを完全に洗浄して、問題のペプチドを調製するのに
使用した低負荷酸不安定樹脂して結合した（１２倍過剰
量で）、、ＦＩＩｌｏｃ−アミノＭ（２当社）をジクロ
ロメタン中に溶解した。溶解を促進するのに必要な場合
はＮ、Ｎ−ジメチルホルムアぐ、ド（ＤＭＦ）を数滴加
えた。Ｎ、Ｎ−ジクロロヘキシルカルボシイ 当伍）を加え、混合物を室温で１０分間撹拌した。 沈殿したＮ．Ｎ−ジシクロヘキシル尿素（ＤＣｔＪ）を
戸去し、Ｐ液を蒸発乾固して残漬をＤＨＦ中に溶解した
。この溶液を脱保護及び洗浄した樹脂に加え、結合反応
を進行させた。 アスパラギン及びグルタミン残基は下記のようにして加
えた。１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１当１）及
びＤＣＣ　（１当ｆｉｔ）を０℃でＤＨＦ中に溶解した
。０℃で１０分間撹拌した後、ＦＩＩＯＣ−アスパラギ
ン（あるいはグルタミン）溶液（１当…）をＤＭＦに加
えた。この混合物をさらに１０分間Ｏ℃で撹拌し、この
混合物全部を樹脂に加え、結合を進行さＶた。 通常の合成過程は下記の通りである。 試　　　　薬　　　　　　　　　−」１−一過り−　　
　　捏−一」ｒＤＨＦ　　　　　　　５ｘ１分　　　洗
浄２０％ピペリジン／ＤＨＦ　　　１ｘ：Ｄ１ｘ７分　
　脱保護叶Ｆ　　　　　　　　　　　１０ｘ１分　　　
　洗　浄予備形成ｌ対称無水物　６０−１２０分　　　
結　合あるいは活性エステル ＤＨＦ　　　　　　　　　　５ｘ１分　　　　洗浄各段
階における結合の完了は、ニンヒドリン及びトリメチル
ベンゼンスルボン酸テスト試薬を用いて監視した。 第１の残基の誘導化樹脂への結合は、Ｎ．Ｎ−了♂ ジメヂル≠＃ノとリジン（ＤＭΔＰ）（０．１当！ｉ）
の存在下に行なった。 Ｃ−末端ドデカペプチド配列は両方のペプチドに共通な
ので、その鎖長のものの合成を２回行ない、半分を第１
のペプチドを続けて合成するのに使用し、他の半分にシ
スティンを付加して第２のペプチドを得た。 各サイクルにつき、ｌ”　ｍｏｃ−アミノＭ（３．　６
ｍｍｏ　ｌ　）及Ｕ　Ｄ　Ｃ　Ｃ　（０．３８ｇ；１．
８ｍｎｌｏｌ）；第１のサイクルで、Ｄ　Ｍ　Ａ　Ｐ　
（０．０２２ｇ＋０．　１８ｍｍｏｌ）：アスパラギン
及びグルタミン残Ｍ　Ｈ　Ｏ　Ｂ　Ｔ　（０．２４（１
；１．８ｍｍｏｌ　）　。下記の基準により各サイクル
を行なった。 Ｆｍｏｃ−アミノ酸−〇■　　　　　量　　　　結合時
間ＦｍＯＣ−Ｃｌ／Ｓ（Ｔｒｔ）−叶　　２．１０ｇ；
３．６ｍｍｏｌ　　１時間ＦｍｏｃーＬｅｕーＯＨ　　
　　　　１．２８ｇ；３．６ｍｍｏｌ　　　１時間Ｆｍ
ｏｃーｆ’ｒｏーＯＨ　　　　　　１．２２ｇ；３．６
ｍｍｏｌ　　１時間Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）−Ｏ
Ｈ　　１．４８（１；３．６１１１１１１０１　　　１
時間ＦｍｏｃーＬｅｕー０１１　　　　　　１．２８ｇ
；３．６ｍｍｏｌ　　　１時間ＦｍｏｃーＡｓｎー叶　
　　　　０．６４ｇ；１．８ｍｍｏｌ　　　１時間Ｆｍ
ｏｃーＡｓｎーＯｆｆ　　　　　　０．６４ｇ；１．８
ｍｍｏｌ　　３時間Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｈｔｒ）−０Ｈ
　　　　２．２０ｇ；３．６ｍｍｏｌ　　　１時間Ｆｍ
ｏｃ−Ｔｙｒ　（Ｂｕｔ）　−ＯＨ　　１．６４（］：
３．６１１１１１１０１　　　１時間Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ
（ＯＢｕｔ）−ＯＨ　　１．４８ｇ；３．６ｍｍｏｌ　
　１時間ＦｍｏｃーＶａｌー叶　　　　　１．２２ｇ；
３．６ｍｍｏｌ　　１時間ＦｍｏｃーＧｌｙー０）Ｉ　
　　　　　１．０８（］；３．６ｍｍｏｌ　　１時間脱
保護の後、樹脂を半分に分けその半分にＢｏｃ−Ｃｙｓ
（Ｔｒｔ）−０Ｈ　　　　０．８３ａ；１．８ｍｍｏｌ
　　　１時間を加え、第２のペプチドを得た。 樹脂の別の半分に以下を加えた。 Ｆｍｏｃ−Ｎｅｔ−０１１　　　　　　０．６７ｇ；１
．８ｍｍｏｌ　　　１時間ＦｍｏｃーＡｌａーＯｆｆ　
　　　　　０．５６ｇ；１．８ｍｍｏｌ　　　１時間Ｆ
ｍｏｃーＰｈｅー叶　　　　　０．７４ｇ；１．８ｍｍ
ｏ１　　　１時間ＦｍｏｃーＬｅｕーＯＨ　　　　　　
０．６４ｇ；１．８ｍｍｏｌ　　　１時間Ｆｍｏｃ−Ｌ
ｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ　　　　０．８４ｇ；１．８ｍｍ
ｏｌ　　　１時間ＦｍｏｃーＧｌｎーＯＨ　　　　　　
０．３３ｇ；０．９ｍｍｏｌ　１時間及び２時間 ＦＩＩｌｏｃ−Ａｌａ−叶　　　　　０．５６（１；１
．８１１１１１Ｑ＋　　１時間Ｆｍｏｃ−八ｒｏ（Ｈｔ
ｒ）−０Ｈ１，１０（１；１．８１１１１１１０１　　
１時間℃ Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ　（Ｂｕ　　）　−０ｔｌ　　０．７
２ｇ；１．８ｍｍｏｆ　　１時間Ｆｍｏｃ−丁ｈｒ（Ｂ
ｕｊ　）−ＯＲ０，７２ｇ；１．８＋＋ｍｏｌ　　　　
１時間Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨＯ，６１ｇ；１．８ｍｍ
ｏ１　１時間Ｆｎ＋ｏｃ−Ｇｌｎ−ＯｆＩ　　　　　　
　Ｏ，３３！ＩＩ；０．９１１１１１０１　　５時間Ｆ
ｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｕｔ）−ＯＨ０，７７ｏ；１．８
ｍｍｏｌ　　　１時間Ｆｍｏｃ−＾５ｎ−Ｏｆｆ　　　
　　　Ｏ，３２（１；０．９ｍｍｏｌ　１１／２時間Ｆ
ｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）−叶　０．７４Ｇ；１．８
１ｆｆ１０１　１時間Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ０，６１
ｇ；１．８ｔｌ１ｍｏｌ　　１時間Ｆｎ＋ｏｃ−Ｇｌｕ
（ＯＢｕｔ）−ＯｆＩ　　Ｏ，７７（］：１．８１１１
１１１０１　１時間Ｂｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−０Ｈ０
，８３ｇ；１．８ｍｍｏ！　　　１時間両方のペプチド
樹脂を洗浄後、ジクロロメタン及びジエヂルエーデルで
洗浄して収縮させた。 ペプチド１ このペプチドを樹脂から切断し、ペプチド樹脂を９５％
トリフルオロ酢ＩＩ（ＴＦへ）１５％エタン保護基を除
去した。濾過後、各断片を蒸発さぽ、残渣を粉砕して３
つの白色固体を得た（１０４Ｒｇ、８０■及び４１１１
１！Ｊ）　、　ＨｐＩ　Ｃ（μＢｏｎｄｐａｋ　　Ｃ，
８：直線勾配５−９５％、０，１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ
−０，１％ＴＦＡ／）４２０　２０分間）によれば、生
成物は主として４つの化合物から成ることが示され、即
ちＭｔｒ保護基が依然存在していた。Ｍｔｒｌち（４−
メトキシ−２，，３，６−ドリメチルベンゼンス４シ の除去を容易にするだにはトリフルオロ酢酸でさらに処
理する必要がある。従って３つのフラクションを合わせ
、さらに５時間ＴＦＡで処理する。 ＨＤＩＣによれば１つの大きなピークといくつかの小さ
なピークを示した。合わせた物質を１０％酢酸中に溶解
し、セファデックスＧ−２５スーパーフアイン上で１０
％酢酸で溶出し、エクスクルージコンクロマトグラフィ
ーにかけた。溶出物は２５４ｎｍで監視し、所望化合物
に対応するフラクションを合わせ、凍結乾燥して白色の
綿毛状固体（１３０■）を１９だ。この化合物を高速原
子衝撃質量分析にかけたところ、分子イオンを発生しな
＃孝がった。 ペプチド２ このペプチドは樹脂を９５％ＴＦＡ１５％Ｅ　Ｄ　Ｔ（
３×１時間）で処理して切断した。これにより３つの白
色固体を得た（　７０ＩＩｔｇ、６１１ｆｔｇ及び４２
ｒＩｔｇ）。 ＨｐｊＩＣ（前記と同じ条件）によれば、２つの大きな
ピークが示され、やはりＭｔｒｌが存在することが示さ
れた。３つのフラクションを合し、ＴＥＡで再処理して
白色固体（１４９■）を１９だ。 ＨＤＩＣによれば生成物は実質的に均一なものであった
。ＦＡＢｌｊｆｆｉ分析によれば１４８１において鋭い
分子イオンが得られ、これは分子１１４８０と一致する
。 実施例４ この２つのペプチドは１型号ビンポリオウィルス（ペプ
チド３）及び３型リビンポリオウイルス（ペプチド４）
のカプシドタンパクＶＰ３のアミノ酸残基５８〜６１か
ら成る。これ等のペプチドは各末端にＣｙｓ残基を有す
る残基５３〜６８により構成される。これ等のペプチド
は実施例３の手順により合成される。＋ｐｆ！ｃにより
各生成物が実質的に均一・であることが示された。ＦＡ
Ｂ−質量分析によればペプチド３は２０９７で鋭い分子
イオンカ得うれ、分子ｆｆｉ　２０９６と一致した。ペ
プチド４では２１３４であり、分子量２１３３と−・致
した。 実滴例す 特異的抗体　−の徂′ ペプチド１及び２に対する実験用ラビットの特異的抗体
応答を下記のようにそれぞれ行なった。 １、非結合ペプチド（１あるいは２）に対する抗体は、
酵素結合免疫吸着測定（ＥＬｔＳΔ）で検知した。 ２．１．２及び３型のポリオウィルスに対する抗体は、
単純放射拡散テスト（ＳＲＤ）により測定したポリオウ
ィルスＣに対する抗原ブロッキング測定により検知した
。 ’ｙ＞５−見り且ヱ二λ玉１±上ユ互ｊｐＨ７，５の０
．１Ｍリン酸ナトリウムバッファー１１ｄを３０ｒＩｔ
ｇのウシチログロブリン（ＢＴＧ、シグマ）あるいは３
０Ｆ／のキーホールリンベットヘモシアニンを入れたガ
ラスバイアルに加えた。溶解した物質を１蔵のリン酸ナ
トリウムバッファーで洗Ｂ　−ｒ　Ｇ溶液を得た。バイ
アルをアルミホイルで覆い遮光した。ｐｌ−１７，５の
０．１Ｍリン酸ナトリウムバッファー中の２％グルタル
アルデヒド溶液を調製し、２００／Ｉｆを５０成の４つ
のロットに分けてペプチド−ＢＴＧ溶液に加え、各添加
の間に振盪した。 その後断続的に振盪しながら１時間室温で放置した。溶
液を４℃で１２のリン酸バッファー化塩溶液（ＰＢＳ）
に対して１晩透析し、ＰＢＳを新しいもの１２に交換し
てさらに８時間透析した。結合ペプチドを、使用するま
で一１０℃で貯蔵した。 −験　　　　の　　　　に　　　　　　　　　９　°　
　　　　゛合成オリゴペプチド１及び２を上記のように
牛チログロブリン（ＢＴＧ）に別々に共役した。免疫に
使用した調製物はリン酸緩衝生理的食塩水（ｐＨ７，２
）中に５００埒／ｄのペプチド１及び２並びに１５００
埒／　Ｉｒ１１のＢＴＧを懸濁状で含むものである。 実験動物の免疫スケジュール 若く（５〜６ケ月令）健庫なウサギに対して、まず最初
に結合ペプチド０．５ｍｅ　（５００埒）とそれと昭 同量のフロイト完全アジュバント（ＦＣＡ、ベット（Ｂ
　ａｃｔｏ）製）の混合物を筋肉内注射し、続いて以下
のスケジュールで結合ペプチド０．５７　（５００埒）
をブースター注射した。最初の注射後７６日後まで、分
析用の血清試料を間隔をおいて収集した。 日２８　　　　　　　　　　　　　　　　血清試料口　
０　０．５蔵結合ベブチドトＦＣＡ　　血清試料口２０
　　　　　　　　　　　　　　　　血清試料口２４　０
．５蔵結合ペプチド十ＦＣＡ　　　　−日４１　　　　
　　　　　　　　　　　　血清試料口４４　０．５蔵結
合ペブヂド　　　　　　　一日５５　　　　　　　　　
　　　　　　　血清試料口７６　　　　　　　　　　　
　　　　　血清試料ウナギのペプチドに対する免疫応答
を調べる為に、エンザイムイムノアッセイを実施した。 グルタルアルデヒドによってポリビニルプレートに結合
させたオリゴペプチドに結合したウサギ血清中の抗体を
検査した。ビオチン結合抗ウサギ抗体をを検出した。西
洋ワサビペルオキシダーゼの曇質（５−アミノサリチル
酸）を添加すると、色の変化が起り、その強度は該ペプ
チドに結合した抗体量に比例する。 ９６穴マイクロエリナプレート（ダイナチック。 Ｄ　ｙｎａｔｅｃｈ社）をオリゴベブグード＜１０埒／
威）で被覆した。４℃で一晩インキユベーションした後
、Ｏ１５％トウイーン２０（コツホ・ライト研究所（Ｋ
ｏｃｈ　−Ｌ　１ｏｈｔ　　Ｌ　ａｂｏｒａｔｏｒｉｅ
ｓ）、　Ｄ−ンブローク（Ｃｏ１ｎｂｒｏｏｋ）　、ベ
ルクス（３ｅｒｋｓ）　）を含むＰＢＳでプレートを５
回洗條した。ウサギ血清をＰＢＳで希釈したものを穴に
加え３７℃で２時間インキュベートした。０．５％トウ
ィーン２０を含むリン酸緩衝生理的食塩水でプレートを
５回洗浄し、ＰＢＳで希釈した。ビオチン結合ロバ抗ウ
サギＩ（＋　　（アマ−ジャム・インターナショナル（
ＡｆｆｌｅｒＳｈａｌｌ　Ｉ　ｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａ
ｌ）を添加した。３７℃で１時間インキュベートした後
ビオチン化抗体を除去し、トウィーン２０を含むリン酸
緩衝生理的食塩水でプレートを５回洗條した。ストレプ
トアビジンビオチン化西洋ワサビペルオキシダーゼ複合
体を加えプレートを３７℃で３０分間インキュベートし
た。このプレートを０．５％トウイーン２０ｆ含右ＰＢ
Ｓで３回、モしてＰＢＳで２回洗條し、基質である５〜
アミノυリチルｌ！Ｉ（ｒ’Ｂｓ１００或中に８０埒）
を各穴に加えた。プレートを３７℃で発色するまでイン
キュベートした。吸光度はタイターチックマルチスキャ
ンセット（Ｔｉｔｅｒｔｅｋｍｕｌｔｉｓｃａｎ　Ｓｅ
ｔ　）にて４９２ｎｍで測定した。ペプチドで免疫する
前のウサギから採取した正常ウサギ血清の１１１００倍
希釈よりも、陽性と考えられる血清の希釈の吸光度が大
きい時はその血清希釈と基質を使用して〃上記装置のブ
ランクをとった。 抗原ブロッキン　アッセイ ウサギ血清のポリオウィルス１型及び３型のＣ抗原との
反応性を測定する為にウサギ血清のＳＲフＳＲＤ法でそ
の他にも記載の（フエルガソン（Ｆ　ｅｒｇｕｓｏｎ）
他、１９８２年）方法を変更したものである。 ｉ　１１に言うと、シ＝Ｊｉ糖勾配からのポリオウィル
ス抗原の［３５Ｓ］メチオニンでラベルされている８０
ＳのＣビークを試験用モノクローナル抗体と混合し、そ
の俊過免疫抗ポリオウィルス３型血清を低濃度で含むア
ガロースゲル中の穴に加えた。 ２４〜４８時Ｖ８１後の放射性標識抗原のゲル内拡散を
オートラジオグラフによって検出した。Ｃ抗原と反応す
る試験抗体は、リン酸緩衝生理的食塩水単独で処理した
コントロール抗原に較べてその抗原がゲル内に拡散する
のを妨害する。抗原のプロツキングカ価は、リン酸！！
衝生理的食塩水と混合したコントロール抗原によって作
られるゾーンと比較して、そのゾーンサイズを顕著に減
少させるような血清希釈によって評価される。 緻】 均一ペプチドに対する　−の−゛、 ＥＬＩＳＡアッセイによって測定されたペプチド２に対
する抗体の力価を代表ＩＪ＋物について第５表に示す。 ペプチドによる最初の免疫１１２１日目に１でに全ての
動物が均一なペプチドに対する抗体シ を生産した。力価は４１日１まで、及びその後のオリゴ
ペプチドのブースター注射の後の血清試料中で増大した
。どの動物についてもプレブレード中には抗ペプチド抗
体は検出さ°れなかった。７第６表はペプチド１に対す
るＥＬＴＳＡの力価を示ツ。 このペプチドは英国特許公開第２１２８Ｇ２１号の＄１
０ｔＬのペプチドとペプチド２を結合したものであり、
各々のペプチドで達成される抗体力価がこの場合も得ら
れる。 ポリオ「ウィルスに・する　　の− ａ）抗原ブロッキング抗体 空のウィルス粒子（ｅｍｐｔｙ　ｖｉｒｉｏｎｓ　）　
、即ちＣ抗原に対する特異抗体は単純放射拡散試験（シ
ルト他１９８０年、フエルガソン他１９８２年）を用い
る抗原ブロッキングアッセイによって検出された。この
方法はＢＴＧに結合さぜたペプチド１及び２によって免
疫した動物から得た血清に対して実施した。 第７表はペプチド２を注射したウナギに於けるポリ第３
型Ｃ抗原に対するブロッキング抗体の誘導を示す。４匹
のうち３匹の動物には１７日１と３１日口の間にまず抗
体が現われた。ペプチド２で免疫した動物の面、清を、
本願発明及び英国特許公開第２１２８６２１号の両Ｈｐ
　１抗原部位の変異がウィルスによって引き起こされて
いるかどうかについて検査した。 その結果を第８表に示す。 第９表はペプチド１を注射したウサギに於けるポリオウ
ィルス３型Ｃ抗原に対するブ［１ラギング抗体の誘導を
示す。 肚工１ ブラウン（［３ｒＯＷｎ）他、　１９８３年、ジｔ７−
ナル・ケム−’ｚす（Ｊ　、　Ｃｈｅｍ　、　Ｓｏｃ、
　）パーキン訳工。 １１６１及びその次。 エバンス（Ｅ　ｖａｎｓ＞他、　１９８３年、ポリオウ
ィルφ ス３型の中和反応に於けるＰｌの８アミノ酸配列の決定
的役割、ネーチャー、　　３０４．　４５９−４６２゜
フエルガソン（Ｆ　ｅｒｇｕｓｏｎ　）他、　１９８４
年、ポリオウィルス３型粒子の中和ニブトープ：モノク
ローナル抗体を用いた分析、ジャーナル１ジエン・、ヴ
イロロ（Ｊ、　Ｇｅｎ、Ｖｉｒｏｌ）　、　６５．　１
９７−２０１゜フリック（Ｆ　ｒｉｃｋ）他、　１９８
５年、１型ポリオウイルスのサビン（３ａｂｉｎ）株の
トリプシン感受性：ウィルス粒子及び関連粒子の開裂部
位、ジャーナル・ヴイ〔１０（Ｊ、　Ｖｉｒｏｌ）　、
　５４．　８５６及びその次・　ラインニツキ−（ｌ　
ｅｉｎｉｋｋｉ）他、　１９８５年。 フィンランドに於ける麻痺性ポリオ、ランセット（Ｌ　
ａｎｃｃｔ）　■、　　５０γ。 マツフカラム、英国に於ける低ガンマグロブリン面症、
メゾカル・リサーチ・カランシル・スペシイアル・リポ
ート・シリーズ（Ｍ　ｅｄｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈ　
Ｃｏｕｎｃｉｌ　５ｐｅｃｉａｌ　ｒｅｐｏｒｔ　５ｅ
ｒｉｅｓ）　。 ３１０号、　　７２−８５゜ マイノー（Ｍｉｎｏｒ）他、　１９８３年、ポリオウィ
ルス中和の為の１要抗原部位の位置及び−・次構造。 ネーチャー、　　３０１．　６７４−６７９゜ラカニエ
ロ（Ｒａｃａｎｉｅｌ　ｔｏ）及びバルチモア（Ｂ　ａ
ｌｔｉｍｏｒｅ＞　、　Ｉｋｌｉ乳動物のインフエクシ
ョンに於けるクローン化されたポリオウィルスの相補的
ＤＮＡ、サイエンス、　　２１４．　９１６−９１９゜
シルト他、　１９８０年、ジ１１−ナル・ジエン・ヴイ
００　（Ｊ、　Ｇｅｎ、Ｖｉｒｏｌ）　、　５１．　１
５７−１７０゜スタンウェイ（Ｓ　ｔａｎ冑ａｙ）他、
　１９８３年、ポリオウィルス３型のＬ　ｅｏｎ　１２
ａよりの核酸配列；１型とノ比較、核酸研究（Ｎ　ｕｃ
ｌｅｉｃ　　Ａ　ｃｉｄｓ　　Ｒｅｓｅａｒｃｌｔ）。 曇硅１１．５６２９−５６４３゜ スタンウェイ他、　７９８４年、神経毒性ポリオウィル
スＰ　３　／　Ｌｅａｎ　／３７のゲノムの完全なヌク
レＡチド配列とそれを弱毒化したサビンワクチン誘導体
Ｐ３／Ｌｃｏｎ　／１２ａ１ｂ　ト（Ｄ比＋９．、７’
［１ス・７ｊＪド・サイ（ｐ　ｒｏｃ、　Ａ　ｃａｄ、
　Ｓ　Ｃｉ　）、米国、　８１．１５３９−１５４３゜ 第１表 ポリオウィルス３型コドン　　２８６　　２８７　　　
　　　２８８　　２８９　　２９０サビン　　　　　　
　　　　　ＡｒｇＡｓｎ　　　　　　　Ａｓｎ　　　Ｌ
ｏｌｌ　　　ＡＳＩ）レオン　　　　　　　　　　　Ｌ
ｙｓ　　　Ａｓｎ　　　　　　　Ａｓｎ　　　Ｌｅｕ　
　　ＡＳＤ変異体ａ（実施例１）　　　　　Ａｒａ　　
　Ａｓｐ　　　　　　　Ａｓｎ　　　Ｌｅｕ　　　Ａｓ
ｐ変異体ｂ（実施例１）　　　　　Ａｒｑ　　　Ａｓｎ
　　　　　　　Ａｓｐ　　　Ｌｅｕ　　　Ａｓｐ変程体
Ｃ（実施例２）　　　　　ＡｒｇＡｓｎ　　　　　　　
Ａｓｎ　　　１−ｅｕＧＩＩＪポリオウィルス２型コド
ン　　２８Ｇ　　　２８７　　２８８　　　　　　２８
９　　２９０サビン　　　　　　　　　　　ＬＶｓ　　
　ＡＳｐ　　　Ｇｌｙ　　　　　　　Ｌｅｕ　　　Ｔｈ
ｒ璽Ｄυり胚弧里３乏　２８７　２８８　２８９　２９
０　２９１　２９２すごン　　　　　　　　　　ｔ−ｙ
ｓ　　　Ａｓｐ　　　Ｇｌｙ　　　Ｔｈｒ　　　Ｌｅｕ
　　　Ｔｈｒ（マーオネイン　　　　　　　　　　Ｌｙ
ｓ　　　ＡＳＩ）　　　Ｇｌｙ　　　Ｔｈｒ　　　ｌｅ
ｕ　　　Ｔｈｒ第４表 ３型ポリオウイルスの抗原変異体に於けるアミノ酸置換
位置変異体　　　タンパク質　　　アミノ酸Ｉ　　　　
　　　ＶＰｌ　　　　　Ａｒ！１１９８−ＧＩＶ２　　
　　　　　ＶＰＩ　　　　　Ａｓｎ２８７−Ａｓｐ３■
Ｐ３Ｇ１ｕ５８−Δｓｎ ４　　　　　　　ＶＦ３　　　　　Ｓｅｒ５ｇ−Ａｓ）
１５　　　　　　　ＶＦ３　　　　５ｅｒ５９−Ａｒａ
Ｇ　　　　　　　ＶＰｌ　　　　　Ａｓｎ２９０−Ｇｌ
ｕ７　　　　　　　ＶＦ３　　　　　Ａｓｐ７７−Ｇｌ
ｕ８　　　　　　　　　　　ＶＦ３　　　　　　　５ｅ
ｒ７ｑ　　Ｌｅｕ９　　　　　　　ＶＦ６　　　　　Ｔ
ｈｒ１６７−Ｌｙｓ１０■Ｐ２■ａ１１６６−Δ１ａ １１　　　　　　　ＶＦ６　　　　　Ｇｌｕ１７２−△
１ａ１２　　　　　　　　　ＶＦ６　　　　　　Ｇｌｕ
１□２−１．ｙｓｉ３　　　　　　　ＶＦ６　　　　　
Ａｓｎ１６４−ＬｙｓＶＰ２　　　　　Ａｓｎ１６４−
Ｔｈｒ１カプシドタンパク質に対するＲＮΔ配列を示し
、該配列内のコドン９３〜ＩＯθ及び２８６〜２９０を
下線ひ示した説明図である。 ＧＭ　　ＧＵＵ　　ＧＣＡ　　ＣＡＧ　　ＧＧＣＭＧ　
　ＣＡＡ　　ＣＡＧ　　ＧＡＵ　　ＡＧＣＧＧＣＣＣＧ
　　ＧＣＧ　　ＣＡＵ　　ＵＣＣＧＣＡ　　ＣＧＣＧＧ
Ｇ　　ＧＣＧ　　ＵＧＣＡＡＵ　　ＧＡＡ　　ＣＭ　　
ＣＣＡ　　ＡＣＣＧＣＣＡＵＧ　　ｔＪＧＧ　　ＣＧＣ
ＡＵＵＵＵＧ　　ＣＧＣＣＧＵ　　ＭＧ　　ＵＵＧＵＵ
Ｕ　　ＧＡＣＡＵＧ　　ＧＡＡ　　ＵＵＣＵｔＪＣＡＣ
ＣＡＡＣＧＣｌＪ　　ＡＡＵＧＵＧ　　ＵＡＣＣＡＧ　
　ＡＵＡ　　ＡｔＪＧＵＡＣＡＵＣＣＣＣＣＣＡ　　Ｇ
ＧＧ ＧＡＣＧＡＣＵＡＣＡＣＵ　　ＴＪＧＧＡＵＡ　　　Ｕ
ＵＵ　　ＵＡＣＡＣＣＵＡＵＵＣＡ　　　ＧＵＧ　　Ｃ
ＣＡ　　ＵＡＣＧＵＧＣＡＣＵＵＵ　　ＵＡＣＧＡＣＧ
ＧＣ ＡＣＡ　　　ＧＡＵ　　ＧＣＣＡＡＵ　　ＧＡＣＡＧＣ
ＧＣＣＡＵＧ　　ＡＣＡ　　ＧＵＵＧＵＵ　　　ＣＧＵ
　　ＧＵＵ　　ＧＵＣＡＡＵＡＣＣＵＣＣＡＡＡ　　Ｇ
ＵＣＣＧＣ ＧＵＡ　　　ＣＧＵ　　ＧＵＣＵＧＧ　　ＵＧＣＣＣＵ
　　　ＵＡＵ　　ＵＡＵ　　ＧＧＡ　　ＣＣＡ★　薯エ
コＩ−”ン

Claims (13)

【特許請求の範囲】
1. （１）腸内ウイルスに起因する病気に対するワクチン接
   種又はその診断において使用するのに適した合成ペプチ
   ドであって、３型ポリオウイルスサビン株の構造カプシ
   ドタンパク質ＶＰ１をコードするＲＮＡ配列内のコドン
   ２８６〜２８８によりコードされるか或いは別の腸内ウ
   イルスの等価コドンによりコードされるペプチド、又は
   このペプチドの抗原等価物からなり、前記コドンの番号
   がＶＰ１カプシドタンパク質をコードするヌクレオチド
   配列の５′末端から数えたものである合成ペプチド。
2. （２）腸内ウイルスに起因する病気に対するワクチン接
   種又はその診断において使用するのに適した合成ペプチ
   ドであって、３型ポリオウイルスサビン株の構造カプシ
   ドタンパク質ＶＰ１をコードするＲＮＡ配列内のコドン
   ２８６〜２９０によりコードされるか或いは別の腸内ウ
   イルスの等価コドンによりコードされるペプチド、又は
   このペプチドの抗原等価物からなり、前記コドンの番号
   が特許請求の範囲第１項に記載のように数えられる合成
   ペプチド。
3. （３）３型ポリオウイルスサビン株の構造カプシドタン
   パク質ＶＰ１をコードするＲＮＡ配列内のコドン９３〜
   ９８によりコードされるか或いは別の腸内ウイルスの等
   価コドンによりコードされるヘキサペプチドの配列又は
   このヘキサペプチドの抗原等価物に結合された特許請求
   の範囲第１項又は第２項に記載のペプチドの配列を含み
   、前記コドンの番号が特許請求の範囲第１項に記載のよ
   うに数えられる合成ペプチド。
4. （４）特許請求の範囲１項又は第２項に記載のペプチド
   の場合と同じタイプの腸内ウイルスのＶＰ３カプシドタ
   ンパク質のアミノ酸残基５８及び５９を含むペプチド配
   列に結合された特許請求の範囲第１項又は第２項に記載
   のペプチドの配列を含む合成ペプチド。
5. （５）特許請求の範囲第１項又は第２項に記載のペプチ
   ドの製法であって、（ａ）特許請求の範囲第１項に記載
   のようにコドン番号を数えた場合に３型ポリオウイルス
   サビン株に対するコドン２８６〜２８８もしくは２８６
   〜２９０であるか又はそれと等価であるような腸内ウイ
   ルスの構造カプシドタンパク質ＶＰ１をコードするＲＮ
   Ａ配列内のコドン、又は（ｂ）前記ＲＮＡ配列に対応す
   るＤＮＡ配列内の対応コドンのいずれかを同定し、この
   ようにして同定されたコドンに対応するペプチド配列を
   含む合成ペプチド又はこのペプチドの抗原等価物を製造
   することからなる製法。
6. （６）特許請求の範囲第１項から第４項のいずれかに記
   載のペプチドの製法であって、個々のアミノ酸及び／又
   は２つ以上のアミノ酸残基で予形成したペプチドから前
   記ペプチドを化学的に合成することからなる製法。
7. （７）特許請求の範囲第１項から第４項のいずれかに記
   載のペプチドの製法であって、当該ペプチドに対するＤ
   ＮＡ配列をプラスミド中に導入し、このプラスミドをバ
   クテリア中に導入し、このバクテリアを誘発して前記ペ
   プチドを回収可能形態で産生せしめることからなる製法
   。
8. （８）腸内ウイルスに起因する病気に対するワクチン接
   種で使用するに適した結合体であって、生理学的に許容
   し得るキャリヤに結合した特 許請求の範囲第１項から第４項のいずれかに記載のペプ
   チドを含む結合体。
9. （９）（ｉ）特許請求の範囲第３項に記載の如くコード
   されるヘキサペプチドもしくはその抗原 等価物、及び／又は、 （ｉｉ）特許請求の範囲第１項から第４項のいずれかに
   記載のペプチドの場合と同じタイプ の腸内ウイルスのＶＰ３カプシドタンパ ク質のアミノ酸残基５８及び５９を含むペプチド も前記キャリヤに結合される特許請求の範囲第８項に記
   載の結合体。
10. （１０）特許請求の範囲第１項から第４項のいずれかに
    記載のペプチドを活性成分とし、これを医薬上許容し得
    るキャリヤ又は希釈剤と共に含む、ワクチンとして使用
    するに適した医薬組成物。
11. （１１）更に、 （ｉ）特許請求の範囲第３項に記載の如くコードされる
    ヘキサペプチドもしくはその抗原 等価物、及び／又は （ｉｉ）特許請求の範囲第１項から第４項のいずれかに
    記載のペプチドの場合と同じタイプ の腸内ウイルスのＶＰ３カプシドタンパ ク質のアミノ酸残基５８及び５９を含むペプチド をも含む特許請求の範囲第１０項に記載の組成物。
12. （１２）腸内ウイルスに起因する病気の診断法であって
    、患者から得た試料を特許請求の範囲第１項から第４項
    のいずれかに記載のペプチドと接触させ、このようにし
    てこのペプチドに結合することになった前記腸内ウイル
    スに対する抗体の存在又は不在を検定することからなる
    方法。
13. （１３）腸内ウイルスに対する抗体の検査で使用するに
    適した試験キットであって、特許請求の範囲第１項から
    第４項のいずれかに記載のペプチドと、このペプチドに
    結合した抗体を検査するための手段とを含むキット。